Hernn Chiriboga P.
Graciela Gmez B.
Karla Garcs E.
Paraguay, 2015
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Qu es el IICA?
Hace ms de 70 aos, un grupo de visionarios identific la necesidad de contar con un
organismo especializado en agricultura para el continente americano, con un propsito que an
hoy mantiene vigencia: promover el desarrollo agrcola y el bienestar rural en ese continente.
Fue as como naci el Instituto Interamericano de Cooperacin para la Agricultura (IICA),
que a lo largo de todo ese tiempo ha sido capaz de identificar retos y oportunidades, y lo ms
importante, de evolucionar como un organismo de cooperacin tcnica internacional que
permanentemente responde a las nuevas demandas del sector agrcola.
La segunda dcada del siglo XXI ha trado nuevos desafos y oportunidades para la
agricultura de las Amricas, destinada a convertirse en un verdadero motor de desarrollo,
capaz de generar crecimiento econmico y prosperidad para las poblaciones de esa regin.
Detonar el potencial del sector agrcola en nuestros pases es crucial para resolver uno de los
mayores retos de la humanidad: lograr la seguridad alimentaria.
El Instituto brinda su cooperacin mediante el trabajo cotidiano, cercano y permanente con
sus 34 Estados Miembros, cuyas necesidades atiende oportunamente, con el fin de lograr una
agricultura cada vez ms inclusiva, competitiva y sustentable. Sin duda alguna, el activo ms
valioso del IICA es la cercana relacin que mantiene con los beneficiarios de su trabajo.
Desde nuestra fundacin, hemos acumulado vasta experiencia en temas como tecnologa e
innovacin para la agricultura, sanidad agropecuaria e inocuidad de alimentos, agronegocios,
comercio agropecuario, desarrollo rural y capacitacin.
Por una agricultura competitiva y sustentable para las Amricas
Nuestra misin es
estimular, promover y apoyar los esfuerzos de los Estados Miembros para lograr su
desarrollo agrcola y el bienestar rural por medio de la cooperacin tcnica internacional
de excelencia
Al lado de nuestros Estados Miembros, nuestra visin es
alcanzar una agricultura interamericana competitiva, incluyente y sustentable que
alimente el hemisferio y el mundo, y que a la vez genere oportunidades para disminuir el
hambre y la pobreza en los productores y los habitantes de los territorios rurales
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Graciela Gmez B.
Karla Garcs E.
Paraguay - 2015
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DEWEY
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TABLA DE CONTENIDO
PRESENTACIN
Pgina
AGRADECIMIENTOS
INTRODUCCIN....................................................................................................1
ANTECEDENTES..................................................................................................3
1. BJETIVO...........................................................................................................7
2. BENEFICIARIOS..............................................................................................7
3. VENTAJAS PARA EL PRODUCTOR...............................................................8
4. PROTOCOLO DE APLICACIN COMO RESULTADO DE
NVESTIGACIN PARTICIPATIVA....................................................................9
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PRESENTACIN
La creciente demanda por productos limpios y orgnicos, generados por la conciencia cada vez ms grande de la poblacin local, regional e internacional hacia los alimentos inocuos; que cumplan con los protocolos de buenas prcticas
agrcolas y que cuiden el ambiente, aparece como una alternativa viable ante las
limitaciones crecientes que enfrenta el sector agrcola convencional, al emplear
agrodefensivos para el control de plagas, a lo que se le suma la resistencia cada
vez ms grande de las plagas y enfermedades al control qumico. Esto ha llevado
a buscar nuevas herramientas para su control y prevencin, particularmente en el
mbito de la Agricultura Familiar. Esta necesidad, ha motivado el uso de productos
biolgicos, amigables con el medio y eficaces en el control de enfermedades y plagas, constituyndose los microorganismos como los ms utilizados y aceptados
por mostrar excelentes resultados en el campo.
Este documento, recoge los trabajos de investigacin y aplicacin de Beauveria
bassiana, un hongo entomopatgeno que acta como bio-insumo para el control
de las hormigas cortadoras, que continan siendo un serio problema entre los pequeos agricultores principalmente, por las prdidas econmicas y de cultivos que
provocan. Se trata pues de presentar una alternativa biolgica verstil que pueda
usarse dentro de un plan de manejo integrado de plagas, constituyndose como
una de las mejores herramientas para una agricultura sustentable.
Los Autores
Ing. Hernn Chiriboga P., Representante del IICA en Paraguay
Ing. Agr. Graciela Gmez B., Especialista en Tecnologa e Innovacin del IICA
Bil. Karla Garcs, Consultora internacional en control biolgico de plagas
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AGRADECIMIENTOS
Los autores hacen extenso el agradecimiento por la colaboracin y apoyo en la
elaboracin y revisin del presente Manual a los siguientes profesionales:
Instituto Paraguayo de Tecnologa Agraria (IPTA)
Ing. Agr. Gregorio Bozzano, Especialista en Fitopatologa
Ing. Liliana Cabrera, Tcnica en Fitopatologa
Instituto Interamericano de Cooperacin para la Agricultura (IICA)
Ing. Agr. Ftima Almada, Especialista en Agricultura Familiar
Ing. Julian Andersen, Especialista en Recursos Naturales
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INTRODUCCIN
El hongo Beauveria bassiana es considerado uno de los agentes de control biolgico con mejor eficiencia en el sector agrcola. Existen experiencias de todas
partes del mundo en el control exitoso de varios tipos de plagas, que causan dao
y grandes prdidas en el sector.
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del pas, aunque tambin las plantaciones forestales. De este modo tambin, se
contribuye a expandir el modelo sustentable de produccin agrcola familiar.
Hay que tener en cuenta que cada vez se presentan mayores resistencias a productos agroqumicos por parte de las plagas y sumado a esto, los pases a los
cuales se exportan los productos aumentan las restricciones en el uso de numerosos plaguicidas, por cuanto demandan productos naturales u orgnicos, con
certificacin.
El uso masivo de hongos entomopatgenos como Beauveria bassiana producidos
en sustratos naturales para el control de hormigas cortadoras del gnero Atta spp.
tiene un gran potencial de disminuir la cantidad de plaguicidas qumicas aplicadas
en la agricultura. La multiplicacin de Beauveria bassiana se puede realizar por los
mismos agricultores, en unidades de produccin muy sencillas en sus fincas utilizando arroz comn como sustrato, y formulando solucin con esporas del hongo
para el control de hormigas cortadoras.
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ANTECEDENTES
En concordancia con el Plan de Mediano Plazo 2014-2018 recientemente aprobado por los Ministros de Agricultura de las Amricas, este proyecto se relaciona
directamente con el Proyecto Insignia Hemisfrico del IICA denominado: Productividad y Sustentabilidad de la Agricultura Familiar para la Seguridad Alimentaria
y Economa Rural, para el logro del objetivo estratgico institucional que busca
mejorar la contribucin de la agricultura a la seguridad alimentaria y nutricional y
la inclusin social.
En el Paraguay, la Agricultura Familiar se ha posicionado en los ltimos aos como
un sujeto estratgico de las polticas pblicas con miras a promover el desarrollo
de los territorios rurales y del sector agro-rural. Por ello, el Marco Estratgico Agrario (MEA) Ampliado 2014- 2018 del Ministerio de Agricultura y Ganadera (MAG)
- como poltica sectorial nacional - establece como uno de sus Ejes Estratgicos,
el Desarrollo de la Agricultura Familiar y la Seguridad Alimentaria.
En este contexto, el MAG promueve y IPTA impulsa la identificacin y multiplicacin del hongo Beauveria bassiana y la produccin de suspensin de conidios a
ser usadas como inculos para el control las hormigas cortadoras del gnero Atta
spp., por los productores de la Agricultura Familiar del pas, dado que en los ltimos tiempos en Paraguay vienen destruyendo, cada vez con mayor agresividad,
plantaciones completas de cultivos agrcolas de importancia econmica, como ser:
soja, algodn, trigo, maz; adems de aquellos destinados a la seguridad alimentaria como los fruti-hortcolas, mandioca, porotos; y plantaciones forestales varias
como las de eucalipto, por ejemplo. Estas hormigas cortan las hojas y tejidos de
las plantas y los transportan a sus nidos subterrneos; galeras en red muy amplia,
donde los utilizan para el cultivo de un hongo basidiomiceto, que constituye su
alimento principal.
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Esta situacin, ha generado alta preocupacin en esferas pblicas locales; referentes de la Agricultura Familiar, tcnicos y productores, dado los daos y prdidas
causados por la plaga (hormigas cortadoras) en los cultivos de renta y de consumo.
Es as que el MAG, a travs del IPTA; solicit la cooperacin del IICA Oficina en
Paraguay, para fortalecer las correspondientes capacidades tcnicas y laboratoriales, con miras a formular el protocolo de investigacin adaptativa a seguir, para generar una solucin tecnolgica al ataque de tales hormigas cortadoras, centrada en
buscar controladores biolgicos de efecto masivo, como ser hongos de los gneros
Beauveria que permitan el control natural de esta plaga agrcola.
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1.
OBJETIVO
2.
BENEFICIARIOS
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3.
Los hongos como Beauveria bassiana que pueden causar enfermedades en los insectos, son llamados entomopatgenos. Viven naturalmente en el ambiente, suelos o en agua, como as tambin alojados en los mismos cuerpos de los insectos,
causando su muerte en un plazo aproximado de cinco a siete das; con la posibilidad de propagar la enfermedad a otros insectos bajo condiciones favorables de
temperatura y humedad.
Los entomopatgenos como Beauveria bassiana, se multiplican y dispersan dentro del mismo cultivo favoreciendo la accin reguladora de la poblacin de insectos-plaga.
stos permanecen en el rea en insectos vivos invernantes; en sus restos o
en el suelo; y pueden ser transmitidos de una generacin a otra del insecto,
por contaminacin de los desoves e infeccin de las cras recin nacidas.
Los microorganismos pueden ocasionar no slo la muerte directa de los
insectos, en este caso hormigas cortadoras, sino tambin la disminucin de
la oviposicin; viabilidad de los desoves o aumentar la sensibilidad a otros
agentes de control.
Una vez establecido el entomopatgeno en el rea, mantiene la poblacin
de la plaga por debajo de los niveles de dao econmico.
Los entomopatgenos no contaminan el ambiente y no son txicos para el
hombre y otros animales.
La aparicin de resistencia en los insectos hacia los patgenos es extremadamente baja, comparada con la alta probabilidad de adquirirla, si se
usaran agroqumicos.
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4.
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4.12.
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4.13.
PRECAUCIONES
MULTIPLICACION
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4.16.
Se seleccionan insectos activos, que se encuentren vivos al momento de ser recolectados, no importa si mueren cuando llegan al laboratorio.
Desinfectar los insectos con hipoclorito de sodio al 0,5%. Los insectos se sumergen dependiendo de la especie de 2 a 10 minutos. Se retira el exceso de hipoclorito sobre una toalla de papel estril; se procede a lavar tres (3) veces en agua
destilada estril y se retira el exceso en toalla de papel estril.
La infeccin de los insectos se realiza por inmersin durante dos (2) minutos en
10 ml. de suspensin de esporas de Beauveria bassiana. Sin retirar el exceso, se
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colocan los insectos en una placa de Petri dentro de una cmara hmeda, a la cual
se le debe hacer controles diarios para mantener la humedad.
Despus de 10 a 15 das, cuando el hongo se ha desarrollado por completo, se
toman los insectos con una pinza y se realiza una desinfeccin en una solucin de
hipoclorito de sodio al 5% por un minuto. Sin lavar, se pasan a una toalla de papel
para retirar el exceso de hipoclorito.
Finalmente los insectos colonizados y desinfectados, se pasan a cajas o tubos
inclinados con agar PDA y se realiza la conservacin de la cepa. sta cepa servir
para futuras masificaciones.
4.17.
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CONCENTRACIN DE ESPORAS
Se realiza la cosecha de esporas de los tubos por raspado con la ayuda de una varilla de vidrio o aguja de diseccin en una licuadora, adicionando una solucin estril
de agua destilada con Tween 80 al 0,1%, hasta un volumen conocido (1.000ml.):
sta es la suspensin madre.
Se preparan diluciones en base 10, a partir de la solucin madre; puede ser hasta
10-4 o 10-5. Para el recuento de esporas y tener la concentracin del inoculo formulado, se utiliza la cmara de Neubauer o hemocitometro.
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La cmara est dividida en dos (2) retculos y cada uno se subdivide en nueve (9)
cuadros de 1 mm2 cada uno, de manera que cada retculo tiene una superficie
total de 9 mm2. El cuadro central aparece de nuevo subdividido en 25 cuadrantes
y estos en 16 cuadrantes ms pequeos.
El recuento se determina sumando el total de esporas presente en los 25 cuadrantes centrales de la cmara.
La concentracin de esporas, se calcula multiplicando el recuento aproximado de
esporas por el inverso de la dilucin empleada para el conteo y por el inverso del
factor de la cmara.
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4.19.
GERMINACIN DE ESPORAS
Esta prueba de germinacin junto con el recuento de esporas, determina la viabilidad de las esporas de un producto biolgico.
Preparar cajas de agar agua o agar PDA; marcar cinco (5) puntos en la superficie
externa inferior de la caja correspondientes a los puntos en los cuales se depositarn las alcuotas que contienen las esporas.
De la dilucin donde se realiz el recuento de esporas en la prueba anterior, previamente agitada, se toman 0,05 ml para depositar en las cajas Petri, a razn de
cinco (5) alcuotas por caja por dilucin. Las cajas se deben incubar a 25 grados
centgrados (+ o - 2) durante 24 horas.
Transcurrido el tiempo de incubacin, se agrega una gota de azul de lactofenol a
cada alcuota, con el propsito de detener la germinacin y a la vez teir las esporas del hongo. Luego con la ayuda de un bistur, se cortan las alcuotas depositndolas sobre una lmina portaobjetos y se cubren con una laminilla.
La observacin se hace con el objetivo 40X contando un mnimo de 100 esporas
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PRUEBA DE PUREZA
x 100
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4.21.
PRUEBA DE PATOGENICIDAD
Prueba de patogenicidad
Se sumergen los insectos en la suspensin de esporas del hongo durante dos (2) minutos, la cual se mantiene en agitacin manual. Luego se coloca un insecto en un tubo
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estril con un disco de papel de toalla o algodn, previamente humedecido con agua
destilada estril y se tapa el tubo con una mota de algodn esterilizada bien ajustada
a la boca del mismo. Despus de 24 horas se adiciona alimento para cada insecto.
Diariamente y durante 10 das se evala la mortalidad causada por el hongo en
estudio, observando al estereoscopio los sntomas y signos de enfermedad en
los insectos. Los insectos vivos o muertos deben permanecer en los tubos para
que no se interrumpa el desarrollo normal del hongo en el insecto. Diariamente
con la ayuda de una jeringa desechable, se adiciona agua destilada estril para
humedecer el algodn, evitando la presencia de agua libre. La humedad puede ser
considerada como el factor ms importante en el desarrollo de una micosis, en las
etapas de germinacin de las esporas y conidiognesis.
Con el registro diario de patogenicidad, se establece el ciclo de desarrollo del hongo
sobre el insecto; el porcentaje de mortalidad y el promedio del tiempo de mortalidad.
El tiempo de evaluacin varia para cada hongo entomopatgeno estudiado, dependiendo del ciclo biolgico del hongo en el insecto y de la supervivencia del
insecto no inoculado bajo las condiciones del ensayo. Los productos comerciales
deben causar mortalidades superiores al 80% en esta prueba.
4.22.
4.11.1
pH
Mediante esta prueba, se determina la acidez o alcalinidad de una formulacin. Se
prepara una mezcla en proporcin 1:10 (muestra: agua destilada); se homogeniza
y se deja reposar durante una hora.
Con un potencimetro previamente calibrado, se determina el pH. El valor del pH
influye en la germinacin del hongo retardndola en valores extremos. Se consideran intervalos ptimos de pH los valores entre 5,5 y 7.
4.11.2
HUMECTABILIDAD
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SUSPENSIBILIDAD
Masificacin de Beauveria
bassiana en sustrato de arroz
Se vierte la suspensin en un Erlenmeyer y se completa hasta un (1) litro, adicionando agua destilada estril, siendo esta la suspensin madre.
De la suspensin madre se toman 50 ml y se llevan a un volumen total de un
litro, conservando la relacin gramo de producto formulado por volumen de agua
recomendado (ejemplo: 100 gramos de arroz con hongo en 20 litros de agua para
aplicar en el campo).
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5.
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Tcnicos del IPTA, del Sistema MAG y del sector privado capacitados
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6.
BIBLIOGRAFA
GARCES ENCALADA, K. Masificacin del hongo entomopatgeno Beauveria bassiana para el control de hormigas cortadoras. Asuncin, Paraguay. IICA. 2014.
21p. (Informe)
GARCES ENCALADA, K. Produccin del hongo entomopatgeno Beauveria bassiana, para el control de hormigas cortadoras. Caacup, Paraguay. Centro de Investigacin Hernando Bertoni. 2014.
BOZZANO, G.; CABRERA, L. Avances de los trabajos con Beauveria sp. para el
control de hormigas cortadoras. Asuncin, Paraguay. 2014. 3p. (Informe)
DUARTE, Z.; BOZZANO, G.; GARCES ENCALADA, K. Control biolgico de plagas y enfermedades. Caacup, Paraguay. Centro de Investigacin Hernando Bertoni. 2014. (Capacitacin)
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