Identifikasi Escherichia coli pada Air Minum Isi Ulang

dari Depot di Kelurahan Pisangan dan Cirendeu

Tahun 2015

Laporan Penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk

memperoleh gelar SARJANA KEDOKTERAN

Oleh:
Zulfikar Tria Raharja
NIM: 1112103000041

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER

FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI
SYARIF HIDAYATULLAH
JAKARTA
1436 H/2015

KATA PENGANTAR

Assalamualaikum wr.wb.
Alhamdulilahirabbilalamin, puji serta syukur saya panjatkan kehadirat
Allah SWT, karena atas segala rahmat dan karunia-Nya saya dapat menyelesaikan
penelitian ini. Shalawat serta salam semoga tetap tercurah limpahkan pada Nabi
besar Muhammad SAW, yang membawa cahaya kebenaran sampai akhir zaman.
Penelitian ini tidak dapat terlepas dari bantuan berupa masukan, kritik
maupun saran dari berbagai pihak. Untuk itu penulis menyampaikan rasa terima
kasih yang sebesar-besarnya kepada:
1. Dr. H. Arif Sumantri, SKM, M.Kes selaku Dekan FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta, dr. Achmad Zaki, S.Ked, M.Epid, SpOT selaku
Ketua Program Studi Program Studi Pendidikan Dokter FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta, serta seluruh dosen Program Studi Pendidikan
Dokter yang selalu membimbing serta memberikan ilmu kepada saya
selama menjalani masa pendidikan di Program Studi Pendidikan Dokter
FKIK UIN Syarif Hidayatullah Jakarta.
2. dr. Intan Keumala Dewi SpMK dan dr. Nurmila Sari ,M.Kes selaku dosen
pembimbing penelitian saya, yang selalu membimbing, mengarahkan, dan
menyemangati saya dalam menyelesaikan penelitian ini dengan baik.
3. dr. Nouval Shahab, SpU, PhD, FICS, FACS selaku penanggungjawab (PJ)
modul riset PSPD 2012.
4. dr.Flori Ratnasari, SpFK selaku penanggungjawab riset PSPD
5. Ibu Yuliati, M.Biomed selaku PJ laboratorium mikrobiologi. yang telah
memberikan izin atas penggunaan lab pada penelitian ini.

6. Kedua orang tua saya yang tercinta, Bpk. Drs.Asna,M.Ed dan Ibu Lilis
Sumiarsih yang selalu memberikan cinta dan kasih sayang, memberikan
doa, nasihat, serta semangat selama ini.
7. Kakak saya, Lisna Sholiha Rahayu dan adik saya Fahri Rauf S yang
menjadi penyemangat hidup saya dan banyak membantu saya dalam
penelitian ini.
8. Untuk Firda Fakhrena, yang selalu menyemangati dan mendukung saya
dalam menyelesaikan penelitian ini.
9. Untuk teman belajar, bermain, dan berorganisasi Binayu, Adlin, Fakhri,
Rasyid, Putri Junita, Ranita, Nadiyah, Putri Auliya, Ega, Reza, Nuraisah,
Galang, Adichita, Sari Dewi Apriana, Fiizhda, Hylman, Shabrina, Nadya,
Reni, Linda, Amatilah Raifa, Meli, Raka

yang sudah memberikan

semangat untuk menyelesaikan penelitian ini.

10. Kepada mba Novi dan Pa Marbi selaku Laboran yang sangat membantu
dalam berlangsungnya penelitian ini.
11. Satpam dan OB Laboratorium Mikrobiologi yang sudah sangat membantu
dalam penelitian ini.
12. Untuk teman seperjuangan penelitian, Octafika Hairlina, Naftalena Dwi
Putri, Nindya Permata yang sudah banyak membantu dan menyemangati
selama penelitian.
13. Seluruh mahasiswa PSPD 2012 yang berjuang bersama meraih mimpi di
masa depan.

Saya sangat mengharapkan kritik dan saran dalam penelitian ini agar dapat
terus dilanjutkan dan bermanfaat untuk berbagai pihak karena penelitian ini
masih jauh dari kesempurnaan, saya sangat mengharapkan kritik dan saran
untuk perbaikan dan kelanjutan penelitian ini. Demikian laporan penelitian ini
saya tulis, semoga dapat memberikan manfaat bagi penulis khususnya dan
para pembaca pada umumnya.

Ciputat, 9 Oktober 2015

vi

ABSTRAK
Zulfikar Tria Raharja. Program Studi Pendidikan Dokter.Identifikasi
Escherichia coli pada Air Minum Isi Ulang dari Depot di Kelurahan
Pisangan dan Cirendeu Tahun 2015.
Semakin berkembangnya perusahaan air minum isi ulang yang
menawarkan harga yang relatif lebih murah dibandingkan dengan air minum
dalam kemasan memerlukan pengawasan terhadap kualitas air minum. Penelitian
ini bertujuanuntuk mengetahui kualitas air minum isi ulang dari depot di
kelurahan Pisangan dan Cirendeu secara mikrobiologi. Penelitian ini
menggunakan metodedeskriptif cross sectional dengan ujiMost Probable Number
(MPN), pewarnaan Gram, uji fermentasi karbohidrat dan uji IMVIC. Dari 9
sampel yang diuji, 1 sampel memenuhi syarat kualitas air minum menurut
PERMENKES dan 8 sampel lainnya mengandung jumlah bakteri koliform
melebihi batas maksimal yaitu 0 per 100ml air. Dari 9 sampel yang diuji hanya 1
sampel yang layak minum sementara 8 sampel lainnya tidak layak minum. Dari 8
sampel tersebut, terdapatEscherichia coli pada 5 sampel sementara 3 sampel
lainnya mengandung bakteri koliform yang lain.
Kata Kunci: Air minum isi ulang, kualitas air minum isi ulang, E.coli, bakteri
koliform
ABSTRAK
Zulfikar Tria Raharja. Program Studi Pendidikan Dokter.Identification
Escherichia coli in Drinking Water Refill from Drinking Water Refill Depot
at Pisangan and Cirendeu Sub-Distric 2015
Industry of water drinking refill growing rapidly and offer low price than
bottled water and need monitoring of drinking water quality test. This research
aims to know the quality of water drinking refillfrom depot at Pisangan and
Cirendeu microbiological. Methodes used is descriptive cross sectional with Most
Probable Number (MPN) test, Gram stain, carbohydrate fermentation test and
IMVIC test.From 9 samples tested, 1 sample fulfil the qualify the quality of
drinking water according to PERMENKES and 8 samples have the amount of
coliform bacteria exceeded the maximum limit, 0 per 100ml water.Only 1 sample
is eligible to drink, while 8 other samples not eligible to drink. From 8 samples,
we found Escherichia coliin 5 samples and 3 other samples contain other coliform
bacteria.
Keywords:Water drinking refill, quality of water drink, E.coli, Coliform bacteria.

vii

DAFTAR ISI

LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA............................................. ii

LEMBAR PERSETUJUAN PEMBIMBING .................................................... iii
LEMBAR PENGESAHAN ................................................................................. iv
KATA PENGANTAR ........................................................................................... v
ABSTRAK ........................................................................................................... vii
DAFTAR ISI ....................................................................................................... viii
DAFTAR GAMBAR ............................................................................................. x
DAFTAR TABEL ................................................................................................ xi
DAFTAR SINGKATAN ..................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN ...................................................................................... xiii
BAB 1 PENDAHULUAN ..................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang .............................................................................................. 1
1.2 Rumusan Masalah ......................................................................................... 2
1.3 Tujuan Penelitian ........................................................................................... 3
1.3.1 Tujuan Umum ......................................................................................... 3
1.3.2 Tujuan Khusus ........................................................................................ 3
1.4 Manfaat Penelitian ......................................................................................... 3
1.4.1 Manfaat bagi Peneliti .............................................................................. 3
1.4.2 Manfaat bagi Institusi ............................................................................. 3
1.4.3 Manfaat bagi Masyarakat........................................................................ 3
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................ 5
2.1 Landasan Teori .............................................................................................. 5
2.1.1 Bakteri Koliform ..................................................................................... 5
2.1.2 Morfologi dan Identifikasi ...................................................................... 6
2.1.3 Klasifikasi Enterobacteriaceae ................................................................ 7
2.2Escherichia coli ( E.coli ) ............................................................................... 8
2.2.1 Variasi dan Patogenitas Escherichia coli.............................................. 10
2.2.2 Kultur dan Media Pertumbuhan Bakteri ............................................... 11
2.2.3 Identifikasi Escherichia coli ................................................................. 12
2.2.4Lactose Broth ......................................................................................... 15
2.3 Air Minum ................................................................................................... 15
2.3.1 Persyaratan Kualitas Air Minum .......................................................... 16
viii

2.3.2 Air Minum Isi Ulang............................................................................. 17

2.3.3Produksi Air Minum Isi Ulang .............................................................. 20
2.4Kerangka Teori ............................................................................................. 22
2.5 Kerangka Konsep ........................................................................................ 23
2.6 Definisi Operasional .................................................................................... 24
BAB 3 METODE PENELITIAN ....................................................................... 25
3.1Desain Penelitian .......................................................................................... 25
3.2Lokasi dan Waktu Penelitian ........................................................................ 25
3.3Populasi dan Sampel .................................................................................... 25
3.3.1Populasi.................................................................................................. 25
3.3.2Sampel Yang Diteliti ............................................................................. 25
3.3.3Cara Pengambilan Sampel ..................................................................... 25
3.3.4Identifikasi Variabel .............................................................................. 25
3.3.5Kriteria Inklusi dan Kriteria Ekslusi ...................................................... 26
3.4Cara Kerja Penelitian.................................................................................... 26
3.4.1 Pengujian Most Probable Number (MPN) ........................................... 26
3.4.2 Uji biokimia dengan uji gula-gula dan uji IMViC................................ 27
3.4.3 Alat dan Bahan Penelitian..................................................................... 29
3.4.4 Alur Penelitian ...................................................................................... 31
3.5Analisis data ................................................................................................. 31
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 32
4.1 Hasil Uji Most Probable Number (MPN) Koliform ................................... 32
4.2 Identifikasi Escherichia coli ........................................................................ 34
4.3 Pewarnaan Gram ......................................................................................... 36
4.4 Uji Gula-Gula ( Fermentasi Karbohidrat) ................................................... 37
4.5Uji IMViC ( Indole, Motile, MR-VP, Citrate) .............................................. 39
4.6.Hasil Uji Mikrobiologis Air Minum Isi Ulang ............................................ 41
4.7 Pembahasan Aspek Keislaman .................................................................... 42
4.8 Keterbatasan Penelitian ............................................................................... 43
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................... 44
5.1 Kesimpulan .................................................................................................. 44
5.2 Saran ........................................................................................................... 44
DAFTAR PUSTAKA .......................................................................................... 45
LAMPIRAN ........................................................................................................ 49
ix

DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1
Gambar 2.2
Gambar 2.3
Gambar 2.4

Gambar 3.1
Gambar 4.1
Gambar 4.2
Gambar 4.3
Gambar 4.4
Gambar 4.5
Gambar 4.6

(a) Pewarnaan Gram Negatif (b) Pewarnaan Gram Positif ........... .6

Struktur Sel Bakteri ....................................................................... 10
Enterohemorrhagic E. Coli ........................................................... 11
(a) Escherichia coli pada EMB agar (b)Enterobacter
aerogenes pada EMB agar (c) Pseudomonas aeruginosa
pada EMB agar.............................................................................. 12
Alur penelitian ............................................................................... 31
Hasil Uji MPN............................................................................... 32
Hasil Inokulasi pada EMB agar .................................................... 35
Hasil Pewarnaan Gram .................................................................. 36
Hasil positif uji gula-gula .............................................................. 38
(a) Hasil positif uji indol (b) Hasil negatif uji indol ...................... 39
(a) Hasil negatif uji sitrat (b) Hasil positif uji sitrat
(c)Hasil positif uji MR (d) Hasil negatif uji MR
(e) Hasil negatif uji VP ................................................................ 40

DAFTAR TABEL

Tabel 2.1
Tabel 4.1
Tabel 4.2
Tabel 4.3
Tabel 4.4
Tabel 4.5
Tabel 4.6

Persyaratan Kualitas Air Minum....................................................... 19

Hasil Uji MPN .................................................................................. 33
Hasil Inokulasi pada media EMB agar ............................................. 36
Hasil Pewarnaan Gram...................................................................... 37
Hasil Uji Fermentasi Karbohidrat ..................................................... 38
Hasil Uji IMVIC ............................................................................... 40
Hasil uji mikrobiologis ..................................................................... 41

xi

DAFTAR SINGKATAN

AMDK
cAMP
DAMIU
DAM
EMB
E.coli
EHEC
EIEC
EPEC
ETEC
IMVIC
MPN
PDAM

Air Minum Dalam Kemasan

cyclic Adenosin Mono Phosphat
Depot Air Minum Isi Ulang
Depot Air Minum
Eosin Methylen Blue
Escherichia coli
Enterohemorrhagic E. coli
Enteroinvasive E. coli
Enteropathogenik E. coli
Enterotoxic E. coli
Indol Motil Voges-Preskauer Methyl Red Citrate
Most Probable Number
Perusahaan Daerah Air Minum

xii

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1
Lampiran 2
Lampiran 3
Lampiran 4
Lampiran 5
Lampiran 6

Alat dan Bahan Penelitian ............................................................... 50

Persiapan Laktosa Broth .................................................................. 52
Uji Presumtif MPN .......................................................................... 53
Pewarnaan Gram.............................................................................. 54
Hasil Inokulasi EMB agar ............................................................... 55
Tabel MPN Koliform....................................................................... 56

xiii

BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Tingginya kebutuhan masyarakat akan air minum, terutama di perkotaan
mendorong timbulnya industri-industri Air Minum Dalam Kemasan (AMDK) dan
Depot Air Minum Isi Ulang (DAMIU). Secara nasional kebutuhan air di tingkat
rumah tangga di Indonesia mencapai lebih dari 20 L per hari bahkan bisa sampai
100 L per hari. Menurut hasil Riskesdas 2010, sumber air yang digunakan oleh
rumah tangga di Indonesia sebagai air minum yaitu antara lain: sumur gali
terlindung (24,7%), air ledeng (14,2%), sumur bor/pompa (14,0%) dan air dari
depot air minum (DAM) (13,8%). Sementara itu berdasarkan tempat tinggal baik
di perkotaan maupun di pedesaan sumber utama air untuk minum cukup
bervariasi.1 Di Kota Tangerang Selatan, cukup banyak sumber air baku yang bisa
diolah menjadi sumber air minum bagi berbagai kebutuhan karena wilayah Kota
Tangerang Selatan setidaknya dialiri oleh 3 sungai yaitu Sungai Cisadane,
Pesanggarahan dan Kali Angke. Selain itu, masih terdapat 9 situ dan danau yang
memiliki kadar dan kapasitas air yang layak diolah.2
Berdasarkan data dari perusahaan daerah air minum (PDAM), masyarakat
yang menggunakan layanan dari PDAM sebesar 4% dari seluruh penduduk di
Tangerang Selatan sementara berdasarkan data dari Dinas Kesehatan akses
masyarakat terhadap air bersih dari perpipaan maupun non perpipaan seperti
sumur gali, sumur pompa tangan dan lainnya sebesar 82 %. Sementara itu, air
minum isi ulang banyak digunakan sebagai sumber air minum oleh masyarakat
yaitu sebesar 15,24%.3
Air minum isi ulang banyak digemari oleh masyarakat karena harganya
yang relatif lebih murah dibandingkan dengan air minum dalam kemasan. Selain
itu air minum isi ulang mudah didapatkan dimana-mana karena sudah banyak
tersebar di berbagai daerah di Indonesia. Namun hal tersebut tidak dibarengi
dengan pemantauan kualitas air minum baik secara fisik, kimiawi maupun
mikrobiologis. Air minum isi ulang diolah dari air baku melalui berbagai proses
meliputi penampungan air baku, penyaringan/ filterisasi, desinfeksi dan pengisian.
1

Selain itu, ada beberapa cara yang saat ini sering digunakan dalam
mengolah air baku untuk air minum isi ulang yaitu ozonisasi, sinar ultraviolet dan
reverse osmosis. Apabila kurang baik dalam proses pengolahannya, maka air
tersebut dapat tercemar oleh bakteri patogen contohnya Escherichia coli (E.coli).
Oleh karena itu perlu dilakukan pengawasan dan pemantauan terhadap kualitas air
minum khususnya air minum isi ulang.4,5
Air minum dengan kualitas yang buruk akan sangat berdampak bagi
kesehatan. Air dapat menjadi media penyebaran penyakit-penyakit tertentu
misalnya diare. Air yang tercemar oleh feses akan terkontaminasi oleh bakteri
Escherichia coli yang dapat menyebabkan diare. Menurut data dinkes kota
Tangerang Selatan, angka penderita diare di Tangerang Selatan cukup tinggi yaitu
sekitar 41%. Sementara di kecamatan Ciputat Timur angka penderita diare sekitar
14% yang kebanyakan adalah anak-anak mulai dari usia kurang dari 1 tahun
sampai usia lebih dari 5 tahun. Selain itu di wilayah kelurahan Pisangan dan
Cirendeu, angka penderita diarenya cukup banyak yaitu sebesar 6,9%. Hal ini
dimungkinkan terjadi salah satunya akibat kualitas air minum yang kurang baik
banyak dikonsumsi masyarakat sekitar.1
Berdasarkan penjelasan diatas, peneliti tertarik untuk melakukan penelitian
terhadap kualitas air minum isi ulang di wilayah kelurahan Pisangan dan Cirendeu
dengan cara memeriksa cemaran bakteri koliform dan mengindentifikasi bakteri
E.coli yang terdapat dalam air. Selain itu peneliti tertarik untuk melakukan
penelitian ini karena belum pernah ada penelitian seperti ini sebelumnya dan
diharapkan dapat ikut berperan dalam mengurangi angka penyebaran penyakit
yang menyebar melalui air (waterborne disease).
1.2 Rumusan Masalah
Apakah terdapat Escherichia coli pada air minum isi ulang dari depot di
kelurahan Pisangan dan Cirendeu ?

1.3 Tujuan Penelitian

1.3.1Tujuan Umum
Untuk mengetahui kualitas air minum isi ulang dari depot di
kelurahan Pisangan dan Cirendeu.
1.3.2 Tujuan Khusus

Mengetahui jumlah cemaran bakteri koliform.

Mengidentifikasi keberadaan bakteri Escherichia coli pada sampel

air minum isi ulang dari depot di kelurahan Pisangan dan Cirendeu.

1.4 Manfaat Penelitian

1.4.1 Manfaat bagi peneliti

Menambah pengetahuan tentang cara penilaian kualitas air minum

secara mikrobiologi.

Menambah

keterampilan

dalam

pemeriksaan

mikrobiologi

pemeriksaan air minum.

Sebagai syarat kelulusan untuk mendapatkan gelar sarjana

kedokteran.

Keterampilan penulisan hasil penelitian.

1.4.2 Manfaat bagi Institusi

Menambah

informasi

dan

literatur

mengenai

peran

ilmu

mikrobiologi dalam menilai kualitas air minum.

Menambah publikasi ilmiah dalam bidang mikrobiologi.

Menambah sumber rujukan untuk penelitian selanjutnya.

Menambah pengetahuan bagi civitas akademika mengenai air

minum yang layak minum.

1.4.3 Manfaat bagi Masyarakat

Memberikan pengetahuan masyarakat mengenai air minum yang

sehat dan layak minum.

Memberikan pengetahuan kepada masyarakat mengenai syarat air

minum yang bersih.

Meningkatkan kesadaran masyarakat mengenai air minum yang

layak minum.

Sebagai salah satu upaya agar masyarakat dapat minum air yang
sehat sehingga dapat mengurangi penyebaran penyakit yang
ditransmisikan melalui air.

BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Landasan Teori
2.1.1Bakteri Koliform
Bakteri Koliformmerupakan bakteri batang Gram negatif yang heterogen
dengan habitat alaminya adalah di saluran cerna manusia dan hewan. Familinya
terdiri dari beberapa genus diantaranya yaituEscherichia, Shigela, Salmonella,
Enterobacter, Proteus dan lain-lain. Spesiesnya dibagi berdasarkan antigen yaitu
antigen O,H dan K. Bakteri koliformbersifat fakultatif aerob maupun anaerob dan
dapat memfermentasikan karbohidrat serta menghasilkan berbagai toksin dan
faktor virulensi lainnya. Bakteri enterik dan Enterobacteriaceae disebut juga
sebagai bakteri koliform. Bakteri koliform adalah suatu kelompok bakteri yang
digunakan sebagai indikator adanya polusi dan kondisi yang tidak baik terhadap
makanan atau minuman. Famili Enterobacteriaceae memiliki karakteristik antara
lain merupakan bakteri Gram negatif, bersifat motil dengan flagel peritrik atau
nonmotil, tumbuh pada media pepton atau ekstrak daging tanpa penambahan
natrium klorida atau suplemen lain, dapat pula tumbuh pada agar Mac Conkey
secara anaerob fakultatif, melakukan fermentasi glukosa dan oksidasi glukosa,
sering disertai dengan produksi gas, merupakan katalase positif, oksidase negatif,
dan

mereduksi

nitrat

memfermentasikan

menjadi

laktosa

di

nitrit.

Enterobakteriaceae

kelompokkan

ke

yang

dalam

dapat

koliform

Enterobacteriaceae.Sementara yang tidak dapat memfermentasikan laktosa antara

lain adalah Salmonella dan Shigella.6,7
Adanya

bakteri

koliform

dalam

suatu

makanan

dan

minuman

menunjukkan kemungkinan adanya mikroba yang bersifat enteropatogenik atau

toksigenik yang berbahaya bagi kesehatan.Bakteri koliform dapat menjadi
indikator dari kontaminasi fekal. Escherichia coli (E.coli), bakteri yang banyak
ditemukan usus besar manusia merupakan indikator adanya kontaminasi fekal dari
manusia. Selain E.coli , koliform lainnya seperti Enterobacter aerogenes, berasal
dari non-fekal mungkin ditemukan pada sampel air.5,8

2.1.2 Morfologi dan Identifikasi

Enterobacteriaceae atau bakteri koliformadalah bakteri Gram negatif,
bentuk batang yang pendek. Pada pertumbuhan di medium padat in vitro memiliki
morfologi yang khas. Beberapa spesies juga memiliki flagel sehingga
menunjukkan motilitasnya pada permukaan agar yang disebut fenomena
swarming yang merupakan ciri dari Proteus Sp. E.coli dan sebagian besar
bakteri enterik lainnya membentuk koloni yang sirkular, konveks, dan halus
dengan tepi yang tegas. Koloni enterobakter memiliki bentuk koloni yang lebih
mukoid.Pola fermentasi karbohidrat dan aktifitas dekarboksilase asam amino dan
enzim lainnya digunakan untuk pembedaan secara biokimia. Beberapa
pemeriksaan misalnya produksi indol dari triptofan sering digunakan pada sistem
identifikasi

cepat

sedangkan

reaksi

VogesProskauer/VP

(produksi

asetilmetilkarbinol dari dekstrosa) lebih jarang digunakan. Biakan pada medium

diferensial yang mengandung zat warna khusus dan karbohidrat misalnya Eosin
Methylen Blue(EMB),Mac Conkey atau medium deoksilat membedakan koloni
yang memfermentasi laktosa dengan yang tidak memfermentasikan laktosa dan
memudahkan identifikasi presumtif secara cepat pada bakteri enterik.Enzim betaD galaktosida dan beta-D glukoronidase sering digunakan sebagai indikator
untuk mendeteksi adanya E.coli dan menghitung total koliform.6,7,28

Gambar 2.1 a. Pewarnaan Gram negatif b. Kultur pada Endo Agar

Sumber: Kayser F,Bienz K,Eckert J,et al, 2005

Prinsip dari identifikasi bakteri adalah untuk memastikan bakteri yang

telah dikultur sebelumnya dan menentukan taksonomi dari bakteri tersebut sesuai
klasifikasinya. Cara yang dilakukan antara lain dengan memperhatikan
karakteristik morfologi

termasuk pewarnaan di bawah mikroskop. Selain itu

karakteristik fisiologis ditentukan dengan menggunakan medium.7

Dalam melakukan identifikasi bakteri, ada beberapa hal yang dapat
diamati yaitu : karakteristik morfologi seperti bentuk(batang, bulat, spiral);
Ukuran(diplokokus,

berantai,

berkelompok);

Pewarnaan

Gram(Gram

posiif/negatif); Flagel ada /tidak, letaknya; Kapsul ada/tidak; Spora/tidak

berspora. Selian itu dari karakteristik fisiologis seperti hasil oksidasi dan katalase;
enzim pemecah karbohidrat, alkohol, glikosida (misalnya betagalaktosida); enzim
metabolisme protein (gelatinase, kolagenase); enzim lainnya (hemolisisn, lipase,
DNAase); hasil metabolisme bakteri; karakteristik dari metabolisme anaerobik
(sitrat sebagai sumber karbon).7
2.1.3Klasifikasi Enterobacteriaceae7
Enterobacteriaceae berdasarkan kemampuan memfermentasikan laktosa
diklasifikasikan menjadi:
1. Cepat memfermentasi laktosa
Enterobacteriaceae yang dapat dengan cepat memfermentasi
laktosa yaitu E.coli : pada medium diferensial terlihat mengkilap
seperti logam; motil; koloni rata; dan tidak lengket, Enterobacter
aerogenes dengan koloni meninggi; tidak ada kilauan logam; sering
motil dan pertumbuhan lebih lengket serta Klebsiella pneumoniae
yang sangat lengket dan mukoid.
2. Lambat memfermentasi laktosa
Beberapa contohnya antara lain : Edwardsiella, serratia,
citrobacter, Arizona, Providencia, Erwinia
3. Tidak dapat memfermentasi laktosa
Yang termasuk ke dalam golongan ini yaitu Shigella dan
Salmonella.Shigella Sp. tidak menghasilkan gas dari dextrosa
sementara Salmonella Sp. motil; menghasilkan asam dan biasanya

gas dari dextrosa. Selain itu ada Proteus Sp. yang dapat membentuk
swarming pada agar; urea dihidrolisis dengan cepat (tercium bau
amonia) serta Pseudomonas Sp. yang memiliki pigmen biru-hijau
yang dapat larut dan berflouresensi; tercium bau manis.
2.2 Escherichia coli (E.coli)
Escherichia coli adalah bakteri enterik dan merupakan flora normal di saluran
pencernaan

hewan

dan

penyakit.E.colitergolong

manusia,
bakteri

namun

Gram

kadang

negatif,

dapat

berbentuk

menimbulkan
batang,

tidak

membentuk spora, kebanyakan bersifat motil (dapat bergerak) menggunakan

flagela (gambar 2.3), ada yang mempunyai kapsul, dapat menghasilkan gas dari
glukosa, dan dapat memfermentasi laktosa.7Selain itu, E.coli memiliki klasifikasi
sebagai berikut:Kerajaan : Bacteria
Filum : Proteobacteria
Kelas : Gamma Proteobacteria
Ordo : Enterobacteriales
Family : Enterobacteriaceae
Genus : Escherichia
Species : Escherichia coli
E.coli juga menunjukkan hasil tes indol positif, lisin dekarboksilase dan
fermentasi manitol. Pada medium diferensial seperti EMB agar, koloni E.coli
memiliki morfologi dengan warna pelangi yang berkilau dan tes bercak indol
yang positif.E.coli juga dapat memecah laktosa secara cepat.E.coli dapat dikultur
menggunakan medium selektif yang menghambat pertumbuhan bakteri Gram
positif dan mengandung laktosa sehingga dapat mendiferensiasi bakteri yang
dapat memfermentasi laktosa.6,7,9
E.coli dapat bertahan di air minum antara 4-12 minggu, bergantung kepada
kondisi lingkungan. Saluran pencernaan manusia biasanya terdapat kolonisasi
E.coli dalam 40 jam dan dapat melekat ke lapisan mukosa dari usus besar. E coli
dapat bertahan beberapa bulan sampai tahun dalam saluran pencernaan
manusia.E.coli dapat tumbuh pada media dengan glukosa sebagai komponennya.
Wild-type E.coli tidak membutuhkan faktor pertumbuhan dan secara metabolik

dapat mengubah glukosa menjadi makromolekul yang menyusun sel.Salah satu

faktor yang dapat mempengaruhi pertumbuhan E.coli antara lain adalah suhu.
E.coli dapat tumbuh pada suhu minimal 10oC dan maksimal 45oC. Suhu optimal
untuk pertumbuhan E.coli ialah 37oC, oleh karena itu E.coli termasuk ke dalam
golongan mesofilik.29,30,32
Habitat alami dari E.coli adalah di saluran pencernaan manusia dan hewan.
Beberapa koloni bakteri lain yang menjadi flora normal di saluran pencernaan
manusia yaitu Enterobacter, Klebsiella, tetapi bakteri ini juga dapat menimbulkan
penyakit pada manusia. Hal ini yang menjadi alasan bakteri ini dijadikan indikator
dari kontaminasi fekal pada air dan makanan. E.coli dapat masuk ke dalam tubuh
manusia terutama melalui konsumsi pangan yang tercemar, misalnya daging
mentah, daging yang dimasak setengah matang, susu mentah, dan cemaran fekal
pada air dan pangan. Dalam kondisi anaerobik , bakteri ini dapat tumbuh dengan
melakukan fermentasi, memproduksi asam dan gas sebagai produk akhirnya.30,32
Lebih dari 700 tipe antigen (serotipe) dari

E. coli di indentifikasi

berdasarkan O,H,K antigen. Serotipe ini berguna untuk menentukan beberapa

strain dari E.coli yang dapat menyebabkan penyakit. Strain patogen dari E.coli
dapat menyebabkan 3 tipe infeksi pada : Infeksi saluran kemih, neonatal
meningitis, dan gastroenteritis. Penyakit tersebut disebabkan oleh sebagian strain
dariE.coli bergantung kepada distribusi dan ekspresi dari virulensinya seperti
adhesin, invasin, toxin, dan kemampuan menyerang dan bertahan terhadap
pejamu.E.coli merupakan patogen yang paling sering menginfeksi manusia seperti
kolesistitis, apendisitis,peritonitis, infeksi pos operasi, sepsis. Infeksi saluran
pencernaan sering disebabkan oleh variasi dari E.coli yaitu EPEC, ETEC, EIEC,
EHEC, dan EAggEC. EPEC dan EAggEC sering menyebabkan diare pada bayi.
ETEC memproduksi enterotoksin yang menyebabkan gejala seperti penyakit
kolera. EIEC menyebabkan infeksi seperti disentri pada usus besar. EHEC
memproduksi verositotoksin dan menyebabkan kolitis.7,9,30

10

Gambar 2.2 Struktur sel bakteri

Sumber: Brain,Marshal, 2000

2.2.1Variasi dan Patogenitas Escherichia coli

a. Enteropathogenik E. coli (EPEC)
Bakteri ini merupakan bakteri penyebab diare pada bayi secara
epidemi dan sporadis. EPEC menyebabkan diare berair dan kadang
berdarah. EPEC atau disebut juga EAEC (Entero-Aggregative E. coli)
dapat menyebabkan Travelers's Diarrhea disertai mual, muntah, dan nyeri
perut. Cara infeksinya yaitu dengan cara melekatkan dirinya pada sel epitel
usus halus menggunakan EPEC adhesion factor (EAF), kemudian
menginjeksikan toksinnya kedalam enterosit.7
Penyebarannya

terjadi

karena

konsumsi

air

minum

yang

terkontaminasi dan produk daging yang terkontaminasi. Patogenesis dari

diare yang disebabkan infeksi EPEC kemungkinan disebabkan oleh invasi
bakteri ke sel pejamu dibandingkan memproduksi toksin. Dosis infeksi
EPEC yang dapat menginfeksi manusia sekitar 106 .Beberapa tipe EPEC
disebut juga sebagai diffusely adherent E. coli (DAEC), berdasarkan pola
spesifik dari perlekatannya. DAEC menyebabkan diare di Meksiko dan
Afrika Utara.7,30
b. Enterohemorrhagic E. coli (EHEC)
EHEC merupakan penyebab utama dari kolitis hemoragik atau
diare berdarah yang dapat menjadi fatal berupa sindrom hemolitik uremik.
Hal ini disebabkan oleh hemolisin yang dapat melisiskan eritrosit. Gejala
yang timbul adalah trombositopeni dan gagal ginjal akut. Mekanisme
patogenesisnya yaitu EHEC memiliki fimbriae spesifik untuk melekatkan
dirinya dengan enterosit sehingga menyebabkan kolitis hemoragik. EHEC

11

juga mampu memproduksi toksin misalnya shigela like toksin dan

verositotoksin.EHEC memiliki karakteristik memproduksi verotoksin atau
shigatoxin(Stx). Dosis infeksi dari bakteri ini yaitu 10 - 100 sel.Infeksi
EHEC kebanyakan akibat pencemaran air dan makanan dan daging yang
mentah, susu mentah, sayur-sayuran, susu basi dan jus apel yang tidak
dipasterisasi. EHEC merupakan organisme invasif sedang . Bakteri ini
tidak menginvasi sel mukosa seperti Shigella, tetapi memproduksi toksin
yang mirip dengan shiga toksin.7,30

Gambar 2.3Enterohemorrhagic E. Coli

Sumber: Todar K, 2012

2.2.2 Kultur dan Media Pertumbuhan Bakteri

Kultur bakteri merupakan suatu proses proliferasi bakteri dengan
menggunakan substrat nutrien yang sesuai. Beberapa medium memiliki
sumber energi organik seperti karbon, nitrogen, sulfur, fosfor, kalsium,
magnesium dan beberapa enzim. Beberapa bakteri juga membutuhkan
faktor pertumbuhan untuk dapat dikultur pada media yang sesuai.6
Setiap koloni mikrobayang akan diidentifikasi harusbenar-benar
murni dan untukmendapatkan biakan murnidigunakan media selektif yang
memungkinkan untuk isolasikoloni mikroba tersangkaberdasarkan pada
karakter biokimia dari mikroba yang akan mempengaruhi sifat
pertumbuhan bakteri pada suatu media spesifik. Identitas mikroba dapat
dilihat dari pembentukan koloni yang spesifik pada media.6,8

12

2.2.3

Identifikasi Escherichia coli

2.2.3.1 EMB Agar
EMB agar (Eosin Methylen Blue)merupakan medium
diferensiasi untuk isolasi bakteri Enterobacteriaceae. E. coli pada
medium ini memiliki penampakan koloni berwarna ungu
kehitaman pada bagian tengah dan kilap logam serta berdiameter
2-3 mm (Gambar 2.4A). Enterobacter aerogenes pada media ini
memiliki diameter 4-6 mm, koloni menonjol dan lebih mukoid,
berwarna pink dengan bagian tengah yang berwarna gelap dan
kebanyakan bergabung antara koloni yang satu dengan lainnya
(Gambar 2.4B). Sementara Pseudomonas aeruginosa memiliki
gambaran koloni yang colourless (Gambar 2.4C).Tidak memiliki
kilap logam dan bagian tengah

koloni berwarna keabuan.

Sementara untuk bakteri yang tidak memfermentasikan laktosa

koloninya tidak berwarna dan translusen.9,11

Gambar 2.4(A) Escherichia coli pada EMB agar(B) Enterobacter aerogenes pada EMB
agar(C) Pseudomonas aeruginosa pada EMB agar
Sumber: ASM Microbe Library.org

Eosin dan pewarna biru metilen menghambat pertumbuhan

bakteri Gram positif dan mendukung pertumbuhan bakteri Gram
negatif. Media ini mengandung laktosa dan sukrosa. Mikroba yang

13

dapat memfermentasi laktosa akan menghasilkan koloni dengan

inti berwarna gelap dan kilap logam, sedangkan mikroba yang
tidak dapat memfermentasi laktosa, koloninya tidak berwana.
Media ini cocok untuk mengkonfirmasi bahwa kontaminan
tersebut adalah E coli.9

2.2.3.2 MPN (Most Probable Number)

Metode MPN dapat digunakan untuk menghitung bakteri
koliform ( Total Colifrom). MPN merupakan suatu metode untuk
menghitung jumlah mikroba dengan menggunakan media cair
dalam tabung reaksi yang pada umumnya setiap pengenceran
menggunakan 3 atau 5 seri tabung dan perhitungan yang dilakukan
merupakan tahap pendekatan secara statistik. Prinsip utama metode
ini adalah mengencerkan sampel sampai tingkat tertentu sehingga
didapatkan konsentrasi mikroorganisme yang sesuai dan jika
ditanam dalam tabung menghasilkan frekuensi pertumbuhan
tabung positif. Semakin besar jumlah sampel yang dimasukkan,
semakin rendah pengenceran yang dilakukan maka semakin sering
tabung positif yang muncul. Semakin kecil jumlah sampel yang
dimasukkan, semakin tinggi pengenceran yang dilakukan maka
semakin jarang tabung positif yang muncul. Nilai MPN sangat
berguna untuk menentukan jumlah mikroorganisme dengan
konsentrasi rendah. Metode ini umumnya digunakan untuk
menganalisa susu, pangan, air atau tanah.9,25
Tabung positif ditunjukkan oleh adanya pertumbuhan
bakteri dan gas.9 Nilai MPN diperoleh dengan asumsi sebagai
berikut:

Bakteri dalam contoh menyebar secara acak

Bakteri dalam contoh tidak berkelompok tetapi saling terpisah

Organisme yang terdapat dalam contoh dapat tumbuh dalam

media selama inkubasi

14

Kondisi yang sesuai untuk pertumbuhan seperti media, suhu,

dan waktu inkubasi.
Perhitungan MPN berdasarkan pada jumlah tabung reaksi

yang positif, yakni yang ditumbuhi oleh mikroba setelah diinkubasi

pada suhu dan waktu tertentu. Pengamatan tabung yang positif
dapat dilihat dengan mengamati timbulnya kekeruhan atau
terbentuknya gas di dalam tabung kecil (tabung durham) yang
diletakan terbalik, yaitu jasad renik yang membentuk gas.9
Ada 3 tahap dari metode MPN :

Tahap presumtif

Sampel yang telah dikumpulkan diinokulasikan ke dalam laktosa broth

yang berisi tabung durham. Pada kultur yang positif, bakteri tumbuh
disertai dengan produksi asam dan gas. Karena beberapa bakteri dapat
memfermentasi laktosa dan memproduksi asam dan gas, hasil positif dari
tes presumtif merupakan indikator yang baik untuk mengetahui
keberadaan koliform.9

Tahap konfirmasi

Beberapa bakteri non koliform dapat menyebabkan hasil positif palsu pada
tahap presumtif. Oleh karena itu semua hasil positif dari tahap presumtif di
goreskan ke agar EMB dan di inokulasikan ke dalam Brilliant Green.9

Tahap Pelengkap
Dilakukan pewarnaan Gram untuk menentukan bakteri Gram
negatif atau Gram positif. Selain itu dilakukan juga uji IMViC (uji
Indol, uji Methyl Red, uji Voges Preskauer, uji penggunaan
Citrate).26

Kelebihan dari metode MPN antara lain

dengan

memperbanyak

tabung

yang

akurasi dapat ditingkatkan

digunakan

setiap

pengencerannya,

ukuran(volume) sampel yang cukup besar dibanding plate count. Sensitivitas

umumnya cenderung lebih baik pada konsentrasi mikroorganisme yang sedikit
dari pada plate count. Jika medium spesifik yang sesuai dengan pertumbuhan
bakteri target dapat dibuat maka perkiraan perhitungan MPN dapat dilakukan
berdasarkan medium tersebut.25

15

2.2.4

Lactose Broth
Lactose broth digunakan sebagai media untuk mendeteksi adanya

bakteri koliform dalam air, makanan, dan produk susu. Pepton dan ekstrak
daging menyediakan nutrien penting untuk metabolisme bakteri. Laktosa
menyediakan sumber karbohidrat yang dapat difermentasi untuk bakteri
koliform. Media ini biasanya digunakan dalam presumptive test atau uji
penduga untuk bakteri koliform. Kehadiran koliform ditandai dengan
munculnya gas pada tabung durham. Lactose broth dibuat dengan
komposisi 0,3% ekstrak daging; 0,5% pepton; dan 0,5% laktosa.9
2.3

Air Minum
Air minum merupakan air yang tanpa atau melalui proses pengolahan yang

memenuhi syarat kesehatan dan dapat langsung diminum. Air yang dapat
diminum yaitu air yang bebas dari bakteri yang berbahaya dan ketidakmurniaan
secara kimiawi. Air minum harus bersih, jernih, tidak berwarna, tidak berbau.
Selain itu, air minum merupakan air yang dapat langsung diminum langsung tanpa
dimasak terlebih dahulu. Sedangkan air bersih merupakan air yang digunakan
untuk keperluan sehari-hari yang memenuhi syarat kesehatan dan dapat diminum
setelah dimasak terlebih dahulu. Air yang terkontaminasi oleh organisme patogen
dapat menjadi penyebab menyebarnya penyakit infeksi. Sumber dari terdapatnya
patogen dalam air adalah karena terjadinya kontaminasi fekal.12,13,14
Dalam peraturan menteri kesehatan ditetapkan bahwa syarat air minum
yang sehat adalah memenuhi syarat fisika, mikrobiologi, kimia, dan radioaktif.
Selain itu air minum yang dikonsumsi tidak boleh menimbulkan gangguan
kesehatan. Jenis air minum meliputi: (a) Air yang didistribusikan melalui pipa
untuk keperluan rumah tangga; (b) air yang didistribusikan melalui tangki air; (c)
air kemasan; (d) air yang digunakan untuk produksi bahan makanan dan minuman
yang disajikan kepada masyarakat.15
Penyediaan air bersih harus diperhatikan kualitas dan kuantitasnya serta
harus memenuhi standar yang berlaku. Untuk itu setiap perusahaan penyedia air
minum harus selalu memeriksakan kualitas airnya sebelum didistribusikan pada
konsumen, karena air baku yang digunakan belum tentu memenuhi standar

16

sehingga perlu dilakukan pengolahan agar dapat memenuhi standar air minum.
Air minum yang ideal harus jernih, tidak berwarna, tidak berbau, tidak berasa dan
tidak mengandung kuman patogen. Pada hakikatnyapersyaratan ini dibuat untuk
mencegah terjadinya serta meluasnya penyakit bawaan air / waterborne disease.16
Air minum yang kita minum harus dilakukan pengawasan kualitasnya
meliputi air minum yang diproduksi oleh suatu perusahaan, baik pemerintah
maupun swasta yang didistribusikan ke masyarakat dengan sistem perpipaan dan
air minum yang diproduksi oleh suatu perusahaan, baik pemerintah maupun
swasta, didistribusikan kepada masyarakat dengan kemasan dan atau kemasan isi
ulang yang dilakukan oleh dinas kesehatan setempat.Pengawasan kualitas air
bertujuan untuk mencegah penurunan kualitas dan penggunaan air yang dapat
mengganggu dan membahayakan kesehatan, serta meningkatkan kualitas air.12,17
Sekarang ini kebutuhan air bagi masyarakat dipasok oleh PDAM yang
merupakan Badan Usaha Milik Daerah. Selain itu, air minum masyarakat juga
berasal dari perusahaan swasta yaitu air minum dalam kemasan (AMDK), yang
tergabung dalam Asosiasi Perusahaan Air Minum Dalam Kemasan Indonesia
(Aspadin), dan air minum yang diproduksi oleh depo-depo yang teergabung
dalam asosiasi Pengusaha depo air (Aspada).18
2.3.1

Persyaratan Kualitas Air Minum

Menurut Peraturan Menteri Kesehatan, air minum yang aman bagi

kesehatan adalah air minum yang memnuhi syarat fisika, kimia,

mikrobiologis dan radioaktif yang dimuat dalam parameter wajib dan
parameter tambahan. Untuk menjaga kualitas air minum yang dikonsumsi
oleh masyarakat, dilakukan pengawasan kualitas air minum secara internal
dan eksternal. Pengawasan secara internal dilakukan oleh penyelenggara
air minum yaitu badan usaha milik negara/daerah, koperasi,badan usaha
swasta, usaha perorangan,kelompok masyarakat atau individual

yang

melakukan penyelenggaraan penyediaan air minum untuk menjamin

kualitas air minum. Pengawasan secara eksternal dilakukan oleh dinas
kesehatan Kabupaten/Kota. Kegiatan yang dilakukan dalam pengawasan
kualitas air minum meliputi inspeksi sanitasi, pengambilan sampel air,

17

pengujian kualitas air, analisa hasil laboratorium, rekomendasi dan tindak

lanjut.5Adapun parameter wajib dan tambahan dalam persyaratan kualitas
air minum dapat dilihat dalam Tabel 2.2.
2.3.2

Air Minum Isi Ulang

Kebutuhan masyarakat terhadap air minum kian meningkat seiring

dengan pesatnya pertumbuhan penduduk. Selama ini sebagian besar

kebutuhan air minum dipenuhi dari sumber air tanah atau air bersih yang
berasal dari air permukaan yang diolah oleh Perusahaan Daerah Air
Minum (PDAM). Karena semakin rendahnya kualitas air sumur,
sementara PDAM juga belum mampu memasok air bersih dengan jumlah
dan kualitas cukup, pemakaian air minum dalam kemasan (AMDK)
meningkat tajam terutama di kalangan masyarakat menengah ke atas. Hal
ini karena air minum ini dianggap lebih praktis dan higienis oleh sebagian
masyarakat. Akan tetapi harga AMDK oleh sebagian masyarakat dianggap
terlalu mahal sehingga mereka beralih iar minum yang berasal dari depot
atau yang lebih dikenal dengan nama Air Minum Isi Ulang (AMIU).19
Salah satu upaya untuk memenuhi kebutuhan air minum adalah
produksi air minum isi ulang yang pada saat ini telah berkembang pesat di
seluruh daerah di Indonesia, terutama di perkotaan seiring dengan
pertumbuhan industri air dalam kemasan. Usaha ini ditempuh untuk
memberikan pilihan bagi masyarakat untuk mendapatkan air minum yang
baik ditengah-tengah semakin mahalnya harga air minum dalam
kemasan.Pengolahan air memiliki tiga tujuan yaitu untuk meningkatkan
estetika dari air agar dapat diterima oleh konsumen, untuk menghilangkan
senyawa toksik dan berbahaya dan untuk menghilangkan atau menonaktifkan organisme yang menyebabkan penyakit yang ada di dalam air.
20,21

Depot Air Minum adalah usaha industri yang melakukan proses

pengolahan air baku menjadi air minum dan menjual langsung kepada
konsumen. Air baku adalah air yang belum diproses atau sudah diproses
menjadi air bersih yang memenuhi persyaratan mutu sesuai Peraturan

18

Kesehatan untuk diolah menjadi produk air minum.

Air baku yang

digunakan Depot Air Minum harus memenuhi standar mutu dan

persyaratan kualitas air minum sebagaimana diatur dalam Peraturan
Menteri Kesehatan RI.5
Beberapa hal yang dapat mempengaruhi kualitas air minum isi
ulang yaitu hygiene dan sanitasi depot, sarana pengolahan, dan proses
pengolahan air minum isi ulang. Proses pengolahan air minum isi ulang
yang saat ini dilakukan diberbagai depot yang ada di masyarakat yaitu
proses ozonisasi, ultraviolet (UV), dan reversed osmosis (RO).22
Proses pengolahan air minum di Depot Air Minum meliputi
penampungan air baku, penyaringan/ filterisasi, desinfeksi dan pengisian.
Proses filtrasi bertujuan selain untuk memisahkan kontaminan tersuspensi
juga

memisahkan

campuran

yang

berbentuk

koloid

termasuk

mikroorganisme dari dalam air, sedangkan desinfeksi bertujuan untuk

membunuh

mikroorganisme

yang

tidak

tersaring

pada

proses

sebelumnya.19
Air baku yang akan digunakan sebagai air minum isi ulang akan
melewati beberapa tahap proses pengolahan. Mula-mula air baku dari
tangki penampung akan melewati filter dari bahan silika untuk menyaring
partikel kasar. Setelah itu memasuki karbon aktif untuk menghilangkan
bau. Tahap berikutnya adalah air disaring dengan saringan berukuran 0,3
mikron lalu ke saringan 0,1 mikron untuk menahan bakteri. Air yang telah
bebas dari bau dan bakteri tersebut kemudian ditampung di tabung khusus
yang berukuran lebih kecil dibanding tabung penampung air baku.
Selanjutnya adalah tahap mematikan mikroorganisme yang mungkin
masih tersisa. Untuk mematikan mikroorganisme, dapat digunakan sistem
lampu sinar ultraviolet (UV) pada instalasi air minum isi ulang.5

19

Tabel 2.1 Persyaratan Kualitas Air Minum

I.
No

Parameter Wajib
Jenis Parameter

Satuan

Kadar Maksimum Yang

diperbolehkan

Parameter

yang

berhubungan

langsung dengan kesehata n

a.

Parameter Mikrobiologi

1) E.coli

KoliformJumlah

per

per

100ml Sampel
2) Total

KoliformJumlah
100ml Sampel

b.

Kimia anorganik

1) Arsen

mg/l

0,01

2) Flourida

mg/l

1,5

3) Total Kromium

mg/l

0,05

4) Kadmium

mg/l

0,003

5) Nitrit, ( sebagai NO2-)

mg/l

6) Nitrat, (sebagai NO3-)

mg/l

50

7) Sianida

mg/l

0,07

8) Selenium

mg/l

0,01

Parameter

yang

tidak

langsung

berhubungan dengan kesehatan

a.

Parameter Fisik

1) Bau

Tidak berbau

2) Warna
3) Total

zat

padat

terlarut

TCU

15

mg/l

500

NTU

(TDS)
4) Kekeruhan
5) Rasa
6) Suhu
b.

Tidak berasa
O

Suhu udara 3

Parameter Kimiawi

1) Aluminium

mg/l

0,2

2) Besi

mg/l

0,3

3) Kesadahan

mg/l

500

4) Klorida

mg/l

250

5) Pangan

mg/l

0,4

Sumber: Permenkes RI, 2010

20

2.3.3

Produksi Air Minum Isi Ulang

Urutan proses produksi air minum di Depot Air Minum adalah

sebagai berikut :

Penampungan Air Baku dan Syarat Bak Penampung

Air baku yang diambil dari sumbernya diangkut dengan
menggunakan tangki dan selanjutnya ditampung dalam bak atau
tangki penampung. Bak penampung harus dibuat dari bahan tara
pangan (food grade), harus bebas dari bahan-bahan yang dapat
mencemari air.5Tangki pengangkutan mempunyai persyaratan yang
terdiri atas :
a. Khusus digunakan untuk air minum
b. Mudah dibersihkan serta di desinfektan dan diberi
pengaman
c. Harus mempunyai manhole
d. Pengisian dan pengeluaran air harus melalui kran
e. Selang dan pompa yang dipakai untuk bongkar muat air
baku harus diberi penutup `yang baik, disimpan dengan am
an dan dilindungi dari kemungkinan kontaminasi.
Tangki pengangkutan harus dibersihkan, disanitasi dan
desinfeksi bagian luar dan dalam minimal 3 bulan sekali. Air baku
harus diambil sampelnya, yang jumlahnya cukup mewakili untuk
diperiksa terhadap standar mutu yang telah ditetapkan oleh Menteri
Kesehatan, sesuai dengan ketentuan pada keputusan menteri
kesehatan.5

Penyaringan bertahap terdiri dari :

a. Saringan berasal dari pasir atau saringan lain yang efektif
dengan fungsi yang sama. Fungsi saringan pasir adalah menyaring
partikel-partikel yang kasar. Bahan yang dipakai adalah butir-butir
silika (SiO2) minimal 80%. Ukuran butir-butir yang dipakai
ditentukan dari mutu kejernihan air yang dinyatakan dalam NTU.5
b. Saringan karbon aktif yang berasal dari batu bara atau
batok kelapa berfungsi sebagai penyerap bau, rasa, warna, sisa

21

khlor dan bahan organik. Daya serap terhadap Iodine (I2) minimal
75%.5
c. Saringan/Filter lainnya yang berfungsi sebagai saringan
halus berukuran maksimal 10 (sepuluh) micron.5

Desinfeksi
Desinfeksi

bertujuan untuk membunuh kuman patogen.

Proses desinfeksi dengan menggunakan ozon (O3) berlangsung

dalam tangki atau alat pencampur ozon lainnya dengan konsentrasi
ozon minimal 0,1 ppm dan residu ozon sesaat setelah pengisian
berkisar antara 0,06 - 0,1 ppm. Tindakan desinfeksi selain
menggunakan ozon, dapat dilakukan dengan cara penyinaran
Ultraviolet (UV) dengan panjang gelombang 254 nm atau kekuatan
2537 0 A dengan intensitas minimum 10.000 mw detik per cm2.5
a. Pembilasan, Pencucian dan Sterilisasi Wadah : Wadah
yang dapat digunakan adalah wadah yang terbuat dari
bahan tara pangan (food grade) dan bersih. Depot Air
Minum

wajib

memeriksa

wadah

yang

dibawa

konsumen dan menolak wadah yang dianggap tidak

layak untuk digunakan sebagai tempat air minum.
Wadah yang akan diisi harus di sanitasi dengan
menggunakan ozon (O3) atau air ozon (air yang
mengandung ozon). Bilamana dilakukan pencucian
maka harus dilakukan dengan menggunakan berbagai
jenis deterjen tara pangan (food grade) dan air bersih
dengan suhu berkisar 60-850C, kemudian dibilas
dengan air minum/air produk secukupnya untuk
menghilangkan sisa-sisa deterjen yang dipergunakan
untuk mencuci.5
b. Pengisian wadah dilakukan dengan menggunakan alat
dan mesin serta dilakukan dalam tempat pengisian yang hygienis.5

22

c. Penutupan wadah dapat dilakukan dengan tutup yang

dibawa konsumen dan atau yang disediakan oleh Depot Air
Minum.5

2.4 Kerangka Teori

Proses
pengolahan

Air Baku

Air
Pegunungan

Air
Tanah

Air
Permukaan

Penampungan
air baku

Depot Air
Minum Isi
Ulang

Desinfeksi
(Ozon/UV)

Penyaringan

Pengisian,
pembilasan
penutupanWadah

Hygine dan
sanitasi Depot

Tidak ada
Kontaminasi

Ada
Kontaminasi

Air Minum Isi Ulang

Layak Minum

Escherichia coli

Tidak Layak
Minum

23

2.5 Kerangka Konsep

Air Minum Isi Ulang

Depot air minum isi

ulang

Proses
pengolahan

Sanitasi dan
higienitas

Penampungan air baku

Desinfeksi ( penutupan wadah,
pencucian, pembilasan)
Penyaringan air

Resiko
Kontaminasi

Escherichia coli

Keterangan
Variabel terikat

Variabel Bebas

Uji MPN Koliform:

Uji presumtif

Uji Pelengkap : Inokulasi ke EMB agar,

Pewarnaan Gram, uji gula-gula, IMViC

24

2.5 Definisi Operasional

No
1

Variable

Definisi Operasional

Air Minum

Air minum yang diisi

Isi Ulang

ulang dan dijual di depot

Alat Ukur

Hasil Ukur

Skala Ukur

Galon air

Liter

Kategorik

Bakteri Gram negative,

bentuk batang berwarna
merah pada pewarnaan
2

Escherichia

Gram, memfermentasi

coli

laktosa, indol +, motil +,

MR +,VP -, Sitrat -,

Pewarnaan
Gram

Uji IMVIC

EMB agar

Ada/
tidak
ada

Kategorik

membentuk koloni kilap

logam pada EMB agar
Tabung berisi lactose

Hasil positif

broth yang berubah

uji

menjadi keruh dan

presumptive

terdapat gas pada tabung

Tabel MPN 3 seri

tabung

Jumlah
koliform/100

Numerik

ml air

durham
Suatu uji yang terdiri
dari uji indol, MR-VP,
4

Uji IMViC

Media SIM

dan sitrat umtuk

Media MR-VP

mengidentifikasi

Agar miring sitrat

Positif/negatif

Kategorik

Escherichia coli.
Uji fermentasi
karbohidrat yang terdiri
dari glukosa, laktosa,
5

Uji Gula-

maltosa, mannitol, dan

Gula

sukrosa dengan media

Positif/negatif
Media uji gula gula

dan/atau ada

Kategorik

gas/tidak

cair dalam tabung

dengan tutup kapas
berwarna

Pewarnaan
Gram

Pewarna ungu

Gram(-) atau

Pewarnaan diferensial

kristal karbol, lugol,

Gram (+),

untuk menentukan sifat

alkohol 96%,

koliform/

safranin, mikroskop

bukan

olympus

koliform

dan morfologi bakteri

Kategorik

BAB 3
METODE PENELITIAN
3.1

Desain Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode deskriptif dengan metode Most

Probable Number (MPN), pewarnaan Gram, uji gula-gula dan uji IMVIC.
3.2

Lokasi dan Waktu Penelitian

Penelitian

ini

dilakukan

di

Laboratorium

Mikrobiologi

Fakultas

Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah

Jakarta pada bulan April s.d Agustus 2015.
3.3

Populasi dan Sampel

3.3.1

Populasi
Populasi adalah semua depot air minum isi ulang yang terletak di

wilayah kelurahan Pisangan dan Cirendeu yaitu sebanyak 9 depot.

3.3.2

Sampel Yang Diteliti

Sampel yang diteliti adalah semua air minum isi ulang dari depot

yang terletak di wilayah kelurahan Pisangan dan Cirendeu yaitu sebanyak

9 sampel
3.3.3

Cara Pengambilan Sampel

Sampel diambil secara total sampling. Sampel air diambil dari

depot air minum isi ulang menggunakan galon air yang di desinfeksi oleh
depot yang kemudian langsung dipindahkan ke dalam wadah steril.
Sampel air harus segera di proses, tidak boleh lebih dari 24 jam sejak saat
pengambilan sampel.
3.3.4

Identifikasi Variabel
3.3.4.1 Variabel Bebas
Air minum isi ulang dari Depot Air Minum Isi Ulang di
kelurahan Pisangan-Cirendeu.

25

26

3.3.4.2 Variabel Terikat

Jumlah bakteri koliform dan bakteri Escherichia coli
yang diisolasi dari air minum isi ulang.
3.3.5

Kriteria Inklusi dan Kriteria Ekslusi

3.3.5.1 Kriteria Inklusi
Kriteria Inklusi dalam penelitian ini yaitu air minum isi
ulang yang diisi langsung dari depot di

wilayah kelurahan

Pisangan dan Cirendeu tidak lebih dari 24 jam

3.3.5.2 Kriteria Ekslusi

Air minum isi ulang yang wadah dan tutupnya terdapat

kerusakan

3.4

Air minum isi ulang yang terlihat keruh

Cara Kerja Penelitian

3.4.1

Pengujian Most Probable Number (MPN)

Metode ini terdiri dari dua tahap pengujian yaitu uji pendugaan

(presumptive test), uji konfirmasi (confirmed test), danuji pelengkap

(complete test).23
3.4.1.1 Persiapan Alat dan Bahan
Sterilisasi alat yang akan digunakan dengan autoklaf.
Ukur contoh cair sebanyak 200 ml secara aseptik kemudian
masukkan dalam wadah steril.Siapkan 9 tabung reaksi yang diisi
dengan masing-masing 10 ml lactose broth serta tabung durham di
dalamnya yang telah di autoklaf sebelumnya pada suhu 1210C.23
3.4.1.2

Tahap Pendugaan ( Presumtif test)

Ambil 9 tabung reaksi yang telah di autoklaf. Masukan

ke dalam 3 tabung pertama sebanyak 10ml sampel, 3 tabung kedua

sebanyak 1ml sampel dan 3 tabung terakhir sebanyak 0,1 ml
sampel. Inkubasi pada temperatur 35 C selama 24 jam sampai

27

dengan 48 jam. Perhatikan adanya gas yang terbentuk di dalam

tabung Durham. Hasil uji dinyatakan positif apabila terbentuk gas.
23

3.4.1.3 Inokulasi ke EMB agar

Buat goresan pada media EMB agar dari tabung LB yang
positif, inkubasi pada temperatur 35 C selama 18 jam sampai
dengan 24 jam untuk diidentifikasi. Koloni yang diduga E. coli
berdiameter 2 mm sampai dengan 3 mm, warna hitam atau gelap
pada bagian pusat koloni, dengan atau tanpa metalik kehijauan
yang mengkilap pada media EMB agar. 23
3.4.1.4 Tahap Pelengkap (Complete Test)
Tahap pelengkap ini terdiri dari pewarnaan Gram, uji fermentasi
karbohidrat/ uji gula-gula, dan uji IMViC.
3.4.2

Uji biokimia dengan uji gula-gula dan uji IMViC

Ambil koloni yang diduga dari masing-masing media EMB agar

dengan menggunakan ose

untuk dilakukan pewarnaan Gram dan uji

biokimia. 23
3.4.2.1 Uji produksi indol
Inokulasikan koloni dari EMB agar pada media SIM dan
inkubasikan pada temperatur 35 C selama 24 jam 2
jam.Teteskan larutan Erlich 1-3 tetes. Hasil reaksi positif ditandai
dengan adanya bentuk cincin merah pada lapisan atas media,
sedangkan hasil reaksi negatif ditandai dengan terbentuknya cincin
kuning. 23
3.4.2.2 Uji Voges-Proskauer (VP)
Ambil biakan dari media EMB agar lalu inokulasikan ke
tabung yang berisi 10 ml media MR-VP dan inkubasikan pada
temperatur 35 C selama 48 jam 2 jam. Pindahkan 5 ml MR-VP
ke tabung reaksi dan tambahkan 0.6 ml larutan -naphthol dan 0.2

28

ml KOH 40 %, kemudian digoyang-goyang.Hasil reaksi positif

ditandai adanya warna merah muda eosin dalam waktu 2 jam.23
3.4.2.3 Uji Methyl Red (MR)
Ambil biakan dari media EMB agar lalu inokulasikan ke
tabung yang berisi 10 ml media MR-VP dan inkubasikan pada
temperatur 35 C selama 48 jam 2 jam. Tambahkan 2 tetes
sampai dengan 5 tetes indikator MR pada tabung. Hasil uji positif
ditandai adanya warna merah dan hasil reaksi negatif ditandai
adanya warna kuning. 23
3.4.2.4 Uji Sitrat
Inokulasikan koloni dari media EMB agar ke dalam media
agar miring sitrat, dan inkubasikan pada temperatur 35 C selama
96 jam. Hasil uji positif ditandai dengan terbentuknya kekeruhan
pada media.23
3.4.2.5 Uji Gula-Gula
Inokulasikan koloni dari EMB agar sebanyak 1 ose pada
tabung uji gula-gula dan inkubasikan selama 24jam. Hasil uji
positif ditandai dengan perubahan warna larutan uji menjadi
kuning dan disertai pembentukan gas pada tabung durham. 23
3.4.2.6 Pewarnaan Gram
Siapkan objek glass yang bersih. Lalu buatlah preparat
ulas (smear) yang telah difiksasi dari EMB agar yang diduga E.
coli. Kemudian teteskan zat pewarna primer ungu kristal violet,
usahakan semua ulasan terwarnai dan tunggu selama 4 menit,
kemudian cuci dengan air mengalir.Teteskan mordant(lugols
iodine) lalu tunggu 1menit, kemudian cuci dengan air mengalir.
Lalu beri larutan pemucat (etanol 96%) setetes demi setetes hingga
etanol yang jatuh berwarna jernih. Jangan sampai terlalu banyak
(overdecolorized), kemudian cuci dengan air mengalir. Teteskan
counterstain (safranin) dan tunggu selama 45 detik, kemudian

29

cuci dengan air mengalir.Keringkan preparat dengan kertas tissue

yang ditempelkan di sisi belakang ulasan (jangan sampai merusak
ulasan) lalu biarkan mengering di udara. Hasil pewarnaan bakteri
Gram negatif akan berwarna merah dan bakteri Gram positif
berwarna ungu. Apabila hasil pewarnaan menunjukkan Gram
negatif, amati morfologi dan lanjutkan dengan melakukan uji
IMVIC dan uji gula-gula.. Jika kultur dugaan tersebut E. coli maka
akan menunjukkan sifat Gram negatif dan morfologi sel berbentuk
batang pendek. 23
3.4.3

Alat dan Bahan Penelitian

3.4.3.1 Alat Penelitian
a. Tahap pengujian MPN
Alat yang digunakan dalam tahapan ini yaitu:
tabung reaksi, tabung durham, gelas kimia, mikropipet,
botol sampel, pinset, pembakar bunsen, timbangan,
magnetic stirer; inkubator, penangas air, autoklaf, lemari
pendingin (refrigerator), plastik tahan panas, rak tabung,
tissue, karet, kapas, spidol, label, alkohol swab, laminar air
flow.
b. Penanaman ke Media selektif
Alat yang digunakan yaitu bunsen,korek,laminar
air flow, jarum inokulasi (ose) bulat, label, spidol,
inkubator, lemari es.
c. Pewarnaan Gram
Alat yang digunakan antara lain glass objek,
bunsen,jarum inokulasi (ose) bulat, rak pewarnaan, botol
aquadest, tissue, bunsen,korek, spidol, mikroskop.
d. Uji biokimia
Alat yang digunakan yaitu tabung reaksi,laminar
air flow, label, spidol, rak tabung reaksi, inkubator,
bunsen,korek, jarum inokulasi (ose) bulat dan jarum.

30

3.4.3.2 Bahan Penelitian

a. Tahap pengujian MPN
Bahan yang digunakan antara lain air minum isi
ulang dan larutan lactose broth.
b. Tahap penanaman ke media selektif
Bahan yang digunakan antara lain media selektif
EMB agar.
c. Pewarnaan Gram
Bahan

yang

digunakan

antara

lain

larutan

pewarnaan Gram ungu kristal karbol, safranin, alkohol

96%,lugol, aquadest, minyak emersi.
d. Tahap uji biokimia
Bahan yang digunakan antara lain adalah larutan uji
gula-gula yang terdiri dari glukosa, laktosa, maltosa,
mannitol, sukrosa, media SIM, media cair MR-VP, media
agar miring sitrat, alpha naftol, KOH 40%.

31

3.4.4 Alur Penelitian

Pembuatan proposal penelitian

Lulus uji proposal

Pengumpulan sampel dari Depot Air Minum

isi Ulang (DAMIU) di Kelurahan PisanganCirendeu
Sebanyak 500ml sampel dari tiap-tiap DAMIU di tampung di wadah steril

Uji pendugaan (presumptive test)

Interpretasi
menggunakan tabel
MPN seri 3 tabung

Hasil (+)

Hasil (-)

Uji tidak dilanjutkan ke

tahap selanjutnya
Hasil : Jumlah
koliform/100ml air

Uji tidak dilanjutkan

ke tahap selanjutnya

Hasil (-)
Inokulasi ke EMB
agar

Hasil positif
(koloni diduga E.coli)

Pewarnaan
Gram
Uji IMVIC

Uji gula-gula

Interpretasi hasil

Gambar 3.1 Alur penelitian

3.5

Analisis data
Data yang telah terkumpul diolah dan disajikan dalam bentuk tabel.

Selanjutnya hasilnya dibandingkan dengan persyaratan air minum berdasarkan

Peraturan Menteri Kesehatan RI Nomor 492/Menkes/per/IV/2010.

BAB 4
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1

Hasil Uji Most Probable Number (MPN) Koliform

4.1.1

Tahap Uji Pendugaan ( Presumptive Test )

Sampel air minum isi ulang yang diambil di depot dari kelurahan

Pisangan dan Cirendeu sebanyak 9 depot, diuji menggunakan metode most

probable number dengan seri 3 tabung setiap pengencerannya. Tahap
pertama yang dilakukan yaitu uji pendugaan (presumptive test) dengan
menggunakan media berupa lactose broth karena merupakan media untuk
mendeteksi adanya bakteri koliform. Hasil positif ditandai dengan
terbentuknya gas dalam tabung durham dan bersifat asam bila warna
media menjadi kuning yang dapat dilihat pada gambar 4.1.
A

Gambar 4.1 (A) Hasil negatif pada lactose broth,

(B) Hasil positif pada lactose broth

Berdasarkan gambar diatas maka didapatkan hasil positif apabila

terbentuk gas pada tabung durham. Di dalam lactose broth mengandung
pepton dan ekstrak daging yang menyediakan nutrien penting untuk
metabolisme bakteri. Laktosa yang terkandung juga menyediakan sumber
karbohidrat yang dapat difermentasi oleh bakteri koliform. Keberadaan
bakteri koliform ditandai dengan adanya gas di dalam tabung durham,

32

33

hasil positif tersebut kemudian dicocokkan dengan tabel MPN seri 3

tabung dan dapat dilihat dalam tabel 4.1.
Tabel 4.1 Hasil Uji MPN
MPN Seri 3 Tabung

Sampel

MPN

3x10ml

3x1ml

3x0,1ml

(per 100ml)

460

23

210

240

240

150

460

150

Berdasarkan Tabel 4.1 dari 9 sampel air minum isi ulang yang diuji 8
sampel tidak memenuhi syarat batas maksimal bakteri koliform yang ditetapkan
dalam

Peraturan

Menteri

Kesehatan

Republik

Indonesia

No.492/MENKES/Per/IV/2010 yaitu kadar maksimum bakteri koliform 0 per 100

ml air.Pada pemeriksaan sampel air minum isi ulang, didapatkan sampel dengan
jumlah bakteri koliform paling sedikit yaitu sampel 4 dengan 4 per 100 ml airdan
sampel 2 yaitu 23 per 100 ml air. Sampel yang mengandung jumlah bakteri
koliform terbanyak yaitu sampel 1 dan sampel 8 yaitu 460 per 100 ml air.
Sementara sampel 5 dan 6 mengandung jumlah bakteri koliform sebanyak 240 per
100ml air. Sampel 7 dan 8 memiliki jumlah bakteri koliform yang sama yaitu 150
per 100ml air. Dan untuk sampel 3 mengandung jumlah bakteri koliform
sebanyak 210 per 100ml air. Sehingga ddidapatkan kesimpulan dari 9 sampel
yang diuji sebanyak 8 sampel mengandung bakteri koliform di atas batas
maksimum dan 1 sampel berdasarkan persyaratan kualitas air minum menurut
Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No.492/MENKES/Per/IV/2010.
Adanya bakteri koliform di dalam air minum isi ulang menunjukkan kemungkinan
adanya kontaminasi serta adanya mikroba yang bersifat enteropatogenik yang
dapat mengganggu kesehatan.

34

Faktor yang mungkin menyebabkan hasil positif dari uji presumptif MPN
ini adalah terjadinya kontaminasi air minum isi ulang pada proses pengolahannya
antara lain penampungan air baku, desinfeksi maupun penyaringan. Selain itu
sanitasi dan higienitas dari depot air minum isi ulang itu sendiri dapat
mempengaruhi hasil uji MPN. Sanitasi yang buruk serta higienitas yang rendah
menyebabkan terjadinya kontaminasi. Berdasarkan hasil observasi dari depot air
minum isi ulang yang menjadi sampel penelitian ini ada beberapa yang memiliki
sanitasi dan higienitas yang buruk dan proses desinfeksi wadah yang kurang
memenuhi syarat yaitu pada sampel 1 dan 8. Hal ini dapat menjelaskan mengapa
hasil MPN terhadap sampel air minum isi ulang dari depot tersebut positif dan
menunjukkan hasil yang paling banyak.
Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian yang sama yang dilakukan
oleh Radji M (2008) terhadap air minum isi ulang di daerah Lenteng Agung dan
Srengseng berjumlah 13 sampel yang diperiksa, ternyata semuanya mengandung
bakteri koliform.Penelitian lain yang dilakukan oleh Bambang A (2014)di
Manado yang berjumlah

9 sampel, ternyata semuanya mengandung bakteri

koliform sehingga tidak memenuhi persayaratan kualitas air minum menurut

Peraturan

Menteri

Kesehatan

No.492/MENKES/Per/IV/2010.Pratiwi A (2007)

Republik

Indonesia

juga meneliti kualitas air

minum isi ulang secara bakteriologis di Bogor dengan hasil dari 27 depot hanya 2
yang tidak memenuhi syarat. Hasil penelitian yang bervariasi ini dapat disebabkan
oleh banyak faktor antara lain sanitasi dan higienitas depot, operator depot serta
proses pengolahan air minum isi ulang yang dapat menjadi sumber kontaminasi.
4.2

Identifikasi Escherichia coli

Setiap sampel yang memberi hasil positif pada uji presumtif di

inokulasikan pada media EMB agar dan diinkubasikan pada suhu 35oC selama 24
jam. Media uji EMB agar merupakan medium diferensiasi untuk isolasi bakteri
koliform, adanya Eschecrichia coli ditandai dengan koloni berwarna ungu
kehitaman pada bagian tengah dan kilap metalik serta berdiameter 2-3 mm seperti
terlihat pada gambar 4.2. Hasil inokulasi pada EMB agar kemudian dilanjutkan
dengan uji gula-gula dan uji IMVIC serta dilakukan pewarnaan Gram.

35

Sampel air minum isi ulang yang di uji, hasil inokulasi pada EMB agar
memberikan hasil yang bervariasi seperti yang terlihat pada tabel 4.2.

Gambar 4.2 Hasil inokulasi pada EMB Agar

Sampel 4 tidak dilakukan inokulasi ke EMB agar karena menunjukkan hasil

negatif pada uji presumptif, kemudian sebanyak 8 sampel yang telah di uji dan
diinokulasikan di EMB agar, didapatkan hasil 5 sampel air minum isi ulang
menunjukkan koloni dengan kilap logam, hal ini diduga merupakan koloni dari
E.coli dikarenakan EMB agar mengandung eosin dan methylen blue yang mampu
menghambat pertumbuhan bakteri Gram positif dan mendukung pertumbuhan
bakteri Gram negatif. Selain itu, laktosa yang terkadung didalamnya diferementasi
oleh bakteri yang mampu memfermentasikan laktosa sehingga akan menghasilkan
koloni dengan inti gelap dengan kilap logam yang menandakan adanya produksi
asam. Escherichia coli merupakan bakteri yang dapat memfermentasikan latosa
secara cepat dan memproduksi asam yang banyak sehingga mengasilkan koloni
kilap logam akibat endapan pigmen hijau metalik.8,32
Penelitian yang sama yang dilakukan oleh Pratiwi A (2007) terhadap air
minum isi ulang di Bogor didapatkan hasil dari 27 sampel yang diuji, hanya1
sampel mengandung E.coli. Sementara dalam penelitian lain yang juga dilakukan
oleh Radji M (2008) dari 13 sampel tidak ada satupun sampel yang mengandung
E.coli. Dan peneitian lain oleh Bambang A (2014) didapatkan hasil dari 9 sampel
yang diuji ternyata yang mengandung E.colihanya 7 sampel. Keberadaan E.coli
menandakan adanya kontaminasi fekal yang dapat disebabkan oleh banyak

36

faktorantara lain sanitasi dan higienitas depot air minum yang buruk, adanya
kontaminasi peralatan serta ketidak optimalan proses desinfeksi/sterilisasi.

Tabel 4.2 Hasil Inokulasi EMB Agar

No

Sampel

Koloni pada EMB agar

Keterangan

Sampel 1

Koloni berwarna ungu kehitaman dan pink

Enterobacter aerogenes

mukoid
2

Sampel 2

Koloni dengan kilap logam

E.coli

Sampel 3

Koloni dengan kilap logam

E.coli

Sampel 4

Tidak dilakukan inokulasi

Sampel 5

Koloni berwarna pink dan mukoid

Pseudomonas

Sampel 6

Koloni berwarna pink

Pseudomonas

Sampel 7

Koloni dengan kilap logam

E.coli

Koloni berwarna pink dan mukoid

Pseudomonas/Enterobacter

Koloni dengan kilap logam

E.coli

Koloni berwarna ungu kehitaman

Enterobacter

Koloni berwarna pink keunguan dan mukoid

Pseudomonas

Koloni dengan kilap logam

E.coli

Koloni berwarna pink-ungu kehitaman dan

Pseudomonas/Enterobacter

Sampel 8

Sampel 9

mukoid

.
4.3

Pewarnaan Gram
Hasil yang didapatkan pada uji pewarnaan Gram menunjukkan semua

sampel merupakan bakteri Gram negatif. Hasil yang diperoleh dapat dilihat dalam
tabel 4.3.

Gambar 4.3 Hasil Pewarnaan Gram (-)

pada sampel air minum isi ulang
Tampak morfologi batang berwarna merah

37

Pada penelitian ini yang dilakukan uji pewarnaan Gram hanya 8 sampel,
semua sampel menunjukkan gambaran mikroskop berbentuk batang dan berwarna
merah, dengan demikian 8 sampel air minum isi ulang tersebut mengandung
bakteri Gram negatif dan merupakan golongan bakteri koliform.

Tabel 4.3 Hasil Pewarnaan Gram

No

Sampel

Morfologi

Keterangan

Sampel 1

Batang, berwarna merah

Gram (-), koliform

Sampel 2

Batang, berwarna merah

Gram (-), koliform

Sampel 3

Batang, berwarna merah

Gram (-), koliform

Tidak dilakukan

4
5

Sampel 5

Batang, berwarna merah

Gram (-), koliform

Sampel 6

Batang, berwarna merah

Gram (-), koliform

Sampel 7

Batang, berwarna merah

Gram (-), koliform

Sampel 8

Batang, berwarna merah

Gram (-), koliform

Sampel 9

Batang, berwarna merah

Gram (-), koliform

Berdasarkan tabel 4.3 hasil uji pewarnaan Gram, semua sampel merupakan Gram
negatif, hal ini disebabkan bakteri Gram negatif memiliki dinding sel yang lebih
tipis, kandungan lipid yang lebih tinggi, dan lapisan peptidoglikan yang tipis
sehingga ketika diberi perlakuan dengan alkohol, hal ini akan mengekstraksi
lipid yang akan meyebabkan permeabilitas dinding sel meningkat. Kemudian
terjadi kompleks karbol gentian violet dan lugol akan keluar dari dinding sel dan
menyerap zat warna kedua (safranin) yang akan mewarnai bakteri Gram negatif
sehingga menjadi berwarna merah.12
4.4

Uji Gula-Gula ( Fermentasi Karbohidrat)

Pada penelitian ini yang dilakukan, hanya 5 sampel yang dilakukan uji

fermentasi karbohidrat karena pada inokulasi di EMB agar menunjukkan

gambaran kilap logam. Hasil yang diperoleh dapat dilihat pada tabel 4.4
dansampel 4 tidak dilakukan uji gula-gula karena memberikan hasil negatif pada
uji presumptif MPN. Seluruh sampel menunjukkan dapat memfermentasi
karbohidrat seperti glukosa, laktosa, maltosa, manitol, sukrosa disertai dengan
pembentukan gas. Hal ini disebabkan karena indikator pH yang terkandung di

38

dalam media uji fermentasi karbohidrat yaitu phenol red akan berubah menjadi
kuning jika bakteri yang diuji mampu memfermentasi karbohidratdisertai
terbentuknya produk asam. Karbohidrat yang digunakan beragam, biasanya
adalah glukosa, sukrosa, laktosa dan manitol. Produk akhir dari glikolisis berupa
piruvat yang akan dikonversi sehingga membentuk asam. Kemudian produk asam
tersebut di ubah menjadi H2 dan CO2 melalui mekanisme enzim hidrogen lyase
sehingga menghasilkan gas. Gas yang terbentuk kemudian terperangkap ke dalam
tabung durham.31

Gambar. 4.4 Hasil positif uji gula-gula

Tabel 4.4 Uji Fermentasi Karbohidrat ( Uji Gula-Gula)

Sampel

Glukosa

Laktosa

Maltosa

Manitol

Sukrosa

Tidak dilakukan

1
2

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

Tidak dilakukan

Tidak dilakukan

Tidak dilakukan

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

+g

39

4.5

Uji IMVIC ( Indole, Motile, MR-VP, Citrate)

Uji IMVIC dilakukan terhadap sampel yang menunjukkan hasil positif

pada presumptif tes, bersifat Gram negatif yang dilihat dari hasil pewarnaan Gram
dan terhadap koloni kilap logam yang tumbuh pada EMB agar. Hasil yang di
dapatkan dari uji IMVIC cukup bervariasi. Hal tersebut dapat dilihat dalam tabel
4.5. Sampel yang diujihanya 5 sampel, sebagian besar menunjukkan hasil indol
positif, motilitas positif dan sitrat positif.
A

Gambar 4.5 (A) Hasil positif uji Indol

(B) Hasil negatif uji Indol

Berdasarkan hasil penelitian, semua sampel diuji menggunakan media

SIM dan menunjukkan hasil indol positif, hal ini disebabkan bakteri memiliki
enzim triptopinase dapat mengkonversi asam amino triptofan menjadi indol. Hal
tersebut

bergantung

pada

reaksi

kimia

antara

indol

dan

p-

dimetilaminobenzaldehida (DMAB) pada kondisi asam untuk menghasilkan

pewarna merah rosindole.Dengan penambahan reagen Kovacs yang mengandung
DMAB akan menghasilkan rosindole berwarna merah akibat reaksi antara indol
dengan DMAB. Tetapi dalam penelitian ini, tidak menggunakan reagen Kovacs
karena ketidaktersedianya reagen tersebut sehingga diganti menjadi reagen erlich.
Reagen erlich dapat dijadikan alternatif untuk uji indol karena di dalamnya juga
terkandung DMAB yang dapat bereaksi dengan indol sehingga menghasilkan
rosindol yang berwarna merah. Bakteri yang menghasilkan uji indol positif yaitu
E.coli.31

40

Tabel 4.5 Hasil uji IMVIC

Sampel

SIM

MR

VP

Sitrat

Tidak dilakukan

1
2

+/+

+/+

Tidak dilakukan

Tidak dilakukan

Tidak dilakukan

+/+

+/+

+/+

Gambar 4.6 (A) Hasil negatif uji sitrat, (B) Hasil positif uji sitrat,
(C) Hasi positif uji MR,
(D) Hasil negatif uji MR, (E) Hasil negatif uji VP

41

4.6. Hasil Uji Mikrobiologis Air Minum Isi Ulang

Hasil uji mikrobiologi terhadap 9 sampel air minum isi ulang dari depot di kelurahan Pisangan dan Cirendeu didapatkan 8
sampel mengandung bakteri koliform dan 5 sampel terdapat E.coli. Hasil yang dieproleh dapat dilihat dalam tabel 4.6.
Tabel 4.6 Hasil Uji Mikrobiologis Air Minum Isi Ulang
Sampel

MPN Seri 3

Jumlah

Tabung

Pewarnaan

Inokulasi pada EMB agar

Uji Fermentasi Karbohidrat

Gram

Uji

Interpretasi

IMVIC

331

460

Gram -

Enterobacter

Tidak dilakukan

300

23

Gram -

E.coli

+g

+g

+g

+g

+g

++--

E.coli

322

210

Gram -

E.coli

+g

+g

+g

+g

+g

+--+

E.coli Citrat +

000

Gram -

330

240

Gram -

Pseudomonas

Tidak dilakukan

330

240

Gram -

Pseudomonas

Tidak dilakukan

321

150

Gram -

E.coli

Tidak dilakukan

+g

+g

+g

+g

+g

+--+

E.coli Citrat +

+g

+g

+g

+g

+g

+--+

E.coli Citrat +

+g

+g

+g

+g

+g

+--+

E.coli Citrat +

Pseudomonas/Enterobacter
8

331

460

Gram -

E.coli
Pseudomonas/Enterobacter

321

150

Gram -

E.coli
Pseudomonas/enterobacter

42

Berdasarkan tabel 4.6, dari 9 sampel yang diuji satu sampel tidak
ditemukan adanya E.coli dan mengandung jumlah bakteri koliform sesuai
persyaratan kualitas air minum menurut PERMENKES sehingga dinyatakan layak
minum. Sementara 8 sampel yang lain mengandung jumlah bakteri koliform
melebihi batas maksimum sesuai PERMENKES serta dari 8 sampel tersebut, dan
5 sampel teridentifikasi adanya E.coli sesuai dengan uji biokimia dan pewarnaan
Gram, sedangkan 3 sampel lainnya tidak ditemukan E.coli. Oleh karena itu 5
sampel tersebut dinyatakan tidak layak minum.

4.7 Pembahasan Aspek Keislaman

Menurut fatwa MUI mengenai air daur ulang, perkembangan teknologi
memungkinkan daur ulang air yang semula berasal dari limbah yang bercampur
kotoran, benda najis dan komponen lain yang merubah kemutlakan air. Air daur
ulang yang dimaksud dalam penelitian ini yaitu air minum isi ulang. Selain itu,
minat masyarakat terhadap penggunaan air minum isi ulang sebagai sumber air
minum karena harganya yang relatif murah. Peningkatan pesat kebutuhan air dan
penurunan kualitas sumber air akibat dari peningkatan jumlah penduduk dan
perkembangan industri. Firman Allah SWT dalam penggalan surat al-Anfal ayat
11 menyebutkan:

Artinya: Dan Allah emnurunkan kepadamu hujan dari langit untuk mensucikan
kamu dengan hujan ini....(Q.S Al-Anfal 8:11)
Selain itu dalam Surat Al-Furqan ayat 48-49 juga disebutkan :

43

Artinya: Dan Kami turunkan dari langit air yang amat bersih agar Kami
menghidupkan dengan air itu negeri(tanah) yang mati, dan agar Kami memberi
minum dengan air itu sebagian besar dari makhluk Kami, biatang-binatang
ternak dan manusia yang banyak" (QS.Al-Furqan 25:48-49)
Kedua ayat tersebut menerangkan bahwa kita sebagai manusia hendaknya
mengkonsumsi

air yang bersih serta baik bagi kesehatan. Rasulullah SAW

menjelaskan dala haditsnya yang berbunyi:

Dari Abi Umamah ra bahwasanya Nabi SAW bersabda: Sesungguhnya air itu
suci dan tidak ada yang menajiskannya kecuali sesuatu yang merubah bau, rasa
dan warnanya. (HR.Ibn Majah)
Dalam hadis tersebut air yang dikatakan najis adalah air yang berubah
warnanya, berbau dan berasa. Najis dalam hal ini merujuk kepada arti tidak
bersih. Menurut hukum fiqih, air daur ulang adalah suci mensucikan, sepanjang
diproses sesuai dengan ketetuan hukum fiqih. Air minum isi ulang merupakan
thariqah taghyir yaitu dengan cara mengubah air yang terkena najis atau yang
telah berubah sifatnya tersebut dengan menggunakan alat bantu yang dapat
mengembalikansifat-sifat asli air itu menjadi suci lagi mensucikan. Menurut
hukum fiqih air tersebut boleh diminum asalkan tidak membahaykana kesehatan.
Hal ini sejalan dengan PERMENKES RI No.492 tentang persyaratan kualitas air
minum dimana air minum yang sehat adalah yang tidak membahaykan kesehatan.
4.8 Keterbatasan Penelitian
Dalam penelitian ini ditemukan beberapa keterbatasan yaitu:

Biaya untuk membeli bahan dan alat yang cukup mahal

Ketersediaan alat dan bahan uji, karena penelitian ini dilakukan di

lab mikrobiologi dan berbarengan dengan peneliti lain sehingga
alat yang digunakan bergantian dan waktu penelitian yang terbatas.

43

43

BAB 5
KESIMPULAN DAN SARAN

5.1 Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian, didapatkan dari ke 9 sampel yang diuji hanya
satu sampel yang layak minum sementara 8 sampel lainnya tidak layak minum.
Dari 8 sampel tersebut, ditemukan Escherichia colipada 5 sampel.
5.2 Saran

Dapat menggunakan BGLB untuk menambah uji konfirmasi selain EMB

agar

Dapat diperluas cakupan wilayah yang diteliti sehingga memperbesar

sampel yang diteliti

Dalam penelitian selanjutnya dapat digunakan metode MPN E.coli agar

lebih spesifik dengan menggunakan media EC Broth.

Dapat digunakan metode lain seperti membran filter untuk uji kualitas air
minum secara mikrobiologi

Dapat diteliti juga mengenai hubungan sanitasi dan higienitas depot

terhadap kualitas air minum isi ulang

44

DAFTAR PUSTAKA

1. Departemen Kesehatan RI. Kriteria Air Keperluan Rumah Tangga. Hasil

Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas) Badan Penelitian Dan Pengembangan
Kesehatan Kementerian Kesehatan RI . 2010
2. Pemerintah Kota Tangerang Selatan. Gambaran Umum Kota Tangerang
Selatan. Diakses dari http://www.tangerangselatankota.go.id/ pada 2
September 2015
3. Pokja AMPL Kota Tangerang Selatan. Buku Putih Sanitasi Kota
Tangerang Selatan.2011
4. Dinas Kesehatan Tangerang Selatan. Sehatkah Air Minum Isi Ulang Yang
Anda Konsumsi. Seksi Penyehatan Lingkungan dan Makanan Minuman
Dinas Kesehatan Kota Tangerang Selatan. 2012
5. Departemen Perindustrian dan Perdagangan RI. Keputusan Menteri
Perindustrian dan Perdagangan Republik Indonesia Nomor 651 tahun 2004
Tentang Persyaratan Teknis Depot Air Minum Dan Perdagangannya. 2004
6. Peraturan Menteri Kesehatan RI. Persyaratan Kualitas Air Minum.
PERMENKES RI/NOMOR 492/MENKES/PER/IV/2010. Departemen
Kesehatan RI. 2010
7. Brooks F, Jante S, Morse S. Jawetz,Melnick,&Adelbergs. Mikrobiologi
Kedokteran. 23th Ed. Jakarta:EGC.2004.
8. Kayser

F,Bienz

K,Eckert

J,et

al.

Medical

Microbiology.

New

York:Thieme Stuttgart. 2005. p234

9. Anonim. Mikrobiologi. Jakarta: Kementrian Pendikan dan Kebudayaan RI.
2013.
10. Sudian S. Pengujian Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Badan POM RI. Vol
9. No.2. 2008.
11. American Public Health Association . Compendium of Methods for the
Microbiological Examination. 1992
12. Buckle K.A, R.A. Edwards, Fleet dan M. Wooton. Ilmu Pangan. Jakarta :
UI Press. 2009.
45

46

13. Sandra, Christyana, Lilis Sulistyorini. Hubungan Pengetahuan dan

Kebiasaan Konsumen Air Minum Isi Ulang Dengan Penyakit Diare.
Surabaya : Artikel Ilmiah Fakultas Kesehatan Masyarakat Universitas
Airlangga. 2007.
14. Anonim. Food and Water - The Microbiological Examination Of Foods &
Water.http://www.marietta.edu/~spilatrs/bio1202/labexercises/9Food_and_Water.pdf diakses pada tanggal 4 September 2015.
15. Staf pengajar Departemen Mikrobiologi FKUI. Buku Penuntun Praktikum
Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta: FKUI. 2005.
16. Kharismajaya,

Theo.

Pengawasan

Dinas

Kesehatan

Pemerintah

Kabupaten Banyumas Terhadap Kualitas Air Minum Usaha Depot Air

Minum Isi Ulang. 2013.
17. Departemen Kesehatan RI. Keputusan Menteri Kesehatan Republik
Indonesia Nomor 907/MENKES/SK/VII/2002 tentang Syarat-Syarat Dan
Pengawasan Kualitas Air Minum.. 2002
18. Soetomo, M.S. Regulasi Air PDAM, AMDK dan Depot Air. 2003
19. Radji, Maksum, Anglia Puspaningrum, Atiek Suamiati. Deteksi Cepat
Bakteri Escherichia coli dalam Sampel Air dengan Metode Polymerase
Reaction Menggunakan Primer 16E1 dan 16E2. Makara Sains, Vol. 14,
No. 1. 2010.
20. Athena, Sukar, Hendro M, D. Anwar M. Pengaruh Pengolahan Air Depot
Air Minum Isi Ulang Dalam Menormalkan Derajat Keasaman
(pH). Media Litbang Kesehatan Volume XV Nomor 2. 2005.
21. Brain,

Marshall.

How

Cells

Work.

2000.

HowStuffWorks.com.<http://science.howstuffworks.com/life/cellularmicr
oscopic/cell.htm>diakses pada tanggal 02 September 2015.
22. SNI.1992. Cara Uji Cemaran Mikroba, Standar Nasional Indonesia, SNI
01-2897-1992, Badan Standar Nasional revisi SNI.2008. Metode
pengujian cemaran mikroba dalam daging, telur dan susu, serta hasil
olahannya. SNI :2897-2008.
23. Gillet P, Smet B, Jacobs J. Water Analysis. Belgium: Prince Leopold
Institute of Tropical Medicine. 2009

47

24. Oblinger JL dan Koburger JA. Understandingand teaching the most

probable number technique. J Milk Food Technol .1975 38(9):540-5
25. United States Department of Agriculture. Most Probable Number
Procedure and tables. 2008
26. FDA. Bacteriological Analytical Manual Appendix 2: Most Probable from
serial silution. 2001
27. Rompre A, Servais P, Bausdart J dkk. Detection and enumeration of
coliforms in drinking water: current methods and emerging approaches. J
Microbiol Methods. 2002 Mar;49(1):31-54
28. Edberg SC, Rice EW, Karlin RJ, Allen MJ. Escherichia coli: the best
biological drinking water indicator for public health protection. USA:
Department of Laboratory Medicine, Yale University School of Medicine.
Symp Ser Soc Appl Microbiol. 2000;(29):106S-116S.
29. Todar

K.

Todars

Online

Textbook

of

Bacteriology

www.textbookofbacteriology.net. Diakses 4 September 2015.

30. Watson

R.

General

and

Medical

Microbiology.

http://www.uwyo.edu/molb2210_lab/info/biochemical_tests.htm diakses 4
September 2015
31. Silva N, Tanikawa M, et all. Microbiological Examination Methods of
Food and Water A Laboratory Manual. Brazil:Institute of Food
Technology CRC Press.2013 (8):88-103 (4):49-56
32. Washington W. Konemans Color Atlas andd Textbook of Diagnostic
Microbiology.6th Ed. Philadelphia: Lippincott Williams and Wilkins.
2006(6):211
33. Bambang A, Fatimawali, Kojong N. Analisis Cemaran Bakteri Koliform
dan Identifikasi Escherichia coli pada Air Minum Isi Ulang di Kota
Manado.UNSRAT: FMIPA. Jurnal Ilmiah Farmasi vol 3 No.3. 2014
34. Pratiwi A. Kulaitas Bakteriologi Air Minum Isi Ulang di Wilayah Kota
Bogor. Jurnal Kesehatan Masyarakat Nasional Vol 2 No.2.2007 p58-63
35. Radji M, Oktavia H, Suryadi H. Pemeriksaan Bakteriologis Air Minum isi
Ulang di Beberapa Depo Air Minum Isi Ulang di Daerah Lenteng Agung

48

dan Srengseng Sawah Jakarta Selatan. Maj IlmuKefarmasian Vol.V

No.2.2008 p101-9
36. MacFaddin J. F. Biochemical tests for identification of medical bacteria.
3rd ed.Philadelphia : Lippincott Williams & Wilkins. 2000.

49

LAMPIRAN 1
Alat dan Bahan Penelitian

Autoklaf

Mikropipet

Magnetic stirer

Laminar Air Flow

Inkubator

Lemari es

49

Oven

Alat Uji MPN

Timbangan

50

(lanjutan)

Set

Bahan MR-VP

pewarnaan Gram

Reagen Erlich

Uji Biokimia

Alkohol, Nacl

51

LAMPIRAN 2
Persiapan Laktosa broth

52

LAMPIRAN 3
Uji Presumptif MPN

53

LAMPIRAN 4
Pewarnaan Gram

54

LAMPIRAN 5
Hasil Inokulasi EMB Agar

Sampel 1

Sampel 5

Sampel 7

Sampel 2

Sampel 3

Sampel 6

Sampel 8

Sampel 9

55

LAMPIRAN 6
Tabel MPN Koliform

Sumber: Water Analysis, 2009