A.

Spektrofotometri uv-vis
Isian
Spektrofotometri merupakan metode analisis yang didasarkan pada sinar monokromatis
serapan oleh suatu jalur larutan berwarna pada panjang gelombang spesifik dengan
menggunakan monokromator prisma dengan spektrofotometer. Metode ini dapat digunakan
untuk analisis(1)...... dan (2) ....... Berdasarkan sumber cahaya yang digunakan dibedakan
menjadi (3)......., (4)........,dan (5)....... . Spektrofotometri Uv-vis adalah metode pengukuran dan
interpretasi radias elektromagnetik yang berkisar pada panjang gelombang (6).... sampai .... .
Dimana sinar UV dapat menyerap cahaya pada panjang gelombang (7).... , sementara sinar
tampak dapat menyerap cahaya pada panjang gelombang (8) ....-..... . Prinsip dari
spektrofotometri UV adalah berdasarkan penyerapan cahaya pada panjang gelombang tertentu
oleh suatu senyawa atau molekul analit. Gugus yang dapat menyerap cahaya pada senyawa
tersebut adalah (9)....... . Proses penyerapan cahaya secara matematis, menggunakan persamaan
yang digunakan dalam analisis kuantitatif spektrofotometri Uv-vis dikenal dengan hukum
(10)......... Rumus persamaan dari hukum tersebut yaitu (11)....... . Komponen pada
spektrofotometri diantaranya (12)......, (13)......., (14)........, (15)........, (16)........ . Ukuran serapan
pada panjang gelombang maksimal agar absorban dapat terbaca hendaklah berkisar antara
(17)........ .
Jawaban :
1. Kualitatif
2. kuantitatif
3. ultra violet
4. infra merah
5. visible
6. 200-800nm
7. 200-400 nm
8. 400-800 nm
9. gugus kromofor
10. Lambert-Beer
11. A = a.b.c
12. Sumber cahaya
13. monokromator
14. kuvet/tempat sampel
15. detektor
16. rekorder
17. 0,2-0,8

Essay
Tabel konsentrasi vs absorbansi larutan baku piridoksin HCl BPFI
Konsentrasi

Absorbansi

6 ppm

0,356

8 ppm

0,440

10 ppm

0,670

12 ppm

0,726

14 ppm

0,796

Suatu tablet piridoksin HCl ingin ditentukan kadarnya dengan menggunakan

spektrofotometri Uv-Vis. Dikeathui beobot rata-rata tiap tablet yaitu 170 mg. Sebanyak 500 mg
serbuk tablet piridoksin HCl dilarutkan dalam labu ukur dengan 100 ml HCL (0,1 N). Kemudian
diambil 2 ml filtrate dengan menggunakan pipet volum dan ditambhkan HCL (0,1 N) hingga 10
ml. Diambil lagi dari larutan yang telah diencerkan sebanyak 2 ml dan ditambahkan HCL (0,1N)
hingga 10 ml. larutan tersebut kemudian dihitung absorbansinya dengan spektrofotometri uv-vis
pada panjang gelombang 290,6 nm dan didapat nilai absorbansinya sebesar 0,705 ppm. Tentukan
kadar piridoksi HCl dalam tablet.
Jawab :
Persamaan regresi :
y = bx +a
y = 0, 0583 x + 0,014
0,705 = 0,0583 x + 0,014
X = 11, 852 ppm (11,852 mg/L)

(X) = 11, 852 mg/1000 ml x

Kadar/ tab :

)x

) x 100 ml = 29, 63 mg / 100 ml

a (Kadar tiap tablet) = 10, 0742 mg/ tablet

B. Kromatografi Kolom

1. Jelaskan prinsip dari kromatografi kolom?

Jawab :
Pemisahan suatu senyawa berdasarkan perbedaan kecepatan migrasi komponen
diantara fase diam dan fase gerak selama sanpel bergerak berdasarkan gaya
gravitasi.
2. Jelaskan 2 cara preparasi kolom (fase diam) pada analisis kromatografi kolom?
a. Cara Basah
Preparasi fasa diam dengan cara basah dilakukan dengan melarutkan fasa diam
dalam fase gerak yang akan digunakan. Campuran kemudian dimasukkan ke dalam
kolom dan dibuat merata. Fase gerak dibiarkan mengalir hingga terbentuk lapisan
fase diam yang tetap dan rata, kemudian aliran dihentikan.
b.
Cara kering
Preparasi fasa diam dengan cara kering dilakukan dengan cara memasukkan fase
diam yang digunakan ke dalam kolom kromatografi. Fase diam tersebut selanjutnya
dibasahi dengan pelarut yang akan digunakan.
3. Jelaskan kelebihan dan kekurangan analisis menggunakan kromatografi kolom
Jawab :
a. Kelebihan kromatografi kolom :
Dapat digunakan untuk analisis dan aplikasi preparative. Digunakan untuk
menentukan jumlah komponen campuran. Digunakan untuk memisahkan dan
purifikasi substansi.
b. Kekurangan kromatografi kolom :
Untuk mempersiapkan kolom dibutuhkan kemampuan teknik dan manual. Metode
ini sangat membutuhkan waktu yang lama (time consuming).
4. Bagaimana teknik yang dilakukan dalam proses elusi pada kromatografi kolom?
Jawab :
Elusi dilakuakn dengan menggunakan pelarut yang bersifat nonpolar, dilanjutkan
dengan pelarut yang bersifat semipolar dan dilanjutkan dengan menggunakan
pelarut yang semakin polar. Masing-masing dilakukan secara bertahap.

C. Kromatografi Lapis Tipis

1. Jelaskan tujuan pemanasan plat KLT dan penjenuhan chamber?
Jawab :
Pemanasan plat KLT bertujuan untuk mengurangi kandungan air dalam plat, sehingga
proses elusi dapat berjalan dengan baik. Penjenuhan chamber bertujuan untuk
meyakinkan bawah kondisi dalam gelas kimia terjenuhkan oleh uap dari pelarut sehingga
proses elusi dapat berjalan dengan cepat
2. Perhatikan gambar berikut ini :

10 cm
7 cm

3 cm

Berdasarkan gambar diatas berapa nilai Rf dari noda A dan noda B..
Jawab :
A : 7/10 = 0,7
B: 3/10 = 0,3
3. Sebutkan dan jelaskan faktor faktor yang mempengaruhi harga Rf.
Jawab :
1. Struktur kimia dari senyawa yang sedang dipisahkan, senyawa yang bersifat nonpolar
cendrung memiliki harga Rf yang tinggi. Dan sebaliknya senyawa yang bersifat polar
memiliki harga Rf yang kecil.
2. Sifat dari penyerap dan derajat aktifitasnya; Biasanya aktifitas dicapai dengan
pemanasan dalam oven, hal ini akan mengeringkan molekul-molekul air yang menempati
pusat-pusat serapan dari penyerap. Perbedaan penyerap akan memberikan perbedaan

yang besar terhadap harga Rf meskipun menggunakan fase bergerak dan zat terlarut yang
sama tetapi hasil akan dapat diulang dengan hasil yang sama,

jika menggunakan

penyerap yang sama, ukuran partikel tetap dan jika pengikat (kalau ada) dicampur
hingga homogen.

3. Tebal dan kerataan dari lapisan penyerap; Proses praktikum tidak dapat dilihat
pengaruh tebal lapisannya, tetapi perlu diusahakan tebal lapisan yang rata.
Ketidakrataan akan menyebabkan aliran pelarut menjadi tak rata pula dalam daerah
yang kecil dari plat.
4. Pelarut (dan derajat kemurniannya) fase bergerak; Kemurnian dari pelarut yang
digunakan sebagai fase bergerak dalam kromatografi lapisan tipis adalah sangat penting
dan bila campuran pelarut digunakan maka perbandingan yang dipakai harus betul-betul
diperhatikan.