Israwati Isolasi Dan Inokulasi

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Mikroorganisme di alam tersebar luas, mulai dari tempat
terdingin dikutub sampai di dalam tubuh kita, termasuk mulut,
saluran pencernaan, dan kulit. Hal tersebut mengakibatkan sulitnya
pengamatan mikroba secara spesifik. Oleh sebab itu diperlukan
teknik isolasi dan pemurnian agar didapatkan media murni. Bakteri
berasal dari bahasa latin bacterium (jamak : bacteria), adalah
kelompok raksasa dari organisme hidup, berukuran sangat kecil
(mikroskopik) dan kebanyakan uniseluler (bersel tunggal), dengan
struktur sel yang relatif sederhana tanpa nucleus atau inti sel,
cytoskeleton, dan organel lain seperti mitokondria dan kloroplas.
Bakteri adalah yang paling berlimpah dari semua organisme.
Mereka tersebar (berada dimana-mana) di tanah, air, dan sebagai
simbiosis dan organisme lain.
Bakteri adalah salah satu contoh mikroorganisme yang penting
dan memiliki bentuk yang beragam. Pada umumnya bakteri
berhubungan dengan makanan. Adanya bakteri dalam bahan pangan
dapat mengakibatkan pembusukan yang tidak diinginkan atau
Israwati
O1A114018
La Ode Muh. Fitrawan S.Farm, Apt
menimbulkan penyakit yang ditularkan melalui makanan atau dapat

melangsungkan fermentasi yang menguntungkan. Di alam fungi dan
yeast/khamir juga tidak pernah berada di suatu tempatanya dalam
satu spesies. Karena itu untuk memperoleh populasi fungi dan
yeast/khamir dalam kultur murni, juga harus dilakukan teknik
isolasi dan pemurnian. Metodenya serupa bakteri, sumber fungi
hampir sama dengan bakteri. Perbedaannya bahwa populasi fungi di
air lebih sedikit dibandingkan lingkungan dengan pH rendah.
Pertumbuhan fungi pada medium menunjukkan penampakkan yang
pada umumnya berupa benang-benang putih dan sangat mudah
untuk dilihat. Sedangkan yeast/khamir akan tampak seperti koloni
bakteri
yang
memisahkan
tidak
atau
mengkilap.
memindahkan
Isolasi
adalah
mikroba
cara
untuk
tertentu
dari
lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni atau biakan murni.
B. Tujuan
Tujuan Praktikum ini adalah :
Israwati
O1A114018
1. Untuk Mengetahui Metode-metode yang digunakan untuk

memisahkan mikroba tertentu dari populasi campurannya
untuk mendapatkan kultur murni.
2. Untuk mengetahui karakteristik mikroba yang tumbuh pada
Kultur murni.
C. Manfaat
Manfaat dari percobaan ini adalah untuk melihat
keanekaragaman
mikroorganisme
pada
berbagai
bahan
di
lingkungan sekitar kita.
BAB II
A. Teori Umum
TINJAUAN PUSTAKA
Isolasi bakteri pendegradasi paraquat. Isolasi bakteri dari

sampel tanah yang diambil secara acak pada 3 lokasi tanah pertanian
(kebun sawi, kacang ,dan jagung) di Kampar. Sebanyak 1 gr tanah
dimasukkan dalam medium N-free yang sudah ditambah
Israwati
O1A114018
substrat
paraquat, kemudian dilakukan pengenceran
dan ditumbuhkan pada
media N-free agar dengan cara taburan (pour plate). Inkubasi

dilakukan pada suhu 28
C selama 24 jam, koloni tunggal yang tumbuh
dipindahkan ke media N-free agar secara streak plate, demikian

seterusnya sampai diperoleh kultur murni. Isolat bakteri murni
dinyatakan sebagai isolat bakteri terpilih. Purifikasi dengan platting
koloni sel tunggal. Purifikasi dilakukan dengan teknik platting koloni sel
tunggal. Beberapa isolat yang diperoleh ditumbuhkan pada medium N-
free agar dengan cara goresan dan diinkubasi pada suhu 28
0 2
C selama
24 jam. Koloni bakteri yang tumbuh terpisah dipindahkan pada medium

N-free agar miring yang ditambah substrat paraquat (10 ppm).
(Bernadita Leni Fibrlarti dkk, (2010).
Inokulasi Azospirillum pada tanaman budidaya menunjukkan bahwa
90 % bakteri Azospirillum ditemukan pada lahan beriklim tropis dan
hampir 60 % pada tanah beriklim sedang dengan suhu berkisar 29 C (D.
Swedrzynska, A. Sawicka, 2000). Dengan kondisi demikian penelitian
yang ditujukkan untuk mengetahui jenis bakteri Azospirillum sp yang
berasosiasi dengan tanaman rumput raja serta pengaruhnya terhadap
Israwati
O1A114018
peningkatan kandungan nutrisi pada rumput raja sebagai pakan ternak

menjadi penting untuk dilakukan. Mengingat bahwa kelima jenis bakteri
Azospirillum sp. tersebut memiliki kemampuan memfiksasi N bebas

yang berbeda-beda meskipun berasal dari tanaman inang yang sama
(Rusmana dan Hadijaya (1994). Perbedaan kemampuan dari masingmasing spesies Azospirillum sp secara langsung akan mempengaruhi
besarnya nitrogen yang dapat disumbangkan ke tanaman inangnya
(Rahman dkk , 2013 ).
Secara alami, mikroba di alam ditemukan dalam populasi
campuran. Untuk memperoleh biakan murni dapat dilakukan
isolasi
yang diawali dengan pengenceran bertingkat. Proses isolasi mikroba

adalah memisahkan mikroba satu dengan mikroba lain yang berasal dari
campuran berbagai mikroba untuk dapat mempelajari sifat biakan,
morfologi dan sifat mikroba lainnya. Bakteri Aerob.
Nama bakteri
berasal dari kata bakterion (bahasa Yunani) yang berarti tongkat

atau batang. Sejalan dengan
pertambahnya pengetahuan, sekarang
bakteri digunakan untuk mikroorganisme bersel satu, berkembang biak

dengan pembelahan diri, serta memiliki ukuran mikron sehingga hanya
tampak dengan mikroskop. Bakteri aerob merupakan bakteri yang
Israwati
O1A114018
membutuhkan
O2
untuk
pertumbuhannya.
Sistem
enzimnya
membutuhkan O2 sebagai elektron aseptor pada proses fosforilasi

oksidatifnya (Fajar diah dkk,2012).
Bakteri pengoksidasi amonia diambil dan diisolasi secara tabur.
Kultur tersebut kemudian diinkubasi pada suhu ruang selama 3-5 hari.
Isolat yang tumbuh kemudian dimurnikan dan dipindahkan pada media
agar miring. Isolat yang diperoleh diseleksi kemampuan tumbuhnya
dengan cara menumbuhkannya dalam erlenmeyer yang berisi 50 ml
media basal. Kultur tersebut diinkubasi pada suhu ruang diatas
penggoyang
(shaker).
Pertumbuhan
bakteri
pengoksidasi
amonia
ditentukan dengan mengukur perubahan amonia dan pembentukan nitrit

secara kualitatif, menggunakan indikator penentu amonium dan
indikator penentu nitrit (Dwi Agustiani dkk, 2004).
Bakteri pendegradasi phenanthrene diisolasi pada medium
minimum agar ONR7a dengan menggunakan metode sebar ( spread).
Medium yang telah diinokulasikan kemudian disublimasi dengan cara
memanaskan senyawa phenanthrene pada suhu optimum yaitu 100C
selama 10 menit. Kondisi demikian menyebabkan senyawa tersebut
menguap, lalu tertangkap pada medium yang diberi pendingin berupa
Israwati
O1A114018
batu es Pemberian batu es di atas medium yang telah diinokulasi untuk

mencegah mencairnya medium agar karena terkena uap panas senyawa
phenanthrene. Medium yang telah disublimasi kemudian diinkubasi
selama 7 hari pada temperatur 30c. Bakteri yang dapat mendegradasi
senyawa phenanthrene ditandai dengan terbentuknya zonabening di
sekeliling koloni (Rini Rifiani,2010).
Kultur Piyrosporum ovale
dengan menggunakan metode agar
miring, dimana pengkulturan dilakukan pada LAF ( Laminar Air Flow) dan
semua
alat
yang
digunakan
telah
disterilkan
dahulu
dengan
menggunakan autoklaf. Satu ose kamir berumur 2 hari digoreskan pada

medium agar SDA di dekat api bunsen, setelah itu ditutup dengan
kapas steril dan diinkubasi selama 48 jam di dalam inkubator dengan
suhu 37o C untuk kemudian digunakan pada uji antifungi (Nimas
Maharanti dkk, 2012).
Isolasi dan karakterisasi BAL dari cincalok hasil formulasi skala
laboratorium
di
peroleh
sebanyak
40
isolat,
dimana
isolat
menunjukkan aktivitas antimikroba terbaik. Isolat Lactobacillus sp.

RED merupakan salah satu dari ketiga isolat BAL tersebut, namun
belum dikarakterisasi kemampuan dari
Israwati
O1A114018
aktivitas bakteriosin, oleh
karena itu, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang penentuan

waktu inkubasi optimum terhadap aktivitas antimikroba bakteriosin
dari Lactobacillus sp (Hanimatul Khoiriyah dkk, 2014).
B. Uraian Bahan
1. Agar (Ditjen POM Edisi III, 1979)

Nama resmi
: AGAR
Pemerian
: Tidak berbau atau bau lemah, berasa

musilago pada lidah.
Kelarutan
: Tidak larut dalam air dingin, dan larut dalam

air mendidih.
Kegunaan
: Sebagai bahan pemadat medium.
Penyimpanan
: Dalam wadah tertutup baik.
2. Pepton (Ditjen POM Edisi III, 1979)

Pemerian
: Serbuk ; kuning kemerahan sampai coklat ;

bau khas
Kelarutan
tidak busuk
: Larut dalam air ; memberikan larutan coklat

kekuningan yang bereaksi agak asam ;
Israwati
O1A114018
praktis tidak larut dalam etanol ( 95% ) P

dan dalam
Kegunaan
Sumber
eter P.
protein
untuk
pertumbuhan
mikroorganisme.
Penyimpanan
: Simpan dalam wadah tertutup rapat, tidak

tembus
cahaya.
3. Ekstrak Beef (Ditjen POM Edisi III, 1979)

Nama resmi
: BEEF EXTRACT
Pemerian
: Berbau dan berasa pada lidah. Kaldu daging

sapi
konsentrat
diperoleh
dengan
mengekstraksi daging sapi segar tanpa

lemak, dengn cara merebus dalam air dan
menguapkan kaldu pada suhu rendah dalam
hampa
udara
sampai
terbentuk
residu
kental berbentuk pasta. Massa berbentuk

pasta, berwarna coklat kekuningan sampai
coklat tua, bau dan rasa seperti daging,
sedikit asam.
Kelarutan
Israwati
O1A114018
: Larut dalam air dingin.
Kegunaan
Sumber
10
protein
untuk
pertumbuhan
mikroorganisme.
Penyimpanan
: Simpan dalam wadah tertutup rapat, tidak

tembus cahaya.
4. Aquadest (Ditjen POM Edisi III, 1979)

Nama resmi
: AQUA DESTILLATA
Pemerian
: Cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau,

tidak berasa.
Kegunaan
: Sebagai sumber nutrien mikroba dan

pelarut medium.
Penyimpanan
5. Dekstrosa (Ditjen POM Edisi III, 1979)

Nama resmi
: DEXTROSUM
Sinonim
: Glukosa, Dekstrosa
RM / BM
: C6H12O6/180,16
Israwati
O1A114018
Pemerian
11
: Hablur tidak berwarna, serbuk halus atau

butiran
putih, tidak berbau, rasa manis.
Kelarutan
: Mudah larut dalam air, sangat mudah larut

dalam
air mendidih, agak sukar larut dalam etanol
(95%).
Kegunaan
: Sebagai sumber nutrient yang spesifik

untuk
mikroba jamur.
Penyimpanan
6. Alkohol ( farmakope indonesia IV, hal: 63 )

Nama resmi
: Aethanolum
Nama lain
: Etanol / Alkohol
Rumus molekul
: C2H6O
BM
: 46,07
Pemerian
: Cairan mudah menguap, jernih, tidak
berwana, bau khas dan menyebabkan rasa
Israwati
O1A114018
12
bau khas dan menyebabkan rasa terbakar

pada lidah. Mudah menguap meskipun pada
suhu rendah dan mendidih pada suhu 78C
dan mudah terbakar.
Kelarutan
: Bercampur dengan air dan praktis bercampur

dengan semua pelarut organik.
Berat Jenis
: 0,812 0,816 g/ml.
Stabilitas
: Mudah menguap walaupun pada suhu rendah.
OTT
: Bahan pengoksidasi Bila dicampur dengan

alkali, warna akan menjadi gelap.
Konsentrasi
Kegunaan
: 60-90 %.
:Anti mikroba, desinfektan, pelarut,dan
penetrasi
Penyimpanan
: Wadah tertutup rapat jauh dari api.
BAB III
METODE KERJA
Israwati
O1A114018
13
A. Alat Dan Bahan

1. Alat
Alat yang digunakan pada percobaan isolasi dan inokulasi
mikroorganisme adalah:
a. Autoklaf
b. Batang pengaduk
c. Bunsen
d. Cawan petri
e. Corong
f. Erlenmeyer
g. Gelas kimia
h. Gelas ukur
i. Hot plate
j. LAF
k. Incubator
l. Ose
m. Pipet tetes
n. Pipet volume
o. Rak tabung
p. Sendok tanduk
q. Tabung reaksi
r. Timbangan analitik
2. Bahan
Bahan yang digunakan pada percobaan isolasi dan inokulasi
mikroorganisme adalah:
a. Alkohol
b. Aquades
c. Air hujan
d. Kapas
e. kasa
f. Kol
g. Lumpur
h. Roti
i. Saus tomat ABC
j. Wortel
Israwati
O1A114018
14
B. Cara Kerja
1. Pembuatan Media Nutrient Agar (NA)
Cara kerja dari pembuatan media NA sintetik ini adalah :
Disiapkan alat dan bahan.

Ditimbang komponen media dengan menggunakan timbangan
analitik sebanyak 1,4 gram
Diukur aquadest sebesar 100 ml dengan menggunakan

gelas ukur.
Dilarutkan bahan dalam aquadest menggunakan gelas
kimia.
Dipanaskan dan diaduk secara konstan larutan bahan di atas
electro mantel / hot plate & stirrer .

Didinginkan larutan dan dimasukkan larutan ke dalam labu
Erlenmeyer.
Ditutup bagian mulut Erlenmeyer menggunakan kapas, kain kasa,
dan plastic wrap.

Disterilkan media dalam autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15
menit.
Diamati warna dan konsistensi media.
Pembuatan Media Nutrient Agar (NA) Non Sintetik

Cara kerja dari pembuatan media NA non sintetik ini adalah :
Israwati
O1A114018
15
Ditimbang komponen medium dengan menggunakan timbangan

analitik sesuai komposisi berikut : beef extract 0,3 gram dan
agar 1,5 gram.

Diukur aquades
menggunakan gelas ukur.

Dibagi akuades menjadi dua bagian, yakni 30 ml dan 70 ml.
yang
akan
digunakan
sebesar
100
ml
Aquades 30 ml digunakan untuk melarutkan beef extract dan
aquadest 70 ml digunakan untuk melarutkan agar.

Dilarutkan beef extract pada gelas kimia dan diletakkan di atas
electromantel. Dibiarkan hingga mendidih dan terjadi perubahan
warna.
Dilarutkan agar pada gelas kimia dan diletakkan di atas
electromantel. Diaduk secara konstan hingga mendidih.

Disaring larutan beef extract menggunakan kertas saring untuk
diambil kaldunya.
Dimasukkan larutan beef extract kedalam larutan agar dan
diaduk sampai homogen.

Dimasukkan media ke dalam labu Erlenmeyer dan ditutup bagian
mulutnya menggunakan kapas, kain kasa, dan plastic wrap.

Disterilkan media pada autoklaf pada suhu 121 0C selama 15
menit.
2. Pembuatan Media Potato Dextrose Agar (PDA) Sintetik

Cara kerja dari pembuatan media PDA sintetik ini adalah :
Israwati
O1A114018
16

Ditimbang komponen media dengan menggunakan timbangan
analitik sebanyak 1,95 gram.
Diukur aquadest sebesar 50 ml dengan menggunakan gelas

ukur.
Dilarutkan bahan dalam aquadest menggunakan gelas
kimia.
Dipanaskan dan diaduk secara konstan larutan bahan di atas
electro mantel / hot plate & stirrer .

Didinginkan larutan dan dimasukkan larutan ke dalam labu
Erlenmeyer.
Ditutup bagian mulut Erlenmeyer menggunakan kapas, kain kasa,
dan plastic wrap.

Disterilkan media dalam autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15
menit.

# Pembuatan Media Potato Dextrose Agar (NA) Non Sintetik
Cara kerja dari pembuatan media PDA non sintetik ini adalah :

Dikupas kentang, dipotong kecil-kecil (dadu) dan dicuci hingga
bersih.
Ditimbang komponen medium dengan menggunakan timbangan
analitik sesuai komposisi berikut : potato/kentang 0,3 gram dan
agar 1,5 gram.
Israwati
O1A114018
Diukur
aquades
yang
17
akan
digunakan
sebesar
100
ml
menggunakan gelas ukur.

Dibagi akuades menjadi dua bagian, yakni 10 ml dan 90 ml.
Aquades _ml digunakan untuk memanaskan kentang dan aquadest
90 ml digunakan untuk melarutkan agar.

Dipanaskan kentang pada gelas kimia dan diletakkan di atas
electromantel. Dibiarkan hingga lunak.

Diambil ekstrak kentang dengan menyaring dan memerasnya
menggunakan kertas saring dan disimpan dalam gelas kimia baru.

Dilarutkan agar pada gelas kimia dan diletakkan di atas
electromantel. Diaduk secara konstan hingga mendidih.

Dimasukkan larutan ekstrak kentang kedalam larutan agar dan
diaduk sampai homogen.
Dimasukkan media ke dalam labu Erlenmeyer dan ditutup bagian
mulutnya menggunakan kapas, kain kasa, dan plastic wrap.
Disterilkan media pada autoklaf pada suhu 121 0C selama

15 menit.
3. Penyiapan bahan Praktikum

a. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan
b. Alat-alat yang akan digunakan terlebih dahulu diterilkan ( untuk
alat-alat gelas tanpa skak disterilakn di oven pada suhu 180 o C
selama dua jam)
Israwati
O1A114018
18
c. Di timbang roti yang berjamur sebanyak 1 gr dan dimasukan ke

dalam 9 ml air yang telah disterilakan di autoklaf pada suhu 121 o
C selama 15 menit
d. Di homogenkan
e. Dipipet hasil pengenceran pertama sebanyak 1 ml dan dimasukan
kedalam tabung pengenceran kedua sebanyak 9 ml yang dianggap
sebagai pengenceran 10-2.
f. Dilakukan hal yang sama hingga pengenceran 10-6
4. Dilakukan hal yang sama ntuk sampel cair
5. Isolasi pada media pertumbuhan
a. Metode tuang
1. Disiapkan alat dan bahan yang akan digunakan yang telah
disterilkan
2. Dipipet 1 ml pada pengenceran 10-6 karena diharapkan koloni
yang tumbuh dapat dihitng dan jumblahnya sedikit dibanding
pengenceran 10-1 .
3. Cawan petri yang telah berisi 1 ml sampel, ditambahkan media
Potata Dextrosa Agar (PDA) 9 ml.

4. Dihomogenkan dengan cara memutar cawan petri pada meja
berbentk angka delapan.
5. Dibiarkan memadat
6. Diinkubasi pada inkubator dengan suhu 25o C
7. Diamati
b. Metode sebar
1. Disiapakan alat dan bahan
Israwati
O1A114018
19
2. Dimasukan 20 ml medium Potato Dextrosa Agar (PDA)

kedalam cawan petri steril secara aseptis
3. Dibiarkan memadat
4. Dimaskan 1 ml sampel pengenceran 10 -6 keatas permukaan
medium PDA
5. Disebarkan secara merata
6. Diinkubasi pada inkubator dengan suhu 25oC
7. Diamati
BAB IV
1.
HASIL PENGAMATAN
A. Gambar Hasil Pengamatan
Isolasi Mikroba
a. Metode sebar
Israwati
O1A114018
20
kolon
i
Israwati
O1A114018
21
koloni
kolon
i
Israwati
O1A114018
22
kolon
i
koloni
Israwati
O1A114018
23
koloni
koloni
b.
Israwati
O1A114018
Metode tuang
24
koloni
koloni
Israwati
O1A114018
25
kolo
ni
Israwati
O1A114018
26
kolon
i
koloni
Israwati
O1A114018
27
koloni
kolon
i
Israwati
O1A114018
28
1. Inokulasi mikroba
a. Teknik Gores
kolon
i
koloni
Israwati
O1A114018
29
kolon
i
koloni
Israwati
O1A114018
30
koloni
kolon
i
Israwati
O1A114018
31
kolon
i
b. Teknik Tanam
koloni
Israwati
O1A114018
32
kolon
i
koloni
Israwati
O1A114018
33
koloni
kolon
i
Israwati
O1A114018
34
koloni
A Hasil pengamatan
a Tabel Pengamatan Isolasi
No
Sampel
1.
Air hujan
2.
Air got
3.
Air
lumpur
4.
Air Aqua
5.
Kol
6.
Roti
Israwati
O1A114018
sebar
tuang
sebar
tuang
sebar
tuang
Atas
irregular
circular
circular
circular
irregular
circular
Bentuk
Elevasi
Margin
umbonate undulate
convex
entire
convex
undulate
convex
undulate
convex
undulate
umbonate entire
Ukuran
moderate
moderate
large
large
moderate
large
sebar
tuang
sebar
tuang
sebar
irregular
culcurad
irregular
irregular
circular
raised
raised
umbonate
umbonate
convex
large
moderate
moderate
moderate
moderate
Metode
entire
felament
undulate
lobate
entire
tuang
Saus
7.
8.
tomat
Wortel
circular
35
convex
entire
large
sebar
tuang
irregular
irregular
umbonate
umbonate
undulate
undulate
small
moderate
sebar
tuang
circular
irregular
convex
raised
lobate
entire
moderate
small
b.Tabel pengamatan inokulasi

No.
Sampel
1.
Air hujan
2.
Air lumpur
3.
Air Aqua
4.
Kol
5.
Saus tomat
Roti
.
7
.
8
Wortel
Air got
Israwati
O1A114018
Media
agar miring
agar tegak
agar miring
agar tegak
agar miring
Agar tegak
agar miring
agar tegak
agar miring
agar tegak
Teknik
gores
tanam
gores
tanam
gores
tanam
gores
tanam
gores
tanam
Bentuk
Rhizoid
Villose
Rhizoid
Filliform
Pulmose
Filliform
Echinulate
Beaded
Spreading
Filliform
agar miring
gores
echinulate
agar tegak
tanam
Echinulate
agar miring
gores
Filliform
agar tegak
tanam
Filliform
agar miring
gores
Beaded
agar tegak
tanam
Beaded
36
B Pembahasan
Mikrobiologi adalah sebuah cabang dari ilmu biologi yang
mempelajari mikroorganisme. Objek kajiannya biasanya adalah
semua makhluk (hidup) yang perlu dilihat dengan mikroskop,
khususnya bakteri, fungi, alga mikroskopik, protozoa, dan Archaea.
Virus
sering
juga
dimasukkan
walaupun
sebenarnya
tidak
sepenuhnya dapat dianggap sebagai makhluk hidup.

Isolasi adalah cara untuk memisahkan mikroorganisme tertentu
dari lingkungan sehingga diperoleh biakan yang sifatnya murni.
Tujuan
isolasi
adalah
untuk
memperlihatkan
keanekaragaman
mikroorganisme dalam lingkungan di sekitar kita. Ada 3 metode

dalam isolasi, yaitu pada medium cair, sel tunggal dan dengan cara
pengenceran. Metode isolasi pada medium cair dilakukan bila
mikroorganisme tidak dapat tumbuh pada medium padat, tetapi
hanya dapat tumbuh pada kultur cair. Metode ini juga perlu
dilakukan
pengenceran
dengan
beberapa
serial
pengenceran.
Semakin tinggi pengenceran peluang untuk mendapatkan satu sel

semakin
besar.
Metode
isolasi
sel
tunggal
dilakukan
untuk
mengisolasi sel mikroorganisme berukuran besar yang tidak dapat
Israwati
O1A114018
diisolasi
dengan
metode
37
agar
cawan/medium
cair.
Sel
mikroorganisme dilihat dengan menggunakan perbesaran sekitar 100

kali. Kemudian sel tersebut dipisahkan dengan menggunakan pipet
kapiler yang sangat halus ataupun micromanipulator, yang dilakukan
secara aseptis. Isolasi dengan cara pengenceran Sampel yang telah
diambil kemudian disuspensikan dalam akuades steril. Tujuan dari
teknik ini pada prinsipnya adalah melarutkan atau melepaskan
mikroba dari substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah
penanganannya. Macam-macam preparsi bergantung kepada bentuk
sampel swab (ulas), rinse (bilas), maseration (pengancuran), serta
teknik pengenceran bertingkat. Tujuan dari pengenceran bertingkat
yaitu
memperkecil
atau
mengurangi
jumlah
mikroba
yang
tersuspensi dalam cairan. Penentuan besarnya atau banyaknya

tingkat pengenceran tergantung kepada perkiraan jumlah mikroba
dalam sampel. Digunakan perbandingan 1 : 9 untuk sampel dan
pengenceran pertama dan
selanjutnya, sehingga pengenceran
berikutnya mengandung 1/10 sel mikroorganisma dari pengenceran

sebelumnya.
Israwati
O1A114018
38
Inokulasi adalah proses memindahkan mikroorganisme dari medium

yang lama ke medium yang baru. Teknik inokulasi ada beberapa
metode
yang
digunakan
untuk
mengisolasi
biakan
murni
mikroorganisme yaitu : Metode gores, metode tebar, metode tuang,

dan metode tusuk. Metode gores ialah penggoresan yang sempurna
akan menghasilkan koloni yang terpisah. Inokulum digoreskan di
permukaan media agar nutrient(medium padat) dalam cawaan petri
dengan jarum pindah (lup inokulasi). Di antara garis-garis goresan
akan terdapat sel-sel yang cukup terpisah sehingga dapat tumbuh
menjadi koloni. Metode sebar ialah setetes inokolum diletakan
dalam sebuah medium agar nutrien dalam cawan petri dan dengan
menggunakan batang kaca yang bengkok dan steril. Inokulasi itu
disebarkan dalam medium batang yang sama dapat digunakan dapat
menginokulasikan pinggan kedua untuk dapat menjamin penyebaran
bakteri yang merata dengan baik. Pada beberapa pinggan akan
muncul koloni-koloni yang terpisah-pisah. Metode tuang isolasi
menggunakan media cair dengan cara pengenceran. Dasar melakukan
pengenceran adalah penurunan jumlah mikroorganisme sehingga
pada suatu saat hanya ditemukan satu sel di dalam tabung. Adapun
Israwati
O1A114018
metode
tusuk
yaitu
dengan
39
dengan
cara
meneteskan
atau
menusukan ujung jarum ose yang didalamnya terdapat inokolum,

kemudian dimasukkan ke dalam media.
Medium yang digunakan untuk bakteri adalah NA untuk medium
padat dan untuk jamur adalah PDA untuk medium padat. Untuk
cawan Petri digunakan medium NA untuk bakteri dan medium PDA
untuk jamur. Isolasi mikroorganisme dari substrat padat dan
substrat cair menggunakan Nutrient Agar (NA) adalah media yang
digunakan
untuk
menumbuhkan
bakteri.
Adapun
untuk
menumbuhkan bakteri adalah 1 x 24 jam dan untuk jamur adalah 3

x 24 jam.
Potato Dextrosa Agar (PDA) merupakan medium organik yang
konsistensinya padat karena mengandung agar PDA biasanya
digunakan
untuk
membiakkan
jamur
karena
mengandung
karbohidrat yang diperlukan oleh jamur sebagai sumber nutrisi.

Pada medium ini kentang berfungsi sebagai sumber karbohidrat
sedangkan dekstrosa berfungsi sebagai sumber energi dan karbon.
Pada PDA, agar hanya berfungsi sebagai pamadat.
Israwati
O1A114018
40
Pada inokulasi bakteri dilakukan dengan menggunakan

medium padat dengan metode agar tegak dan metode agar miring.
Selain itu juga menggunakan medium padat dalam cawan Petri
dengan menggunakan medium NA serta menggunakan medium cair
yaitu NB. Pada metode agar tegak, inokulasi menggunakan medium
NA yang telah dipadatkan dengan posisi tegak dalam tabung
reaksi. Pada metode agar miring inokulasi menggunakan medium
NA yang telah dipadatkan dalam tabung reaksi dengan posisi
miring. Pada inokulasi jamur dilakukan dengan menggunakan
medium padat dengan metode agar tegak dan metode agar miring.
Selain itu juga menggunakan medium padat dalam cawan Petri
dengan menggunakan medium PDA. Pada metode agar tegak,
inokulasi menggunakan medium PDA yang telah dipadatkan dengan
posisi tegak dalam tabung reaksi. Dalam setiap perlakuan metode
isolasi dan inokulasi dilakukan secara aseptis, dimaksudkan agar
kontaminasi oleh mikroba lain yang tidak dikehendaki dapat
dicegah semaksimal mungkin. Untuk memindahkan sel-sel mikroba
dari satu medium ke medium lainnya digunakan jarum ose yang
Israwati
O1A114018
41
disterilkan melalui pemijaran dari pangkal sampai ke ujungnya

sampai berwarna merah sesaat sebelum dan setelah digunakan.
Lamanya inkubasi bakteri dan jamur berbeda. Ini dikarenakan
perbedaan waktu yang dibutuhkan bakteri dan jamur untuk
bereprodiksi
(melakukan
pembelahan)
berbeda.
Bakteri
membutuhkan waktu untuk pembelahan selama 1 - 2 hari

sedangkan jamur membutuhkan waktu untuk pembelahan selama 3
- 5 hari. Inkubasi dilakukan dengan membalik cawan Petri. Hal ini
dimaksudkan agar uap air yang terjadi selama proses inkubasi,
tidak jatuh ke dalam medium.
Percobaan isolasi menggunakan cawan petri dengan roti
berjamur sebagai sampel serta Nutrient Agar sebagai medianya.
Adapun dalam melakukan isolasi menggunakan 2 metode yaitu
metode tuang dan metode sebar.
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Kesimpulan dari percobaan yang telah dilakukan adalah
metode yang biasa digunkan untuk memisahkan mikroba tertentu
Israwati
O1A114018
42
dari populasi campurannya untuk mendapatkan kultur murni

diantaranya : teknik gores, teknik sebar dan teknik tuang yaitu
dengan menuangkan sampel terlebih dahulu pada cawan petri
kemudian dilanjutkan dengan menuangkan media.
B. Saran
Saran yang dapat diberikan pada percobaan ini adalah
sebaiknya
setelah
praktikum,
praktikum
diharuskan
memperhatikan kebersihan di dalam laboratorium.
DAFTAR PUSTAKA
Fibriarti Leni Bernadeta, Tetty Marta Linda, Elsa Windi Nefira. 2010.
Isolasi Dan Seleksi Bakteri Pendegradasi Paraquat Dari
Tanah Pertanian Di Kampar Riau. Jurnal Teknobiologi.
Anas,Arsy,Aysyah, Rahman, Panca Dewi Manuhara Karti Erika B.Lacon.
2013. Pengaruh Inokulan Bakteri Azospirillum Sp Asal
Rumput Raja Terhadap Sifat Kimia Tanah. Jurnal
Agriplus.
Puspitasari,Fajar,Diah,. Maya Shovitri, dan Nengah Dwianita
Kuswytasari. 2012. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri
Israwati
O1A114018
43
Aerob Proteolitik dari Tangki Septik. Jurnal Sains Dan

Seni Its. Vol. (1), No. (1).
Agustiyani,Dwi.,Hartati
Imamuddin.,Erni
Nur
Faridah.,dan
Oedjijono.2004.Pengaruh pH dan Substrat Organik

Terhadap
Pertumbuhan
dan
Aktivitas
Bakteri
Pengoksidasi Amonia.Jurnal Biodiversitas.Vol(5)No(2).

Riffiani,Rini.2010.Isolasi
Bakteri
Batanta-Salawati
Pendegradasi
Raja
Ampat
Pheananthrene
Papua.Jurnal
Biologi
Indonesia.Vol(6)No(2).
Mahataranti,Nimas.,Ika
Yuni
Astuti.,dan
Asriningdhiani.2012.Formulasi
Shampo
Binar
Antiketombe
Ekstrak Etanol Seledri (Apium graveolens L) dan

Aktivitasnya
terhadap
Jamur
Pityrosporum
Ovale.Jurnal Pharmacy.Vol(9)No(2).
Khoiriyah,Hanimatul.,Puji,Ardiningsih.,dan,Afghani.,Jayuska.2014.Pene
ntuan Waktu Inkubasi Optimum terhadap Aktivitas
Bakterioson
Lactobacillus
Sp.RED.Jurnal
JKK.Vol(3)No(1).
LAMPIRAN
A. SKEMA KERJA
a. Pembuatan Medium Nutrient Agar dan Potatoes Dextrosa
Agar
Medium
(Nutrient Agar, Potatoes Dextrosa Agar)
Timbang sesuai hasil perhitungan
Israwati
O1A114018
44
Cukupkan dengan aquades hingga 100 ml

Aduk hingga homogen
Panaskan menggunakan hot plate sampai melarut sempurna

Sterilisasi menggunakan autoklaf
Diamati
1. KOMPOSISI MEDIA
a. Komposisi Media Potato Dextrose Agar (PDA) Non Sintetik
Kentang
0,3 gram
Agar
1,5 gram
Aquadest
ad 100 m
2. Perhitungan Bahan.
a. Pembuatan Media Potato Dextrose Agar (PDA) Non
Sintetik
Media potato dextrose agar non sintetik dibuat dengan
perbandingan kentang 3 gram dan agar 15 gram dalam 1000
ml aquades.Untuk aquades 100 ml :
a. Kentang
39 gram 1000 ml
=
x
100 ml
x=
Israwati
O1A114018
39 gram 100 ml 300 gram ml

=
=3,9 gram
1000 ml
1000 ml
45
b. Agar
15 gram 1000 ml
=
x
100 ml
x=
15 gram 100 ml 1500 gram ml

=
=1,5 gram
1000 ml
1000 ml
Jadi, untuk membuat media nutrient agar non sintetik

diperlukan 0,3 gram kentang dan 1,5 gram agar dalam 100
ml aquades.
Israwati
O1A114018

Israwati Isolasi Dan Inokulasi

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Israwati Isolasi Dan Inokulasi

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME

La Ode Muh. Fitrawan S.Farm, Apt

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME

menimbulkan penyakit yang ditularkan melalui makanan atau dapat

lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni atau biakan murni.

La Ode Muh. Fitrawan S.Farm, Apt

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME

1. Untuk Mengetahui Metode-metode yang digunakan untuk

lingkungan sekitar kita.

Isolasi bakteri pendegradasi paraquat. Isolasi bakteri dari

La Ode Muh. Fitrawan S.Farm, Apt

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME

paraquat, kemudian dilakukan pengenceran

dan ditumbuhkan pada

media N-free agar dengan cara taburan (pour plate). Inkubasi

C selama 24 jam, koloni tunggal yang tumbuh

dipindahkan ke media N-free agar secara streak plate, demikian

free agar dengan cara goresan dan diinkubasi pada suhu 28

24 jam. Koloni bakteri yang tumbuh terpisah dipindahkan pada medium

La Ode Muh. Fitrawan S.Farm, Apt

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME

peningkatan kandungan nutrisi pada rumput raja sebagai pakan ternak

Azospirillum sp. tersebut memiliki kemampuan memfiksasi N bebas

yang diawali dengan pengenceran bertingkat. Proses isolasi mikroba

berasal dari kata bakterion (bahasa Yunani) yang berarti tongkat

pertambahnya pengetahuan, sekarang

bakteri digunakan untuk mikroorganisme bersel satu, berkembang biak

La Ode Muh. Fitrawan S.Farm, Apt

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME

membutuhkan O2 sebagai elektron aseptor pada proses fosforilasi

ditentukan dengan mengukur perubahan amonia dan pembentukan nitrit

La Ode Muh. Fitrawan S.Farm, Apt

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME

batu es Pemberian batu es di atas medium yang telah diinokulasi untuk

dengan menggunakan metode agar

menggunakan autoklaf. Satu ose kamir berumur 2 hari digoreskan pada

menunjukkan aktivitas antimikroba terbaik. Isolat Lactobacillus sp.

aktivitas bakteriosin, oleh

La Ode Muh. Fitrawan S.Farm, Apt

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME

karena itu, perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang penentuan

1. Agar (Ditjen POM Edisi III, 1979)

: Tidak berbau atau bau lemah, berasa

: Tidak larut dalam air dingin, dan larut dalam

: Sebagai bahan pemadat medium.

: Dalam wadah tertutup baik.

2. Pepton (Ditjen POM Edisi III, 1979)

: Serbuk ; kuning kemerahan sampai coklat ;

: Larut dalam air ; memberikan larutan coklat

La Ode Muh. Fitrawan S.Farm, Apt

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME

praktis tidak larut dalam etanol ( 95% ) P

: Simpan dalam wadah tertutup rapat, tidak

3. Ekstrak Beef (Ditjen POM Edisi III, 1979)

: Berbau dan berasa pada lidah. Kaldu daging

mengekstraksi daging sapi segar tanpa

kental berbentuk pasta. Massa berbentuk

: Larut dalam air dingin.

La Ode Muh. Fitrawan S.Farm, Apt

ISOLASI DAN INOKULASI MIKROORGANISME

: Simpan dalam wadah tertutup rapat, tidak

4. Aquadest (Ditjen POM Edisi III, 1979)

: Cairan jernih, tidak berwarna, tidak berbau,

: Sebagai sumber nutrien mikroba dan