Anda di halaman 1dari 11

Kuliah 7

Produksi Protein Rekombinan

Nur Asni Setiani


Sekolah Tinggi Farmasi Indonesia

Kuis 5
1. Ekspresi gen terdiri dari proses transkripsi yang menghasilkan mRNA dan translasi
yang menghasilkan protein
2. Vektor kloning bertujuan untuk mendapatkan DNA sehingga memiliki sifat copy
number tinggi Sedangkan vektor ekspresi bertujuan untuk mendapatkan protein
sehingga memiliki komponen tambahan untuk proses downstream/pemurnian
3. Contoh prokariot yang biasa digunakan untuk ekspresi adalah bakteri Bacillus
cereus yang termasuk bakteri gram positif dan bakteri Escherichia coli yang
merupakan bakteri gram negatif yang dapat menghasilkan protein periplasmik.
4. Promoter pada Pichia pastoris adalah AOX1 yang diinduksi oleh metanol
5. Gambarkan skema vektor ekspresi eukariot dan sebutkan bagian-bagiannya!
Satuan transkripsi
Promoter (p)
Sisi kloning (MCS)
Sinyal terminasi transkripsi & poliadenilasi (t)
Marker seleksi
eukariot (ESM)
E. coli (Ampr)
ori
E. coli
eukariot

Pemurnian protein
Pemisahan berdasarkan perbedaan sifat kimia
dan fisika protein dgn molekul lain
Ukuran
Afinitas

Pemurnian protein

Pemisahan
berdasarkan
ukuran

Pemurnian protein
Pemurnian 1.000 10.000 x
Protein rekombinan:
Hexa-His: mengikat ion logam (Ni2+, Cu2+
GST (glutation S- transferase): mengikat glutation

Pemurnian protein

SDS-PAGE

SDS terikat pada


bagian hidrofobik
dari protein

Protein terdenaturasi
Muatan protein
menjadi negatif

Elektroforesis dua dimensi

Western blotting /
immunoblotting

ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay)

Penentuan urutan asam amino dengan


alat MS/MS
Mass spek I
Protein diberi perlakuan dengan protease
Massa masing-masing peptida ditentukan

Mass spek II
Peptida ditembak dengan atom-atom gas berenergi tinggi
Ikatan peptida putus, terbentuk fragmen-fragmen yang masingmasing berbeda 1 aa
Fragmen-fragmen peptida dipisahkan dan massanya ditentukan

Urutan asam amino ditentukan berdasarkan perbedaan massa


antara peptida
Bila massa aa jauh lebih tinggi, berarti ada modifikasi pasca
translasi