PEMBUATAN INSULIN SINTETIC

Gen insulin sintetik di produksi melalui cloning rantai alfa yang dilakukan terpisah
dengan rantai beta, masing masing disisipkan pada plasmid yang berbeda, untuk selanjutnya
insulin rantai alfa hasil cloning akan digabung dengan rantai beta menjadi insulin aktif.
Tahapannya sebagai berikut :

1) Seperti pada proses pembuatan insulin menggunakan lactose operon (gen lac Z),
pembuatan insulin menggunakan bantuan -galaktosidase juga membuat rantai A dan B
secara terpisah.
2) Gen yang menyandi baik rantai A dan rantai B digabung dengan gen -galaktosidase. galaktosidase ini digunakan sebagai promotor, dengan hanya IPTG (suatu analog laktosa)
maka gen -galaktosidase akan tersintesis.
3) Gen rantai A maupun rantai B yang berada didekatnya, tentu juga akan tersintesis. Ini
adalah cara bagaimana gen rantai A tersintesis menjadi protein A.
4) Bila gen -galaktosidase bertemu dengan inducer yaitu IPTG, maka gen ini akan
tersintesis. Metionin dan rantai A metionin B yang berada didekatnya akan ikut
teersintesis, proses selanjutnya, sama seperti menggunakan laktose operon .

5) Pada tahap terakhir, rantai A dan B akan digabungkan menggunakn proses oksidasi.
Proses oksidasi berlangsung sebagai berikut: Rantai A dan B dioksidasi, bila tidak
terbentuk protein yang diinginkan maka direduksi kembali. Proses oksidasi-reduksi ini
memakan waktu dan tidak efisien.
PEMBUATAN INSULIN DARI cDNA
Complementary DNA (cDNA) merupakan DNA yang disintesis dari template mRNA dalam
sebuah reaksi yang dikatalis oleh enzim reverse transcriptase. Enzim reverse transcriptase akan
mengecek mRNA dan mensinstesi sebuah DNA yang merupakan pasangan dari mRNA tersebut.
Berikut tahap pembuatan insulin dari cDNA
1. mRNA proinsulin diubah menjadi cDNA proinsulin menggunakan enzim reverse
transcriptase. Diperlukan juga sintesis kodon untuk menyandi protein.
2. Kemudian cDNA dan kodon metionin di ligase bersama plasmid.
3. Di dalam gen E. Coli ini akan tersintesis menjadi protein yaitu peptida A, C (suatu
fragmen internal) dan B (ingat peptida A, C, dan B adalah proinsulin, tanpa rantai C
disebut insulin).
4. CNBr akan memeotong metionin dan memisahkan antara -galaktosidase dan proinsulin
5. Proinsulin diubah secra enzimatik oleh enzim proteolitik menjadi insulin.