Ejercicio 1

Ejercicio 2

Los alcaloides son compuestos orgnicos con actividad biolgica. En un laboratorio de

Farmacognosia se requiere separar, identificar y cuantificar los alcaloides presentes en
una muestra de extracto vegetal. Para ello se seleccion el mtodo de Cromatografa
Gas-Lquido y las siguientes condiciones de trabajo: columna de 1.5 m x 4 mm, de
Cromosorb W impregnado en OV-101 al 5%. Como mtodo de cuantificacin se
propuso la normalizacin de rea.
a) Diga qu tipo de columna se seleccion. Justifique.
Respuesta: se emple una columna de relleno o empacada lo cual puede ser evidenciado
en las dimensiones de la misma ya que las columnas capilares son mas largas.
b) Diga qu condiciones de trabajo faltan por definir.
Faltan por definir la temperatura del inyector, de la columna y del detector aspectos
estos importantsimos en cromatografa gaseosa. Falta por definir la velocidad de flujo y
el volumen de inyeccin. Falta por definir el tipo de detector utilizado
c) Proponga y describa un mtodo para la identificacin de los componentes de la
muestra.
Un mtodo de identificacin puede ser por comparacin de los tiempos de retencin de
cada compuesto que aparezca en el cromatograma con estndares de referencia
correspondientes a los alcaloides analizados.
d) Describa el mtodo de cuantificacin propuesto.
En este mtodo de cuantificacin en caso de no realizarse con factor de correccin se
suman las reas de todos los peaks que aparecen en el cromatograma y esta suma
corresponde al 100%, luego por regla de tres se determina a que por ciento corresponde
el rea del analito que se investiga. Es por esto que es un mtodo que determina
proporciones relativas no concentraciones exactas.
Ejercicio 3
Para la determinacin del contenido de aspirina y codena en tabletas se aplica una
tcnica de HPLC, previa extraccin de ambos principios activos con un solvente
adecuado, en las siguientes condiciones cromatogrficas:
-

Columna Licrosorb RP C18 de 10 m (4 mm x 30 cm)

FM agua: metanol: acetonitrilo: cido actico glacial (70: 15: 15: 1)

Detector UV de variable a 250 nm

Volumen de inyeccin 10 L
Seal

tiempo (min.)

a) Qu mecanismo de separacin se pone de manifiesto? En qu se bas para

identificarlo?
Respuesta: se pone de manifiesto el mecanismo de separacin reparto fase reversa o
inversa, se identifica por la columna RP C18 lo que indica que la fase estacionaria en
este caso es la silica gel a la cual se le enlaz un compuesto de 18 atomos de carbono
haciendo de esta forma la fase estacionaria menos polar que la fase mvil. El
fundamento de este mtodo se basa en la capacidad que tienen los analitos de
distribuirse entre la fase estacionaria y la fase mvil de acuerdo a su afinidad por cada
una de ellas lo cual depende de la polaridad de las fases y de los analitos.
b) Por qu considera que se puede utilizar un detector UV para realizar esta
determinacin?
Respuesta: Porque tanto la aspirina como la codena tienen grupos cromforos que
permiten la absorcin de radiacin electromagntica proveniente de la zona Uv del
espectro.
c) Proponga 3 variaciones en las condiciones cromatogrficas establecidas, para
mejorar la resolucin del cromatograma. Justifique su propuesta en cada caso.
Respuesta: 1. Disminuir la velocidad de flujo. De esta manera los analitos estn ms
tiempo en contacto con la FE y la FM pudiendo mejorarse asi la separacin.
2. Utilizar una columna ms larga porque as se aumentan el nmero de platos
tericos y aumenta el nmero de equilibrio entre FE-FM-analito mejorando la
separacin.
3. Disminuyendo el tamao de particula del empaque de la columna cromatogrfica
porque asi se aumenta igualmente el nmero de platos tericos y adems disminuye el
termino de camino tuortoso (A) de la ecuacin de Van Deenter mejorando la
separacin.
d) Una vez mejorada la resolucin, explique cmo procedera experimentalmente
para identificar los principios activos separados.

Respuesta: Mediante el mtodo de comparacin de los tiempos de retencin.

Ejercicio 4
El sunitinib es un frmaco de reciente incorporacin en la teraputica antitumoral,
especficamente para el tratamiento del carcinoma avanzado de clulas renales. Para
ajustar la dosis en pacientes con deterioro de las funciones hepticas es necesario
monitorear las concentraciones del frmaco en sangre, y para ello se utiliza la
Cromatografa Lquida de Alta Resolucin, previa extraccin del compuesto de inters,
con las condiciones cromatogrficas siguientes:
Columna cianopropil Nucleodur (250 x 4 mm, 3 m)
Sistema de solventes: acetonitrilo-acetato de amonio (55:45)
Velocidad de flujo: 1 mL/min
Temperatura: 40 0C
Detector espectrofotomtrico (431 nm)
a) Identifique el mecanismo de separacin que se pone de manifiesto. Justifique cmo
lo reconoci. Explique el principio qumico fsico en el que se fundamenta esta
separacin.

b) Justifique la utilizacin del detector empleado, atendiendo al principio de

funcionamiento del mismo y a la estructura del compuesto analizado.
c) Al comparar el cromatograma de la disolucin obtenida a partir de una porcin de
sangre extrada de pacientes con tratamiento con el de la disolucin obtenida a
partir de una porcin de sangre extrada de pacientes sin tratamiento, se observan
tres picos en la primera disolucin que no aparecen en la segunda, y que varan
sus reas en funcin de la dosis de frmaco administrada, lo cual hace suponer la
presencia de dos de los principales metabolitos (S1 y S2) del frmaco. Describa
una metodologa que le permite corroborar la presencia de sunitinib y sus
metabolitos en la muestra analizada.
d) Si una vez identificados los componentes de inters, se desea determinar el
contenido de sunitinib en la muestra analizada, describa cmo procedera
experimentalmente si utiliza el mtodo de la curva de calibracin para ello.

sunitinib

Ejercicio 5
Para determinar la pureza de la materia prima de Enflurano (C 3H2ClF5O) se reporta en la
farmacopea la tcnica siguiente:
Inyectar un volumen de enflurano (no ms de 30 L) en un cromatgrafo gaseoso
equipado con un detector de conductividad trmica. El cromatgrafo debe tener una
columna de acero inoxidable 3 m x 4 mm empacada con 20% de fase lquida G4
(dietilenglicol succinato polister) en S1A (tierras silceas para cromatografa gaseosa)
de 60-80 mesh. La temperatura de la columna se ajusta aproximadamente a 60 0 y se
incrementa hasta 1200 a intervalos de 60 por minuto. El inyector debe mantenerse
alrededor de 2000. Utilizar helio como gas portador a una velocidad de flujo de
alrededor de 60 mL por minuto. Calcular la pureza, en porcentaje, dividendo 100 veces
el rea del pico correspondiente al Enflurano entre la suma de todos los picos en el
cromatograma.
a) Identifique las condiciones cromatogrficas empleadas.
b) Identifique el rgimen de trabajo utilizado y diga como lo identific.
c) Explique el principio de funcionamiento del detector utilizado.
d) Determine la pureza de la materia prima si se obtuvieron los siguientes resultados:
Pico
1

Componente
Impureza A

tR (min.)
1,23

rea
800

Enflurano

3,43

11900

Impureza B

4,05

550

Ejercicio 6
Para determinar el contenido de hidroclorotiazida y su principal metabolito en orina
se extraen convenientemente ambos compuestos, se derivatizan y se analizan por una
tcnica de Cromatografa Gas-Lquido. Entre las condiciones cromatogrficas que se
definen se encuentran:
-

Columna HP Ultra-1 de 25 m x 0.22 mm

Flujo 1 mL/min

Temperatura del inyector 250 C

Temperatura inicial 130 C, temperatura final 320 C, velocidad de calentamiento

16 C/min

a) Mencione las condiciones cromatogrficas que faltan por definirse.

b) Identifique el tipo de columna que se utiliza y el rgimen de trabajo que se aplica.
En qu se bas para identificarlos?
c) Explique cmo procedera para identificar los compuestos separados.
d) Explique cmo procedera para cuantificar la hidroclorotiazida por adicin de
patrn interno, incluyendo los cromatogramas que se deben obtener de cada corrida
realizada. Considere que como patrn interno se utiliza la clorotiazida (compuesto ms
polar que el principio activo y menos polar que el metabolito), y que los resultados
deben expresarse en ppm.