Manuel de Manipulation Des Semences Dans Une Banque de Génes PDF

Manuels pour les banques de gnes No.
Manuel de
manipulation des semences

dans les banques de gnes
N. Kameswara Rao, Jean Hanson, M. Ehsan Dulloo, Kakoli Ghosh,
David Nowell et Michael Larinde
Manuels pour les banques de gnes No. 8
Manuel de
manipulation des semences

dans les banques de gnes
N. Kameswara Rao, Jean Hanson, M. Ehsan Dulloo, Kakoli Ghosh,
David Nowell and Michael Larinde
Bioversity International
Via del Tre Denari 472a, 00057 Maccarese, Rome, Italie
Institut international de recherche sur le btail (ILRI)
P.O. Box 5689, Addis Ababa, Ethiopie
Organisation des Nations Unies pour lalimentation et lagriculture (FAO)
Via delle Terme di Caracalla, 00100 Rome, Italie
Bioversity International est un organisme scientifique indpendant caractre international visant promouvoir la
conservation et le dploiement en champ et dans les forts des ressources phytogntiques au profit des gnrations
actuelles et futures. Il est un des 15 centres fonctionnant sous lgide du Groupe consultatif pour la recherche agricole
internationale (GCRAI), une association de membres des domaines privs et publics qui soutiennent les efforts
pour utiliser la science de pointe pour rduire la faim et la pauvret, amliorer lalimentation et la sant, et pour
protger lenvironnement. Bioversity a son sige social Maccarese, prs de Rome, en Italie, et possde des bureaux
rgionaux dans plus de 20 pays travers le monde. Il fonctionne sur la base de quatre programmes : (1) Diversity
for Livelihoods (La diversit au service de tous) (2) Understanding and Managing Biodiversity (Mieux connatre et
grer la biodiversit) (3) Commodities for Livelihoods (Les denres de base pour une vie meilleure) et (4) Global
Partnerships (Partenariats internationaux)
Le statut international a t confr Bioversity au titre dun accord dtablissement qui, en janvier 2006, avait t
sign par les gouvernements des pays suivants: Algrie, Australie, Belgique, Bnin, Bolivie, Brsil, Burkina Faso,
Cameroun, Chili, Chine, Congo, Costa Rica, Cte dIvoire, Chypre, Danemark, Egypte, Equateur, Grce, Guine,
Hongrie, Inde, Indonsie, Iran, Isral, Italie, Jordanie, Kenya, Malaisie, Mali, Maroc, Mauritanie, Norvge, Ouganda,
Pakistan, Panama, Prou, Pologne, Portugal, Rpublique Tchque, Rpublique Slovaque, Roumanie, Russie, Sngal,
Soudan, Suisse, Syrie, Tunisie, Turquie, et Ukraine.
Pour mener bien son programme de recherche, Bioversity reoit une aide financire de plus de 150 donateurs,
incluant des gouvernements, des fondations prives et des organismes internationaux. Pour plus de renseignements
sur les donateurs et les activits de recherche, consultez les rapports annuels de Bioversity. Des copies
imprimes sont disponibles sur demande bioversity-publications@cgiar.org ou partir du site web de Bioversity
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Les dsignations gographiques utilises dans cette publication ainsi que la prsentation de matriel ne sont en
aucun cas le signe dune opinion, quelle quelle soit, exprime par Bioversity ou le GCRAI quant au statut lgal
dun pays, dun territoire, dune ville ou une zone ou lautorit qui les dirige, ou sur la dlimitation de ses frontires
gographiques ou administratives. De mme, les opinions exprimes sont celles des auteurs et ne refltent pas
ncessairement celles de ces organisations.
La mention dune marque dpose ne constitue pas le cautionnement du produit et nest faite qu titre dinformation
Citation : Rao NK, Hanson J, Dulloo ME, Ghosh K, Nowell D et Larinde M. 2006. Manuel de manipulation des
semences dans les banques de gnes. Manuels pour les banques de gnes No. 8. Bioversity International, Rome,
Italie.
ISBN 978-92-9043-741-3
Via dei Tre Denari 472/a
00057 Maccarese
Rome, Italie
Bioversity International, 2006
ii
Manuel de manipulation des semences
TABLE DES MATIERES

Remerciements
vi
Partenaires de cette publication
vii
Liste des relecteurs
ix
Avant-propos
Prface
xii
1. Introduction
2. Acquisition et enregistrement du matriel gntique
2.1 Acquisition du matriel gntique
2.2 Enregistrement du matriel gntique
14
3. Nettoyage des semences
22
4. Dtermination du taux dhumidit des semences et dshydratation
31
4.1 Dtermination du taux d'humidit
31
4.2 Dshydratation des semences
40
5. Contrle de la qualit des semences
57
5.1 Test de la viabilit des semences
57
5.2 Test de l'tat sanitaire des semences
87
5.3 Test des semences pour l'introduction par inadvertance de transgnes
92
6. Empaquetage et stockage des semences
97
6.1 Empaquetage des semences
97
6.2 Stockage des semences
102
7. Distribution du matriel gntique
109
8. Contrle et rgnration du matriel gntique
117
8.1 Contrle du matriel gntique
117
8.2 Rgnration du matriel gntique
123
Annexe I: Politiques et cadres internationaux influenant

laccs au matriel gntique et son change
134
Annexe II: Mthodes srologiques de dtection des pathogens

des plantes
137
Annexe III: Glossaire
139
Annexe IV: Equipement spcialis pour les banques de semences
148
Annexe V: Liste des acronyms
165
iii
DIAGRAMMES DE FLUX
Diagramme de flux 1.1. Squence gnrale des oprations dans une banque de semences
Diagramme de flux 2.1. Enregistrement du matriel gntique
16
Diagramme de flux 3.1. Nettoyage des semences
23
Diagramme de flux 4.1. Dtermination du taux d'humidit des semences
32
Diagramme de flux 4.2. Dshydratation des semences
41
Diagramme de flux 4.3. Protocole de dtermination du comportement au stockage

des semences
47
Diagramme de flux 5.1. Test de germination
59
Diagramme de flux 6.1. Empaquetage des semences
98
Diagramme de flux 7.1. Distribution du matriel gntique
110
Diagramme de flux 8.1. Contrle de la viabilit
119
TABLEAUX
Tableau 4.1. Mthode de dtermination du taux d'humidit pour des espces cultives
et fourragres importantes
34
Tableau 4.2. Espces pour lesquelles le broyage est obligatoire
35
Tableau 4.3. Enregistrement et calcul du taux d'humidit des semences
36
Tableau 4.4. Taux d'humidit l'quilibre (approximatifs) de certaines espces cultives

communes 25C
43
Tableau 5.1. Directives pour tester la germination des plantes cultives les plus communes
61
Tableau 5.2. Fiche modle de donnes pour enregistrer les rsultats de germination
78
Tableau 5.3. Concentration, tempratures et dures de coloration au chlorure

de ttrazolium
84
Tableau 6.1. Modle de tableau pour enregistrer les informations sur l'empaquetage
des semences
101
Tableau 6.2. Temprature de stockage et taux d'humidit suggrs pour

les collections actives
104
Tableau 8.1. Intervalle suggr pour contrler la germination de collections actives

ou de base chez les semences olagineuses et non olagineuses
118
Tableau 8.2. Pourcentages seuils de germination pour la rgnration des accessions
120
Tableau 8.3. Plan de test squentiel de germination pour un standard de rgnration

de 85% lorsque l'on teste la germination de semences par groupes de 40
121
iv
Tableau 8.4. Comportement reproductif et mcanismes de contrle de la pollinisation

pour la rgnration de plantes cultives importantes
132
FIGURES
Figure 2.1. L'extraction des graines des fruits charnus
10
Figure 4.1. Isotherme de taux d'humidit
44
Figure 4.2. Prdiction du temps de dshydratation
45
Figure 5.1. Test de germination des semences sur le dessus de papiers absorbants
dans des botes de Petri
69
Figure 5.2. Test de germination des semences par la mthode entre les papiers
71
Figure 5.3. Test de germination des semences dans la sable
72
Figure 5.4. Anomalies chez des plantules de pois
74
Figure 5.5. Anomalies chez des plantules d'arachide
75
Figure 5.6. Anomalies chez des plantules de bl
76
Figure 5.7. Anomalies chez des plantules d'oignon
77
Figure 5.8. Scarification manuelle de l'enveloppe des semences
80
Figure 5.9. Pattern de coloration aprs un test au ttrazolium chez des semences
de dicotyldone
85
Figure 5.10. Pattern de coloration aprs un test au ttrazolium chez des semences
de monocotyldones
86
ENCADRES
Encadr 2.1. Unit de base pour l'enregistrement
18
Encadr 4.1. Options pour la dshydratation initiale
50
Encadr 5.1. Humidification des semences sches
60
Encadr 5.2. Les plantules avec les dfauts suivants sont classes comme anormales
73
REMERCIEMENTS
Nous sommes particulirement reconnaissants envers T. van Hintum,
L. de Groot, L. Boukema, A. Borner, S. Linington, C. N. Nkhoma,
L. M. Engle, N. C. Altoveros, M. Mackey, A. W. Ebert, Xiaorong Hu,
M. Wetzel, V. Mahalakshmi, H. Kamau et W. Marandu pour leur
lecture critique de la premire version du manuscrit. Nous remercions
Teodardo Calles pour son aide pour la construction des diagrammes.
Nous remercions galement le Centre technique de coopration
agricole et rurale ACP-UE (CTA), Pays Bas, pour le soutien financier
apport la prparation de ce manuel. Des remerciements sont
galement dus au Dr Tran Hong, de lUniversit de Reading, pour
son avis dexpert sur certains des points techniques couverts dans
ce guide. Nous souhaitons galement remercier tout le personnel
de Bioversity International, et en particulier Annie Huie, qui a aid
la prparation de ce manuel ainsi que le Dr Florent Engelmann,
pour la traduction de ce guide en franais. Nous remercions aussi
Nicolas Muema pour les illustrations et les dessins. Nous sommes
galement reconnaissants envers Elizabeth Goldberg, responsable
de lUnit de recherche et de soutien pour le dveloppement
des capacits de Bioversity International, pour nous avoir guids
dans le dveloppement de ce manuel et de sa version dautoapprentissage. Nous remercions galement Paul Neate et son
quipe, particulirement Patrizia Tazza et Frances Ferraiuolo, pour
la conception et le style de cette publication.
vi
PARTENAIRES DE CETTE PUBLICATION

Bioversity International est un organisme scientifique indpendant
caractre international visant promouvoir la conservation
et le dploiement en champ et dans les forts des ressources
phytogntiques au profit des gnrations actuelles et futures. Il est
un des 15 centres fonctionnant sous lgide du Groupe consultatif
pour la recherche agricole internationale (GCRAI), une association
de membres des domaines privs et publics qui soutiennent les
efforts pour utiliser la science de pointe pour rduire la faim et
la pauvret, amliorer lalimentation et la sant, et pour protger
lenvironnement. Bioversity a son sige social Maccarese, prs
de Rome, en Italie, et possde des bureaux rgionaux dans plus
de 20 pays travers le monde. Il fonctionne sur la base de quatre
programmes : (1) Diversity for Livelihoods (La diversit au service de
tous) (2) Understanding and Managing Biodiversity (Mieux connatre
et grer la biodiversit) (3) Commodities for Livelihoods (Les
denres de base pour une vie meilleure) et (4) Global Partnerships
(Partenariats internationaux)
LInstitut International de Recherche sur le Btail (ILRI) rassemble
les domaines de la recherche sur le btail et la rduction de la
pauvret, sappuyant sur des ressources scientifiques dexcellence
et sur du personnel mieux form pour aboutir la rduction de
la pauvret et un dveloppement durable. LILRI est un institut
de recherche but non lucratif dont le sige est bas Nairobi
au Kenya, et qui travaille en Afrique, en Asie, en Amrique Latine
et dans les Carabes. LILRI a galement des bureaux en Afrique
Occidentale, Orientale et Afrique du Sud ainsi quen Asie du Sud
et du Sud-est, en Chine et en Amrique Centrale. LILRI est un
des 15 centres fonctionnant sous lgide du Groupe consultatif
pour la recherche agricole internationale (GCRAI). Sa stratgie
se concentre sur trois axes : (1) scuriser les biens des plus
pauvres; (2) amliorer la productivit de leur systme dlevage et
(3) augmenter les perspectives face un march en perptuelle
volution. Les programmes de recherche de lILRI sont orients
vers 4 domaines : identification des diverses possibilits en matire
de recherche et dveloppement ; amlioration des perspectives de
commercialisation ; utilisation des biotechnologies pour assurer la
qualit du cheptel ; et les personnes, le btail et lenvironnement.
LOrganisation des Nations Unies pour lalimentation et
lagriculture joue un rle de chef de file dans les efforts internationaux
de lutte contre la faim. La FAO, qui est au service la fois des pays
dvelopps et des pays en dveloppement, est une tribune neutre
vii
au sein de laquelle tous les pays se runissent sur un pied dgalit

pour ngocier des accords et dbattre de politiques. La FAO est
galement une source de savoir et dinformations. Elle aide les
pays en dveloppement et les pays en transition moderniser et
amliorer les pratiques agricoles, forestires et halieutiques, et
garantir une bonne nutrition pour tous. Depuis sa cration en 1945,
elle a consacr une attention particulire au dveloppement des
zones rurales, o vivent 70 pour cent des populations pauvres et
affames de la plante. Les quatre grands domaines dactivit de la
FAO : mettre linformation la porte de tous; partager lexpertise
en matire de politiques; servir de lieu de rencontre pour les Etats;
porter les connaissances sur le terrain.
Le Centre technique de coopration agricole et rurale (CTA) a
t cr en 1983 dans le cadre de la Convention de Lom entre
les tats du Groupe ACP (Afrique, Carabes, Pacifique) et les pays
membres de lUnion europenne. Depuis 2000, le CTA exerce ses
activits dans le cadre de lAccord de Cotonou ACP-CE.
Le CTA a pour mission de dvelopper et de fournir des services
qui amliorent laccs des pays ACP linformation pour le
dveloppement agricole et rural, et de renforcer les capacits de ces
pays produire, acqurir, changer et exploiter linformation dans
ce domaine. Les programmes du CTA sont conus pour : fournir
un large ventail de produits et services dinformation et mieux
faire connatre les sources dinformation pertinentes ; encourager
lutilisation combine de canaux de communication adquats et
intensifier les contacts et les changes dinformation, entre les
acteurs ACP en particulier ; renforcer la capacit ACP produire et
grer linformation agricole et mettre en uvre des stratgies
de GIC, notamment en rapport avec la science et la technologie. Le
travail du CTA tient compte de lvolution des mthodologies et des
questions transversales telles que le genre et le capital social.
viii
LISTE DES RELECTEURS

T. van Hintum, L. Groot et
L. Boukema
Centre for Genetic Resources
(CGN)
PO Box 16, 6700 AA
Wageningen
Pays Bas
N.C. Altoveros
Deputy Director and Researcher
Institute of Plant Breeding
University of the Philippines
Los Baos
College 4031, Laguna
Philippines
A. Borner
Institut fr Pflanzengenetik
und Kulturpflanzenforschung
Corrensstrae 3
D-06466 Gatersleben
Allemagne
M. Mackey
Australian Centre for
International Agricultural
Research (ACIAR)
GPO Box 1571
Canberra ACT 2601
Australie
S. Linington
Millennium Seed Bank Project
Wakehurst Place
Ardingly
Haywards Heath
West Sussex RH17 6TN
Royaume Uni
C.N. Nkhoma
SADC Plant Genetic Resources
Centre (SPGRC)
Private Bag CH6
Lusaka
Zambie
A.W. Ebert
Coordinator
Plant Genetic Resources and
Biotechnology
CATIE
7170 Turrialba
Costa Rica
Xiaorong Hu
ICGR, CAAS
12 Zhong Guan Cun South
Street,
Beijing, 100081
Chine
L.M. Engle
Geneticist and Head
Genetic Resources and Seed
Unit
AVRDC The World Vegetable
Center
60 Yi-Ming Liao 74151
Shanhua, Tainan 741
Taiwan
ix
AVANT-PROPOS
Les banques de gnes sont les entrepts des ressources
phytogntiques, qui fournissent le matriel brut pour lamlioration
des plantes cultives. Elles jouent un rle cl en contribuant au
dveloppement durable de lagriculture, en aidant augmenter la
production alimentaire et en surmontant ainsi la faim et la pauvret.
La rsistance inhrente aux ravageurs et maladies peut tre
introduite dans les plantes cultives, rduisant la ncessit dutiliser
des produits chimiques qui peuvent avoir des effets nfastes sur les
agriculteurs et lenvironnement. Les semences conserves dans les
banques de gnes sont une ressource vitale et irremplaable, un
hritage qui doit tre conserv pour offrir des options futures pour
lagriculture dans un monde confront au changement climatique et
dautres dfis imprvus. La conservation durable des ressources
gntiques dpend des actions effectives des personnels des
banques de gnes, qui jouent un rle critique pour sassurer que le
matriel gntique est conserv dune manire efficace et efficiente.
Ils doivent appliquer des procdures correctes pour manipuler les
semences, afin dassurer leur survie et leur disponibilit pour les
gnrations prsentes et futures.
Dans le pass, le Manuel pratique pour la manipulation des
semences dans les banques de gnes (Hanson, 1985), publi
par le Bureau international pour les ressources phytogntiques
(IBPGR), le prcurseur de lInstitut international des ressources
phytogntiques (IPGRI) (maintenant Bioversity international), a aid
les curateurs des banques de gnes et les techniciens conserver
les semences. Les recherches conduites au cours des dernires
dcades ont produit des avances dans nos connaissances de la
physiologie des semences et de leur comportement au stockage.
La Convention sur la diversit biologique (CDB) en 1992, le Trait
international sur les ressources phytogntiques pour lalimentation
et lagriculture (PGRFA) et les accords qui y sont lis ont chang
le cadre global de la proprit du matriel gntique et du partage
des avantages. Le dveloppement des organismes gntiquement
modifis (OGM) et les controverses associes ont des implications
importantes sur la manire dont les banques de gnes grent leur
matriel gntique, notamment pour empcher lintrogression
non intentionnelle de gnes exotiques, incluant les transgnes.
Toutes ces nouvelles opportunits et ces nouveaux dfis rendaient
ncessaire une mise jour du manuel pour les banques de gnes
publi en 1985. Ce manuel aborde ces rcents changements et a
pour but de sassurer que les manipulations dans les banques de
gnes remplissent les exigences daujourdhui. Le nouveau manuel
x
est complt par un module interactif dauto-apprentissage, qui se

trouve sur le CD-Rom accompagnant cet ouvrage. Le manuel et le
module dauto-apprentissage ont pour but daider relever les dfis
associs au manque et aux changements frquents de personnel
qualifi dans les banques de gnes, particulirement dans les pays
en dveloppement.
Le manuel et le module dauto-apprentissage qui laccompagne
fournissent des directives dtailles sur les procdures et des leons
lintention des personnels qui nont pas loccasion de suivre des
cours sur la conservation des semences et la gestion des banques
de gnes. En utilisant le manuel et son module, les personnels des
banques de gnes peuvent apprendre eux-mmes les diffrentes
tches accomplir dans une banque de gnes et avoir galement
une rfrence rapide sur les procdures essentielles des banques de
gnes. Avec cette publication, nous esprons contribuer assurer
que les personnels des banques de gnes dans le monde entier
maintiendront avec des standards levs de survie et de qualit le
matriel gntique dont ils ont la charge.
Laura Snook
Directrice du Programme
Mieux connatre et grer la biodiversit
xi
PREFACE
Des procdures adquates de manipulation des semences dans les
banques de gnes sont fondamentales pour une conservation efficace
long terme et cot rduit des ressources phytogntiques. Elles
garantissent que les graines stockes sont de la plus haute qualit
possible et quelles atteignent une viabilit maximale. Lobjectif des
banques de gnes est de maintenir des accessions ayant une viabilit
leve pendant de longues priodes. Les avances ralises dans nos
connaissances de la biologie des semences au cours des dernires
dcades ont conduit une comprhension amliore de la physiologie
des semences et du comportement des semences au stockage, ce qui
fait des graines le moyen de conservation long terme le plus facile
et le plus pratique. Ceci a conduit au dveloppement de techniques
pour la manipulation adquate des semences et pour leur prparation
au stockage dans les banques de gnes.
Dans les annes 80, le Bureau international pour les ressources
phytogntiques (IBPGR), le prcurseur de lInstitut international
des ressources phytogntiques (IPGRI) (maintenant Bioversity
International) a command une srie de manuels pour les banques
de gnes incluant le Manuel pratique pour la manipulation des
semences dans les banques de gnes N1 par Jean Hanson (1985),
pour aider les curateurs de banques de gnes et les techniciens en
conservation des semences. Cette srie puise est toujours une
rfrence standard pour le travail dans les banques de gnes et
elle reste lune des rares sources dinformations pratiques pour les
curateurs de banques de gnes et pour les techniciens. Au cours
des dernires annes, trs peu douvrages ont t publis sur
ce sujet. Les quelques excellentes publications sur ce sujet sont
souvent trop complexes pour pouvoir tre utilises par la moyenne
des techniciens, particulirement dans les pays en dveloppement.
Ce manuel est une mise jour du manuel pratique prcdent
lattention des nouveaux personnels des banques de gnes qui
nont pas reu de formation formelle. Il bnficie des avances
ralises dans la technologie des semences, dans les techniques de
stockage et de gestion des semences au cours des deux dernires
dcades ; la technologie moderne de communication est utilise
pour le rendre plus largement accessible.
Le besoin pour ce produit a t soulign lors dune rcente valuation
des besoins en formation et capacit pour les programmes nationaux,
ralise par Bioversity et lOrganisation des Nations Unies pour
lalimentation et lagriculture (FAO). Comme cela a t exprim par
nos partenaires au cours de diverses runions et ateliers, le manque
xii
de personnel form est une contrainte majeure pour conserver le

matriel gntique avec comptence et efficacit. Dans les pays en
dveloppement, les personnels employs par les banques de gnes
pour les oprations de routine nont pas les connaissances de base
en physiologie des semences et sur les bonnes pratiques de gestion
des banques de gnes; les changements frquents de personnel
aggravent galement le problme. Ce manuel pratique et simple aidera
le personnel des banques de gnes dans leur travail de tous les jours.
Cette publication sintresse au stockage des seules semences
orthodoxes cest--dire les semences qui peuvent tre dshydrates
jusqu un taux dhumidit bas et tre maintenues des tempratures
proches de 0C dans les banques de gnes. Les activits et les
procdures majeures du fonctionnement dune banque de gnes
sont gnralement les mmes entre banques de gnes, bien quelles
puissent varier dans leur contenu et leur envergure.
Depuis la premire dition du manuel pratique en 1985, plusieurs
nouveaux dveloppements ont eu lieu qui justifient une rvision
des procdures dans les banques de gnes. La prise deffet de la
Convention sur la diversit biologique (CDB) en 1992 et le Trait
et lagriculture (PGRFA), en 2004, ont chang la perception de
la proprit du matriel gntique et du partage des bnfices
dans le monde. Ces accords fournissent de nouveaux cadres de
conduite pour lacquisition, la conservation et lutilisation de la
biodiversit, et influencent la manire dont les banques de gnes
effectuent leur travail. Dans la CDB et le Trait international sur les
PGRFA, il est reconnu que : la biodiversit est le droit souverain des
nations ; la collecte de matriel gntique doit tre effectue avec
consentement pralable en connaissance de cause; lacquisition de
matriel gntique est sujette des termes agrs mutuellement et
des accords de transfert multilatraux ou bilatraux.
De plus, le Fonds fiduciaire mondial pour la diversit des cultures (Fonds
fiduciaire) a t tabli pour soutenir le dveloppement et le financement
de la conservation de la diversit des plantes cultives au niveau
mondial. Le Fonds fiduciaire aide conserver les collections qui ont une
importance critique pour la scurit alimentaire et le dveloppement
durable. Afin de recevoir le soutien du Fonds fiduciaire, les banques de
gnes doivent satisfaire un nombre de critres dligibilit, dont lun
est que les rcipiendaires ont les ressources humaines et les systmes
de gestion ncessaires pour conserver les ressources phytogntiques
et conformes aux standards scientifiques et techniques de gestion
convenus. Ceci requiert des directives pour aider les banques de gnes
maintenir des standards de gestion levs.
xiii
Un dveloppement nouveau et controvers qui devrait affecter la

gestion du matriel gntique est la manipulation dorganismes
gntiquement modifis (OGM). On attend maintenant des banques
de gnes quelles prennent des mesures proactives pour empcher
lintrogression non intentionnelle de gnes trangers, incluant des
transgnes, qui ne sont pas dj prsents dans les chantillons
quelles conservent. Pour cette raison, le Genetic Resources
Policy Committee (GRPC) du Groupe consultatif pour la recherche
agricole internationale (GCRAI) a dvelopp des principes directeurs
qui traitent des risques dintroduction de transgnes dans les
collections, particulirement aux points critiques des procdures
employes dans les banques de gnes. Ces principes et les
changements dans les protocoles requis pour les mettre en uvre
sont dvelopps dans cette nouvelle dition.
La publication de ce manuel est une initiative commune de
Bioversity International, de lInstitut international de recherche sur le
btail (ILRI) et de la FAO, finance en partie par le Centre technique
de coopration agricole et rurale ACP-UE (CTA). Ce manuel est
destin au personnel des banques de gnes, particulirement aux
techniciens qui manipulent des semences orthodoxes ; il essaie
dexpliquer simplement les procdures mettre en uvre pour
la gestion quotidienne de la manipulation des semences dans les
banques de gnes. Afin daugmenter la valeur de ce manuel pour
la formation et le dveloppement des capacits, les auteurs lont
adapt pour crer un module interactif dauto-apprentissage, qui
sera publi par Bioversity International avec le soutien du CTA,
comme un outil supplmentaire sur le Web et sur CD-Rom.
Il est important de noter que ce manuel se concentre seulement sur
les procdures de manipulation des semences et quil ne couvre
pas en dtails les procdures de documentation, de collecte ou
de caractrisation ; ces sujets sont bien traits dans dautres
publications. Les lecteurs sont invits consulter la littrature pour
obtenir une meilleure comprhension de ces importantes activits
des banques de gnes.
Kameswara Rao
Jean Hanson
Ehsan Dulloo
Kakoli Ghosh
David Nowell
Michael Larinde
xiv
1. Introduction
1. Introduction
2. Acquisition et
enregistrement du
matriel gntique
2.1 Acquisition du
matriel gntique
2.2 Enregistrement du
matriel gntique
4. Dtermination du taux
dhumidit des semences
et dshydratation
4.1 Dtermination du
taux d'humidit
4.2 Dshydratation des
semences
5. Contrle de la qualit
des semences
5.1 Test de la viabilit
des semences
5.2 Test de l'tat sanitaire
des semences
5.3 Test des semences
pour l'introduction
par inadvertance
de transgnes
6. Empaquetage et
stockage des semences
6.1 Empaquetage des
semences
6.2 Stockage des
semences
7. Distribution du matriel
gntique
8. Contrle et rgnration
du matriel gntique
8.1 Contrle du matriel
gntique
8.2 Rgnration du
matriel gntique
1. INTRODUCTION
Pour les ressources phytogntiques, le
comportement physiologique au stockage et la
longvit inhrente des semences de chaque
espce dictent le mode de conservation utiliser.
Le stockage des semences est la mthode prfre
pour 90% des six millions daccessions conserves
dans les collections ex situ dans le monde entier,
parce quil est pratique et conomique. Cest
la principale mthode de conservation pour les
espces qui produisent des semences orthodoxes,
qui supportent la dessiccation jusqu des taux
dhumidit rduits et le stockage trs basse
temprature. La plupart des espces arables et
fourragres, ainsi que de nombreuses espces
ligneuses, produisent des semences qui
appartiennent cette catgorie. Les techniques
pour conserver les semences orthodoxes ont
t amliores pendant plusieurs dcades. Elles
consistent dshydrater les semences jusqu des
taux dhumidit bas (37% du poids frais, selon
lespce), les stocker dans les conteneurs scells
hermtiquement basse temprature, de prfrence
-18C ou en dessous (FAO/IPGRI, 1994).
Un certain nombre despces ligneuses tropicales
et subtropicales produisent des semences qui ne
survivent pas la dessiccation et qui ne peuvent
pas tolrer les basses tempratures et qui ne sont
donc pas faciles stocker; ces espces sont
connues sous le terme despces rcalcitrantes.
Des techniques existent pour stocker certaines
espces rcalcitrantes, mais ces semences ont
gnralement une viabilit courte et chaque
espce requiert sa propre mthode de stockage.
Une troisime catgorie despces qui ont un
comportement intermdiaire a galement t
identifie. Ces semences tolrent des combinaisons
de dessiccation et de basses tempratures. Il y a
en fait un gradient des semences orthodoxes aux
semences rcalcitrantes, sans limites bien dfinies
entre les catgories. Bien que des recherches
aient t conduites pour surmonter les problmes
associs la conservation des semences, peu de
progrs ont t raliss au-del du stockage
court terme des semences non-orthodoxes.
1
Cette publication sintresse au stockage des semences orthodoxes

dans les banques de gnes. Les oprations de base dune banque
de semences incluent lassemblage, le traitement, la conservation,
la rgnration et la distribution du matriel gntique. Les activits
et procdures majeures pour le fonctionnement dune banque de
gnes sont gnralement les mmes dans toutes les banques de
gnes, bien quelles puissent varier sensiblement. Les banques de
semences peuvent tre trs spcialises ; par exemple, la banque
internationale du riz Los Baos, Philippines, conserve seulement le
riz et ses espces sauvages apparentes. Le maintien de la viabilit
et de lintgrit gntique des semences restent les pierres angulaires
de la gestion dune banque de gnes. La qualit et la durabilit
de toute conservation de matriel gntique dpend de la faon
dont les semences sont traites et conserves. Des procdures de
manipulation des semences inappropries conduisent lacclration
de la dtrioration, ce qui rend la conservation plus coteuse.
Le fonctionnement dune banque de gnes implique une srie
dactivits complexes et interdpendantes (voir Diagramme de 1.1).
Lassemblage de matriel gntique au moyen de la collecte dans
des zones de diversit gntique connue ou de donations dautres
centres est la premire tape vers la conservation ex situ de la
diversit des plantes cultives. Aprs leur rception la banque de
gnes, les chantillons de semences sont enregistrs et ajouts
la collection, condition quils satisfassent aux standards requis
pour la qualit des semences, leur quantit et les informations qui
les accompagnent. La procdure pour intgrer une accession dans
une banque de gnes comprend le nettoyage, la dtermination
du taux dhumidit, la dshydratation, le test de la viabilit et
lempaquetage. Les accessions de matriel gntique doivent tre
maintenues avec une proportion leve de semences viables; ceci
implique le stockage dans des conditions appropries, la vrification
priodique de la viabilit des semences et leur rgnration quand
la situation le requiert. La rgnration doit tre effectue dans des
conditions optimales pour maintenir lintgrit gntique et maximiser
la longvit. Afin de minimiser la drive gntique, des nombres
suffisants de plantes doivent tre cultivs et les prlvements raliss
de manire identique. Lintgrit gntique des espces pollinisation
croise doit galement tre maintenue par pollinisation contrle
ou isolement. Les semences doivent tre rcoltes aprs quelles
aient atteint le point de maturit physiologique et conditionnes ou
traites en conditions optimales pour assurer une viabilit leve et
leur disponibilit pour le stockage. De bonnes conditions climatiques
pendant les priodes de post-maturation pr-rcolte sont galement
vitales pour assurer la qualit des semences au moment de leur
rcolte : un temps sec acclre la dshydratation des semences sur
2
la plante jusqu une teneur en eau qui est favorable la manipulation,

alors quun temps humide (avec une humidit relative leve) retarde
la dshydratation des semences sur la plante, ce qui conduit une
dtrioration des semences avant mme la rcolte.
La plupart des banques de gnes ont le mandat de distribuer le
matriel gntique aux utilisateurs. Les accessions de matriel
gntique sont gnralement distribues en utilisant des accords
de transfert de matriel (MTA) qui dfinissent les termes et les
conditions de leur utilisation, et les dispositions concernant le
partage des avantages provenant du matriel gntique. Lors de la
premire runion de lorgane directeur du Trait international sur les
ressources phytogntiques pour lalimentation et lagriculture, en
juin 2006, un accord standard de transfert de matriel (SMTA) a t
formalis ; le SMTA offre un contrat uniforme pour lutilisation dans
tous les changes de matriel gntique des espces incluses dans
lAnnexe I du Trait. Il inclut des termes spcifiques qui gouvernent
laccs et le partage des avantages, ce qui facilite les changes de
matriel gntique dans le monde entier.
Le travail sur les ressources gntiques inclut la gestion de grandes
quantits dinformations, qui ncessitent des systmes de gestion
de la documentation et de gestion des informations. La gestion des
informations nest pas couverte dans ce manuel, mais le lecteur doit
consulter le Guide de documentation des ressources gntiques
produit par Painting et al. (1993).
La gestion des banques de gnes requiert des prises de dcisions
cratives et adaptes. Au vu de laugmentation de la pression subie
par les banques de gnes pour amliorer leur activit et leur efficacit
en termes de cots, il est ncessaire de dvelopper des stratgies
cohrentes de gestion. Des lments importants de la gestion, la
fois au niveau de la banque de gnes et de la collection, sont analyss
et les options pour une gestion plus active et efficace sont discutes
dans une publication rcente dEngels and Visser (2003).
Lectures complmentaires
Engels, J.M. et Visser, L. (eds.). 2003. A guide to effective management
of germplasm collections. IPGRI Handbook for Genebanks No. 6.
IPGRI, Rome, Italie.
FAO/IPGRI. 1994. Genebank standards. FAO and IPGRI, Rome, Italie.
Painting K.A., Perry, M.C., Denning, R.A. et Ayad, W.G. 1993. Guidebook
for genetic resources documentation: A self-teaching approach to
the understanding, analysis and development of genetic resources
documentation. IBPGR, Rome, Italie.
3
Diagramme de ux 1.1. Squence gnrale des oprations dans une banque de semences.
COLLECTE DANS LE PAYS
INTRODUCTION
EXTRACTION DES
SEMENCES NETTOYAGE
QUARANTAINE
REGENERATION
ENREGISTREMENT
NETTOYAGE,
DESHYDRATATION
REGENERATION
EMPAQUETAGE
STOCKAGE
CONTRLE
DISTRIBUTION
CARACTERISATION
EVALUATION
DOCUMENTATION
2. Acquisition et enregistrement
1. Introduction
2. Acquisition et
enregistrement du
matriel gntique
2.1 Acquisition du
matriel gntique
matriel gntique
et dshydratation
4.1 Dtermination du
taux d'humidit
semences
des semences
des semences
des semences
pour l'introduction
par inadvertance
de transgnes
6. Empaquetage et
6.1 Empaquetage des
semences
6.2 Stockage des
semences
gntique
du matriel gntique
gntique
8.2 Rgnration du
matriel gntique
2. ACQUISITION ET
ENREGISTREMENT DU
MATERIEL GENETIQUE
2.1 Acquisition du matriel
gntique
Quest-ce que lacquisition de matriel
gntique ?
Lacquisition de matriel gntique est lobtention de
matriel gntique dune espce quune banque de
gnes a le mandat de conserver. Cest ltape initiale
de la conservation des ressources gntiques.
Pourquoi est-elle ralise ?

La principale raison dacqurir du matriel
gntique est dassurer quune diversit suffisante
est disponible pour rpondre aux besoins prsents
et futurs. Les raisons pour lacquisition incluent :
lrosion gntique : quand la menace de
perte de diversit gntique est prsente dans
une zone particulire et que la conservation in
situ nest pas possible ;
complter des manques : quand il manque
de la diversit ou quelle est insuffisamment
reprsente dans une collection existante ;
lacquisition en rponse un besoin : lorsque
lon a besoin de matriel gntique pour du
travail damlioration, de recherche ou de
dveloppement ;
lacquisition opportuniste : la collecte non
planifie, fortuite, despces non cibles
lorsque loccasion se prsente.
Comment est-elle ralise ?

Le matriel gntique est acquis en :
le collectant dans les champs dagriculteurs,
des habitats sauvages ou sur les marchs,
particulirement dans les centres de diversit
connus ;
se procurant du matriel intressant par
correspondance ou par des changes avec
dautres centres dintroduction de vgtaux,
des banques de gnes, des scientifiques, des
cultivateurs privs, des socits semencires ou
dautres fournisseurs de matriel gntique.
5
Politique dacquisition de matriel gntique

Les banques de gnes doivent avoir des politiques dacquisition
claires afin que le volume de matriel acquis reste dans les
limites des capacits de gestion de chaque banque de gnes.
Lorsque lespace de stockage ou les ressources pour maintenir les
collections sont limites, le matriel gntique doit tre acquis en se
basant sur les priorits.
Etablissement de priorits
Lacquisition de matriel gntique doit tre base sur sa valeur
ou sur la menace dextinction perue. La valeur peut tre
estime comme lutilit des caractres et ladaptation des
environnements uniques. Les races locales, les cultivars primitifs
et les espces sauvages et apparentes doivent recevoir une
priorit dacquisition leve, suivis par les stocks gntiques, le
matriel lite damlioration et les varits obsoltes et modernes.
Il faut considrer la disponibilit des ressources pour la gestion
avant dacqurir des taxons sauvages.
La Convention sur la diversit biologique (CDB) et le Trait
et lagriculture (PGRFA) fournissent les cadres pour lacquisition et
lutilisation du matriel gntique. La collecte est lie par la CDB,
qui couvre laccs avec consentement pralable en connaissance
de cause selon des termes accepts mutuellement et le partage
des avantages. Le Trait international sur les PGRFA se rfre
spcifiquement aux espces cultives listes dans lAnnexe I
du Trait, que les pays participants ont identifies comme tant
importantes inclure dans un systme daccs multilatral. Laccs
au matriel gntique dans le cadre de ces deux instruments
internationaux est maintenant gouvern par lAccord standard de
transfert de matriel (SMTA), qui a t adopt par lorgane directeur
du Trait ; les termes du SMTA couvrent la fois laccs au matriel
gntique et les bnfices qui en drivent, et doivent tre pris en
compte lors de la collecte et de lchange de matriel.
Acquisition de matriel gntique par collecte

La planification et la ralisation de la collecte de matriel gntique
ont t couvertes en dtails dans les publications de Guarino et al.
(1995) et Smith et al. (2003). Le personnel des banques de gnes doit
se rfrer ces publications pour de plus amples informations.
Moment dune collecte de semences

Idalement, les semences doivent tre collectes leur maturit
optimale, lorsque la vigueur des semences, leur tolrance la
6
dessiccation et leur longvit sont considres comme les plus

hautes. Alors quil est difficile de suivre ces caractristiques au
champ, les changements de la couleur du fruit, des graines ou la
formation dune couche noire (chez les crales) peuvent tre utiliss
comme indicateurs visuels pour faire des valuations prliminaires
de la maturit optimale des semences. Ces changements sont bien
corrls avec laccomplissement de la maturit de masse, mais
pas ncessairement avec la longvit maximale des semences.
Cependant, ce sont des indicateurs utiles pour les collecteurs de
matriel gntique. La dispersion des semences est galement un
bon marqueur pratique de la maturit des semences.
Couleur des fruits
Chez les fruits charnus, les changements de couleur gnralement
du vert au jaune, brun ou rouge se produisent avec la maturit.
Chez la tomate, la couleur rouge du fruit indique que la plupart
des semences sont leur longvit maximale. Les semences de
fruits verts, jaunes/roses ou trop mrs ont des chances dtre
soit immatures, soit trop matures et de mauvaise qualit.
Chez Cucurbita moschata, un changement de la couleur du
fruit du vert au jaune-brun et un pdoncule de couleur paille
indiquent une vigueur des semences leve.
Chez Capsicum annuum, la vigueur des semences augmente
en mme temps que la couleur du fruit change du vert au rouge
avec quelques petites taches vertes, puis au rouge intense.
Chez Brassica oleracea, la couleur du fruit (silique) change du
vert au jaune, et chez le soja ainsi que de nombreuses autres
lgumineuses, elle change du vert au jaune-brun puis au brun
au fur et mesure que la graine mature.
Couleur des graines
Chez de nombreux fruits secs, la couleur des graines change du vert
au jaune ou au brun, au fur et mesure que la graine mature :
Chez le soja, la couleur des semences change du vert au jaune-vert
puis au jaune.
Chez Sesbania bispinosa, la couleur de lenveloppe de la graine
change du jaune au vert olive, puis au brun verdtre.
Formation dune couche noire
Chez les crales, comme le mas ou le sorgho, la maturation
concide avec la formation dune couche dabscission noire ou
brune, nomme couche noire. La maturit est aussi indique par le
fait que les msocarpes et les feuilles infrieures se dsschent.
La couche noire est localise la base de lamande, au point
dattache de lpi, du ct oppos lembryon (mas) ou au
sommet du grain (sorgho et millet).
7
La couche noire peut tre trouve en grattant doucement pour enlever

lenveloppe de la graine et exposer ainsi la couche dabscission.
Variation de la maturit des semences

Les collecteurs de matriel gntique rencontrent souvent des variations
dans la maturit des semences, qui sont le rsultat des diffrences
de priode de floraison entre les plantes et, au sein dune mme
inflorescence, sur des plantes individuelles. Ce problme peut tre
surmont en collectant des fruits de maturit uniforme condition
que certains marqueurs et le temps suffisant soient disponibles.
Conteneurs pour collecter les chantillons
Utiliser des sacs en papier pour collecter les graines.

Utiliser des sacs en tissu qui permettent la circulation de lair
(comme des sacs en mousseline) pour collecter des panicules
ou des fruits secs.
Utiliser des conteneurs ouverts tels que des paniers en fil
mtallique ou en bambou, ou des tubes pour collecter les fruits
charnus.
Sassurer que les fruits ne sont pas crass.
Pendant le transport, ne pas laisser trop monter la temprature
des fruits pour viter quils fermentent.
Des sacs en filets de nylon sont galement trs utiles pour
collecter les chantillons, car ils laissent lair circuler librement.
En plus de leur utilisation pour collecter des semences, des
gousses et des fruits, ils peuvent tre utiliss pour lextraction
des graines et pour faire scher les graines aprs extraction. Ils
sont disponibles dans toute une gamme de mailles.
Traitement des semences au champ

Juste aprs leur rcolte, les semences ont souvent des taux
dhumidit levs (1020%) et courent le risque de se dtriorer
cause de contaminations par des champignons ou des bactries. Les
fruits et les semences humides ont des taux de respiration levs, et
si loxygne vient manquer cause dune aration inadquate, la
fermentation dmarre. La respiration et la fermentation crent toutes
deux de la chaleur, ce qui cause des dommages au matriel stock.
Lorsque les missions de collecte sont particulirement longues, le
pr-nettoyage, lextraction des semences et leur dshydratation au
champ deviennent ncessaires pour rduire le volume et le poids
pendant le transport, liminer les contaminants et amener la teneur
en eau des semences niveau sans risques.
Employer les mthodes du manuel pour le nettoyage et
lextraction des semences afin de conserver la viabilit.
Si les graines sont collectes avec une surface humide, les
scher dabord lombre ou dans une pice bien ventile en les
8
talant sur du papier journal ou du papier absorbant, avant de

les transfrer dans sacs en tissu ou en papier.
Les semences des fruits dhiscents (tels que le gombo, le colza
et le ssame) peuvent tre extraites en rpartissant les fruits sur
une bche lombre.
Les fruits matures souvrent et relchent leurs graines au fur
et mesure quils schent. Il faut parfois apporter un impact
supplmentaire comme ratisser ou secouer les fruits.
Enlever les fruits vides et les dbris et transfrer les semences
dans des sacs en coton, en nylon ou en papier.
Avec les fruits pulpe (comme la tomate ou le concombre),
extraire les semences la main avec prcautions, les laver
leau courante pour enlever la pulpe et le mucilage, les taler en
une couche fine pour maximiser laration et leur permettre de
scher lombre (voir Figure 2.1).
Toujours conserver les semences dans des conteneurs permables
lhumidit, comme des sacs en papier ou en coton, et sassurer
que lair circule librement entre et au travers des sacs.
Lorsque les conditions climatiques sont chaudes et humides et
que les missions de collecte sont longues, il faut dshydrater
encore plus les semences en utilisant des dessiccants tels que
le silicagel (la proportion recommande de graines par rapport
au silicagel est de 3:2 1:1).
Conserver des couches alternes de silicagel et de graines
empaquetes dans un grand conteneur tanche lair afin de
rduire le taux dhumidit des semences.
Avec les petits fruits qui contiennent un grand nombre de
semences (tels que le kiwi ou la fraise), conserver les semences
lintrieur des fruits est loption la plus pratique si les missions
de collectes sont courtes et si la logistique le permet.
Lextraction des graines doit tre vite si les fruits ncessitent
un post-mrissement ou si les semences sont fragiles ou
rcalcitrantes.
Transport du matriel collect jusqu la banque de gnes

Lquipe dexploration doit assurer la scurit du matriel collect
jusqu la fin de la mission de collecte, lorsquil est transport
la banque de gnes. Lexposition des semences des conditions
dfavorables pendant le transport peut causer des dommages trs
importants.
Il faut prendre soin de conserver le matriel temprature
optimale et un taux dhumidit sans danger, mme quand la
distance de transport est courte.
Sassurer que le conteneur renfermant les semences est bien
emball et quaucun dgt nest caus aux semences ou aux
fruits au cours du transport.
9
Recruter des porteurs pour

accompagner lquipe lorsque
la collecte seffectue au cours
de longues expditions dans
des endroits reculs et envoyer
le matriel prissable ou les
semences ayant une viabilit
limite le plus tt possible la
banque de gnes.
Figure 2.1. L'extraction des graines des fruits charnus.
10
Acquisition du matriel gntique par correspondance et

change
Les chantillons peuvent tre obtenus par correspondance si lon
sait que la zone dintrt a dj t collecte. Les banques de gnes
doivent demander de la documentation aux pays ou des entits
indpendantes pour certifier que lenvoi est exempt dorganismes
gntiquement modifis (OGM).
Identification dchantillons uniques pour acquisition

Le maintien dchantillons dans une banque de gnes est coteux ;
les banques de gnes doivent vrifier avec soin que les chantillons
nexistent pas dj dans leurs collections avant acquisition.
Puisque chaque banque de gnes adopte son propre systme de
numrotation, il est possible que la mme accession soit enregistre
deux fois avec une identification diffrente. On identifie le plus
facilement une duplication dans une collection en comparant les
champs pertinents dans les bases de donnes passeport des
banques donatrices et destinataires.
Acquisition de matriel gntique unique

Obtenir les informations passeport compltes, incluant les noms
ou numros didentification possibles, le pedigree et la source
dorigine.
Prparer une liste finale des accessions uniques acqurir.
Envoyer la liste finale daccessions acqurir identifies
lexpditeur, pour faciliter le transfert des semences.
Si le matriel est reu de ltranger, vrifier les exigences des
autorits phytosanitaires nationales du pays receveur et suivre
les procdures pour limportation des semences dcrites cidessous.
Les accessions de matriel gntique qui ont t cribles et
purifies par slection pour leurs caractristiques dsirables, ainsi
que les mutants identifis lors de la plantation de matriel gntique,
servent de matriel brut important pour lamlioration des plantes.
Ils incluent des sources de rsistance aux contraintes biotiques et
abiotiques, des lignes mles-striles, des nains et dautres stocks
gntiques. Les banques de gnes doivent acqurir ce matriel
avec les informations compltes sur son pedigree.
Les banques de gnes peuvent galement acqurir du matriel
gntique lite gnr au cours de programmes damlioration
pour des caractres spcifiques ou qui ont un rendement lev
prouv. Au cours de lacquisition, sassurer que les dtails de
pedigree et les donnes morphologiques complets sont inclus
avec le matriel.
11
La plupart des erreurs sont

faites lors de lentre des
donnes, particulirement
en ce qui concerne les
espaces, la ponctuation, la
casse et lorthographe, qui
ncessitent une vrication
attentive lorsque lon compare
des bases de donnes pour
identier des doublons.
Introduction de matriel gntique et quarantaine post-entre

Les banques de gnes acquirent souvent du matriel gntique
provenant de zones dans lesquelles les ravageurs, les pathognes
et les espces-htes ont co-volu. La classification suivante aidera
le personnel des banques de gnes valuer le statut phytosanitaire
potentiel du matriel acqurir.
Le risque dintroduire de nouveaux ravageurs et pathognes est :
1. faible pour du matriel gntique collect ou produit dans la rgion
ou le pays dans lequel est situe la banque de gnes ;
2. intermdiaire pour du matriel gntique collect ou produit dans
la mme rgion gographique ou le mme continent que celui dans
lequel le pays hte est situ ;
3. lev pour du matriel gntique collect ou produit dans dautres
continents et pour du matriel vgtatif.
Afin de rduire le risque dentre de ravageurs, pathognes et
mauvaises herbes, certains pays ont une lgislation qui contrle
lentre de matriel de propagation exotique, y compris les semences.
Limportateur doit sassurer quil suit toutes les exigences du pays
destinataire avant dimporter la moindre semence.
Les caractristiques des rgles dimportation peuvent inclure des
dispositions telles que les suivantes :
Les envois de plantes et semences peuvent devoir tre imports
des points dentre spcifiques, comme dtermin par les
autorits de protection des plantes du pays importateur.
Les semences et le matriel de plantation peuvent devoir
tre cultivs en isolement, ou confins dans une structure de
quarantaine post-entre pour une dure spcifie, ou remplir
certaines conditions.
Des dispositions supplmentaires peuvent tre requises pour
des envois consistus de plantes ou produits vgtaux.
Limportation de sol, de terre, sable, compost et dbris de
plantes accompagnant les semences ou le matriel de plantation
est gnralement proscrite.
Les envois seront probablement inspects et dsinfects si ncessaire
par les autorits phytosanitaires avant leur autorisation, condition
que toutes les autres exigences du pays importateur aient t
satisfaites. Le non respect de ces exigences peut causer des retards
malvenus, qui peuvent conduire la destruction du matriel.
Le matriel issu de semences ncessitant un isolement peut tre plant
en serre lpreuve des ravageurs, dans des cages grillages ou sur
des parcelles en champ. Le personnel des services phytosanitaires
12
conduit des inspections priodiques pendant la priode de croissance

des plantes, au cours desquelles les plantes atteintes par des ravageurs
associs aux semences sont dtruites, alors que les graines collectes
sur les plantes saines sont dlivres la banque de gnes.
Procdure pour limportation de semences

Lors de ltape de planification, prendre en compte les ravageurs
que lon trouve sur lespce cible et les exigences phytosanitaires
pour lintroduction du matriel gntique.
1. Collecter des informations sur les ravageurs que lon a des
chances de rencontrer dans le pays ou la zone de collecte ou de
production des semences.
2. Dterminer sur quelles parties de la plante on trouve ces ravageurs.
3. Vrifier les conditions dimportation des semences avec les
autorits phytosanitaires nationales. Si ncessaire, obtenir un
permis dimportation de vgtaux1 des autorits comptentes
et lexpdier lenvoyeur avant limportation. Toutes les
demandes phytosanitaires doivent tre soumises aux autorits
phytosanitaires nationales du pays hte pour approbation.
4. Si une quarantaine post-introduction est ncessaire, chaque
accession doit tre cultive en confinement ou en isolement.
5. Les plantes doivent tre observes priodiquement et celles
sur lesquelles on souponne une infection par des ravageurs
associs aux semences doivent tre dtruites par incinration.
6. Toutes les plantes ne prsentant aucun symptme doivent tre
testes pour la prsence dinfections latentes par des virus que
lon trouve dans leur zone dorigine et dans le pays o elles sont
maintenues ; les plantes infectes doivent tre incinres.
7. Les semences ne doivent tre collectes que sur des plantes saines.
Organismes gntiquement modis (OGM)

Les banques de gnes doivent tre conscientes des dangers
inhrents lintroduction par inadvertance de transgnes ou de
plantes gntiquement modifies lors de lassemblage du matriel
gntique, et elles doivent prendre des mesures pour minimiser ces
introductions (voir Annexe I ainsi que la section 5.3 de ce manuel).
Lorsquelles planifient la collecte de nouvelles accessions ou leur
acquisition par dautres moyens, les banques de gnes doivent
effectuer une analyse de risques pour dterminer :
1. si des vnements de transgense (commerciaux ou de
recherche) dans les taxons concerns sont susceptibles dtre
prsents dans la zone de collecte ou dacquisition ;
Un permis dimportation est une autorisation crite des services nationaux de protection des
plantes dimporter des produits contrls, y compris des plantes et des produits vgtaux.
13
2. la distance entre le site de collecte et les sites o les vnements

de transgense sont situs ;
3. si les fournisseurs de matriel gntique peuvent fournir une
documentation adquate de leurs pratiques de gestion en ce qui
concerne le matriel en question.
Ebbels, D.L. 2003. Principles of plant health and quarantine. CAB
International, Wallingford, UK.
FAO (2006). Third Session of the Intergovernmental Technical Working
Group on Plant Genetic Resources for Food and Agriculture, Rome,
2628 October 2005. http://www.fao.org/waicent/FaoInfo/Agricult/
AGP/AGPS/pgr/ITWG3rd/docsp1.htm
Guarino, L., Rao, V.R. et Reid, R. (eds.). 1995. Collecting plant genetic
diversity. CAB International, Wallingford, UK.
International Treaty on Plant Genetic Resources for Food and Agriculture.
FAO, Rome, Italie. http://www.fao.org/ag/cgrfa/itpgr.htm. (Dernire
visite : 11 octobre 2006)
Hay, F.R. et Smith, R.D. 2003. Seed maturity: when to collect seeds from
wild plants. Pp. 97133 in Seed conservation: Turning science into
practice. (R.D. Smith, J.B. Dickie, S.H. Linington, H.W. Pritchard and
R.J. Probert, eds.). Royal Botanic Gardens, Kew, GB.
Smith, R.D., Dickie, J.B., Linington, S.H., Pritchard, H.W. et Probert, J.R.
(eds.). 2003. Seed conservation: Turning science into practice. Royal
Botanic Gardens, Kew.
2.2 Enregistrement du matriel gntique

Quest-ce que lenregistrement ?
Lenregistrement est lattribution dun numro didentification unique
appel numro daccession, pour suivre chaque chantillon de
semences reu par une banque de gnes afin de le distinguer des
autres chantillons.
Pourquoi le fait-on ?
Lenregistrement est ralis afin de permettre aux banques de
gnes de conserver des archives exactes des chantillons et pour
produire des listes dinventaires pour la conservation, la distribution
et dautres aspects de la gestion du matriel gntique.
Quand le fait-on ?
Lenregistrement est ralis ds que lchantillon entre dans la
banque de gnes. Pour une gestion et une utilisation efficaces
des collections, enregistrer les chantillons sils rpondent aux
conditions dcrites ci-dessous.
14
Comment le fait-on ?
Lenregistrement est ralis en plusieurs tapes (voir Diagramme de
flux 2.1) :
Etape 1 : avant lenregistrement

Avant lenregistrement, le statut des chantillons doit tre
vrifi, pour sassurer que les conditions minimales suivantes
sont remplies avant quils soient accepts dans la banque de
gnes.
Accords et permis dacquisition

Les chantillons doivent avoir t acquis auprs de collecteurs,
de banques de gnes ou dautres sources avec les accords et
les permis dacquisition ou de transfert de matriel appropris, en
accord avec les rglements nationaux et internationaux concernant
leur conservation, distribution et utilisation (voir lAnnexe I pour plus
dinformations).
Informations passeport
Les chantillons doivent tre accompagns dinformations
passeport adquates, particulirement le nom du cultivar, le
numro du collecteur et le pedigree (pour les stocks gntiques
et le matriel amlior), pour sassurer que chaque chantillon
nexiste pas dj dans la banque de gnes. Les donnes
passeport minimales requises doivent inclure les informations
suivantes :
A.
Echantillons de missions de collecte

Nom commun de la plante et/ou genre et espce
Numro de collecte
Lieu du site de collecte
Pays dorigine
Date de collecte
Phnologie
Source de collecte
Nombre de plantes chantillonnes
B.
Echantillons reus en donation

Nom commun de la plante et/ou genre et espce
Nom de laccession et/ou autre identification associe lchantillon
Information sur le pedigree et dtails de linstitut damlioration
(pour les lignes de croisement)
Phnologie
Source dacquisition
Pays dorigine
Numro daccession chez le donateur (si applicable)
15
Diagramme de ux 2.1. Enregistrement du matriel gntique.

SEMENCES ENTRANTES
VERIFIER LES ACCORDS

D'ACQUISITION ET LES PERMIS QUI
LES ACCOMPAGNENT
Sont-ils disponibles?
NON
LES DEMANDER AU DONATEUR
OUI
VERIFIER LA BASE DE DONNEES
POUR UNE DUPLICATION POSSIBLE
Les donnes
passeport sont-elles
adquates?
NON
CORRESPONDRE AVEC LE
DONATEUR ET RECEVOIR
PLUS D'INFORMATIONS
NON
DESINFECTER OU JETER
L'ECHANTILLON
OUI
FAIRE POUSSER LES DOUBLONS
CTE A CTE ET COMPARER LES
CARACTERISTIQUES SI CONFIRMES
COMME DOUBLONS, REGROUPER
LES SEMENCES ET MAINTENIR
AVEC LE NUMERO D'ACCESSION
D'ORIGINE
OUI
L'chantillon
est-il une duplication
probable?
NON
L'tat sanitaire
des semences est-il
satisfaisant?
OUI
OUI
SUBDIVISER L'ECHANTILLON
Une subdivision
est-elle ncessaire?
NON
La quantit de
semences est-elle
sufsante pour au moins
trois rgnrations?
NON
OUI
La germination
est-elle > 85%?
NON
OUI
ASSIGNER UN NUMERO D'ACCESSION ET
ENTRER LES INFORMATIONS DANS UN DOSSIER
16
PROGRAMMER
L'ECHANTILLON POUR LA
REGENERATION
Distinctivit
Les nouveaux chantillons doivent tre gntiquement distincts de
toute autre accession dj enregistre dans la banque de gnes.
Deux chantillons peuvent avoir des noms identiques ou trs
voisins et des caractristiques des graines identiques, mais tre
gntiquement distincts, alors que des chantillons avec des noms
diffrents peuvent tre gntiquement similaires.
Les approches morphologiques, biochimiques et molculaires
peuvent tre utilises pour identifier les doublons, selon les
infrastructures et les ressources disponibles dans la banque de
gnes. Les tests suivants peuvent tre raliss :
Morphologiques
Les doublons suspects sont cultivs lun ct de lautre en
champ ou en serre et les diffrences entre les caractristiques
morphologiques, telles que la hauteur des plantes, la taille des
fleurs et des feuilles, ainsi que leur forme et leur couleur sont
compares.
Laccession candidate est dfinie comme distincte lorsque lon
trouve quelle diffre significativement pour au moins une des
caractristiques des accessions existantes dj enregistres.
Les tests de diffrences bass sur la morphologie peuvent tre
similaires au groupe de caractristiques spcifiques dune plante
cultive, qui se conforment aux directives techniques tablies
par lUnion internationale pour la protection des obtentions
vgtales (UPOV, 1991). Si ncessaire, ces caractristiques
peuvent tre values sur deux ou trois saisons. Cependant,
cela peut ne pas tre ralisable avec des races locales qui ont
une variabilit intra-accession leve.
La procdure statistique pour valuer la distinctivit est le test t.
Biochimiques
Quand la comparaison phnotypique ne fournit pas une vidence
suffisante de la distinctivit, des mthodes telles que llectrophorse
des protines de la semence et des isozymes peuvent tre utilises
pour amliorer la comparaison des caractres morphologiques et
pour distinguer les chantillons.
Molculaires
Les marqueurs ADN tels que les AFLP, SSR et SNP offrent des outils
puissants de discrimination et peuvent tre appliqus avec succs
pour vrifier lapparentement entre chantillons, condition que cette
approche soit ralisable et conomiquement viable. Pour plus de dtails
sur les mthodes molculaires, voir de Vicente et Fulton (2003).
17
Sil est confirm que les chantillons compars sont des doublons, il
est recommand aux banques de gnes de regrouper les semences
et de les traiter comme une entit. Si lchantillon est identique
une accession existante, il faut la conserver sous le numro
daccession dorigine.
Etat sanitaire des semences
Chaque chantillon doit tre accompagn dun certificat

phytosanitaire et de dclarations supplmentaires selon les
exigences des rglements phytosanitaires du pays hte (voir le
chapitre 7 pour plus de dtails).
Les chantillons de semences doivent tre inspects par examen
visuel sous un stromicroscope. Ils doivent tre exempts
de pathognes, de champignons en croissance, dinfections
bactriennes et virales et dinsectes.
Qualit et quantit des semences

Les semences doivent tre de la plus haute qualit et en nombre
adquat pour le stockage.
En gnral, le pourcentage de germination ne doit pas tre
infrieur 85% pour les espces cultives ou infrieur 75%
pour les espces sauvages (pour plus dinformation sur les tests
de germination, voir le chapitre 5).
La quantit de semences doit tre suffisante pour raliser au
moins trois rgnrations. Cela garantira que des graines sont
encore disponibles pour une autre plantation, mme si le premier
essai de rgnration choue (voir Encadr 2.1).
Encadr 2.1. Unit de base pour lenregistrement.

Le nombre minimum de semences pour lenregistrement (unit de base) peut tre estim partir de la taille dun
chantillon standard utilis pour la rgnration et de la viabilit de lchantillon, selon lquation suivante.
Nombre de semences requis pour lenregistrement = Population de plantes dsire pour la rgnration nombre
minimum de rgnrations / (% de germination % dtablissement attendu au champ)
Exemple :
Population de plantes dsire pour chaque rgnration = 100
Germination = 95%
Etablissement attendu au champ = 90%
Nombre minimum de rgnrations (facteur de scurit) = 3
Unit de base ou nombre minimum de semences pour lenregistrement =
(100 x 3)
(0,95 x 0,90)
= 351 semences
La germination et l'tablissement au champ sont exprims en dcimales ; par exemple, 95% est exprim comme 0,95. L'tablissement des plantes
est gnralement infrieur de 5% au pourcentage de germination dans de mauvaises conditions et de 1% dans de bonnes conditions.
18
Que faire si les conditions minimales ne sont pas satisfaites?

Si lchantillon ne satisfait pas aux conditions requises, lui assigner
un numro temporaire jusqu ce que lchantillon soit prt recevoir
un numro denregistrement permanent. Le numro temporaire doit
pouvoir tre facilement distingu des autres numros daccessions
Accords et permis
Contacter le collecteur ou le donateur pour les accords ncessaires
qui dfinissent le statut des chantillons pour ce qui concerne leur
conservation et utilisation ultrieure.
Duplications daccessions
Confirmer la duplication et considrer les semences comme un nouveau
lot de semences sous le numro daccession dorigine.
Informations passeport manquantes
Ecrire au collecteur ou au donateur du matriel gntique pour demander
les informations manquantes.
Mauvais tat sanitaire des semences
Si les semences contiennent des pathognes ou des insectes, envoyer
lchantillon un phytopathologiste ou un entomologiste pour traitement.
Sil est possible dacqurir un chantillon de remplacement, incinrer
immdiatement lchantillon et prendre note de laction ralise et de sa
justification; demander un nouvel chantillon au donateur.
Qualit et quantit de semences inadquates
Rgnrer lchantillon immdiatement.
Restructuration des chantillons

Chez les espces autogames, si un chantillon comprend un
mlange physique de deux lignes ou espces, ou plus, elles
peuvent tre subdivises et maintenues comme des accessions
distinctes. Dans ce cas, subdiviser lchantillon dans ses diffrents
composants aide au maintien efficace de lintgrit gntique. Il faut
noter quune subdivision ne doit pas tre effectue si la variation
dans lchantillon original est continue, comme chez les plantes
fortement allogames.
Etape 2 : Procdure denregistrement

Si lchantillon satisfait aux conditions minimales dcrites ci-dessus,
il peut tre accept pour enregistrement et un numro daccession
lui est attribu en utilisant la procdure suivante :
1. Classer le matriel par ordre alphabtique par nom de varit ou
par ordre numrique par numro de collecte, selon lidentification
fournie.
19
Si les chantillons sont

enregistrs sans donnes
passeport adquates, leur
identit et statut biologique
resteront inconnus, empchant
ainsi leur utilisation. Un chec
de rgnration dchantillons
ayant une viabilit faible ou
comportant un trs petit
nombre de semences aura
pour rsultat la perte de
laccession, ce qui laissera des
manques dans linventaire.
2. Vrifier tous les paquets en les comparant avec la liste

accompagnant les chantillons.
3. Si aucune liste nest fournie ou si les semences ne correspondent
pas aux donnes, prparer une nouvelle liste. Revrifier pour
confirmer que tous les paquets ont t inclus.
4. Vrifier le dossier des donnes passeport pour dterminer le
dernier numro daccession donn.
5. Assigner le numro suprieur suivant daccession au premier
chantillon de la liste et des numros conscutifs aux chantillons
suivants.
6. Ecrire clairement le numro daccession sur le paquet en
utilisant un feutre indlbile, ainsi que sur la liste des nouveaux
chantillons.
7. Entrer les dtails dans les dossiers de donnes passeport
du systme de documentation de la banque de gnes.
Pour chaque accession, enregistrer toutes les donnes
passeport, les donnes originales didentification et la date
denregistrement dans les champs appropris du dossier de
donnes passeport.
8. Sil manque des donnes, laisser le champ vide et contacter le
donateur pour quil fournisse les donnes manquantes.
Procdures de numrotation pour les nouvelles banques

de gnes
Le systme de numrotation dune banque de gnes doit tre
simple et pratique utiliser.
Utiliser un systme strictement numrique qui soit squentiel (1,
2, 3). Les numros assigns sont gnralement prcds dun
acronyme (comme GBK pour la Banque de gnes du Kenya) pour
identifier chaque chantillon avec sa banque denregistrement.
Des informations supplmentaires comme lanne dacquisition
et le code de la plante ne doivent pas tre incorpors dans un
numro daccession.
Si des collections de matriel gntique de grande taille
sont conserves, une numrotation daccessions spare mais
squentielle peut tre donne pour chaque culture. Cependant,
cette approche nest pas recommande si la banque de gnes
est petite ou si elle contient de nombreuses espces.
Eviter dassigner des numros rservs pour des plantes
particulires (par exemple, 1 500 pour le mas, 501 1000 pour
le nib) ou pour des espces sauvages, lorsque lon utilise un
systme numrique unique.
Documentation
La documentation des informations reues avec un chantillon est un
aspect important de lenregistrement. Les informations documentes
20
lors de lenregistrement comprennent les donnes passeport, qui

fournissent des informations de base pour lidentification et la
gestion gnrale daccessions individuelles.
Une grande partie de ces informations est soit enregistre lorsque
lchantillon est collect, ou bien accompagne lchantillon sil
est reu en provenance dautres sources. Lutilisation de listes de
descripteurs reconnus au niveau international pour documenter
les informations passeport simplifie lchange de donnes entre
banques de gnes. La liste de descripteurs passeport standard multiplantes (MCPD) dveloppe par la FAO et lIPGRI est disponible sur
www.bioversityinternational.cgiar.org/publications/pdf/124.pdf.
Engels J.M. et Visser, L. (eds.). 2003. A guide to effective management
of germplasm collections. IPGRI Handbook for Genebanks No.6.
de Vicente, C. et Fulton, T. 2003. Using molecular marker technology
in studies on plant genetic diversity : Learning module Vol 1. IPGRI,
Rome, Italie.
International Union for the Protection of New Plant Varieties (UPOV).
1991. International Convention for the Protection of New Varieties of
Plants. UPOV, Genve. (http://www.upov.int)
21
3. Nettoyage
1. Introduction
2. Acquisition et
enregistrement du
matriel gntique
2.1 Acquisition du
matriel gntique
matriel gntique
et dshydratation
4.1 Dtermination du
taux d'humidit
semences
des semences
des semences
des semences
pour l'introduction
par inadvertance
de transgnes
6. Empaquetage et
6.1 Empaquetage des
semences
6.2 Stockage des
semences
gntique
du matriel gntique
gntique
8.2 Rgnration du
matriel gntique
22
3. NETTOYAGE DES SEMENCES

Quest-ce que le nettoyage des semences ?
Le nettoyage des semences est lenlvement des
dbris, du matriel inerte, des semences abmes
ou infectes et des semences dautres espces,
pour augmenter la qualit des chantillons pour le
stockage (voir Diagramme de flux 3.1).
Pourquoi nettoyer les semences ?

Le nettoyage des semences est ncessaire pour :
Rduire le volume pendant le transport en
enlevant les matriaux trangers ;
Amliorer la puret des chantillons en enlevant
les semences abmes et immatures ;
Optimiser lespace de stockage et rduire les
cots.
Chez les espces fruitires, un certain prnettoyage peut tre ncessaire pour enlever
les feuilles et les rameaux afin de rduire le
volume et dempcher la dissmination possible
de maladies et de ravageurs.
Quand nettoyer les semences ?

Les semences doivent tre nettoyes
immdiatement aprs la rcolte ou peu aprs leur
arrive la banque de gnes. Les fruits peuvent
tre mous et charnus, comme les drupes avec une
pulpe charnue, ou durs et parchemins, comme
les gousses. Lextraction des semences est donc
la premire tape du nettoyage des semences.
Si les semences ne peuvent pas tre manipules
immdiatement, les fruits peuvent tre stocks pour
une courte dure avant lextraction des semences.
Les fruits mous sont stocks de manire optimale
1015C dans une humidit suffisamment leve
pour prvenir leur desschement. Les fruits durs
ou secs sont stocks de faon optimale lombre
en couches fines. Il est essentiel que lair circule
librement entre les fruits humides. Pour faciliter
cela, les fruits doivent tre conservs dans des
conteneurs ventils tels que des plateaux avec des
trous ou des fonds en grillage, ou dans des sacs
en filets de nylon.
Diagramme de ux 3.1. Nettoyage des semences.

VERIFIER SI LE MATERIEL REU EST CONSTITUE DE FRUITS SECS OU DE FRUITS CHARNUS
FRUITS SECS
SI FRUITS CHARNUS, DETERMINER LA

METHODE D'EXTRACTION ADAPTEE
EXTRAIRE LES SEMENCES
VERIFIER SI LE TAUX D'HUMIDITE DES SEMENCES EST ADEQUAT POUR LE BATTAGE ET/OU LE NETTOYAGE
NON
EFFECTUER LA
PRE-DESHYDRATATION
Le taux
d'humidit des
semences est-il
optimal?
OUI
L'chantillon
a-t-il besoin d'tre
battu?
NON
OUI
VERIFIER SI L'ECHANTILLON PEUT ETRE BATTU MECANIQUEMENT
OUI
EFFECTUER UN
BATTAGE MECANIQUE
Le battage
peut-il tre fait
mcaniquement?
NON
EFFECTUER UN
BATTAGE MANUEL
DETERMINER L'ETAT PHYSIQUE DES SEMENCES
REALISER UNE DESINFECTION

DES SEMENCES
NON
NON
L'chantillon
est-il sain?
ENLEVER LES DEBRIS

QUI L'ACCOMPAGNENT
OUI
NON
L'accession
est-elle exempte
de dbris?
Le processus de
dsinfection est-il difcile
et/ou coteux?
OUI
OUI
Un nouvel
NON
chantillon peut-il tre
obtenu?
OUI
Les semences
sont-elles pleines et non
endommages?
NON
ENLEVER LES SEMENCES

ABIMEES ET VIDES
OUI
ESSAYER DE RECUPERER LE
PLUS DE SEMENCES POSSIBLE
OBTENIR UN NOUVEL
ECHANTILLON
Y a-t-il assez
de semences pour le
stockage
NON
OUI
ENTRER LES INFORMATIONS SUR LE
PROCESSUS DE NETTOYAGE
PASSER A LA DESHYDRATATION
23
REGENERER
L'ECHANTILLON
Extraction des semences des fruits

Le cot de la maintenance des
accessions dans les banques
de gnes est lev. Seules
des semences propres et de
qualit leve doivent tre
conserves en stockage.
Les semences doivent tre matures avant leur extraction. Sinon, il est
possible de faire mrir les fruits avec les graines lintrieur en les
laissant dans un environnement frais et bien ventil. Les conditions de
stockage doivent simuler celles que lon trouve sur la plante-mre. Les
procdures dextraction des semences varient selon le type de fruit.
Extraction des graines de fruits secs dhiscents

Les banques de gnes reoivent gnralement les semences de
fruits secs dhiscents aprs le battage. Cependant, dans certains
cas, elles sont reues dans les fruits comme des pis ou des
inflorescences, ce qui ncessite leur sparation de la vgtation.
De nombreux fruits secs dhiscents (capsules, siliques, follicules et
gousses dhiscentes) souvrent dj au cours du schage lorsquils
sont tals en une couche fine avec une circulation dair suffisante.
Le dtachement physique des graines des fruits varie avec lespce.
Chez certaines, un mouvement mineur comme le ratissage, le fait
de secouer ou dagiter est suffisant pour une extraction complte.
Les semences de certaines espces comme certaines lgumineuses
conservent une attache forte par le funicule et les semences peuvent
ncessiter une extraction manuelle ou par battage. Le battage est
galement ncessaire quand les semences sont reues sous la forme
dpis (mas, millet, etc.) ; il doit tre ralis quand le taux dhumidit est
entre 12 et 16%, pour minimiser les dgts causs aux semences.
Les semences peuvent tre battues manuellement ou mcaniquement.
Le battage manuel est la mthode prfre, parce quil y a
une probabilit plus faible dabmer les semences pendant le
battage. Les semences peuvent tre battues en les plaant
dans des sacs ou en les talant sur une aire de battage et en
les battant avec des btons. Une autre mthode pour dtacher
les semences fortement attaches aux gousses est de les
frotter doucement entre deux surfaces rugueuses telles que
du caoutchouc, du papier de verre ou des pierres, en faisant
attention ne pas scarifier ou craser les semences.
Lorsque lon utilise des batteuses mcaniques, il est essentiel
que les batteuses soient nettoyes avec une brosse ou lair
comprim entre deux lots pour :
viter la contamination avec des semences daccessions
battues prcdemment ;
empcher de transfrer les maladies et ravageurs dune
accession lautre.
Extraction de semences de fruits secs non dhiscents

Certains fruits non dhiscents doivent tre casss mcaniquement pour
24
pouvoir extraire leurs semences. Une certaine dshydratation initiale

est ncessaire pour augmenter leur fragilit et faciliter lextraction.
Les semences de gros fruits (comme larachide et les haricots)
peuvent tre extraits en ouvrant chaque fruit manuellement ou
par traitement mcanique, sans abmer les graines.
Les fruits non dhiscents plus petits (comme chez le poix-chiche
et les crucifres) peuvent tre casss en les battant comme
dcrit ci-dessus.
Les gousses avec un matriau gommeux (telles que Prosopis
cineraria) ncessitent plusieurs sances de battage et un
schage intermittent.
La technique de transpiration pour les herbes fourragres

La transpiration est une technique utile pour amliorer la maturit
et faciliter le battage et le nettoyage des semences de certaines
herbes tropicales qui sont troitement enserres dans des glumes.
Elle consiste empiler les pis frachement coups, les envelopper
dans de lherbe ou une bche pour leur permettre de chauffer ou
de transpirer lombre, et les empcher de se desscher pendant
trois ou quatre jours. Aprs cette priode, les graines matures sont
facilement spares sans battage. La pile doit tre surveille de
prs et tourne de temps en temps pour empcher une monte en
temprature excessive ; des tempratures trop leves pendant la
transpiration peuvent causer une dtrioration des semences.
Extraction des semences de fruits charnus

La mthode dextraction des fruits charnus varie avec le type de fruit.
Le mieux est de couper le fruit en deux ou de couper sa partie distale
et de lcraser pour en faire sortir le contenu dans un rcipient.
Les petites graines de fruits pulpeux peuvent tre extraites en
crasant la pulpe, en la mlangeant avec de leau, en laissant les
graines sdimenter et en enlevant la pulpe.
Les semences de grandes dimensions peuvent tre extraites de
la pulpe avec des pinces (comme les Citrus spp.). La pulpe peut
aussi tre dtache en lavant les semences dans des tamis sous
leau courante ou en les frottant contre un treillis mtallique et en
les rinant pour enlever la pulpe. Un mixeur peut tre utilis pour
broyer de grandes quantits de pulpe, mais on broie facilement
trop fort et on abme les semences. Utiliser une agitation brve,
intermittente, vitesse rduite. Couvrir les lames du mixeur avec
une couche de caoutchouc peut galement rduire les dgts.
Lextraction manuelle est prfrable, afin dviter de causer des
dommages physiques aux semences pendant ce processus.
Aprs le lavage, scher les semences en couches fines sur
des feuilles de papier absorbant avec une circulation dair et
lombre, en vitant la chaleur.
25
Graines mucilagineuses
Si un mucilage entoure les semences (comme chez la tomate, le
concombre et certains melons) et quil ne peut pas tre enlev par
lavage, il existe un nombre doptions :
Frotter doucement les graines mouilles sur un treillis mtallique
(la taille des mailles doit retenir les graines alors que la pulpe
passe au travers) avec une main gante.
Frotter doucement les semences avec du sable propre et
grossier, puis enlever le sable et le mucilage avec de leau.
Il est galement possible de commencer par dshydrater les
semences et denlever ensuite le mucilage. Sassurer que les
semences ne collent pas la surface de schage et quelles
sont bien spares, pour empcher quelles se collent entre elles
pendant le schage.
Pour enlever le mucilage, la fermentation ( 2025C pendant
jusqu trois jours), un traitement lacide (une solution dHCl
24% ajoute la solution visqueuse dans la proportion de
1/1 pendant une heure), une digestion enzymatique (solution
de pectinase 0,1% poids/volume la proportion de 1:40
pendant 24 heures) et le bicarbonate de sodium (solution 10%
mlange la solution visqueuse dans une proportion de 1:1
applique pendant 1824 heures) sont galement employs.
Cependant, les traitements prolongs peuvent endommager les
semences et ils doivent tre utiliss avec prudence.
Fruits avec une pulpe fortement adhrente
Les fruits chez lesquels la pulpe est fortement adhrente aux
semences (comme lamandier) peuvent tre manipuls avec les
mthodes suivantes :
Faire tremper les fruits dans des seaux ou des conteneurs
appropris, jusqu ce quils soient mous, mais pas jusqu ce
quils commencent fermenter, comme lindiquent les bulles et
lodeur. Sparer manuellement les semences de la pulpe.
Ecraser les fruits imbibs pour sparer la chair des graines.
Aprs le dpulpage, laver soigneusement les semences pour
enlever toute trace de pulpe. Le lavage sous leau courante est la
meilleure mthode.
Ne pas essayer de dshydrater

les semences si lon sait
quelles sont rcalcitrantes et
quelles ne supportent pas
la dessiccation jusqu des
teneurs en eau basses.
Fruits noyaux
Les fruits noyaux (comme la pche, la prune ou labricot) peuvent
tre dpulps dans un broyeur mnager (les lames doivent tre
protges avec du caoutchouc) sans risque dabmer les semences.
Dtacher la chair la main avec un couteau bien aiguis est aussi
un moyen pratique pour de petites quantits de semences. Aprs le
26
dpulpage, laver les noyaux leau courante pour enlever les traces
de pulpe et scher la surface. Si les graines doivent tre extraites
pour le stockage, scher les noyaux et ouvrir chaque endocarpe
avec une pince, en appliquant la pression au point le plus large de
laxe longitudinal du noyau. Sinon, insrer une lame rsistante dans
le sillon et tourner.
Il est important que les semences orthodoxes extraites des fruits
soient dshydrates rapidement une temprature approprie,
jusqu des teneurs en eau basses pour le stockage long terme.
Comment nettoyer les semences

Le nettoyage ne doit pas abmer les chantillons ou conduire un
gaspillage. Il peut tre ralis manuellement ou mcaniquement,
mais il est fortement recommand aux banques de gnes de
nettoyer les accessions la main pour les raisons suivantes :
Le nettoyage mcanique peut conduire une slection au sein
daccessions gntiquement htrognes (du fait de lexclusion
des trs petites et trs grosses semences qui passent par les
ouvertures mcaniques).
Les quipements ncessitent un nettoyage rigoureux et souvent
des ajustements prcis entre les accessions.
Etape 1 : Sparation des dbris

La premire tape du nettoyage des semences est denlever tous
les dbris (matriel autre que les semences) de lchantillon entier.
Utiliser des tamis main avec des mailles de diffrentes tailles
pour enlever les petits et gros dbris. Lorsque lon nettoie des
accessions gntiquement htrognes, il est important de
remettre les petites semences dans le reste de laccession.
Sparer les graines vides et les autres matriaux lgers comme
les cales qui nont pas t spars lors du tamisage, par un
vannage doux2 ou dans un souffleur de semences.3
Etape 2 : Examen des semences pour identifier les

dgts causs par les champignons et les insectes
Etaler les semences sur une surface plate, bien claire, dune
couleur contraste et observer tout signe dinfestation. Utiliser
une table lumineuse ou une table de puret, si disponibles.
Les semences sont places dans des paniers plats et lances en lair. Le vent carte tous les
matriaux lgers comme la poussire et les fragments de feuille, alors que les semences, plus
lourdes, retombent dans le panier.
Les lots de semences sont placs dans un cylindre vertical la base duquel de lair est souffl par
un dispositif aliment llectricit. Le courant dair qui va vers le haut entrane vers le haut tout les
matriaux lgers comme les cales alors que les semences, plus lourdes, sont rcupres la base.
27
Si les semences sont moisies ou infestes :

isoler lchantillon affect du reste du matriel ;
dshydrater les semences avec du silicagel jusqu un
taux dhumidit bas dans des conteneurs scells, pour
viter une diffusion plus large des champignons ou des
insectes ;
si on suspecte une infestation, stocker les semences
dans un rfrigrateur une temprature voisine de zro
pendant sept jours pour tuer les insectes avant denlever les
semences infectes, et continuer les procdures normales
dempaquetage et de stockage.
Etape 3 : Examen des semences pour identifier les

dommages mcaniques et les semences vides
Etaler les semences sur une surface bien claire, de couleur

contraste, comme une table lumineuse ou une table de
puret.
Les examiner pour identifier tout dommage physique ou toute
semence vide.
Sparer manuellement et liminer toutes les semences abmes
ou fltries repres lil nu.
Sparer les semences vides et le matriel lger par soufflage,
comme dcrit ci-dessus.
Etape 4 : analyse de puret

La puret exprime combien un lot de semences est propre. Les
informations sur la vritable composition du lot de semences sont
importantes ; lanalyse de puret sert de guide pour dterminer
la ncessit dun nettoyage supplmentaire. Au cours dune
analyse de puret, chaque fraction de semences pures4 de
lchantillon de travail est spare de la matire inerte et des
autres semences.
Peser un chantillon de travail dun poids donn (par exemple
250 g) prlev au hasard dans le lot entier de semences en
utilisant une balance lectronique.
Etaler lchantillon sur la table et sparer manuellement toutes
les semences pures avec des pinces ou liminer les impurets
par soufflage, tamisage, ou en laissant les semences rouler sur
une surface en pente.
28
LISTA (2005) spcifie quune fraction pure de semences contient : (i) des semences intactes de
lespce en question ainsi que des semences mortes, fltries, malades, immatures ou pr-germes ;
(ii) des aknes et des fruits similaires comme des samares avec ou sans prianthe, sans tenir compte
de savoir si ils contiennent une vraie semence, moins quil soit apparent quils nen contiennent
pas ; (iii) des fractions de semences casses, des aknes, etc. qui ont plus de la moiti de leur taille
dorigine. Dans les banques de gnes, la puret doit tre attribue des chantillons qui ne sont pas
seulement exempts de semences de mauvaises herbes et dautres plantes cultives et de matriaux
inertes mais aussi de semences vides, immatures, abmes et infectes.
Peser la fraction de semences pures et exprimer la puret

comme le pourcentage du poids des semences pures sur le poids
total de lchantillon de travail, comme indiqu ci-dessous.
Puret (%) =
Poids des semences pures (g)

100
Poids total de lchantillon de travail (g)
Exemple :
Poids total de lchantillon de travail = 250 g
Poids des semences pures = 245,2 g
Matire inerte = 3,5 g
Autres graines = 1,3 g
Puret (%) = 245,2 x 100 = 98,08%
250
Etape 5 : Vrification
Aprs le nettoyage :
Re-contrler visuellement les chantillons pour leur puret et les
semences abmes.
Vrifier lchantillon de rfrence (voir chapitre 6) ou les donnes
de rfrence pour une couleur et une forme des semences
correspondantes, si les chantillons sont reus aprs rgnration.
Aprs le nettoyage des semences, dtruire soigneusement les
dchets pour viter la diffusion dinsectes et de maladies
dautres matriels.
Equipement utile
Les quipements suivants sont utiles pour le nettoyage des semences :
Tamis : Un jeu de tamis gradus empilables comme ceux utiliss
pour lanalyse des sols. Les tailles les plus utiles sont les numros
standards 5, 10, 18, 35 et 60, qui correspondent des mailles
de 0,1574"/4 mm, 0,787"/2 mm, 0,394"/1 mm, 0,197"/0.5 mm et
0,0098"/0.25 mm. Des passoires de cuisine avec des grilles de
tailles diffrentes peuvent galement tre utilises, ou un tissu
mailles grossires peut aussi tre employ.
Des verres doseurs en Pyrex de diffrentes tailles : 1, 2 et 4
verres de contenance.
Des petits plateaux, des bols mixeurs, des passoires, des
cuves et dautres rcipients en plastique ; le matriel de cuisine
ordinaire est bien adapt.
Des outils pour dcouper : un couteau tranchant, un couteau
dents, des lames de rasoir ou un cutter lames jetables, des
ciseaux bouts fins.
Une planche dcouper.
29
La puret doit tre attribue

des chantillons qui sont non
seulement exempts de graines
de mauvaises herbes et dautres
plantes cultives, de dbris et
de matriel inerte, mais aussi
de semences vides, immatures,
abmes ou infectes. Les
banques de gnes doivent
viser la puret absolue
il est important dtablir des
standards aussi hauts que
95% pour la proportion de
semences pures dans les
accessions. Si une accession
natteint pas cette valeur aprs
le nettoyage initial, elle doit alors
tre re-nettoye autant de fois
que ncessaire pour atteindre la
puret absolue.
Des pinces plates.

Des limes, du papier de verre, des grilles en fil de fer et autres
outils abrasifs.
Des filtres en papier comme les filtres caf Melitta numro 6 et
du papier filtre
Une lampe grossissante, une loupe serre-tte et une loupe
main 714
Des pinces, des pinces fines et des pinces bout pointu
Un sche-cheveux manuel, de prfrence plusieurs vitesses,
dont lunit de chauffage a t dconnecte
Un souffleur de semences un appareil mcanique pour
vanner les semences pour diminuer la quantit de dchets,
particulirement chez les semences despces herbaces (par
ex. un souffleur South Dakota)
Un petit ventilateur
Un mixeur avec des lames recouvertes de caoutchouc
Des vaporisateurs avec jet rglable
Documentation
De nombreuses banques de gnes ont tendance ne pas documenter
les procdures de nettoyage des semences, sauf pour ce qui concerne
la date de nettoyage. Comme les collections de matriel gntique
recouvrent souvent une varit de caractristiques de fruits et de
semences, et que les procdures de nettoyage varient selon les plantes
et les accessions, il est important que toutes les donnes associes
soient collectes et stockes pour rfrence future. Les descripteurs
suivants peuvent tre utiliss pour documenter les informations sur le
nettoyage des semences au niveau des accessions :
Type dchantillon
Mthode dextraction
Mthode de battage
Mthode de nettoyage
Date de nettoyage
Proportion de semences vides, immatures ou endommages (%)
Poids ou nombre total de semences aprs nettoyage
Puret des semences (%)
Ellis, R.H., Hong, T.D. et Roberts, E.H. 1985. Handbook of Seed
Technology for Genebanks. Volume 1. Principles and methodology.
IBPGR, Rome, Italie.
ISTA. 2005. International Rules for Seed Testing. Edition 2005.
International Seed Testing Association, Bassersdorf, Suisse.
Schmidt, L. 2000. Guide to handling of tropical and subtropical forest
seeds. Danida Forest Seed Centre, Humlebaek, Danemark.
30
4. Taux d'humidit
1. Introduction
2. Acquisition et
enregistrement du
matriel gntique
2.1 Acquisition du
matriel gntique
matriel gntique
et dshydratation
4.1 Dtermination du
taux d'humidit
semences
des semences
des semences
des semences
pour l'introduction
par inadvertance
de transgnes
6. Empaquetage et
6.1 Empaquetage des
semences
6.2 Stockage des
semences
gntique
du matriel gntique
gntique
8.2 Rgnration du
matriel gntique
4. DETERMINATION DU TAUX
DHUMIDITE DES SEMENCES
ET DESHYDRATATION
4.1 Dtermination du taux
dhumidit
Quest-ce que le taux dhumidit des
semences ?
Le taux dhumidit des semences (THS) est la
quantit deau prsente dans une semence. Leau
est prsente la fois sous forme libre et sous
forme lie des composs chimiques dans les
cellules, tels que les hydrates de carbone et les
protines.
Le THS est exprim en termes du poids de
leau contenue dans une semence comme un
pourcentage du poids total de la semence avant
dshydratation, connu sur la base du poids humide
(ph) ou du poids frais (International Seed-Testing
Association [ISTA] 2005).
THS (% pf) = poids humide poids sec 100
poids humide
Le taux dhumidit peut galement tre exprim
sur la base du poids sec (ps) cest--dire la
perte de poids en pourcentage du poids sec des
semences.
THS (% ps) = poids humide poids sec 100
poids sec
Pourquoi est-il important de dterminer

le taux dhumidit des semences ?
Le taux dhumidit est le facteur le plus important
qui dtermine la vitesse laquelle les semences
se dtriorent et il a des impacts importants sur
la longvit des semences pendant leur stockage
dans les banques de gnes. Mme de faibles
changements du taux dhumidit ont des effets
importants sur la vie en stockage. Il est important
de dterminer le taux dhumidit avant le stockage
pour prdire de manire prcise la vie potentielle
pendant le stockage de chaque accession.
31
Diagramme de ux 4.1. Dtermination du taux dhumidit des semences.

DETERMINER LA QUANTITE DE SEMENCES DISPONIBLES POUR LE TEST
Y a-t-il
assez de semences
disponibles ?
PRENDRE UN ECHANTILLON
PARFAITEMENT REPRESENTATIF D'AU
MOINS DIX SEMENCES
NON
OUI
DETERMINER SI UNE PRE-DESHYDRATATION EST NECESSAIRE
L'chantillon
a-t-il besoin d'une prdshydratation ?
OUI
EFFECTUER LA PRE-DESHYDRATATION
NON
DETERMINER SI L'ECHANTILLON DOIT ETRE BROYE
Le broyage
est-il ncessaire ?
OUI
BROYER
NON
DIVISER L'ECHANTILLON EN DEUX REPLICATIONS
DETERMINER LA METHODE A UTILISER
UTILISER LA METHODE DE
L'ETUVE A TEMPERATURE
CONSTANTE HAUTE
NON
Les semences
sont-elles
olagineuses ?
OUI
UTILISER LA METHODE DE
L'ETUVE A TEMPERATURE
CONSTANTE BASSE
AVANCER POUR DETERMINER LE TAUX D'HUMIDITE DES SEMENCES
CALCULER LE TAUX D'HUMIDITE DES SEMENCES
ENREGISTRER LES INFORMATIONS SUR LA DETERMINATION DU TAUX D'HUMIDITE DES SEMENCES
32
Dtermination du taux dhumidit des semences

Le taux dhumidit des semences peut tre dtermin par deux
mthodes diffrentes (voir Diagramme de flux 4.1) :
la mthode de dshydratation ltuve, dcrite par lISTA (2005) ;
des humidimtres.
Mthode de dshydratation ltuve

La mthode la plus prcise pour dterminer le taux dhumidit est la
dshydratation ltuve, dans laquelle leau est extraite des semences
par la chaleur dans des conditions contrles. Cette mthode est
destructrice pour les semences et doit tre employe seulement lorsquelle
est essentielle. Il est recommand de conduire une dtermination prcise
en utilisant cette mthode aprs la priode de dshydratation, pour
dterminer le taux dhumidit initial des semences stockes.
LISTA (2005) a prescrit deux diffrentes mthodes de dshydratation
ltuve pour dterminer le taux dhumidit, selon la composition
chimique des semences :
la mthode temprature basse constante pour les semences
olagineuses ;
la mthode temprature haute constante pour les semences
non olagineuses.
La mthode recommande pour dshydrater les espces cultives
et fourragres importantes est donne dans le Tableau 4.1.
Pr-dshydratation
La pr-dshydratation est obligatoire si les semences sont humides
et si lon suppose que leur taux dhumidit est suprieur 17%
(10% pour le soja et 13% pour le riz) ; il doit tre ralis avant la
dtermination du taux dhumidit par dshydratation ltuve. Si
une pr-dshydratation est ncessaire, procder comme suit :
1. Peser deux sous-chantillons de 45 g de semences dans leurs
conteneurs.
2. Pr-dshydrater les chantillons une nuit dans un endroit chaud
et sec comme une paillasse de laboratoire.
3. Les peser de nouveau dans leurs conteneurs et dterminer la
perte de poids (perte dhumidit) par soustraction.
4. Calculer le taux dhumidit par rapport au poids frais.
Equipement
Lquipement suivant est ncessaire pour dterminer le taux
dhumidit par dshydratation ltuve :
Une tuve convection mcanique (courant dair forc) avec
un temps de rtablissement de 15 minutes ou moins, capable
33
Dans les banques de gnes,

le taux dhumidit est
gnralement exprim par
rapport au poids frais.
de maintenir la temprature requise dans un intervalle d1C et

quipe avec un thermomtre prcis 0,5C ;
Des conteneurs de dshydratation non corrosifs (en mtal
ou en verre) avec des couvercles bien ajusts la taille dun
conteneur doit permettre la hauteur de lchantillon rparti
uniformment dtre infrieure 0,3 g cm-2 ;
Un broyeur vitesse rglable pour obtenir des particules de
tailles spcifies (0,50,4 mm) il ne doit pas produire de
chaleur non dsire lorsquil broie ;
Une balance analytique capable de peser 34 dcimales
(0,0010,0001 g) ;
Un dessiccateur quip lintrieur avec une plaque paisse
de mtal ou de cramique pour permettre le refroidissement
rapide des conteneurs, et contenant dans son fond un agent
dessiccant tel que du silicagel ou du chlorure de calcium.
Des tenailles ou des gants pour manipuler des conteneurs
chauds.
Tableau 4.1. Mthode de dtermination du taux dhumidit pour des espces cultives et fourragres importantes
(source : ISTA, 2005).
Mthode de ltuve temprature basse constante
Crucifres
Ricin (Ricinus)*
Poivrier (Capsicum)
Cotonnier (Gossypium)*
Aubergine (Solanum)
Camline (Camelina)
Lin (Linum)
Arachide (Arachis)*
Oignon (Allium)
Radis (Raphanus)
Ssame (Sesamum)
Soja (Glycine)*
Toutes les espces darbres
Mthode de ltuve temprature haute constante

Luzerne (Medicago)
Asperge (Asparagus)
Orge (Hordeum)*
Haricot (Phaseolus)*
Betterave (Beta)
Agrostide (Agrostis)
Herbe des Bermudes (Cynodon)
Scorsonre (Scorzonera)
Pturin (Poa)
Brome (Bromus)
Sarrasin (Fagopyrum)*
Fromenteau (Phalaris)
Carvi (Carum)
Carotte (Daucus)
Cerfeuil (Anthriscus)
Chicore (Cichorium)
Pois-chiche (Cicer)*
Trfle (Trifolium)
Dactyle (Dactylis)
Cresson (Lepidium)
Crtelle (Cynosurus)
Concombre (Cucumis)
Cumin (Cuminum)
Herbe de Dallis (Paspalum)
Festuque (Festuca)
Vulpin (Alopecurus)
Laitue (Lactuca)
Lupin (Lupinus)*
Mas (Zea)*
Millet (Panicum)
Avoine (Avena)*
Persil (Petroselinum)
Pois (Pisum)*
Herbe de Rhodes (Chloris)
Riz (Oryza)*
*broyage ncessaire
34
Seigle (Secale)*
Ivraie (Lolium)
Sainfoin (Onobrychis)
Serradelle (Ornithopus)
Sorgho (Sorghum)*
Courge (Cucurbita)
Mlilot (Melilotus)
Fenasse (Arrhenatherum)
Phlole (Phleum)
Tomate (Lycopersicon)
Lotier (Lotus)
Canche cespiteuse
(Deschampsia)
Houlque (Holcus)
Vesce (Vicia)*
Pastque (Citrullus)*
Bl (Triticum)*
Taille des chantillons et chantillonnage

La mthode de dshydratation ltuve est destructrice et, du fait
que la quantit de semences est limite dans la plupart des banques
de gnes, des chantillons de poids rduit doivent tre utiliss.
1. Utiliser deux rplications de 0,51,0 g de semences ou un
minimum de dix semences pour dterminer le taux dhumidit,
selon la disponibilit.
2. Lchantillon doit tre reprsentatif de laccession entire.
Sassurer que le lot de semences est bien mlang et que
lchantillon est prlev dans de petites portions ayant des
positions diffrentes dans le lot de semences.
3. Une fois lchantillonnage ralis, garder les semences dans des
conteneurs tanches jusqu ce quelles soient testes, pour
viter les changements de taux dhumidit.
Souvenez-vous que si
lchantillon provient du
stockage au froid, de leau
risque de se condenser
sur les semences. Lors de
lchantillonnage, nouvrez pas
les conteneurs avant quils aient
atteint la temprature ambiante.
Broyage
Certaines semences doivent tre broyes en petites particules pour
permettre un schage uniforme et complet. Une liste des espces
qui ncessitent un broyage est donne dans le Tableau 4.2.
Si lespce nest pas sur la liste, mais que ses semences sont
plus grandes que des semences de bl, il faut les broyer.
Si un broyage est ncessaire, broyer les semences en fragments
infrieurs 4 mm pour les semences de lgumes et darbres, et
0,51 mm pour les crales avant de les peser.
Dtermination du taux dhumidit

Mthode de temprature constante leve pour les
semences non olagineuses
Le taux dhumidit est dtermin de la faon suivante :
1. Scher les conteneurs 130C pendant une heure et les laisser
refroidir dans le dessiccateur pendant une heure.
2. Marquer et peser chaque conteneur, y compris le couvercle, et
enregistrer les poids sur la feuille de donnes prsente dans le
Tableau 5.3 (colonne P1). Pour tre prcis lors de la dtermination
du taux dhumidit, la taille et le poids des rcipients doivent tre
proportionnels au poids des chantillons utiliss.
Tableau 4.2. Espces pour lesquelles le broyage est obligatoire (source : ISTA, 2005).
Arachis hypogaea
Avena spp.
Cicer arietinum
Citrullus lanatus
Fagopyrum esculentum
Glycine max
Gossypium spp.
Hordeum vulgare
Lathyrus spp.
Lupinus spp.
Oryza sativa
Phaseolus spp.
Pisum sativum
Secale cereale
Sorghum spp.
Triticum spp.
Vicia spp.
Zea mays
35
3. Placer deux sous-chantillons de 0,51,0 g, choisis au hasard

dans chaque chantillon (pr-dshydrats et broys si ncessaire)
dans deux rcipients spars, qui serviront de deux rplications.
Remettre les couvercles, peser de nouveau et enregistrer les
poids dans le Tableau 4.3 (colonne P2).
4. Placer les rcipients avec leurs couvercles enlevs dans une
tuve maintenue 130133C.
5. Dshydrater les semences pendant une quatre heures, selon
lespce (quatre heures pour Zea mays, deux heures pour les
autres crales et une heure pour les autres espces).
6. Replacer le couvercle sur chaque rcipient la fin de la priode
de dshydratation.
7. Transfrer les conteneurs dans un dessiccateur et les laisser
refroidir pendant 45 minutes.
8. Enregistrer le poids des conteneurs, y compris celui des
chantillons, dans le Tableau 4.3 (colonne P3).
9. Calculer le taux dhumidit par rapport au poids humide et lexprimer
en pourcentage une dcimale, en utilisant la formule suivante :
La priode de dshydratation
commence quand ltuve a
atteint la temprature requise
aprs que les chantillons
aient t mis dans ltuve et
que la porte ait t ferme.
Taux dhumidit (%) = P2 - P3 100 dans laquelle

P2 - P1
P1 = poids dun rcipient avec son couvercle ;
P2 = poids dun rcipient avec son couvercle et lchantillon
avant dshydratation ;
P3 = poids dun rcipient avec son couvercle et lchantillon aprs
dshydratation.
Tableau 4.3. Enregistrement et calcul du taux dhumidit des semences.

N
accession
Rplication/
N conteneur
Poids du
conteneur
vide avec
couvercle
(g)
P1
Poids du
conteneur avec
couvercle +
semences avant
dshydratation
(g)
P2
RI
R II
RI
R II
RI
R II
RI
R II
36
Poids du
conteneur avec
couvercle +
semences aprs
dshydratation
(g)
P3
Taux dhumidit %
(par rapport au poids frais)
(P2-P3)/
(P2-P1) 100
Moyenne
(R I + R II)/2
10. Rpter le test si le taux dhumidit entre les deux rplications

varie de plus de 0,2%.
Exemple :
Accession no.
Rplication /
N conteneur
Poids d'un
conteneur vide
avec couvercie
(g) (P1)
Poids d'un conteneur

avec couvercie +
semences avant
dshydratation (g) (P2)
Poids d'un conteneur

avec couvercie +
semences aprs
dshydratation (g) (P2)
R1
10,3245
14,8668
14,4356
R2
10,1442
14,9948
14,5365
Calcul :
Rp 1 :
% taux dhumidit = 14,8668-14,4356 100 = 9,49
14,8668-10,3245
Rp 2 :
% taux dhumidit = 14,9948-14,5365 100 = 9,45
14,9948-10,1442
Taux dhumidit (par rapport au poids frais) = 9,47+9,45 = 9,46%
2
Si les chantillons ont t pr-dshydrats, utiliser la formule

suivante pour dterminer le taux dhumidit final :
Taux dhumidit final (%) = (M1+ M2) (M1 x M2) dans laquelle
100
M1 = taux dhumidit (%) la premire tape de dshydratation
(pr-dshydratation)
M2 = taux dhumidit (%) la deuxime tape de dshydratation
(dshydratation ltuve)
Mthode temprature constante basse pour les semences
olagineuses
Pour les semences olagineuses, utiliser une temprature plus basse
pendant une dure plus longue, afin que seule leau soit perdue par
les semences. Suivre la procdure dcrite ci-dessus, sauf pour les
tapes 4 et 5, qui doivent tre modifies comme suit :
1. Placer les rcipients avec leurs couvercles enlevs dans une tuve
maintenue 103 2C.
2. Dshydrater les semences pendant 171 heures.
Lutilisation dune temprature plus leve et dune dure de
dshydratation plus longue que la normale va conduire la perte
de composs volatils et deau, particulirement chez les semences
olagineuses. Cela conduira une surestimation du taux dhumidit.
37
Pendant la dtermination
du taux dhumidit,
lexposition des chantillons
lenvironnement du laboratoire
doit tre rduite au minimum.
Balances dessiccateurs
Les balances dessiccateurs combinent un chauffage dernier cri
avec une pese extrmement prcise pour une mthode rapide et
prcise de lanalyse de la teneur en humidit. En utilisant le principe
de la perte de poids au cours de la dshydratation le standard
pour la mesure de lhumidit la balance pse automatiquement
un chantillon, le dshydrate, mesure la perte de poids due la
dshydratation et calcule le taux dhumidit des semences. Lanalyse
se termine automatiquement quand la dshydratation est complte
et que le poids sec est stable, ou aprs un certain temps spcifi par
loprateur. Le rsultat final est affich sur lcran digital.
Le dsavantage majeur des mthodes de dshydratation ltuve et
avec une balance dessiccateur, particulirement lorsque lon a affaire
des accessions contenant un nombre limit de semences, est que les
semences sont tues aux tempratures utilises pour la dshydratation ;
ces mthodes demandent galement beaucoup de temps. Plusieurs
banques de gnes utilisent des mthodes rapides et non-destructrices
pour contourner ces problmes, bien que certaines de ces mthodes
soient moins prcises que la mthode de dshydratation ltuve.
Mthodes non destructrices pour la dtermination du taux

dhumidit
Humidimtres rapides
Le taux dhumidit des semences peut galement tre dtermin en
utilisant des humidimtres rapides. Toute une varit dhumidimtres
rapides est disponible. Ils mesurent les proprits lectriques de
lhumidit des semences, soit par conductivit5 ou capacit.6 Il est
important de noter que ces appareils doivent tre calibrs en utilisant
la mthode standard de dshydratation ltuve pour chaque plante
teste, et quils sont plus prcis pour des taux dhumidit compris
dans une gamme donne (625%), selon le type dhumidimtre
utilis. Ils sont moins fiables au dessus et au dessous de cette
gamme. Il est recommand de nutiliser les humidimtres que pour
une mesure grossire du taux dhumidit avant la dshydratation.
Calibration des humidimtres rapides

La relation exacte entre la lecture dun humidimtre et le taux
dhumidit rel, comme il est dtermin avec la mthode de ltuve
de lISTA, est appele calibration. La calibration doit tre base sur
La conductivit est une mesure de la rsistance lectrique des semences.
La capacit est une mesure du pouvoir des semences stocker une charge lectrique.
38
de nombreux chantillons de varits, rgions et annes diffrentes,

et doit inclure la gamme de taux dhumidit normalement rencontrs
avec lespce en question (625%). Les courbes de calibration sont
tablies en traant les lectures faites lhumidimtre avec celles
obtenues avec la mthode de dshydratation ltuve. Une fois que
la courbe de calibration est tablie, chaque lecture peut facilement
tre convertie en taux dhumidit exact.
Pour dterminer le taux dhumidit en utilisant un humidimtre
calibr, procder comme suit :
1. Prendre deux chantillons choisis au hasard dans le lot de semences,
qui ont le poids et le volume requis pour lhumidimtre utilis.
2. Placer lchantillon dans la chambre de mesure et enregistrer la
valeur.
3. Le taux dhumidit (en pourcentage du poids) est gal la
moyenne des valeurs des deux chantillons tests.
Senseurs dhumidit digitaux

De nombreuses banques de gnes utilisent aujourdhui des senseurs
dhumidit digitaux pour la dtermination du taux dhumidit (voir
la Figure 3.1.3). Ces mthodes sont bases sur le fait que les
semences gagnent ou perdent rapidement de lhumidit en fonction
de leur environnement. Des semences humides dans un air sec
perdent de lhumidit ; des semences sches dans un air humide
gagnent de lhumidit. Aprs une dure suffisante, il ny a plus de
mouvement dhumidit entre les semences et lair ; ce point, on dit
que les semences sont lquilibre.
Les senseurs dhumidit digitaux mesurent la quantit de vapeur
deau dans lair lquilibre avec un chantillon de semences
enferm dans une chambre tanche. La valeur est gnralement
exprime en humidit relative lquilibre (HRe), et peut tre
relie au taux dhumidit conventionnel en utilisant une courbe de
calibration dveloppe en utilisant la procdure ci-dessus.
Ellis, R.H., Hong, T.D. et Roberts, E.H. 1985. Handbook of Seed
Technology for Genebanks. Volume 1. Principles and methodology.
IBPGR, Rome, Italie.
International Seed Testing Association, Bassersdorf, Suisse.
Probert, R.J., Manger, K.R. et Adams, J. 2003. Non-destructive measurement
of seed moisture. Pp. 367387 in Seed conservation: Turning science
into practice. (R.D. Smith, J.B. Dickie, S.H. Linington, H.W. Pritchard
and R.J. Probert, eds.). Royal Botanic Gardens, Kew, GB.
39
4.2 Dshydratation des semences

Quest-ce que la dshydratation des semences ?
La dshydratation des semences est la rduction du taux dhumidit
des semences jusqu des niveaux recommands pour leur
stockage, en utilisant des techniques qui naffectent pas la viabilit
des semences (voir Diagramme de flux 4.2).
Pourquoi dshydrate-t-on les semences ?

Des semences frachement rcoltes peuvent avoir un taux dhumidit
lev, qui stimule la respiration et la croissance des embryons des
graines, des insectes et des champignons. Les semences doivent
donc tre dshydrates jusqu un taux dhumidit suffisant pour
empcher les dommages, le rchauffement et les infestations au
cours du stockage.
Quand dshydrate-t-on les semences ?

La dshydratation dun chantillon de semences doit commencer le
plus tt possible aprs leur rception pour viter la dtrioration. Il
est important de sassurer que les semences ne sont pas laisses
dans des remises, des magasins ou des corridors, mais quelles sont
places dans un environnement bien ar et frais (avec une humidit
relative basse), ds leur arrive dans la banque de gnes. Dans une
pice ayant une humidit relative leve, un appareil mcanique pour
diminuer lhumidit (dshumidificateur) peut tre ncessaire.
Jusqu quel taux dhumidit les semences doivent-elles

tre dshydrates ?
Le taux dhumidit optimal pour le stockage dpend de lespce et
de la dure de stockage prvue. Il est important dadopter un rgime
de dshydratation appropri, dans lequel lhumidit relative et la
temprature de lair qui dshydrate sont rgules pour atteindre le
taux dhumidit vis.
Le taux dhumidit des semences qui vont tre stockes dans
une collection de base (voir glossaire) doit tre compris entre 3%
et 7%, selon lespce.7
Pour les collections de base, des taux dhumidit des semences lquilibre une humidit relative
de 10-15% sont recommands pour dshydrater les semences (voir dshydratation dshumidifie
dans cette section). Le taux dhumidit des semences lquilibre dpend de la teneur en lipides
les semences avec une teneur leve en huile auront un taux dhumidit plus bas que les
semences amylaces la mme humidit relative, puisque le volume dhuile dans la semence exclut
leau (voir Tableau 4.4). Si le contenu en huile (D0 ) est connu, Cromarty et al. (1992) proposent une
quation pour estimer le taux dhumidit des semences lquilibre (Me, par rapport au poids sec)
une humidit relative donne (R en dcimales) et une temprature donne (T en C).
Me = (1-D0 ) (-440 In (1-R))
1,1+(T/90)
40
Diagramme de ux 4.2. Dshydratation des semences.

VERIFIER SI LE TAUX D'HUMIDITE DES SEMENCES EST OPTIMAL POUR LE STOCKAGE
Les semences
ncessitent-elles une
dshydratation initiale ?
OUI
REALISER LA DESHYDRATION PASSIVE

OU ACTIVE
NON
PREPARER LES SEMENCES POUR LA DESHYDRATATION FINALE
Les semences
sont-elles dans des conteneurs
permables ?
NON
PLACER LES SEMENCES DANS DES

CONTENEURS PERMEABLES
OUI
REALISER LA DESHYDRATATION FINALE
DETERMINER LE TAUX D'HUMIDITE DES SEMENCES
Les semences
sont-elles sufsament
dshydrates pour tre
stockes ?
NON
CONTINUER LA DESHYDRATATION
OUI
ENREGISTRER LES INFORMATIONS SUR

LE PROCESSUS DE DESHYDRATATION
PASSER AU TEST DE VIABILITE
Le taux dhumidit des semences qui vont tre stockes dans

une collection active (voir glossaire) doit tre compris entre 3%
et 8% pour les semences ayant de mauvaises caractristiques
de stockage (telles que les semences olagineuses) et entre 7%
et 11% pour les semences ayant de bonnes caractristiques de
stockage (comme les crales, selon la temprature utilise pour
le stockage). (Pour de plus amples informations, voir le Tableau
6.2 au Chapitre 6).
41
Taux dhumidit critique

Le taux dhumidit critique est le niveau au dessous duquel
une rduction supplmentaire du taux dhumidit naugmente
plus la longvit des semences stockes hermtiquement. Ellis,
Hong et Roberts, en ayant travaill depuis 1988 avec plus de 25
plantes cultives, ont trouv que le stockage hermtique au taux
dhumidit critique assure la longvit maximale des semences
une temprature de stockage donne. Les valeurs du taux
dhumidit critique varient selon lespce, denviron 6% pour le
pois (Pisum sativum) et le haricot mungo (Vigna radiata), qui sont
riches en protines, 4,55,0% pour des crales comme le riz,
le bl et lorge, qui sont riches en amidon. Pour les espces
semences olagineuses, les valeurs du taux dhumidit critique
sont plus basses: 3,3% pour le soja (Glycine max); 2,7% pour le lin
(Linum usitatissimum); 2,4% pour le niger (Guizotia abyssinica) et
2% pour larachide (Arachis hypogaea) et le tournesol (Helianthus
annuus). Ces valeurs ont t dtermines en stockant les semences
65C, aprs quilibrage 1011% dhumidit relative (HR)
20C. Cependant, il a t rapport que les taux dhumidit critiques
sont affects par les tempratures et il faut tre prudent lorsque
lon extrapole des donnes dtudes de vieillissement acclr par
rapport aux conditions de stockage relles, parce que les conditions
thermodynamiques des deux environnements peuvent tre assez
diffrentes (voir Vertucci et Roos, 1993). Pour des informations plus
spcifiques sur le taux dhumidit critique pour diffrentes espces,
voir Ellis (1998), Ellis et al. (1989, 1990 et 1996) et Walters (1998 et
2003). Des dommages physiques et la rupture de lenveloppe des
graines peuvent tre causs par une dshydratation des semences
trop rapide ou trop pousse chez quelques espces telles que
larachide, le soja, le pois-chiche et Sterculia foetida. Pour viter ce
type de dgts, les semences des espces sensibles doivent tre
dshydrates avec prcautions de manire progressive, avec une
dshydratation initiale lente une humidit relative lgrement plus
leve, suivie par une deuxime tape de dshydratation.
Principes de la dshydratation des semences

Les semences sont hygroscopiques et absorbent ou relarguent de
lhumidit selon lhumidit relative de lair ambiant et le gradient
de potentiel hydrique entre la semence et lair environnant. Si la
pression de vapeur de leau de la semence est plus grande que
celle de lair environnant, la semence va perdre de lhumidit et
devenir plus sche (dsorption). Si la pression de vapeur de leau
de la semence est plus basse que celle de lair environnant, la
semence va gagner de lhumidit par absorption. Labsorption ou la
dsorption se produisent jusqu ce que la pression de vapeur deau
dans la semence et lair environnant soient en quilibre.
42
Taux dhumidit lquilibre et isothermes dhumidit

La teneur en eau des semences lquilibre avec lhumidit relative
de lair environnant est appele taux dhumidit lquilibre. La
comprhension de la relation entre le taux dhumidit des semences
lquilibre et lhumidit relative est importante pour dterminer les
rgimes appropris de dshydratation pour les semences.
Pour une espce donne, il existe une relation identifiable entre
lhumidit relative et le taux dhumidit des semences (voir Tableau
4.4). Les semences vont perdre ou absorber de leau jusqu
ce que leur taux dhumidit soit en quilibre avec lHR de lair
environnant cette temprature. La relation entre le taux dhumidit
des semences et lhumidit relative est exprime par un isotherme
Tableau 4.4. Taux dhumidit lquilibre (approximatifs) de certaines espces cultives communes 25C.
HR (%)
Espce
10
15
20
30
45
60
75
90
Arachide
6,0
8,4
10,0
12,1
14,4
19,5
Aubergine
4,6
6,6
7,7
9,2
11,0
13,8
Avoine
2,1
4,0
5,8
7,6
9,4
11,2
Betterave
6,7
9,1
10,8
12,7
15,0
19,1
Bl
2,9
4,6
5,4
6,4
7,6
9,6
Carotte
4,5
5,9
6,8
7,9
9,2
11,6
Chou
2,6
4,3
5,6
7,1
8,4
10,1
Concombre
3,1
4,9
6,3
8,0
9,8
11,9
Gombo
3,3
4,9
5,6
6,3
7,9
10,0
15,2
Haricot de Lima
3,0
3,9
4,2
5,6
9,8
13,0
Laitue
2,8
4,2
5,1
5,9
7,1
9,6
Lin
3,8
5,8
8,4
10,2
12,7
14,4
18,8
Mas
1,8
3,2
4,6
6,3
7,8
9,4
Moutarde
5,7
8,0
9,6
11,8
13,8
18,5
Navet
3,8
7,2
8,3
10,0
11,2
13,1
Oignon
4,6
6,8
8,0
9,5
11,2
13,4
Orge
2,6
3,8
5,1
6,8
8,3
10,2
Pastque
5,4
7,3
8,6
10,1
11,9
15,0
Pois
4,6
5,6
6,5
7,9
9,8
11,8
14,0
17,6
Potiron
7,0
8,7
10,5
12,2
14,8
20,6
Radis
6,4
8,6
10,5
12,0
15,2
18,8
Riz
4,1
5,5
6,5
7,4
9,3
13,1
18,8
Sarrasin
3,0
4,3
5,6
7,4
9,0
10,8
Seigle
3,2
5,0
6,3
7,8
9,2
11,1
Soja
2,6
4,0
5,1
6,3
7,4
9,0
Sorgho
3,0
4,8
6,1
7,6
8,8
9,0
5,5
7,0
8,5
10,4
12,1
14,6
19,8
Tomate
Compil partir de : Roberts, E.H. (ed.). 1972. Seed viability. Chapman and Hall, London; Harrington, J. F. 1972. Seed Biology, Vol
III. Academic Press, New York: 145245 et Justice O.L. et Bass L.N. 1978. Principles and practices of seed storage, Agriculture
Handbook No. 506. USDA, Washington D.C., USA.
43
Taux dhumidit des semences (% poids frais)
de sorption cest simplement un graphe reprsentant le taux

dhumidit des semences par rapport au pourcentage dhumidit
relative (voir Figure 4.1). Les isothermes dhumidit dpendent de
la composition chimique des semences et diffrent entre espces
et mme entre semences de la mme accession rcoltes des
stades de dveloppement diffrents. Les isothermes dhumidit
sont trs utiles pour estimer le taux dhumidit auquel les semences
peuvent tre dshydrates dans un environnement donn.
20
15
10
Amylaces
Olagineuses
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Humidit relative (%)

Source: Bradford, K.J. 2004. Seed storage and longevity. pp 7684. In: Seed production
and quality. UC Davis, Seed Biotechnology Center, USA.
Figure 4.1. Isotherme de taux d'humidit.
Comment prparer des isothermes dhumidit

Les isothermes dhumidit peuvent tre facilement construits
en permettant aux semences datteindre lquilibre dans des
environnements ayant une HR connue, maintenue par des solutions
satures en sels une temprature donne. Les solutions satures
en sels ci-dessous produisent une srie dHR 25C :
Sel
HR correspondante (%)
Hydroxyde de sodium
7,5
Chlorure de lithium
13
Chlorure de magnsium
32
Nitrate de magnsium
54
Nitrate dammonium
65
Chlorure de sodium
75
Chlorure de potassium
85
44
Les solutions satures en sels sont prpares en mlangeant le sel

avec de leau pour former une suspension visqueuse.
1. Placer la suspension visqueuse dans le fonds dun
dessiccateur.
2. Placer un poids connu de semences dans des conteneurs en
treillis mtallique ou des sacs faits en moustiquaires et les placer
sur la plaque du dessiccateur. Le mlange de sel ne doit pas
venir au contact des semences.
3. Sceller le couvercle sur le dessiccateur.
4. Laisser suffisamment de temps pour que lhumidit des semences
squilibre avec lair environnant lintrieur du dessiccateur
cela peut prendre plusieurs semaines. Les semences vont soit
absorber soit perdre de lhumidit, selon le gradient de pression
de vapeur deau entre les semences et lair environnant. Quand
le poids des semences reste inchang, le taux dhumidit
lquilibre est atteint.
5. Dterminer le taux dhumidit des semences lquilibre
chaque HR en dshydratant ltuve, comme dcrit dans la
section prcdente. Marquer le taux dhumidit des semences
lquilibre sur laxe des Y dun graphe et lHR des solutions
de sels respectives sur laxe des X, comme indiqu sur la
Figure 4.2.
Taux dhumidit des semences (%)
13
12
11
10
9
8
7
6
5
4
4
12
16
22
26
30
Dure de dshydratation (jours)

Exemple : des semences reues la banque de gnes ont un taux dhumidit initial
denviron 10% et doivent tre dshydrates 7% pour le stockage. Sur le graphe cidessus, les lignes allant de la courbe laxe des X indiquent approximativement deux et
15 jours. La diffrence entre les deux valeurs (15 2 = 13 jours) est le temps requis pour
dshydrater les semences dun taux dhumidit de 10% un taux dhumidit de 7%.
Figure 4.2. Prdiction du temps de dshydratation.

45
Evaluation de la sensibilit la dessiccation

Tester la tolrance des semences la dessiccation est un
prrequis pour choisir le rgime de dshydratation appropri, si le
comportement des semences la dessiccation nest pas encore
connu. Les semences rcalcitrantes ne peuvent pas survivre
la dessiccation en dessous de taux dhumidit comparativement
hauts. La sensibilit la dessiccation peut tre value en
mesurant le pourcentage de germination diffrents intervalles de
dshydratation (voir Diagramme de flux 4.3).
Les semences qui tolrent la dessiccation (qui ne montrent
pas de perte de viabilit) jusqu un taux dhumidit de 5% ou
moins (valeurs en quilibre avec 1015% HR 20C) ont de
fortes probabilits de montrer un comportement orthodoxe au
stockage.
Les semences qui tolrent la dessiccation jusqu un taux
dhumidit de 1012% (valeurs en quilibre avec une HR de
4050% 20C), mais dont la viabilit diminue lorsquelles
sont soumises une dessiccation supplmentaire jusqu un
taux dhumidit infrieur, ont une forte probabilit davoir un
comportement intermdiaire au stockage.
Les semences qui sont tues par une dessiccation un taux
dhumidit de 1520% (valeurs en quilibre avec une HR >70%
20C) ont de fortes probabilits dtre rcalcitrantes.
Des informations sur le comportement au stockage dune large
gamme despces sont disponibles sur www.rbgkew.org.uk/data/
sid. Une grande partie des informations incluses dans ce site Web
provient du Compendium on Seed Storage Behaviour par Hong et
al. (1996). Une version lectronique de la base de donnes de ce
compendium est galement disponible en tant tlcharge depuis le
site Web des publications de Bioversity : www.bioversityinternational.
org/publications/index.asp.
Procdures de dshydratation des semences

Etape 1 : Prdire le taux dhumidit et la dure de
dshydratation
Evaluer la ncessit de la dshydratation en estimant le taux
dhumidit des semences reues la banque de gnes. Une
mesure rapide du taux dhumidit peut tre effectue en utiliser un
humidimtre calibr, comme dcrit dans la section 4.1.
Si lhumidit est au dessus des limites pour le stockage
en scurit (37% pour la conservation, selon lespce), la
dshydratation est ncessaire.
46
Diagramme de ux 4.3. Protocole de dtermination du comportement au stockage des semences.
RECEPTION DES SEMENCES
DETERMINER LE TAUX DHUMIDITE DES SEMENCES

ET LA VIABILITE INITIALE
DESHYDRATER JUSQUA 1012% DE TAUX DHUMIDITE
La plupart des graines meurent
TEST DE VIABILITE
La plupart des graines survivent
DESHYDRATER A UN TAUX
DHUMIDITE DE 5%
TEST DE VIABILITE
La plupart des graines meurent
STOCKER HERMETIQUEMENT
A -20C PENDANT 3 MOIS
La plupart des
graines meurent
TEST DE VIABILITE
PROBABLEMENT
RECALCITRANTES
PROBABLEMENT
INTERMEDIAIRES
PROBABLEMENT
ORTHODOXES
Source : Hong et Ellis (1996).
Prdiction de la dure de dshydratation

La dure de la priode de dshydratation peut tre prdite en
utilisant lune ou lautre des mthodes dcrites ci-dessous.
Si la banque de gnes na pas dexprience pralable de la
dshydratation des semences dune espce particulire, il peut
tre ncessaire de faire des essais, afin de prdire la dure de
dshydratation approprie.
47
Prdiction de la dure de dshydratation par perte de poids

1. Dterminer le taux dhumidit de lchantillon de semences en
utilisant les mthodes dcrites dans la section 4.1.
2. Peser lchantillon de semences qui requiert une dshydratation.
3. Calculer le poids des semences au taux dhumidit requis en
utilisant lquation :
Poids final des semences =
poids initial des semences (100 taux dhumidit initial)
(100 taux dhumidit vis)
Exemple :
Poids initial des semences = 250 g
Taux dhumidit initial = 12%
Taux dhumidit vis en fin de dshydratation = 8%
Poids final des semences au taux dhumidit de 8% =
250 x (100 -12) = 239 g
(100 - 8)
4. Garder lchantillon dans un tissu en mousseline ou un sac en mailles

de nylon et lui permettre de se dshydrater, en pesant priodiquement
lchantillon, jusqu ce que le poids requis soit atteint.
Prdiction de la dure de dshydratation partir de courbes

moyennes de dshydratation
En gnral, les semences se dshydratent selon un mode exponentiel
jusqu ce que le taux dhumidit lquilibre soit atteint. La vitesse
de dshydratation de diffrents lots de semences de la mme
espce sera plus ou moins gale dans les mmes conditions
denvironnement. Les courbes de dshydratation peuvent donc tre
utilises pour prdire la dure de dshydratation de tous les lots de
semences dune espce donne dans des conditions donnes. Ceci
vite des vrifications frquentes du taux dhumidit des semences
pendant la dshydratation et limite la consommation de semences.
Comment prparer des courbes de dshydratation moyennes
1. Collecter 250500g de semences de chacune des 35 accessions
(qui ont des caractristiques diffrentes, telles que la taille des
semences, leur masse, leur forme, leur composition chimique)
dune espce donne. Utiliser des lots de semences avec des
semences en excs ou ceux dont on se dbarrasse cause de
leur faible viabilit.
2. Dterminer le taux dhumidit de chaque lot de semences en utilisant
la mthode de dshydratation ltuve dcrite prcdemment.
48
3. Dshydrater les chantillons en utilisant la mme mthode et les

mmes conditions que celles utilises en pratique.
4. Mlanger les semences dans un conteneur et prlever chaque
jour un petit chantillon pour dterminer le taux dhumidit.
5. Rpter chaque jour jusqu ce que plus aucun changement du
taux dhumidit ne soit enregistr.
6. Reporter les donnes sur un graphe avec le taux dhumidit en
pourcentage sur laxe des Y et la dure de dshydratation sur
laxe des X.
7. Les changements du taux dhumidit en fonction du temps peuvent
tre dcrits en faisant passer une courbe exponentielle (courbe
moyenne de dshydratation) par lensemble des donnes.
La courbe moyenne de dshydratation peut tre utilise comme
guide parce que les autres lots de semences de la mme espce
doivent se dshydrater la mme vitesse. Ceci peut tre rpt
avec les semences de toutes les espces et leurs courbes de
dshydratation peuvent tre traces pour diffrentes conditions.
Utilisation des courbes moyennes de dshydratation pour

prdire la dure de dshydratation
1. Utiliser le graphe prpar pour les semences de lespce
particulire qui est dshydrate.
2. Dterminer le taux dhumidit initial de lchantillon par la
mthode de dshydratation ltuve.
3. Slectionner le taux dhumidit final qui est requis pour le
stockage de cette espce.
4. Tracer une ligne horizontale partir des taux dhumidit initiaux et dsirs
sur laxe vertical des Y traversant le courbe de dshydratation.
5. Noter sur laxe des X le jour correspondant aux points
dintersection avec la courbe de dshydratation pour chacun
des taux dhumidit.
La diffrence entre les deux points sur laxe des X indique la dure
de dshydratation requise pour atteindre le taux dhumidit dsir
(voir Figure 4.2).
Etape 2 : Prparer les semences pour la dshydratation

1. Il est prfrable de placer les semences dans des sachets
permables8 tiquets pour chaque accession. Lorsque lon
Les sachets utiliss pour la dshydratation doivent tre suffisamment permables pour permettre
lhumidit de schapper aisment. Selon la taille des semences, des sachets en mousseline ou
taills dans une moustiquaire sont les mieux adapts pour cet usage.
49
utilise des sachets, deux tiquettes doivent toujours suivre le lot

de semences lune place lextrieur du sachet et lautre
lintrieur avec les semences. Les tiquettes doivent tre
rsistantes et crites avec un feutre indlbile.
2. Ne pas conserver une grande quantit de semences dans un
seul sachet. Sparer les accessions dans plusieurs sachets en
couches fines, pour faciliter la dshydratation rapide.
3. Fermer les sachets comme il faut afin dviter que les semences
ne schappent ou ne se mlangent.
Etape 3 : Dshydratation des semences

Plusieurs mthodes sont disponibles pour dshydrater les semences.
Les mthodes employes les plus communes et sres sont la
dshydratation dshumidifie et la dshydratation au silicagel.
Dautres mthodes comme la dshydratation avec des solutions
satures en sel peuvent aussi tre utilises.
Eviter dutiliser des
tempratures leves pour
la dshydratation, car elles
rduisent la dure de vie des
semences pendant le stockage.
Toutes ces mthodes reposent sur le fait de laisser les semences

dans un environnement HR basse et de laisser le taux dhumidit
des semences atteindre lquilibre temprature relativement basse
(1025C). Noter que les semences atteindront lquilibre des vitesses
diffrentes selon lespce, la taille des semences et les conditions de
dshydratation. La plupart des semences vont commencer par se
dshydrater rapidement, puis la vitesse de dshydratation va diminuer
au fur et mesure que lon sapproche dun taux dhumidit bas.
Si le taux dhumidit des semences est trop lev (>15%), il est
recommand de dshydrater les semences en deux tapes :
1. une dshydratation initiale pour rduire le taux dhumidit
jusqu des niveaux sans danger afin dviter une dessiccation
rapide et dabmer les semences fragiles (comme les dgts dus
au clivage chez le soja) (voir encadr 4.1 pour les options de
dshydratation initiale) ;
Encadr 4.1. Options pour la dshydratation initiale.

A lextrieur, lombre sur des tagres ouvertes en treillis mtallique, si
le climat sy prte
ncessite des mesures de contrle supplmentaires contre les oiseaux,
les insectes et la rose
Dshydratation passive dans une pice avec une bonne ventilation et
circulation de lair
non ralisable sous des climats chauds et humides sous les tropiques
humides
Dshydratation active sous ventilation force
50
2. une dshydratation finale jusquau taux dhumidit recommand

pour la conservation dans les banques de gnes.
Dshydratation dshumidie
Cette mthode comprend la dshydratation des semences dans
un environnement o lHR est garde basse en utilisant des
dshumidificateurs. Les standards pour les banques de gnes
FAO/IPGRI (1994) recommandent une gamme de 1015% HR et
une temprature de 1025C pour dshydrater les semences.
Pour des banques de gnes plus petites, des enceintes de
dshydratation des semences conues pour fournir ces conditions
existent. Les banques de gnes plus grandes auront besoin
de pices modulaires de plein pied pour la dshydratation des
semences. Le cabinet ou la salle de dshydratation doit avoir un
mcanisme de scurit pour rguler la temprature et empcher la
surchauffe en cas daccident mcanique.
1. Placer les semences qui ont t empaquetes dans des sacs en
tissu sur les tagres ouvertes de la salle de dshydratation ou de
lenceinte de dshydratation des semences. Bien sassurer que
les sacs de semences ne sont pas trop serrs et quil y a assez
despace pour permettre une bonne circulation de lair entre eux.
2. Laisser les semences dans la salle ou lenceinte de
dshydratation jusqu ce que le taux dhumidit soit dans la
gamme requise pour le stockage. Si le taux dhumidit initial et
le poids de lchantillon sont connus, la longueur de la priode
de dshydratation peut tre prdite en utilisant les courbes
moyennes de dshydratation ou en mesurant la perte de poids
comme dcrit auparavant (voir tape 1).
3. Alternativement, prlever un sous-chantillon et dterminer si
le taux dhumidit requis a t atteint ou non, en utilisant les
mthodes dcrites dans la section 4.1.
Dshydratation au silicagel
Les petits chantillons peuvent tre dshydrats en utilisant du
silicagel. La procdure pour dshydrater les semences en utilisant
du silicagel bleu est explique ci-dessous.
1. Placer du silicagel bleu auto-indicateur9 dans un dessiccateur
ou un bocal en verre avec un couvercle tanche. Pour une
dshydratation efficace, le poids du silicagel doit tre gal
Les utilisateurs du traditionnel silicagel bleu auto-indicateur sont svrement mis en garde contre
les possibles effets cancrignes du chlorure de cobalt, qui est utilis comme indicateur. Le silicagel
doit tre manipul sous hotte aspirante ds quil y a un risque de gnrer de la poussire. Les
alternatives au silicagel bleu comme le silicagel auto-indicateur granuleux orange incolore ou
le silicagel enrob (2-5 mm), qui produit moins de poussire, sont disponibles chez la plupart des
fournisseurs de produits de laboratoire et doivent tre utiliss lorsque cest possible.
51
2.
3.
4.
5.
6.
7.
celui des semences. Pour une dshydratation plus rapide,

certaines banques de gnes utilisent un rapport silicagel:
semences de 3:1.
Placer les semences dans des sacs permables et les laisser
proximit du silicagel.
Garder le dessiccateur une temprature frache
(approximativement 20C).
Changer le silicagel tous les jours ou lorsque la couleur change
du bleu fonc au rose ou au bleu ple.
Rgnrer le silicagel en le chauffant 100C jusqu ce quil
redevienne bleu fonc. Le laisser refroidir dans un conteneur
tanche avant de le rutiliser.
Laisser les semences avec du silicagel frais dans le conteneur
jusqu ce que le taux dhumidit des semences soit dans la
gamme requise pour le stockage.
Empaqueter les semences dans des conteneurs appropris
une fois que le taux dhumidit recommand ou le poids des
semences lquilibre est atteint, et lorsque le niveau de
germination et le taux de mortalit sont acceptables.
Dshydratation au chlorure de calcium

Les semences peuvent galement tre dshydrates en utilisant des
granules de chlorure de calcium anhydre. Le chlorure de calcium est
sans danger, non toxique et bon march. On le trouve facilement
dans les drogueries et on sen dbarrasse facilement en le vidant
dans lvier. La mthode de dshydratation est trs similaire
celle employe avec le silicagel, mais le produit est jet aprs
dshydratation, ou il peut tre rutilis pour prparer des solutions
satures en sel.
1. Placer des granules de chlorure de calcium anhydre dans un
dessiccateur ou un bocal en verre avec un couvercle tanche
et un treillis mtallique sur le produit. Fermer le conteneur pour
viter labsorption de lhumidit de lair.
2. Placer rapidement les semences dans des sacs permables sur
la plaque du dessiccateur ou le treillis mtallique.
3. Laisser le dessiccateur une temprature frache (environ
20C).
4. Lorsque la couche suprieure du chlorure de calcium devient
dure et brillante, le retourner de telle sorte que le fonds se
retrouve sur le dessus. Une fois quil devient compltement dur,
il peut tre rutilis pour prparer une solution sature en sel,
comme dcrit plus bas.
5. Laisser les semences avec le chlorure de calcium dans le
conteneur jusqu ce que le taux dhumidit des semences soit
dans la gamme requise pour le stockage.
52
6. Emballer les semences dans des conteneurs appropris une fois

que le taux dhumidit recommand ou le poids des semences
lquilibre est atteint, et que la germination et ltat sanitaire des
semences sont acceptables.
Solutions satures en sel

Les semences peuvent tre prpares pour le stockage en les
dshydratant dans des conteneurs tanches au dessus de solutions
satures en sels minraux, tels que le chlorure de calcium et le
chlorure de lithium. Le chlorure de calcium maintient un HR de 30%
25C et peut tre utilis pour dshydrater les semences en vue de
leur conservation moyen terme. De manire similaire, le chlorure
de lithium procure une HR de 13% et le bromure de calcium une
HR de 18% 20C, et ils peuvent tre utiliss pour la conservation
long terme. Des mlanges de chlorure de calcium et de chlorure
de lithium peuvent galement tre utiliss pour atteindre des taux
dhumidit des semences plus bas moindre cot quavec du
chlorure de lithium seul. LHR exacte et le taux dhumidit vis
doivent tre dtermins pour le rapport spcifique des produits
chimiques utiliss.
Pour prparer le mlange de sels :
1. Mlanger le sel leau pour former une solution visqueuse.
2. Placer la solution visqueuse dans un dessiccateur ou un
rcipient ouvert et placer le rcipient dans un conteneur
tanche plus grand, qui sera utilis pour dshydrater les
semences.
3. Etaler les semences en une couche fine lintrieur de
leur conteneur et le placer dans le dessiccateur ou dans le
conteneur plus grand. Le mlange de sel ne doit pas venir au
contact des semences. Fermer hermtiquement le couvercle
du conteneur le plus grand qui contient les semences et la
solution visqueuse.
4. Laisser suffisamment de temps pour permettre au taux
dhumidit datteindre lquilibre avec lair lintrieur du
rcipient cela peut prendre plusieurs semaines. Faire circuler
lair lintrieur du conteneur acclrera le processus de
dshydratation.
Autres mthodes peu onreuses
Rfrigrateur dgivrage automatique

Si lon ne dispose pas de sels minraux, les semences peuvent tre
dshydrates en utilisant un rfrigrateur dgivrage automatique.
53
Laction du dgivrage automatique va maintenir une HR basse

lintrieur du rfrigrateur. Il est difficile de contrler lHR exacte,
mais cette mthode est satisfaisante si de meilleurs moyens ne
sont pas disponibles. LHR varie entre 1040% dans de nombreux
rfrigrateurs, ce qui correspond des taux dhumidit appropris
pour la conservation moyen ou long terme.
1. Etaler les semences en une couche fine dans un rcipient
ouvert.
2. Placer le rcipient dans un rfrigrateur dgivrage automatique
et laisser les semences atteindre lquilibre avec lhumidit
lintrieur du rfrigrateur.
3. Bien fermer le rcipient de dshydratation, le sortir du rfrigrateur
et le laisser atteindre la temprature ambiante avant de louvrir,
pour viter la condensation dhumidit sur les semences.
4. Sceller les semences dans des conteneurs tanches et les
transfrer en conditions de stockage.
Dshydratation lombre
La dshydratation lombre peut tre un moyen efficace de
rduire le taux dhumidit des semences dans des environnements
dans lesquels lHR est basse (infrieure 40%) ; plus basse est
lhumidit, plus efficace sera le processus de dshydratation.
La dshydratation lombre est particulirement utile pour la
dshydratation initiale. Ne pas dshydrater au soleil car on pense
que cela affecte la viabilit long terme des semences chez
certaines espces.
1. Etaler les semences en une seule couche sur un drap ou sur
des claies mtalliques places lombre, en sassurant que lair
circule librement. Tout appareil qui peut augmenter le flux dair
sur les semences (comme un ventilateur) augmentera lefficacit
de la dshydratation.
2. Recouvrir les semences dun filet protecteur pour empcher la
prdation par les animaux (oiseaux, rats, etc.).
3. La nuit, replier le drap et le conserver dans pice frache.
4. Laisser suffisamment de temps pour que le taux dhumidit des
semences atteigne lquilibre avec lHR ambiante cela peut
prendre plusieurs jours.
Dans les pays tropicaux qui ont une HR leve, il est plus
difficile et plus cher de maintenir une salle de dshydratation
une HR trs basse. Une combinaison de mthodes incluant
des technologies bon march telles que la dshydratation au
silicagel et les sels saturs peut tre employe pour rduire
efficacement le taux dhumidit des semences jusqu des
niveaux acceptables.
54
Documentation
Les descripteurs suivants peuvent tre utiliss pour documenter
les informations concernant la dtermination du taux dhumidit
et les procdures de dshydratation pour des accessions
individuelles :
Taux dhumidit des semences au moment de leur rception (%)
Mthode utilise pour la dtermination de lhumidit
Mthode et dure de la pr-dshydratation (si ncessaire)
Mthode de dshydratation finale
Dure de la dshydratation finale
Taux dhumidit final aprs dshydratation (%)
Date de la dtermination du taux dhumidit final
Poids de 100 ou 1000 graines (g)
Poids sec total des semences (g)
Cromarty, A. 1984. Techniques for Seed-drying. Pp. 88125 in Seed
management techniques for genebanks. (J.B. Dickie, S. Linington
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56
5. Test de la qualit
1. Introduction
2. Acquisition et
enregistrement du
matriel gntique
2.1 Acquisition du
matriel gntique
matriel gntique
et dshydratation
4.1 Dtermination du
taux d'humidit
semences
des semences
des semences
des semences
pour l'introduction
par inadvertance
de transgnes
6. Empaquetage et
6.1 Empaquetage des
semences
6.2 Stockage des
semences
gntique
du matriel gntique
gntique
8.2 Rgnration du
matriel gntique
5. TEST DE LA QUALITE DES

SEMENCES
5.1 Test de la viabilit des
semences
Quest-ce que la viabilit des semences ?
La viabilit des semences est la mesure du
nombre de semences dans un lot de semences
qui sont vivantes et peuvent se dvelopper en
plantes qui vont se reproduire dans les conditions
appropries au champ.
Pourquoi doit-on dterminer la viabilit

des semences ?
Il est trs important que les semences stockes
dans une banque de gnes soient capables de
produire des plantes lorsquelles sont semes
au champ. Elles doivent avoir une viabilit leve
au dbut du stockage et la maintenir pendant le
stockage. Les semences avec une viabilit initiale
leve survivront galement plus longtemps au
stockage. La viabilit des semences dcline
lentement au dbut, puis plus rapidement au
fur et mesure que les semences vieillissent.
Il est important de savoir quand ce dclin se
produit afin dagir pour rgnrer laccession.
Une dtrioration excessive conduira la perte
du matriel.
Quand faut-il dterminer la viabilit ?

La viabilit des accessions doit tre dtermine :
Avant que les semences soient empaquetes
et places dans la banque de gnes ;
A intervalles rguliers pendant le stockage.
Le test de la viabilit peut prendre quelques
jours quelques semaines, selon lespce.
Si possible, les rsultats des tests de viabilit
doivent tre rendus disponibles avant que les
semences ne soient empaquetes et places
dans la banque de gnes, afin que les semences
de mauvaise qualit puissent tre identifies et
rgnres.
En attendant les rsultats des tests de viabilit,
ou sil y a un retard dans la mise en uvre de ces
57
Le stockage de semences
avec une viabilit initiale leve
va maximiser la longvit de
laccession. Le suivi de la
viabilit au cours du stockage
facilite lidentication opportune
des accessions qui ncessitent
une rgnration pour assurer
la disponibilit continue du
matriel gntique conserv.
tests, les semences doivent tre places dans un environnement

frais pour minimiser leur dtrioration.
Comment doit-on dterminer la viabilit ?

De nombreuses mthodes diffrentes existent pour tester la
viabilit des semences. La mthode la plus prcise et fiable est le
test de germination. Il existe aussi des tests biochimiques, qui ont
lavantage dtre plus rapides, mais qui ne sont pas aussi prcis que
le test de germination. Ils demandent galement des connaissances
particulires pour tre raliss et interprts. Ces tests ne sont
gnralement pas recommands pour un usage gnral pour tester
la viabilit des semences dans les banques de gnes.
Quest-ce quun test de germination ?

Un test de germination est ralis pour dterminer quelle proportion
de semences dans une accession va germer dans des conditions
favorables et produira des plantules normales (des plantules qui
comportent les structures essentielles, racines, tiges et des rserves
alimentaires suffisantes), capables de se dvelopper en plantes
matures pour leur reproduction (voir Diagramme de flux 5.1).
Comment teste-t-on la germination ?

Les besoins de base pour la germination des semences sont : de
leau, de loxygne, de la lumire et une temprature adapte. Les
semences despces diffrentes ont des besoins diffrents et on ne
peut tablir un ensemble gnral de conditions pour faire germer
les semences de toutes les espces. Les semences de certaines
espces sont plus tolrantes et germent dans une large gamme de
conditions, mais la germination complte ne peut tre obtenue que
dans les conditions optimales.
Pour les espces ayant
des semences de grandes
dimensions qui ont un faible
taux de multiplication des
semences et pour celles
qui ont des problmes de
rgnration des semences
(comme les espces
sauvages), il peut devenir
difcile dutiliser 200 graines
pour un test de germination
Dans ce cas, Deux rplications
de 50 ou 25 graines chacune
peuvent tre utilises, selon la
quantit disponible.
Combien de semences doit-on tester ?

Un test de germination avec une taille dchantillon fixe utilisant
200 semences est recommand pour dterminer la viabilit au
dbut du stockage.
Les Standards internationaux pour les banques de gnes (FAO/
IPGRI, 1994) recommandent dutiliser un minimum de deux
rplications avec 100 graines par rplication. Si les rsultats du test
montrent que la germination est en dessous de 90%, 200 graines
supplmentaires doivent tre testes en utilisant la mme mthode.
On prend la moyenne des deux tests comme viabilit totale.
Quand une semence a-t-elle germ ?
La germination dune semence peut tre dfinie comme la reprise
de croissance de lembryon et lmergence ou la protrusion
de la radicule des structures qui la recouvrent. Pour tester les
58
Diagramme de ux 5.1. Test de germination.
PRENDRE UN ECHANTILLON DE L'ACCESSION AU HASARD
COMPTER DEUX REPETITIONS DE 100 SEMENCES CHACUNE
VERIFIER SI L'ON DOIT S'ATTENDRE A LA DURETE DES SEMENCES OU A LA DORMANCE DE L'EMBRYON
OUI
La duret
des semences est-elle
prsente ?
La dormance
embryonnaise est-elle
prsente ?
NON
OUI
NON
REALISER UNE SCARIFICATION

MANUELLE
EFFECTUER UN TRAITEMENT POUR

LEVER LA DORMANCE
DETERMINER LA METHODE DE GERMINATION DES SEMENCES
Les semences
sont-elle petites ?
OUI
UTILISER LA METHODE EN BOITES DE PETRI
NON
UTILISER LA METHODE ENTRE LES PAPIERS
Les semences
sont-elle de taille
moyenne ?
OUI
UTILISER LA METHODE DE GERMINATION
DANS LE SABLE
NON
COMPTER LES PLANTULES QUI ONT
GERME NORMALEMENT
INTERPRETER LES RESULTATS
Les rplications
sont-elles
compatibles ?
NON
REPETER LE TEST
OUI
CALCULER LE POURCENTAGE MOYEN DE GERMINATION

EN UTILISANT TOUTES LES REPLICATIONS
ENTRER LES DONNEES DANS LES FICHIERS
59
semences dans les banques de gnes, la germination nest pas

complte tant que la plantule ne peut tre juge normale selon
des critres spcifiques pour chaque espce (voir Association
of Seed Analysts [AOSA], 2005; ISTA, 2005). Cest parce que
lobjectif du test des semences est de donner une indication de la
faon dont les semences vont se comporter comme propagules
au champ.
Test de germination
Etape 1 : Prparation du test de germination
1. Vrifier les besoins spcifiques en temprature, lumire et tout
autre traitement requis pour tester la germination dune espce
donne (voir Tableau 5.1).
2. Vrifier que lquipement et lenvironnement appropri sont
disponibles pour satisfaire ces conditions. Si ce nest pas le cas,
les meilleures alternatives possibles doivent tre trouves.
3. Prendre au hasard un chantillon de semences de chaque
accession aprs avoir lgrement secou le lot de semences
dans son conteneur ou en les talant sur une surface propre et
en mlangeant minutieusement.
4. Compter 200 semences (ou moins, selon leur disponibilit)
pour chaque test. Remettre les semences en excs dans leur
conteneur.
5. Diviser ces semences en au moins deux rplications.
6. Si les semences sont trs sches (avec un taux dhumidit
infrieur 8%), et quelles risquent de subir des dommages
dus limbibition, il peut tre ncessaire daugmenter le taux
dhumidit (ce processus est appel humidification) jusqu
1517% avant de tester la germination. (voir encadr 5.1).
Encadr 5.1. Humidification des semences sches.

Petites graines
1.
2.
3.
4.
Etaler les semences de manire uniforme sur une bote de Petri.

Placer trois serviettes en papier trs humides plat lintrieur dune grande bote en polythylne.
Placer les botes de Petri (sans couvercles) contenant les semences sur le dessus du papier humide et
fermer la bote avec un couvercle bien ajust.
Placer la bote dans un incubateur 20C pendant 24 heures ou plus, selon le taux dhumidit initial.
Grosses graines
1.
2.
3.
Placer les semences dans des sacs permables faits en toile de moustiquaire ou un matriau similaire.
Placer les sacs sur le dessus dune jauge au dessus de leau dans un dessiccateur. Il faut faire attention
viter le contact direct entre les semences et leau.
Placer le dessiccateur 20C pendant environ 48 heures. La couche de semences ne doit pas avoir plus
dune graine dpaisseur pour permettre toutes les semences dabsorber lhumidit de latmosphre de
manire quivalente.
60
Tableau 5.1. Directives pour tester la germination des plantes cultives les plus communes. Se rfrer ISTA
(2005) ou AOSA (2005) pour des informations sur dautres plantes.
Plante
Espce
Substrat*
Temprature
(C)**
Premier
Dernier
comptage
(jours)
Amarante
Amaranthus spp.
DP
20/30 ; 20
7, 14
Arachide
Arachis hypogaea
EP ; S
20/30 ; 25
5, 10
Ethephon 0,2%
Aubergine
Solanum
melongena
DP ; EP ; S 20/30
7, 14
Lumire ; KNO
3
Avoine
Avena sativa
EP ; S
5, 10
Stratifier 5C ou 10C pendant

cinq jours et tester dix jours
Betterave
Beta vulgaris
subsp. vulgaris
DP ; EP ; S 20/30 ; 20
3, 10
Prlaver et scher un maximum

de 25C
Bl
Triticum aestivum
DP ; EP ; S 20
4, 7
Carotte
Daucus carota
DP ; EP
20/30; 20
6, 14
Chicore
Cichorium intybus
DP
20 ; 20/30
5, 14
Choux
Brassica oleracea
var. capitata
DP ; EP
20/30 ; 20
3, 10
Choux fleur
Brassica oleracea
var. botrytis
DP ; EP
20/30 ; 20
3, 10
Citrouille
Cucurbita maxima
EP ; S
20/30 ; 25
4, 7
Prchauffer (3035C) ;
stratifier ; GA
3
GA 50 ppm
3
Lumire ; KNO
3
trois jours ; KNO et lumire
3
trois jours ; KNO et lumire
3
Garder le substrat plutt sec
Colza annuel
Brassica napus
EP , DP
20/30
3, 7
Concombre
Cucumis sativus
DP ; EP
20/30
3, 7
Coriandre
Coriandrum sativum DP ; EP
15
6, 21
Coton
Gossypium spp.
EP ; S
20/30 ; 25
4, 12
Raclage ; scarification mcanique

des graines dures
Courge
Cucurbita pepo;
C. moschata
EP ; S
20/30
4, 7
Courge
amphore
Lagenaria
siceraria
EP ; S
20/30 ; 20
14
Dactyle
agglomr
Dactylis
glomerata
DP
15/25
7, 21
Lumire ; stratifier 5C ou 10C

pendant sept jours
Eleusine
Eleusine corocana
DP
20/30
Fve
Vicia faba
EP ; S
20
4, 14
KNO
3
Stratifier 10C pendant trois jours
Flole des
prs
Phleum pratensis
DP
20/30
5, 10
Lumire ; KNO et stratifier 5C

3
ou 10C pendant cinq jours
Fraisier
Fragaria ananassa
DP
20/30 ; 20
28
Lumire
Gombo
Abelmoschus
esculentus
EP ; DP
20/30
4, 14
Haricot
Phaseolus vulgaris
EP ; S
20/30 ; 25 ; 20 5, 8
20
Traitements spciaux ;
Instructions supplmentaires
pour des semences fraches et
dormantes
61
Plante
Espce
Substrat*
Temprature
(C)**
Premier
Dernier
comptage
(jours)
Haricot de Lima Phaseolus lunatus
EP ; S
20/30 ; 25
5, 9
Herbe des
Bermudes
Cynodon dactylon
DP
20/30
7, 21
Lumire ; KNO
3
Ivraie vivace
Lolium perenne
DP
15/25 ; 20
5, 14
KNO et stratifier 5C ou 10C

3
pendant cinq jours
Jarosse gesse
cultive
Lathyrus sativus
EP ; S
20
4, 14
Scarification mcanique des

semences dures
Laitue
Latuca sativa
DP ; EP
20
Lumire ; scarification
Lentille
Lens culinaris
EP, S
20
5, 10

semences dures
Lin
Linum
usitatissimum
EP ; DP
20/30 ; 20
3, 7
Lupin
Lupinus angustifolius; EP ; S
L. albus
20
3, 10
Luzerne
Medicago sativa
DP ; EP
20
4, 7
Mas
Zea mays
EP ; S
20/30 ; 25 ; 20 4, 7
Mlilot blanc
Melilotus albus
DP ; EP
20
4, 7
Melon
Cucumis melo
EP ; S
20/30
4, 10
Mil
Pennisetum
glaucum
DP ; EP
20/30 ; 25
3, 7
Millet
Setaria italica
DP
20/30
4, 10
Moutarde
noire
Brassica nigra
DP ; EP
20/30 ; 20
3, 7
Lumire ; KNO et stratification

3
10C pendant trois jours
Moutarde
brune
Brassica juncea
DP ; EP
20/30
3, 7
Lumire ; stratification 10C et

tester cinq jours supplmentaires
Nib
Vigna unguiculata
EP ; S
20/30 ; 25
5, 8
Oignon
Allium cepa
EP ; DP
20
6, 10
Orge
Hordeum vulgare
EP ; S
20
4, 7

cinq jours
Pastque
Citrullus lanatus
EP ; S
20/30 ; 25
4, 14
Garder le substrat plutt sec ;

Tester 30C
Piment
oiseau
Capsicum
frutescens
DP ; EP
20/30
6, 14
Lumire et KNO
3
Pois
Pisum sativum
EP ; S
20
Pois dAngole
Cajanus cajan
EP
25
5, 10

semences dures
Pois-chiche
Cicer arietinum
EP
20
5, 8

graines dures
62
dormantes

graines dures
Plante
Espce
Substrat*
Temprature
(C)**
Premier
Dernier
comptage
(jours)
dormantes
Pomme
de terre
Solanum
tuberosum
DP ; EP
20/30 ; 20
8, 16
GA , 2000 ppm
3
Radis
Raphanus sativus
DP ; EP
20/30 ; 20
4, 6
Ricin
Ricinus communis
EP ; S
20/30
7, 14
Riz
Oryza sativa
DP ; EP ; S 20/30 ; 25
5, 14
Prchauffer 40C pendant cinq

jours
Safran btard
Carthamus
tinctorius
DP ; EP
20 ; 25 ;
4, 14
Lumire 15C
Sarrasin
Fagopyrum
esculentum
EP ; DP
20/30 ; 20
3, 6
Seigle
Secale cereale
DP ; EP ; S 20
4, 7
Ssame
Sesamum indicum
DP
20/30
3, 6
Soja
Glycine max
EP ; S
20/30 ; 25
5, 8
Soja noir
Vigna mungo
EP
20/30 ; 25 ; 20
3, 7
Soja vert
Vigna radiata
EP ; S
20/30 ; 25
3, 7
Sorgho
Sorghum bicolor
DP ; EP
20/30 ; 25
3, 10

cinq jours
Tabac
Nicotiana tabacum
DP
20/30
4, 14
Lumire
Tomate
Lycopersicon
esculentum
DP ; EP
20/30
5, 14
Lumire ; KNO
Tournesol
Helianthus annuus
EP ; S
20/30 ; 25 ; 20
3, 7
Trfle
dAlexandrie
Trifolium
alexandrinum
DP ; EP
20
3, 7
Trfle blanc
Trifolium repens
DP ; S
20
3, 10

cinq jours
Trfle violet
Trifolium pratense
DP ; EP
20
4, 10

cinq jours
Triticale
Triticosecale
DP ; EP ; S 20
4, 7

cinq jours
Vesce cultive
Vicia sativa
EP ; S
5, 10
20

cinq jours
*DP = dessus du papier, EP = entre papiers, S = Sable

**20/30 = tempratures alternes de 20C applique pendant huit heures par jour et 30C pendant 16 heures.
63
Les semences despces sauvages qui ont des enveloppes dures

peuvent ncessiter une scarification (percer lenveloppe de la
graine avec une lame de rasoir, du papier de verre ou un scalpel
sans abmer lembryon) avant lhumidification ou le semis.
Etape 2 : Raliser le test de germination

Bien que plusieurs mthodes soient disponibles pour tester
la germination, les quatre mthodes dcrites ci-dessous sont
suggres ; elles peuvent tre utilises pour la plupart des espces
et donnent des rsultats uniformes :
1. Mthode dessus du papier
2. Mthode entre les papiers
3. Germination dans le sable
4. Mthode avec agar
Du papier absorbant est utilis comme substrat pour la germination
avec les deux premires mthodes.
La qualit de chaque nouveau

lot de papier doit tre teste
sa rception.
Qualit du papier utilis comme substrat

Il est important dutiliser du papier de haute qualit comme substrat
pour obtenir une germination uniforme et des rsultats reproductibles. Si
possible, le papier doit remplir les spcifications suivantes (ISTA, 2005) :
Le papier utilis comme substrat10 ne doit pas tre toxique pour
les plantules en cours de dveloppement.
Il doit tre capable dabsorber et de fournir suffisamment
dhumidit pour que les semences germent.
Il doit tre suffisamment solide pour ne pas se dsintgrer lors
des manipulations, et ne pas tre pntr par les racines des
plantules qui se dveloppent.
Il doit avoir un pH neutre de 67.
Test simple de qualit du papier
A. Prsence de substances toxiques

1. Couper le papier la bonne taille et le placer dans une bote de
papier de 9 cm.
2. Humidifier le papier avec suffisamment deau.
3. Faire un test en utilisant des semences dune espce sensible
comme lherbe des Bermudes (Cynodon dactylon), le ptunia
(Petunia hybrida) ou le tabac (Nicotiana tabacum) pour observer
la germination sur le papier humidifi.
10
64
Des exemples de substrat standard incluent le papier filtre grain 181 de chez Whatman et les
serviettes en papier non toxique 400PT de Seedburo.
4. Evaluer le dveloppement des racines au bout de cinq jours.

Les symptmes de toxicit du papier incluent des extrmits
de racines raccourcies et dcolores.
B. Force du papier
1. Humidifier le papier et le tenir en lair par un coin.
Le papier ne doit pas se dchirer.
C. Absorption de lhumidit
1. Couper le papier en bandes de 10 mm de largeur.
2. Le tenir verticalement avec environ 20 mm de papier immerg
dans leau.
3. Mesurer la hauteur au dessus du niveau que lhumidit a atteinte.
Le minimum standard est une monte de 30 mm en deux
minutes.
Contrle des champignons lors des tests de germination
Les contaminations fongiques arrivent frquemment lors des tests
de germination, particulirement avec les semences despces
lgumineuses ; elles sont gnralement associes des semences
immatures, endommages ou vieilles. Elles peuvent galement
se produire au cours des prtraitements tels que lextraction des
semences ou rsulter de problmes dhygine dans la zone de test
des semences. Adopter les pratiques de laboratoire ci-dessous
pour minimiser les risques de contamination fongique :
1. Nettoyer et dsinfecter (par une strilisation de surface avec de
lalcool 7095% ou de leau de javel domestique 20%) la
zone de test et les incubateurs entre lots successifs, pour limiter
la dissmination des attaques fongiques ; se laver les mains,
ainsi que les paillasses et lintrieur des incubateurs avec de
leau savonneuse chaude est une technique simple mais efficace
pour rduire les contaminations.
2. Espacer les semences comme il faut et sassurer que les
semences ne se touchent pas entre elles. Utiliser des nombres
plus levs de rplications, si ncessaire.
3. Fournir un environnement de germination optimal, de sorte que
les semences germent rapidement ; le rgime de tempratures
doit tre adapt et lenvironnement de la zone de test doit tre
bien ar.
4. Sassurer de la propret des milieux et des conteneurs utiliss
pour tester la germination ; sassurer quils ne sont pas des
sources dinoculum. Striliser les surfaces des conteneurs en les
frottant avec de lalcool 7095% ou en les trempant dans de
leau de javel 20% ou de leau 55C pendant 1015 minutes.
5. Eviter les dommages causs par limbibition (par une
humidification pralable des semences) qui pourraient conduire
65
une fuite du contenu cellulaire, qui fournit une source dlments

nutritifs aux champignons.
6. Enlever rapidement les semences qui se dtriorent pour viter la
dissmination de champignons vers les semences avoisinantes.
Si la contamination augmente, laver les semences dans de leau
de javel 110% et recommencer le test dans un conteneur
propre avec un nouveau substrat.
7. Enlever les structures qui recouvrent les semences (comme les
glumes) avant les tests, lorsquelles savrent tre des sources
dinfection.
8. Enlever les semences qui ont germ avant la rcolte et qui sont
ensuite dshydrates, car elles peuvent tre source dinfection.
Alors que ces pratiques minimisent le risque de contaminations
fongiques, le traitement des semences avec des fongicides tels
que le Thiram ou le Benlate, ou la strilisation des surfaces
lhypochlorite de sodium rduisent les attaques fongiques pendant
les tests de germination. Cependant, lutilisation de fongicides peut
affecter les rsultats des tests de germination et peut constituer
un danger pour la sant des personnes qui conduisent les tests.
Ils ne doivent tre utiliss que lorsquils sont essentiels, mais sont
extrmement utiles lors du semis au champ ou de la rgnration.
Traitement des semences

1. Ajouter une pince de fongicides dans le conteneur o se
trouvent les semences prpares pour le test de germination.
2. Bien agiter le conteneur de telle sorte que les semences
reoivent un enrobage uniforme de fongicides.
Strilisation de surface
1. Tremper les semences pendant 10 minutes dans une solution
1% dhypochlorite de sodium. La concentration de lhypochlorite
domestique est gnralement de 5%. Ajouter 80 ml deau
distille 20 ml deau de javel pour obtenir une solution 1%.
2. Soigneusement rincer les semences avant le test de germination.
Mthode du dessus du papier

Cette mthode est bien adapte aux espces ayant des semences de
moins de 2 mm de diamtre, comme les lgumineuses petites graines
et les espces fourragres. Les semences sont mises germer sur du
papier absorbant humide dans des conteneurs ayant un couvercle qui
ferme bien, pour viter la perte dhumidit. Les botes de Petri en verre
ou en plastique sont des conteneurs couramment utiliss.
66
1. Striliser les surfaces du conteneur en les frottant avec le lalcool

7095% ou en les trempant dans de leau de javel 20% ou
de leau 55C pendant 1015 minutes.
2. Couper le papier absorbant la taille et la forme du conteneur.
Pour les botes de Petri, on peut utiliser des ronds de papier filtre
comme le Whatmann Grade 181 du diamtre appropri.
3. Placer le papier dans le fonds du conteneur ou de la bote de Petri.
4. Marquer les conteneurs avec le numro daccession, le numro
de rplication et la date de test ; utiliser un stylo ou un marqueur
indlbile pour le marquage.
5. Ajouter le volume requis deau distille. Si lon ne dispose pas
deau distille, de leau du robinet bouillie et refroidie peut tre
utilise. Le volume deau distille dpend de lpaisseur du
papier et de la taille du conteneur. Le papier filtre ne doit pas tre
assez mouill pour quun film deau se forme lorsque lon appuie
dessus avec le doigt. Pour du papier filtre Whatman Grade dans
des botes de Petri de 9 cm de diamtre, il faut 4 ml deau.
6. Appuyer le papier au fond du conteneur en utilisant un entonnoir
lenvers ou des pinces.
7. Etaler les semences de manire uniforme sur la surface du papier,
de telle sorte quelles ne se touchent pas. Il est recommand
que la distance entre les semences soit de trois cinq fois le
diamtre des semences.
8. Couvrir les conteneurs et sassurer quil ny a pas de blocage de
lair rsultant dun excs dhumidit sur les couvercles.
9. Placer les conteneurs dans un germinateur ou un incubateur
maintenu la temprature recommande pour la germination de
lespce (voir Tableau 5.1).
10. Vrifier rgulirement le taux dhumidit du substrat, particulirement
lorsque lhumidit lintrieur des enceintes nest pas contrle ou
que la temprature est rgle 2530C. Les papiers doivent
gnralement tre humidifis plusieurs fois au cours du test.
Autrement, on peut conserver les conteneurs dans un sac en
plastique fin (ferm de manire lche et non scell afin de permettre
la diffusion doxygne) pour viter que le substrat ne sassche.
11. Conduire le test pendant la dure recommande (voir Tableau
5.1) et compter le nombre de semences qui ont germ.
12. Si certaines semences nont pas germ et ont lair dormantes,
les traiter avec les techniques appropries pour stimuler la
germination (voir Tableau 5.1) et continuer le test jusqu ce
que toutes les semences aient germ ou que plus aucune
germination supplmentaire ne se soit produite aprs deux
comptages conscutifs.
13. Noter les semences qui nont pas germ mais qui sont fermes et
saines la fin du premier comptage, ainsi que celles qui nont pas
germ et sont prsumes mortes la fin du test de germination.
67
La Figure 5.1 montre les stades dun test de germination utilisant

des papiers buvard dans des botes de Petri.
La mthode entre les papiers

est bon march et facile
prparer, mais les semences
ne peuvent pas tre observes
sans drouler le papier. Ne
pas faire scher et rutiliser
le papier pour un autre test,
car il peut transmettre une
contamination fongique dun
test lautre.
Mthode entre les papiers

Cette mthode est la plus approprie pour les espces semences
moyennes ou grandes, entre 2 mm et 1 cm de diamtre, qui incluent
de nombreuses crales, les lgumineuses et les lgumes graines.
Les semences sont mises germer entre des couches de papier
humide. Lorsque cest possible, le papier doit suivre les spcifications
dcrites prcdemment (par exemple serviettes en papier non toxique
400 PT de chez Seedburo Equipment Co., papier de germination
normal et lourd de chez Hoffman Manufacturing, Inc. et papier pour
test de semences Grade 3663 de chez Whatman Plc.).
1. Couper le papier la taille adquate pour contenir une rplication
de semences.
2. Marquer le papier une extrmit avec le numro de laccession,
le numro de rplication et la date de test. Utiliser un crayon ou
un feutre indlbile pour le marquage.
3. Humidifier le papier avec de leau.
4. Disposer les semences en ranges intervalles rguliers,
environ 4 cm du bord suprieur, en laissant un espace de 34
cm sur les cts. Idalement, la distance entre les semences
doit tre au moins trois cinq fois celle de leur diamtre.
5. Couvrir les semences avec un autre morceau de papier imbib.
6. Rouler le papier de manire lche du ct oppos au marquage.
7. Utiliser un trombone ou un lastique pour tenir le papier roul et
lempcher de souvrir.
8. Garder les rouleaux verticalement dans une bote en plastique
profonde.
9. Ajouter une quantit suffisante deau dans la bote (qui recouvre
environ 3 cm des rouleaux de papier).
10. Placer la bote dans un incubateur ou un germinateur maintenu
la temprature recommande et mener le test pendant la
priode recommande (voir Tableau 5.1).
11. Garder les papiers humides en les pulvrisant avec de leau
(en utilisant des pulvrisateurs) si ncessaire, particulirement
lorsque la temprature est leve (2530C).
12. Compter les semences germes en droulant le papier avec
prcautions pour viter de le dchirer ou dabmer les racines
des jeunes plantules.
13. Si certaines semences nont pas germ et semblent dormantes,
les traiter avec la technique approprie (voir Tableau 5.1).
Continuer le test jusqu ce que toutes les semences aient
germ ou que plus aucune germination ne se soit produite aprs
deux comptages conscutifs.
68
Figure 5.1. Test de germination des semences sur le

dessus de papiers absorbants dans des botes de Petri.
69
14. Noter les semences qui nont pas germ mais qui sont fermes et
saines la fin du premier comptage, ainsi que celles qui nont pas
germ et sont prsumes mortes la fin du test de germination.
La Figure 5.2 montre les stades de prparation des tests de
germination utilisant des serviettes en papier.
Utiliser du sable n pour les

tests de germination. Du sable
de carrire ou de rivire est
meilleur que du sable de plage
ou de rivage. Si du sable de
rivage doit tre utilis, le laver
soigneusement pour enlever
tous les sels. Le nettoyer en le
pasteurisant ( 180F ou 82C
et 5 psi avec trois cycles dune
heure chacun) avant utilisation.
Germination dans le sable

Cette mthode est la plus approprie pour les grandes semences
(ayant un diamtre de plus d1 cm), qui sont difficiles faire germer
dans des botes de Petri ou trop lourdes pour la mthode entre les
papiers.
1. Mettre du sable strile humide dans des pots ou des botes en
plastique profondes avec drainage. Une seule feuille de papier
peut tre place au fonds des botes pour empcher le sable de
scouler par les trous de drainage.
2. Arroser le sable jusqu quil soit humide. Ne pas mettre deau
en excdent.
3. Faire des trous selon un mode quidistant denviron la mme
profondeur que la taille des semences. Idalement, la distance
entre les semences doit tre dau moins trois cinq fois le
diamtre des semences.
4. Prparer des tiquettes en plastique ou en bois avec le numro
daccession, la date de semis et le numro de rplication et les
placer dans chaque bote.
5. Placer une graine dans chaque trou et recouvrir les trous de sable.
6. Arroser de nouveau le sable par pulvrisation pour sassurer que la
couche de sable nest pas dplace lors de larrosage. Larrosage
par le fond est meilleur que larrosage par le dessus ; il est ralis
en plaant les conteneurs dans lesquels sont raliss les tests sur
de plus grands plateaux avec de leau pendant une heure environ.
7. Placer les botes dans des conditions dclairement et de
temprature adaptes lespce.
8. Conserver le substrat humide pendant les tests en rajoutant de
leau, mais ne pas trop arroser.
9. Effectuer le test pendant la priode recommande pour lespce
et compter le nombre de semences qui ont pouss.
La Figure 5.3 montre les stades dun test de germination dans le
sable.
Mthode avec de lagar

Lagar est un substrat qui peut remplacer le papier, particulirement
pour tester la germination des semences petites et moyennes.
70
Figure 5.2. Test de germination des semences par la mthode entre les papiers.
71
Figure 5.3. Test de germination des semences dans la sable.

72
Lagar se dissout lentement dans leau chaude et forme une solution

visqueuse, qui forme un gel ferme lorsquelle se refroidit.
1. Striliser la surface des conteneurs en les frottant avec de
lalcool 7095% ou en les trempant dans de leau de javel
20% ou de leau 55C pendant 1015 minutes.
2. Marquer des botes de Petri de 9 cm ainsi que leurs couvercles
(pour de petites semences), ou tout autre conteneur de
germination rsistant la chaleur, en indiquant le numro
daccession, le numro de rplication et la date de test.
3. Prparer une solution dagar 1% en dissolvant 1 g dagar en poudre
dans 100 ml deau distille chaude sur une plaque chauffante.
4. Laisser la solution bouillir jusqu ce que lagar soit compltement
dissous, puis laisser refroidir 50C et verser dans les botes de
Petri marques ou les autres conteneurs. Lpaisseur du substrat
doit tre deux fois celle des semences.
5. Disposer les semences de manire quidistante sur la surface de
lagar.
6. Couvrir les botes avec leurs couvercles et les placer dans un
incubateur la temprature recommande pour lespce (voir
Tableau 5.1).
7. Effectuer le test pour la priode recommande (voir Tableau 5.1)
et compter le nombre de semences qui ont germ.
Lagar reste humide jusqu

un mois et est un substrat
particulirement adapt
aux tudes de dormance.
Cependant, il est sensible
aux contaminations par les
bactries et champignons
ariens et des conditions
striles sont requises au
laboratoire lorsque lon utilise
ce substrat.
Etape 3 : Evaluation des tests de germination

1. Les plantules enleves au cours dun test de germination sont
classes comme normales ou anormales (voir Encadr 5.2).
Les plantules normales possdent des structures racinaires
et ariennes adquates, qui sont essentielles pour leur
dveloppement ultrieur en plantes.
Encadr 5.2. Les plantules avec les dfauts suivants sont classes comme anormales
(pour plus de dtails, se rfrer ISTA, 2003, 2005 ou AOSA, 2005).
Racines
Racine primaire chtive, tronque, aplatie, manquante, casse, fendue depuis lextrmit, enferme dans lenveloppe
de la graine, avec un gotropisme ngatif, vitreuse, pourrie cause dune infection primaire ou avec moins de deux
racines secondaires chez les monocotyldones
Tige (hypocotyle, picotyle et msocotyle)
Court et pais, compltement fendu, manquant, resserr, tordu, vitreux ou pourri cause dune infection primaire
Bourgeon terminal/feuilles
Dform, abm, manquant ou pourri cause dune infection primaire
Cotyldons
Gonfls, dforms, ncrotiques, vitreux, spars ou manquants, et pourris cause dune infection primaire
Des exemples de plantules normales et anormales chez le pois, larachide, le bl et loignon sont montrs sur les
Figures 5.4 5.7.
73
plantule anormale
plantule
normale
Figure 5.4. Anomalies chez des plantules de pois.
Les plantules anormales sont incapables dun dveloppement

ultrieur et souffrent de dficiences, de dtriorations ou de
faiblesses dans leurs systmes racinaires ou ariens.
2. Il est important que les tests de germination soient observs
rgulirement et que les plantules normales et les plantules
anormales soient enleves afin de permettre aux autres plantules
de se dvelopper dans un environnement moins confin ; il est
galement important denlever les semences contamines par
des champignons afin dempcher la dissmination de linfection.
Il est dsirable deffectuer un comptage initial de germination au
bout de trois ou sept jours, suivi par un comptage final au bout
74
plantule anormale
plantule
normale
Figure 5.5. Anomalies chez des plantules d'arachide.
de sept ou 14 jours, selon lespce. Certaines espces comme

les herbaces ncessitent une priode de test allant jusqu
21 ou 28 jours, et il est dsirable deffectuer un comptage
intermdiaire au bout de 14 jours. Les procdures dtailles de
germination et les priodes pour le comptage des plantules sont
fournies dans les rgles de lISTA et de lAOSA pour le test des
semences (voir ISTA, 2005 et AOSA, 2005).
3. Enregistrer les informations sur la feuille fournie sur le Tableau 5.2.
4. Enregistrer galement toute plantule anormale ou semence
morte enleve lors du premier comptage ou des comptages
intermdiaires (voir Tableau 5.2) ; ils fournissent une indication
75
Seules les plantules normales

(celles qui dmontrent une
capacit au dveloppement
continu dans des conditions
adaptes) sont considres
comme ayant germ. Les
plantules anormales ne
doivent pas tre considres
comme ayant germ.
plantule anormale
plantule
normale
Figure 5.6. Anomalies chez des plantules de bl.
5.
6.
7.
8.
76
du progrs de la dtrioration des semences, si un bilan ultrieur

est requis.
A la fin du test de germination, compter et enregistrer toutes les
semences non germes et mortes dans chaque rplication.
Calculer le pourcentage moyen de germination de laccession en
utilisant les rsultats de toutes les rplications pour dterminer le
nombre de plantules normales produites.
Rpter le test de germination si la diffrence entre les deux
rplications dpasse 10% ou si la tolrance maximale dpasse
la probabilit de 2,5% (voir Ellis et al., 1985).
Lorsquune semence a germ, la plantule rsultante peut tre
plantule anormale
plantule
normale
Figure 5.7. Anomalies chez des plantules d'oignon.
limine ou transplante pour une rgnration quand le nombre

de semences stockes est extrmement bas.
Pourquoi certaines semences ne germent-elles pas ?

Les semences ne germent pas parce quelles sont mortes ou
dormantes. Gnralement, les semences mortes se ramollissent
et pourrissent pendant le test. Afin de dterminer si les
semences sont mortes ou dormantes, inspecter les semences
non germes avec des pinces pour voir si elles sont molles ou
dures. Les semences chez lesquelles lembryon est ferme sont
potentiellement viables. Un pourcentage lev de ces semences
77
Tableau 5.2. Fiche modle de donnes pour enregistrer les rsultats de germination.
Plante/espce :
Substrat :
Numro daccession :
Temprature :
Numro de rfrence du lot :
Lumire :
Date de stockage :
Traitements spciaux :
Date de test :
Dure dincubation :
Plantules normales
Rplication
II
III
Nombre de semences testes

Date
IV
Total
Remarques
Jour
Total germes
Anormales
Dures/dormantes
Mortes
Germination (%)
indique que les conditions de germination ntaient pas optimales

ou que les semences sont dormantes.
Dormance des semences

La dormance fait rfrence ltat dans lequel des semences
viables ne germent pas, mme dans des conditions normalement
favorables la germination.
Comment dterminer si les semences sont dormantes

Les semences qui restent dures, ou qui absorbent de leau mais
restent fermes et en bon tat au cours des tests de germination
sont probablement dormantes. La dormance des semences est
commune chez les semences frachement rcoltes et chez de
nombreuses espces sauvages apparentes des plantes cultives.
Types de dormance
Dormance due lenveloppe de la semence
Des conditions physiques, chimiques ou mcaniques empchent
labsorption dhumidit. Des exemples de dormance lie
lenveloppe de la semence peuvent tre trouvs dans les familles
des Anacardiaces, des Bursraces, des Cistaces, des Fabaces,
des Graniaces, des Malvaces et des Rhamnaces.
78
Dormance embryonnaire
Des substances inhibitrices, gnralement dans lembryon ou dans
les tissus qui lentourent, empchent la germination. Des exemples
de dormance embryonnaire peuvent tre trouvs dans les familles
des Apiaces, des Iridaces, des Liliaces, des Papavraces et
des Renonculaces.
Chez certaines espces, les embryons de la graine sont sousdvelopps ou pas compltement forms lors de la dispersion
des semences. Chez ces espces, lembryon continue crotre
aprs la dispersion, et la germination est empche jusqu
ce que lembryon atteigne une longueur critique spcifique de
lespce. Des exemples peuvent tre trouvs dans les familles des
Annonaces, des Apiaces, des Orchidaces, des Orobanchaces
et des Renonculaces.
La dormance peut galement tre cause par une combinaison
dimpermabilit de lenveloppe de la semence et de dormance
physiologique de lembryon. Pour que la germination ait lieu, les
deux types de dormance doivent tre levs. Lordre dans lequel
chaque type de dormance doit tre lev dpend de lespce. Des
exemples sont Ceanothus (Rhamnaces), Tilia (Tiliaces) et Rhus
(Anacardiaces).
Comment dterminer le type de dormance

Si le fait davoir enlev lenveloppe de la graine ne conduit pas
la germination, le mcanisme de dormance est localis dans
lembryon lui-mme.
Traitements pour lever la dormance

Chez certaines semences qui sont dormantes la rcolte, la
dormance se lve naturellement avec le temps. Plusieurs mthodes
sont utilises pour des genres spcifiques.
Lever la dormance lie lenveloppe
Trouer ou scarifier lenveloppe de la graine en la perant, en la
coupant, en lbrchant ou en la limant avec un couteau, une aiguille
ou du papier de verre sont les procdures prfres pour lever la
dormance lie lenveloppe.
La scarification manuelle est efficace nimporte quel endroit de
lenveloppe, mais la rgion micropylaire doit tre vite, car cest
la partie la plus sensible de la semence o est situe la radicule
(voir Figure 5.8).
Si les structures qui recouvrent la graine empchent la croissance
de lembryon, les enlever pour permettre la germination.
79
Figure 5.8. Scarfication manuelle de l'enveloppe des semences.
Si lenveloppe de la graine contient des inhibiteurs qui empchent

ou retardent la germination, ils peuvent tre limins en plaant
les graines sous de leau courante pendant plusieurs heures ou
en trempant les semences dans un grand volume deau qui est
change toutes les six 12 heures.
LISTA recommande galement dutiliser de lacide sulfurique
concentr pendant 245 minutes pour scarifier lenveloppe des
graines. Cependant, cette mthode est coteuse et dangereuse
et doit tre applique avec prcautions.
Afin denlever la cuticule cireuse et de permettre limbibition,
placer les semences dans de leau 75C pendant trois six
minutes. Il faut faire attention ne pas utiliser des tempratures
leves pendant de longues priodes ou ne pas faire bouillir
les semences.
Lever la dormance embryonnaire

Il existe plusieurs traitements recommands pour lever la dormance
embryonnaire (voir Tableau 5.1). Ceux-ci incluent le pr-chilling
(galement appel stratification au froid) pour les espces tempres
et tropicales daltitude leve, le prchauffage, lapplication dacide
gibbrellique (GA3) faible concentration, lajout de nitrate de
potassium (KNO3) au substrat et la lumire.
Pr-chilling (stratification au froid)

Les semences sont places dans des conteneurs sur un substrat de
germination humide et gardes entre 3 et 5C dans un rfrigrateur
80
pendant sept jours. Pour des semences plus dormantes, le traitement

peut tre allong jusqu 14 jours. Une fois que la stratification est
termine, les conteneurs sont replacs dans des incubateurs et les
semences sont mises germer dans les conditions recommandes.
Prchauffage
Les semences sont traites une temprature ne dpassant pas
40C pendant jusqu sept jours, avec une circulation de lair libre
avant germination dans les conditions recommandes.
Acide gibbrellique
Du papier pour test de germination est humidifi avec une solution
dacide gibbrellique (GA3) 0,05%, prpare en dissolvant 500 mg
de GA3 dans 1 l deau. La germination est ensuite poursuivie dans
les conditions recommandes.
Nitrate de potassium
Une solution de nitrate de potassium (KNO3) 0,2%, prpare en
dissolvant 2 g de KNO3 dans 1 l deau, est utilise pour humidifier le
papier de germination au dbut du test. La germination est ensuite
poursuivie dans les conditions recommandes.
Lumire
La lumire peut tre ou ne pas tre requise pour la germination,
en fonction de lespce. Lorsque lon utilise des tempratures
constantes pour la germination despces chez lesquelles la lumire
est ncessaire, les tests doivent tre raliss avec de la lumire
pendant au moins huit heures par cycle de 24 heures. Lorsque des
tempratures alternes sont utilises, toute application ncessaire
de lumire doit concider avec le cycle de temprature leve.
Lintensit lumineuse doit tre de 7501250 lux, fournie par des
lampes blanches froides.
Nombre des mthodes dcrites ci-dessus sont spcifiques de
genres. Les traitements de leve de dormance recommands pour
les espces cultives communes sont donns dans le Tableau
5.1. Pour des informations sur dautres espces, se rfrer Ellis
et al. (1985).
Algorithme pour dvelopper des procdures de tests de
germination adaptes pour des espces pour lesquelles
aucune information nest disponible
Etape 1
Dterminer si les enveloppes de la graine sont impermables

en vrifiant limbibition de semences places une nuit sur du
81
papier filtre imbib. Si les semences nont pas absorb deau,

scarifier les enveloppes de la graine et observer aprs 12
heures supplmentaires. Procder la germination lorsque les
semences se sont imbibes deau.
Etape 2
Si la premire tape ne produit pas une germination complte

et si les accessions sont dorigine tempre, faire le test des
tempratures constantes de 15C et 20C. Pour des accessions
dorigine tropicale, utiliser des tempratures constantes de 20C
et 25C.
Si lorigine des accessions est inconnue ou douteuse, tester
15, 20 et 25C.
Dans tous les cas, appliquer de la lumire pendant 12 heures
sur 24.
Etape 3
Si la deuxime tape na pas conduit une germination

complte, tester un chantillon de semences supplmentaire
avec des tempratures alternes, 25/10C (12 heures et 12
heures) pour les accessions dorigine tempre et 35/20C (12
heures et 12 heures) pour les accessions dorigine tropicale.
Si lon applique de la lumire raison de 12 heures par jour, cela
doit concider avec le cycle de temprature leve.
Si lorigine de laccession est inconnue ou douteuse, tester un
chantillon de semences chaque temprature.
Etape 4
Si la troisime tape na pas conduit une germination complte,

ajouter 0,1 0,2% de nitrate de potassium (KNO3) au substrat
utilis pour le test avec le rgime de tempratures qui donne les
meilleurs rsultats aux tapes 2 et 3.
Etape 5
Si la quatrime tape na pas conduit une germination

complte, stratifier les semences 2C 6C pendant huit
semaines et tester la germination dans les meilleures conditions
dtermines au cours des tapes deux quatre.
Etape 6
82
Si la germination complte nest pas obtenue, estimer la viabilit

en utilisant le test au ttrazolium dcrit ci-dessous. Les rsultats
de ce test indiqueront si limpossibilit dobtenir une germination
complte est due la prsence de semences mortes.
Si le test au ttrazolium indique que la dormance nest pas leve
et que les semences sont viables, essayer dautres traitements
pour lever la dormance, comme lacide gibbrellique (GA3) ou le

prchauffage 40C pendant trois sept jours.
Test de viabilit des semences au ttrazolium
Le test au ttrazolium peut tre utilis comme une procdure de
secours pour identifier des semences viables mais dormantes, qui
nont pas germ la fin dun test de germination. La procdure pour
raliser ce test est indique ci-dessous.
Prconditionnement
1. Enlever les structures qui recouvrent les graines (glumes, etc.).
2. Prconditionner les semences en les trempant dans leau ou en
les plaant en milieu humide 30C. Aucun prconditionnement
nest ncessaire quand des semences non germes sont
values la fin dun test de germination.
Prparation de la solution de chlorure de ttrazolium

La solution de ttrazolium doit avoir un pH compris entre 6 et 8
pour obtenir les meilleurs rsultats. Pour prparer 1 litre de solution
tamponne de chlorure de ttrazolium :
1. Dissoudre 3,631 g de phosphate de potassium di-hydrogn
(KH2PO4) dans 400 ml deau distille.
2. Dissoudre 7,126 g de phosphate dhydrogne disod
(Na2HPO4.2H2O) dans 600 ml deau distille.
3. Mlanger les deux solutions pour prparer le tampon.
4. Dissoudre 10 g de 2,3,5,-chlorure de triphnyl ttrazolium dans
1 litre de solution tampon.
Pour obtenir une solution de ttrazolium 0,5%, mlanger une
partie de la solution stock avec une partie deau distille. Le chlorure
de ttrazolium doit tre stock lobscurit et au froid pour de
courtes dures.
Coloration
1. Couper en deux les semences longitudinalement en passant par
lembryon avec une lame de rasoir.
2. Jeter une moiti de chaque semence et placer lautre moiti
dans la solution de coloration la concentration recommande
(voir Tableau 5.3) dans un rcipient en verre.
3. Placer les rcipients dans un incubateur dans une zone obscure
la temprature et pour la dure recommandes pour chaque
espce (voir Tableau 5.3).
4. Aprs la coloration, laver les semences plusieurs fois dans de
leau distille pour enlever lexcs de colorant.
83
Le test au ttrazolium nest

pas un test absolu de viabilit
des semences. Pour gagner
en crdibilit, le test doit tre
compar avec les rsultats
des tests de germination pour
chaque espce.
Tableau 5.3. Concentration, tempratures et dure de coloration au chlorure de ttrazolium (pour les plantes de
lAnnexe I du Trait international sur les PGRFA).
Plante
Espce
Prconditionnement
Coloration
Aubergine
Solanum melongena
Imbiber ou imprgner, 18h
0,51%, 624h, 30C
Betterave
Beta vulgaris
1%, 2448h, 30C
Bl
Triticum aestivum
0,5%, 24h, 30C
Choux
Brassica spp.
0,51%, 36h, 30C
Eleusine
Eleusine corocana
Imprgner, 18h, 5C
0,5%, 3h, 30C
Fve
Vicia faba
Imprgner, 22h
0,51%, 1624h, 30C
Haricots
Phaseolus spp.
Imbiber 1824h, puis imprgner, 23h
0,51%, 624h, 30C
Lentille
Lens culinaris
Imbiber, 18h, puis imprgner, 23h
1%, 624h, 30C
Mas
Zea mays
0,51%, 26h, 30C
Mil
Pennisetum glaucum
0,51%, 624h, 30C
Nib
Vigna unguiculata
Imprgner, 22h
0,51%, 1624h, 30C
Orge
Hordeum vulgare
0,5%, 3h, 30C
Pois-chiche
Cicer arietinum
1%, 624h, 30C
Pois
Pisum sativum
Imbiber 1824h, puis imprgner, 23h
0,51%, 624h, 30C
Riz
Oryza sativa
0,5%, 3h, 30C
Seigle
Secale cereale
0,5%, 23h, 30C
Sorgho
Sorghum bicolor
Imbiber, 16h, 30C
0,51%, 0.51h, 40C
Tournesol
Helianthus annuus
0,51%, 36, 30C
Triticale
Triticosecale
0,5%, 24h, 30C
5. Immerger les semences dans une solution de lactophnol (1 litre

de lactophnol prpar partir de 200 ml de phnol, 200 ml
dacide lactique, 400 ml de glycrine et 200 ml deau) pendant
une deux heures avant dvaluer les semences.
6. Evaluer les semences pour leur mode de coloration sous un
microscope binoculaire faible grossissement ; les tissus
viables sont colors en rouge vif. Des taches roses et rouge trs
fonc indiquent des tissus morts.
7. Classer les semences en trois catgories selon leur mode de
coloration :
les semences compltement colores qui sont viables ;
les semences qui ne sont pas du tout colores qui ne sont
pas viables ;
les semences partiellement colores qui produiront soit des
plantules normales, soit des plantules anormales, selon
lintensit et le mode de coloration (voir ISTA 2005 pour plus
dinformations).
Les Figures 5.9 et 5.10 montrent respectivement des patterns de
coloration au ttrazolium chez des semences de dicotyldones et
de monocotyldones.
84
10
11
12
13
14
15
Figure 5.9. Pattern de coloration aprs un test au ttrazolium chez

des semences de dicotyldones. Les numros 16 correspondent
des semences qui peuvent germer et les numros 715 des
semences qui ne peuvent pas germer (adapt de AOSA, 2005).
Documentation
Il est crucial de documenter les donnes de viabilit pour la
gestion efficace des collections de matriel gntique, puisque
cela permet au personnel des banques de gnes de prendre des
dcisions informes sur lopportunit de rgnrer du matriel
(voir Chapitre 8). Les descripteurs suggrs pour documenter
les informations au niveau dune accession sur le test de viabilit
(germination) incluent les points suivants :
Nombre de semences testes par rplication
Nombre de rplications
Mthode de test de germination employe
Date du test de germination
Dure du test (ou jour du premier et du dernier comptage)
Nombre de graines germes au premier comptage
Graines dormantes/dures au premier comptage (%)
Traitements spciaux de leve de dormance (si employs)
Germination finale (% de plantules normales)
Germination anormale (%)
Semences mortes (%)
Niveaux de tolrance pour lexactitude statistique
85
Figure 5.10. Pattern de coloration aprs un test au ttrazolium

chez des semences de monocotyldones. Les numros
14 correspondent des semences qui peuvent germer et
les numros 59 des semences qui ne peuvent pas germer
(adapt de AOSA, 2005).
Association of Official Seed Analysts. 2005. Rules for testing seeds.
Association of Official Seed Analysts, USA.
Baskin, C. C. et Baskin, J. M. (1998) Seeds: Ecology, Biogeography
and Evolution of Dormancy and Germination. Academic Press, San
Diego, USA.
Ellis, R.H., Hong, T.D et Roberts, E.H. 1985. Handbook of seed
technology for genebanks. Volume 1: Principles and methodology.
Handbooks for Genebanks. No. 2. IBPGR, Rome, Italie.
FAO/IPGRI, 1994. Genebank standards. FAO and IPGRI, Rome, Italie.
ISTA. 2003. ISTA Handbook for Seedling Evaluation. International Seed
Testing Association, Basserdorf, Suisse.
International Seed Testing Association, Basserdorf, Suisse.
86
Smith, R.D., Dickie, J.B., Linington, S.H., Pritchard, H.W et Probert, J.R.
(eds.). 2003. Seed conservation: Turning science into practice. Royal
Botanic Gardens, Kew, GB.
5.2 Test de ltat sanitaire des semences

Quest-ce que ltat sanitaire des semences ?
Ltat sanitaire se rfre ltat des maladies dun chantillon
de semences et la prsence ou labsence dorganismes et de
ravageurs causant des maladies.
Quest-ce que le test de ltat sanitaire des semences ?

Les tests de ltat sanitaire des semences dterminent le statut dun
chantillon de semences, dun lot de semences ou dune accession
en ce qui concerne les maladies qui affectent cette plante cultive
ou cette espce sauvage.
Pourquoi est-il important de tester ltat sanitaire des

semences ?
Les plantes cultives sont souvent infectes par une gamme de
pathognes communs transmis par les semences qui peuvent ne pas
tre visibles ou facilement reconnus lors de la collecte des semences.
Les inoculums transmis par les semences rduisent la longvit
au stockage et causent une faible germination ou un mauvais
tablissement au champ. Les inoculums transmis par les semences
stimulent galement les maladies au champ, rduisant ainsi la
valeur des plantes cultives. Lchange de semences infectes peut
galement permettre la dissmination de maladies et de ravageurs
dans de nouvelles rgions. Les banques de gnes doivent sassurer
que les semences prpares pour la conservation sont exemptes de
maladies et ravageurs transmis par les semences.
Ravageurs et pathognes communs transmis par les

semences
Il y a quatre groupes principaux dorganismes communs qui sont
transports dans les semences et qui affectent une large gamme de
plantes cultives:
Champignons
Bactries
Virus
Insectes
Les mthodes spcifiques pour dtecter les pathognes varient
selon lorganisme et lhte, et des mthodes spcifiques sont
ncessaires pour une identification prcise de la plupart des
pathognes.
87
Mthodes de dtection des ravageurs et pathognes

Standard de ltat sanitaire des semences
Examiner un chantillon reprsentatif de semences pour rechercher
la prsence de pathognes en utilisant une ou plus des mthodes
ci-dessous. Habituellement, un chantillon de 400 semences en
rplications de 100 semences chacune est pris pour lexamen. La taille
de lchantillon peut tre diminue pour les petits lots de semences.
Si le pourcentage de semences infectes est suprieur 5%, le lot de
semences peut tre considr comme impropre la conservation.
Examen visuel
La mthode la plus simple pour dtecter les maladies et ravageurs est
dexaminer des semences sches lil nu ou sous un microscope
faible grossissement. Cette mthode met en vidence les insectes
qui se meuvent librement, les ufs, les acariens, les fructifications
fongiques comme les sclrotes, les galles, les boules de charbon,
les masses bactriennes et les dbris vgtaux infects. Lexamen
des semences sches la lumire ultra-violette ou proche de lultraviolet rvle les infections par certains champignons et bactries par
lmission de fluorescence.
Evaluation des semences

Les semences doivent tre plantes dans du sol strilis en serre.
Les plantules doivent tre observes immdiatement aprs la
germination et toute plante montrant des symptmes ressemblant
ceux dune contamination virale, tels que la marbrure des feuilles, la
dfoliation ou le jaunissement, doivent faire lobjet dun prlvement
et tre testes pour les virus (voir ci-dessous). Les plantules
infectes par des bactries ou des champignons peuvent mourir et
doivent tre examines par la suite au laboratoire, et les chantillons
doivent tre tals sur plaques pour lidentification du pathogne
(voir ci-dessous).
Si une infection est suspecte mais quaucun symptme na t
observ aprs que la deuxime vraie feuille a merg, il peut tre
ncessaire de raliser des tests srologiques pour des infections
latentes ou asymptomatiques par des virus. La plupart des virus
des lgumineuses expriment des symptmes manifestes au stade
plantule.
Technique de lavage des semences

Cette technique est utile pour tester des champignons contaminants
transmis par les semences comme les charbons, les caries, les
odiums et les rouilles.
88
1. Placer 2 g de lchantillon de semences dans un tube essai,

ajouter 2 ml deau strile et bien mlanger pendant cinq dix
minutes.
2. Centrifuger la solution surnageante 200 rpm pendant dix
minutes et observer les sdiments sous un microscope pour
dtecter la prsence de structures fongiques.
Mthodes dincubation
Les mthodes du buvard et de la plaque dagar sont des moyens
simples et peu coteux de dtecter les champignons transmis par
les semences qui rpondent la sporulation.
Test du buvard
Les tests du buvard sont similaires aux tests de germination, dans la
mesure o les semences sont places sur des couches humidifies
de papier absorbant et incubes dans des conditions qui stimulent
la croissance des champignons.
1. Placer au fond de botes de Petri strilises trois couches de
papier absorbant humidifi avec de leau strile.
2. Enlever leau en excs et placer la main ou avec des pinces
2025 semences.
3. Placer les semences rgulirement pour viter quelles soient en
contact.
4. Incuber les semences sous une lumire proche de lultraviolet en alternant des cycles de 12 heures dobscurit/lumire
pendant 7 jours 202C.
5. Examiner les botes de Petri avec un stromicroscope pour
rechercher des champignons se dveloppant sur les semences.
La croissance profuse des plantules peut rendre linterprtation
difficile. Cela peut tre vit en ajoutant du sel de sodium de 2,4-D
pour fournir une solution de pulvrisation 2%.
Mthode de la plaque dagar

Cest la mthode la plus communment utilise pour identifier
les champignons transmis par les semences. Des champignons
diffrents et mme des souches diffrentes des mmes champignons
requirent des milieux de croissance et de sporulation diffrents. La
lumire proche de lultra-violet, dune longueur donde de 300380
nm (galement appele lumire noire) peut tre ncessaire. Les
milieux simples incluent une combinaison de lgumes, de sources
dhydrates de carbone ou de sucre et de lagar et peuvent tre
confectionns en mlangeant des lgumes bouillis et crass
avec de lagar quand des mlanges commerciaux ne sont pas
89
disponibles. Les milieux les plus couramment utiliss sont lagar

avec pomme de terre et dextrose/saccharose et lagar farine
davoine.
1. Prparer le milieu en mlangeant 1 g de poudre de pomme de
terre dextrose agar dans 100 ml deau distille.
2. Striliser le mlange lautoclave pendant 1520 minutes et
laisser refroidir jusqu 50C.
3. Verser avec prcautions le mlange dans des botes de Petri
striles, en soulevant le couvercle seulement pour verser le
mlange afin dviter les contaminations.
4. Laisser le milieu refroidir et solidifier pendant 20 minutes.
5. Dsinfecter les semences en surface en les prtraitant pendant
une minute dans une solution 1% dhypochlorite de sodium
(NaOCl) prpare en diluant 20 parties deau de javel domestique
avec 80 parties deau.
6. Placer environ dix semences (selon leur taille) sur la surface avec
des pinces.
7. Incuber les botes de Petri 2025C pendant cinq huit jours.
8. Identifier les pathognes transmis par les semences sur la base
des caractristiques des colonies et des spores.
Des colonies bactriennes se dveloppent parfois sur lagar et
inhibent la croissance des champignons, rendant lidentification
difficile. Ceci peut tre surmont en ajoutant un antibiotique comme
la streptomycine (500 ppm) au milieu agar autoclav, aprs quil ait
refroidi jusqu 5055C.
Mthode de la raction en chane par polymrase (PCR)

La PCR est une raction in vitro pour amplifier de manire
exponentielle une petite quantit dune squence de nuclotides
spcifique en prsence dune squence modle avec deux amorces
doligonuclotides qui shybrident aux brins opposs et flanquent la
rgion dintrt dans lADN cible. La raction est cycle, incluant la
dnaturation du modle, lannellation des amorces et lextension des
amorces anneles par lADN polymrase, jusqu ce quun nombre
suffisant de copies soient faites pour lanalyse ultrieure. La PCR
peut permettre la dtection de trs petites quantits dun pathogne
dans un chantillon, en amplifiant les squences du pathogne
jusqu un niveau dtectable. La PCR est particulirement utile
pour dtecter les maladies cause de sa vitesse et de sa prcision,
mais cest une technique coteuse ; elle peut tre utilise pour
dtecter tout organisme qui a de lADN en utilisant des tmoins
positifs et ngatifs pour la comparaison. Une fois que la squence
de lorganisme est connue, des amorces spcifiques peuvent tre
faites pour dtecter des souches de pathognes.
90
Les tests dhybridation des acides nucliques (appels southern

et northern blot), dans lesquels lADN ou lARN est transfr dun
gel dlectrophorse sur une membrane puis les acides nucliques
sont dtects avec une amorce marque, peuvent galement tre
utiliss. La technique dhybridation de spots dacides nucliques
(NASH), dans laquelle un pathogne lADN marqu shybride
directement avec lADN du pathogne immobilis sur une
membrane en nylon, peut galement tre utilise sans passer par
le stade de la PCR. Ces techniques sont constamment raffines et
de nouvelles procdures deviennent disponibles pour la dtection
de pathognes spcifiques. Pour plus dinformations, se rfrer
Albrechtsen (2005).
Mthodes srologiques et autres mthodes

Essai dimmuno absorption enzymatique (ELISA)
Le test ELISA est une mthode de diagnostic qui utilise des protines
appeles anticorps pour dtecter les pathognes des vgtaux. Ce
test est bas sur la capacit dun anticorps reconnatre et se lier
un antigne spcifique, une substance associe un pathogne
des vgtaux. Les anticorps utiliss dans les diagnostics sont des
protines hautement purifies, produites en injectant un animal
sang chaud (comme un lapin) un antigne associ une maladie
des plantes particulire. Lanimal ragit lantigne et produit
des anticorps, qui reconnaissent et ragissent seulement avec les
protines associes lagent causal de cette maladie des plantes.
Des changements de couleur sur la surface de lunit indiquent une
raction positive (maladie prsente).
Il y a de nombreux types diffrents dELISA qui peuvent dtecter
la prsence dune protine. Une description dtaille de ces
tests est hors du cadre de cette publication et les personnels des
banques de gnes sont invits se rfrer Albrechtsen (2005).
Cependant, les procdures gnrales des deux mthodes les plus
communes, plaque recouverte dantigne (ACPELISA) et immuno
essai dempreinte de tissus (TBIA), sont donnes en Annexe II. Pour
plus de dtails, se rfrer Lin et al. (1990).
Mthode des plantes indicatrices

Cette mthode est particulirement utile pour dtecter les bactries
et les virus. Des extraits de semences sont prpars et inoculs
sur une plante indicatrice comme le tabac. Les pathognes sont
identifis en se basant sur les symptmes qui se dveloppent. Les
plantes indicatrices peuvent galement tre utilises pour sparer
diffrents virus au moyen dune spcificit virus-hte.
91
Documentation
Les descripteurs suggrs pour documenter les informations au
niveau dune accession sur ltat sanitaire des semences incluent
les points suivants :
Source du matriel utilis pour le test
Type de matriel (feuille, racine, tige, semence)
Nombre de plantes chantillonnes et testes par rplication
Organismes tests
Mthode de test
Date du test
Dure du test, si appropri
Maladies identifies
Incidence de chaque maladie (%)
Albrechtsen, S.E. 2005. Testing methods for seed-transmitted viruses:
Principles and protocols. Oxford University Press, Oxford, GB.
International Seed Testing Association, Bassersdorf, Switzerland.
Lin, N.S., Hsu, Y.H. et Hsu, H.T. 1990. Immunological detection of plant
viruses and mycoplasm-like organisms by direct-tissue blotting in
nitrocellulose membranes. Phytopathology, 80: 824828.
5.3 Test des semences pour lintroduction

par inadvertance de transgnes
Que sont les transgnes?
Les transgnes sont des gnes qui sont introduits dans un autre
organisme ou une autre espce au moyen de techniques dADN
recombinant. Les plantes transgniques portent des transgnes
dans leur gnome et les transmettent leur descendance par la
reproduction normale.
Pourquoi dterminer la prsence dun gne/transgne?

Lun des composants les plus importants de la bonne gestion dune
banque de gnes est de raliser des tests de la prsence dun gne
ou dun phnotype. Ceci est dune importance critique pour les
exigences phytosanitaires, mais cela devient galement important
pour la dtection des transgnes. Il y a tout un nombre de raisons
pour lesquelles il est important de dtecter la prsence dun gne/
transgne dans une accession dune banque de gnes. Bien que la
liste ne soit pas exhaustive, ces raisons incluent :
des questions rglementaires, particulirement lies aux aspects
phytosanitaires et la bioscurit, o le pays importateur, et
92
potentiellement le pays exportateur, a besoin que lon fasse tat

de la prsence de tels gnes ;
des situations dans lesquelles la prsence dun tel gne/
transgne peut affecter les droits de proprit intellectuelle, soit
dans le pays o est situe la banque de gnes, soit dans un pays
vers lequel laccession va tre envoye ;
des questions sociales qui ncessitent que lidentit gntique
soit dclare ou que certains gnes/transgnes soient limits.
Quand doit-on dtecter la prsence dun gne/transgne?

Il est gnralement accept comme tant mal avis pour des
plantes cultives contenant des transgnes dtre incorpores dans
des collections de matriel gntique. Le risque dune inclusion par
inadvertance peut tre classifi comme suit :
Forte probabilit : plantes typiquement allogames avec des
apparentes sexuellement compatibles sur lesquelles des
recherches tendues au champ ou une distribution commerciale
sont en cours.
Faible probabilit : typiquement des plantes qui sont fortement
auto-pollinisatrices, multiplies vgtativement ou des plantes
cultives pour lesquelles lingnierie gntique na pas encore
t ralise ou en est ses tout premiers stades.
Probabilit moyenne : le reste des plantes cultives.
Attention immdiate : des plantes cultives avec des transgnes
qui sont dj distribues commercialement.
Attention dans un futur proche : un travail exprimental en
champ est en cours ou attendu dici un trois ans.
Attention pour le long terme : plantes cultives pour lesquelles
aucun travail significatif na t ralis au champ.
Les banques de gnes doivent prendre des mesures proactives
pour limiter de risque de gnes exotiques, incluant les transgnes,
dans leurs collections ex situ. Les accessions qui ne requirent pas
de tests incluent :
les espces chez lesquelles aucun vnement transgnique
(commercial ou de recherche) ne sest produit ;
les accessions pour lesquelles aucun transgne commercial
ntait prsent au moment de lacquisition (comme le mas avant
1996) ou pour lesquelles aucun organisme transgnique ntait
prsent prs du site de collecte ;
les accessions pour lesquelles il y a eu des vnements
transgniques, mais pour lesquelles de bonnes pratiques de
gestion ont t suivies dans le processus daccession.
En 2004, le Genetic Resources Policy Committee (GRPC) et le
Science Council du GCRAI ont organis un atelier technique
93
pour explorer les voies et les moyens de grer la presence non

intentionnelle de transgnes dans des collections de materiel
gntique, avec lobjectif de fournir des contributions dans un
processus qui permettrait aux banques de gnes des Centres
GCRAI dtablir des procdures visant empcher lintrogression
non intentionnelle de transgnes dans les collections. Suite cet
atelier, un principe conducteur a t prpar et adopt par le GRPC.
Pour plus dinformations sur ce sujet, consulter la section politique
du site Web de Bioversity, http://www.bioversityinternational.
org/About_us/Policies_and_Ethics/index.asp (dernire visite le 20
decembre 2006). Ces principes conducteurs ont galement t pris
en considration lors de la troisime session du Groupe de travail
technique intergouvernemental sur les ressources phytogntiques
pour lalimentation et lagriculture, qui sest tenu la FAO,
Rome, du 26 au 28 octobre 2005. De plus amples informations sur
cette runion sont disponibles sur le site Web de la Commission,
http://www.fao.org/waicent/FaoInfo/Agricult/AGP/AGPS/pgr/
ITWG3rd/docsp1.htm.
Procdures pour empcher le ux de gnes non

intentionnel partir dorganismes gntiquement
modis (OGM)
Les transgnes et les gnes conventionnels sont sujets aux
processus biologiques de mutation, de flux de gnes, dintrogression,
de recombinaison et de slection naturelle. Les meilleurs pratiques
pour empcher lintrogression des gnes conventionnels fournissent
donc galement une base approprie pour empcher lintrogression
de transgnes.
Le matriel gntique est soumis au maximum de risques lors de
la rgnration (voir Chapitre 8) et le contrle des flux de gnes est
essentiel pour assurer lintgrit gntique. Pour rduire le risque
chez les plantes cultives chez lesquelles des transgnes font
communment partie des nouveaux cultivars, il est recommand
deffectuer la rgnration en isolement de toute zone o des
plantes transgniques ont des chances dtre cultives.
Les informations sur le statut transgnique des plantes cultives
sont essentielles pour dterminer quelles mesures, sil y en a, sont
ncessaires pour confirmer que le matriel gntique est exempt de
transgnes. Il est recommand que :
tous les rsultats soient rendus publiquement disponibles ds
quils ont t confirms ;
toutes les procdures et les informations associes soient
prsentes ;
94
les autorits appropries dans le pays dorigine soient informes

dans les cas o des transgnes sont dtects ;
pour les plantes cultives gntiquement modifies distribues
commercialement et les plantes en dveloppement exprimental,
les banques de gnes maintiennent une base de donnes des
plantes cultives et de leur statut vis--vis de la recherche
transgnique.
Une fois quil a t dtermin quune accession na pas besoin

dtre teste ou quelle a t teste ngative, suivre les procdures
de rgnration et de maintenance appropries pour conserver
lintgrit gntique, comme pour toutes les accessions.
Procdures pour tester la prsence dOGM

Les deux mthodes de base pour dtecter la prsence dun
gne/transgne sont le test ELISA et lamplification par PCR.
Ces deux mthodes ont dj t dcrites et elles sont robustes,
bien que chacune prsente des avantages et des dsavantages.
Par exemple, le test ELISA dtecte la prsence du produit dun
gne (protine) et ncessite donc un gne exprim. Des kits de
tests sont disponibles dans le commerce pour la plupart des
vnements commerciaux qui peuvent tre utiliss en champ.
Dun autre ct, la PCR peut dtecter des squences de gnes
qui ne sexpriment pas, dans pratiquement tous les tissus, mais
ce test est plus difficile raliser et nest donc pas pratique pour
une mise en uvre au champ. Dans la plupart des cas, la dtection
dun rsultat positif utilisant une mthode doit tre confirme
avec une seconde mthode. Si les matriels sont utiliss au
niveau molculaire pour leur empreinte ou des tudes de diversit
gntique, un test additionnel pour la prsence dun transgne
peut tre ralis avec un cot minimal.
Les gnes/transgnes qui doivent tre utiliss dans de tels tests
incluent les vnements majeurs qui sont commercialiss lheure
actuelle pour lespce. Ils peuvent normalement tre trouvs sur
Internet et sont indiqus dans les tests fournis par les services
commerciaux de tests (soit comme kits ELISA ou services PCR).
Ils vont changer au fur et mesure que de nouveaux vnements
transgniques sont introduits sur le march ou que des vnements
deviennent obsoltes, bien que le besoin de tester puisse continuer
pendant un certain temps. Le nombre de semences dans toute
accession peut limiter le niveau de dtection. De plus amples
informations et un guidage technique sur lchantillonnage et la
dtection dOGM peuvent tre trouvs sur : www.europa.eu.int/
comm/environment/biotechnology/pdf/recom2004_787.pdf.
95
Une liste mise jour des mthodes valides est galement

disponible sur http://biotech.jrc.it.
Documentation
Les descripteurs suggrs pour documenter les informations au
niveau dune accession sur la prsence de transgnes incluent les
points suivants :
Source du matriel pour le test
Type de matriel (feuille, plantule, semence)
Nombre de plantes chantillonnes et testes par rplication
Transgnes tests
Mthode de test
Date du test
Dure du test, si appropri
Transgnes identifis
Incidence de chaque transgne (%)
96
6. Empaquetage et stockage
1. Introduction
2. Acquisition et
enregistrement du
matriel gntique
2.1 Acquisition du
matriel gntique
matriel gntique
et dshydratation
4.1 Dtermination du
taux d'humidit
semences
des semences
des semences
des semences
pour l'introduction
par inadvertance
de transgnes
6. Empaquetage et
6.1 Empaquetage des
semences
6.2 Stockage des
semences
gntique
du matriel gntique
gntique
8.2 Rgnration du
matriel gntique
6. EMPAQUETAGE ET
STOCKAGE DES SEMENCES
6.1 Empaquetage des
semences
Quentend-t-on par empaquetage des
semences ?
Lempaquetage des semences consiste
placer un chantillon de semences compt ou
pes dans un conteneur qui est alors ferm
hermtiquement pour stockage ultrieur (voir
Diagramme de flux 6.1).
Pourquoi les semences sont-elles

empaquetes ?
Les semences sont empaquetes pour :
empcher labsorption deau de latmosphre
aprs la dshydratation ;
garder les accessions spares et viter de
les mlanger ;
empcher les contaminations par les insectes
et les maladies.
Quand doit-on empaqueter les semences ?

Le meilleur moment pour empaqueter les
semences est immdiatement aprs quon ait
dtermin que le taux dhumidit est dans les
limites requises pour un stockage en scurit. Les
semences sches vont rabsorber de lhumidit de
lair ambiant, plus humide. Les semences doivent
donc tre empaquetes sans retard dans des
conteneurs tanches et scells hermtiquement,
aprs quon les ait sorties de la chambre ou de
lenceinte de dshydratation.
Types de conteneurs
Diffrents types de conteneurs existent pour
lempaquetage ; le choix dpend des conditions
de stockage et de lespce. Il est important
que le matriel demballage soit compltement
impermable leau et quil soit adapt lutilisation
long terme. Les conteneurs frquemment utiliss
comprennent des bouteilles en verre, des botes en
aluminium, des sachets en aluminium plastifi et
des bouteilles en plastique.
97
Diagramme de ux 6.1. Empaquetage des semences.

VERIFIER VISUELLEMENT LES CONTENEURS
Le conteneur
est-il en dessous des
standards ?
OUI
LE JETER
NON
PREPARER DES ETIQUETTES POUR L'INTERIEUR ET L'EXTERIEUR
PESER LES ECHANTILLONS DE SEMENCES POUR REMPLIR LES CONTENEURS
VERIFIER SI L'ACCESSION DOIT ETRE PLACEE DANS PLUS D'UN CONTENEUR
L'accession
sera-t-elle place dans un
seul conteneur ?
NON
NON IMPRIMER
LES ETIQUETTES
SUPPLEMENTAIRES
NECESSAIRES
OUI
ETIQUETER LES CONTENEURS
REMPLIR LES CONTENEURS ET RAJOUTER L'ETIQUETTE A L'INTERIEUR
VERIFIER VISUELLEMENT SI CHAQUE CONTENEUR EST CORRECTEMENT SCELLE
Le conteneur
a-t-il une fuite ?
OUI
NON
PLACER LE CONTENEUR DANS LA SALLE DE STOCKAGE
ENREGISTRER LES DONNEES

POUR CHAQUE ACCESSION
98
Les diffrents types de conteneurs ont chacun leurs avantages et

dsavantages. Les bouteilles de verre sont bonnes mais peuvent se
casser facilement. Les botes en aluminium sont difficiles resceller une
fois quelles ont t ouvertes. Les sachets en aluminium peuvent tre
rescells et occupent moins de place que les autres conteneurs, mais
les semences pointues peuvent les percer et lhumidit peut sinfiltrer
lintrieur. Les bouteilles en plastique et les botes en aluminium sont
rsistantes lhumidit mais pas impermables lhumidit, moins
quelles naient un joint serr en plastique. Elles doivent tre utilises
avec prcautions si lHR de la pice de stockage nest pas contrle.
Test de la qualit des conteneurs

La qualit et la capacit tre scells des conteneurs peuvent tre
testes comme suit :
1. Remplir les conteneurs avec du silicagel auto-indicateur rgnr
et les sceller comme lorsque lon stocke des semences.
2. Dterminer avec prcision le poids des conteneurs au moyen
dune balance analytique.
3. Maintenir les conteneurs au dessus de leau (mais sans quils la
touchent) dans un dessiccateur pendant une semaine environ.
4. Sortir les conteneurs du dessiccateur et laisser scher leur surface.
5. Peser les conteneurs, enregistrer les changements de poids et
examiner la couleur du silicagel.
Si le poids des conteneurs reste constant, alors ils sont
impermables lhumidit et ils sont bien scells.
Si le poids des conteneurs augmente et que le silicagel est
devenu bleu ple ou rose, alors ils sont de mauvaise qualit
et de lhumidit rentre par lendroit o ils sont scells.
6. Ajuster ltanchit et rpter le test pour confirmer la qualit
des conteneurs.
La qualit dun conteneur peut aussi tre teste en le remplissant
deau et en le plaant au dessus de silicagel dans un dessiccateur
ou dans une enceinte ventile 40C pendant une deux semaines.
Un changement dans le poids du conteneur indique sa mauvaise
qualit ou une fuite lendroit o il est scell.
Combien doit-on empaqueter de semences ?

Le nombre de semences empaqueter pour le stockage va dpendre
de lespce et de la frquence laquelle des semences vont tre
prleves pour le contrle, la distribution ou la rgnration. Les
Standards pour les banques de gnes FAO/IPGRI (1994) indiquent
que, pour un matriel qui prsente une faible variation morphologique
(accessions gntiquement homognes), le nombre de 3000 graines
99
Les sachets en aluminium

plasti sont les conteneurs les
plus communment utiliss dans
banques de gnes parce quils
utilisent peu despace et quil est
facile de les resceller. Les sachets
en aluminium utiliser dans les
banques de gnes doivent avoir
les spcications suivantes :
une couche externe de 17 g m-2
de Melinex, 4 g m-2 de laque ;
une couche moyenne de
33 g m-2 (12 m) de feuille
daluminium, 4 g m-2 de laque ;
une couche interne de 63 g m-2
de polythylne.
est acceptable, mais quil est prfrable que chaque accession soit
reprsente par 4000 graines. Pour des matriels montrant une grande
variation morphologique (accessions gntiquement htrognes),
une accession doit comprendre au moins 4000 semences, mais il est
prfrable de prendre 12 000 semences.
Dans les banques de gnes, il est plus facile de travailler avec des
poids, mais le nombre de semences peut facilement tre converti
partir des poids, si le poids de 100 ou de 1000 graines est connu.
Par exemple, pour dterminer le nombre de semences dans un
chantillon pour lequel le poids de 100 graines est connu :
Nombre de graines dans lchantillon = Poids de lchantillon (g) 100
Poids de 100 graines (g)
Exemple :
Poids de lchantillon = 275 g
Poids de 100 graines = 12,5 g
Nombre total de graines dans lchantillon = 275 x 100 = 2200
12,5
Comment
les
empaquetes ?
semences
doivent-elles
tre
Lempaquetage est ralis au mieux dans une pice climatise dans

laquelle lHR est contrle. Il est important de sassurer que les
semences sorties de la salle de dshydratation soient exposs
lair ambiant le plus brivement possible, de telle sorte quelles ne
rabsorbent pas deau.
1. Dcider du conteneur le mieux adapt pour stocker les semences.
Diffrents types de conteneurs peuvent tre utiliss, selon la taille et
la forme des semences et lobjectif de la conservation (soit pour des
collections actives ou des collections de base voir section 6.2).
2. Prparer et tiqueter les conteneurs pour chaque accession ;
des tiquettes autocollantes produites lordinateur et des
codes barres11 sont maintenant utiliss dans de nombreuses
banques de gnes. Lutilisation de codes barres assure que les
informations sont exactes et quaucune erreur ne se produit au
11
Les codes barres sont un systme informatis de codage qui utilise un profil de barres de largeurs
diffrentes pour identifier les accessions de manire unique. Les codes barres sont lus par
scannrisation optique du profil imprim et en utilisant un programme informatique pour dcoder
le profil. Les donnes contenues dans un code barre peuvent varier : dans sa forme la plus simple,
il peut simplement tre un numro daccession alors que, dans dautres cas, le code barre peut
contenir des dtails plus labors de passeport et dinventaire. Lutilisation de codes barres offre
des bnfices normes aux banques de gnes, en permettant une capture des donnes plus
rapide et plus prcise pour minimiser les erreurs et faciliter la gestion des inventaires.
100
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
cours de la transcription. Prparer une tiquette inclure avec

les semences lintrieur du conteneur. Les tiquettes doivent
contenir les informations suivantes :
Numro daccession
Genre et espce
Numro de conteneur
Poids des semences
Date de stockage
Peser chaque conteneur vide tiquet.
Remplir le conteneur avec les semences et peser nouveau.
Calculer le poids des semences.
Ajouter ltiquette et sceller immdiatement le conteneur pour
protger les semences de lHR ambiante leve.
Vrifier la qualit de chaque conteneur aprs lavoir scell par un
examen visuel pour sassurer quil ny a pas de fuites.
Tout conteneur qui est en dessous du standard doit tre
remplac immdiatement.
Placer les conteneurs dans la pice de stockage.
Entrer les donnes pertinentes sur chaque accession dans le
fichier de donnes. Un modle de tableau pour enregistrer le
poids des semences et du conteneur est propos ci-dessous.
Tableau 6.1. Modle de tableau pour enregistrer les informations sur lempaquetage des semences.
Date dempaquetage :
Numro de
laccession
Type de
conteneur
Nom de lemploy :
Numro du
conteneur
Poids du
conteneur
vide
Poids du
conteneur et
des semences
1
2
3
Echantillons de rfrence (herbariums de semences)

Les herbariums de semences sont utiles pour vrifier les attributs
physiques des semences, sans avoir ouvrir des conteneurs
scells. Empaqueter sparment un petit chantillon (cinq dix
semences ou gousses de lgumineuses, ou 5 g de crales) des
semences dorigine dans une enveloppe en plastique transparent
que lon peut resceller ou dans un rcipient en verre, pour vrifier
lintgrit gntique aprs la rgnration et pendant le transfert des
semences. Les chantillons peuvent tre stocks dans une armoire
avec des tagres peu espaces. Sassurer que les semences de
lchantillon dorigine ne sont jamais compltement puises, afin
quelles puissent servir de rfrence pour lidentification.
101
Poids des
semences
Quelques prcautions
Ne pas mlanger des semences rcoltes des saisons

diffrentes, car la qualit et la longvit des chantillons
peuvent tre diffrentes. Assigner des numros de lots
(indiquant la saison de rcolte, le site ou le numro du champ
et le numro de rgnration) pour diffrencier les lots de
semences.
Garder les semences obtenues aux diffrentes saisons
dans des conteneurs spars ou dans le mme conteneur,
en utilisant des sacs en tissu ou des sacs en plastique
individuels que lon peut resceller si le conteneur peut les
contenir.
Se souvenir que les conteneurs sortis du stockage au froid ou
du rfrigrateur doivent tre laisss se rchauffer jusqu
temprature ambiante pour viter la condensation deau sur
la surface des semences. Cela peut prendre plusieurs heures,
particulirement pour les semences de grandes dimensions
et pour celles venant de tempratures infrieures 0C.
Les tiquettes auto-adhsives et lencre utilise pour le
marquage doivent tre rsistantes leau et trs solides.
Afin dassurer la conservation long terme et la disponibilit continue

de semences de haute qualit pour leur utilisation, les semences
empaquetes dans des conteneurs impermables lhumidit doivent
tre stockes dans des conditions denvironnement contrles,
comme cela est dcrit dans la section suivante.
FAO/IPGRI, 1994. Genebank standards. FAO and IPGRI, Rome,
Italie.
6.2 Stockage des semences

Quest-ce que le stockage des semences ?
Le stockage des semences est la conservation des semences dans
des conditions denvironnement contrles qui maintiennent la
viabilit des semences pendant de longues priodes.
La longvit des semences dpend de la qualit initiale des
semences, du taux dhumidit et de la temprature au cours du
stockage. En gnral, un taux dhumidit bas et une temprature
basse rduisent la perte de viabilit des semences. Diverses
combinaisons de taux dhumidit et de tempratures peuvent
tre utilises pour prolonger la viabilit des semences pendant le
stockage.
102
Types de stockage
Deux types dentrepts pour les semences sont utiliss pour la
conservation des ressources gntiques: ceux qui maintiennent les
chantillons de semences pour la scurit long terme auxquels
on fait rfrence sous le terme de collections de base et ceux
qui maintiennent les chantillons de semences pour un usage
immdiat auxquels on fait rfrence sous le terme de collections
actives. La temprature, lHR, le taux dhumidit des semences, les
conteneurs et les modalits de distribution varient pour ces deux
types dentrepts.
Collections de base
Une collection de base est un groupe daccessions dans lequel
chacune est distincte et aussi proche que possible de lchantillon
dorigine en termes dintgrit gntique. Normalement, les
semences ne sont pas distribues directement aux utilisateurs
partir des collections de base, mais elles sont seulement utilises
pour rgnrer les collections actives (FAO/IPGRI, 1994). Les
collections de base sont stockes pour de longues priodes en
dessous de 0C gnralement de -18 -20C pour maintenir
la viabilit des semences.
Engels et Visser (2002) ont introduit le terme dchantillon le plus
original (MOS) pour qualifier les chantillons dans les collections
de base. Un MOS comprend des semences qui ont subi le plus
petit nombre de rgnrations depuis que le matriel a t acquis
par la banque de gnes ; il peut tre un sous-chantillon du lot de
semences dorigine ou un chantillon de semences du premier cycle
de rgnration, si le lot de semences dorigine ncessitait une
rgnration avant le stockage.
Collections actives
Les collections actives sont constitues daccessions qui sont
immdiatement disponibles pour la distribution. On accde
frquemment ces accessions qui sont conserves dans des
conditions qui assurent une viabilit de plus de 65% pendant 1020
ans (FAO/IPGRI, 1994). Les combinaisons de temprature et de taux
dhumidit pour le stockage des collections actives qui peuvent
assurer une viabilit au dessus de 65% pendant 1020 ans sont
indiques dans le Tableau 6.2. Il est plus pratique dutiliser un taux
dhumidit plus bas et de stocker une temprature plus leve,
pour conomiser sur les cots de rfrigration. Cependant, lorsquil
nest pas possible de dshydrater un taux dhumidit bas, le
stockage un taux dhumidit plus lev mais une temprature
plus basse peut tre considr.
103
Tableau 6.2. Temprature de stockage et taux dhumidit suggrs pour les

collections actives (source : Bioversity, non publi).
Temprature
(C)
Caractristiques de stockage
Mauvaises (ex. oignon)
Taux dhumidit (% poids humide)
Bonnes (ex. orge)
25
20
3.5
7.5
15
5.0
8.0
10
6.0
9.0
7.0
10.0
8.0
11.0
Organisation des collections

Le principe sous-jacent pour le maintien dune collection de base
ou de MOS est quau moins quelques semences de lchantillon
dorigine doivent tre mises de ct et conserves dans les meilleures
conditions possibles, pour assurer la survie long terme en scurit.
Cela peut tre obtenu en gardant les semences pour la distribution
physiquement spares (comme une collection active) de lchantillon
dorigine, mais il ny a pas de ncessit absolue de procder ainsi.
Une banque de gnes peut choisir de maintenir un chantillon de
chaque accession, la fois pour la conservation (collection de base)
et pour lutilisation (collection active), tant que le cot de maintenance
nest pas trop lev. Si la banque de gnes conserve la fois des
collections de base et des collections actives, il est plus rentable de
stocker dans la collection active seulement les accessions qui sont
utiliss par les slectionneurs et les autres utilisateurs (Pour de plus
amples informations, voir Engels et Visser, 2003.)
Type dinfrastructure de stockage

Les deux options communment disponibles pour le stockage des
semences sont les chambres froides et les rfrigrateurs. Le choix
dpend du nombre daccessions stocker, de la taille des semences et
des tempratures de stockage slectionnes. Lorsque les collections
sont petites et que des tempratures juste en dessous de zro sont
requises, des conglateurs verticaux ou horizontaux reprsentent une
option peu onreuse pour le stockage des semences.
Comment lespace de stockage est-il organis ?

Lorganisation de lespace de stockage dpend du type
dinfrastructure de stockage et du type de conteneurs utiliss dans
la banque de gnes. Au vu du cot du maintien du stockage au
froid, lespace doit tre optimis de sorte quun nombre maximal
daccessions de semences puissent tre stockes.
104
Stockage en chambre froide

Si la banque de gnes a une chambre froide, la meilleure option est
dutiliser des racks mobiles pour maximiser lespace de stockage.
Chaque rack est divis en un certain nombre dtagres. La
distance entre les tagres dpend de la taille des conteneurs. Les
petits rcipients ou les sachets en aluminium peuvent tre rangs
dans des botes ou sur des plateaux et placs sur les tagres.
Un systme de codage peut aider le personnel de la banque de gnes
localiser facilement les accessions pour retrouver les chantillons ;
le codage peut tre informatis dans une base de donnes ou un
systme dinventaire de stocks. Par exemple, A010201 peut tre
utilis pour indiquer la localisation suivante :
Numro de salle (si lon utilise plus dune salle de stockage) : A
Numro de rack : 01
Numro dtagre : 02
Numro de plateau/bote : 01
Conglateurs horizontaux ou verticaux
Pour les banques de gnes qui utilisent des conglateurs horizontaux
ou verticaux, des conteneurs qui rentrent dans sur des tagres ou
dans des botes contenant des petits rcipients individuels peuvent
tre utiliss pour stocker les accessions. Comme pour le stockage
en chambre froide, un systme de codage pour aider localiser une
accession peut tre mis en place, incluant le numro du conglateur,
le numro de range et le numro de bote.
Stockage des chantillons de semences

Etape 1 : Vrifier le nombre de semences dans laccession
1. Peser les semences de chaque accession. Convertir le poids
des semences en nombres en utilisant le poids de 100 graines
ou de 1000 graines comme dcrit dans la section prcdente.
2. Vrifier que lchantillon contient plus que le nombre requis de
semences pour un chantillon gntiquement homogne (3000
4000 semences) ou un chantillon gntiquement htrogne
(400012 000 semences).
3. Si lchantillon contient moins que la quantit requise, soit
procder directement la rgnration, soit le stocker
temporairement dans la banque de gnes et le rgnrer la
premire opportunit (voir Chapitre 8).
Etape 2 : Identification dun emplacement pour le stockage

Ltape suivante est de dterminer lendroit lintrieur de la salle de
stockage ou du conglateur auquel laccession va tre stocke.
105
1. Vrifier le fichier dinventaire pour trouver lespace disponible

suivant pour laccession.
2. Assigner lespace auquel laccession va tre place. Si
laccession est stocke dans plus dun conteneur, les garder
tous ensemble.
Etape 3 : Placer les semences dans lespace de stockage

1. Etablir une liste des espaces assigns o chaque accession va
tre place.
2. Placer les conteneurs dans la salle de stockage ou le conglateur
leurs places assignes.
Etape 4 : Entrer les donnes dans la base de donnes

1. Entrer les donnes concernant la place de stockage, la date et le
nombre de conteneurs dans le fichier dinventaire.
Duplication de scurit (collection de sauvegarde par

scurit)
La duplication de scurit signifie quun sous-chantillon
gntiquement identique de laccession est stock un autre
endroit (de prfrence en dehors du pays), pour fournir une
assurance contre la perte du matriel. La duplication de scurit
inclut la fois la duplication du matriel et de linformation qui lui
est rattache. Les chantillons pour la duplication de scurit sont
prpars de la mme manire que la collection de base :
Les semences doivent tre dshydrates jusqu un taux
dhumidit de 52%, selon lespce.
Les semences doivent tre propres et en bon tat sanitaire.
Le pourcentage de germination doit tre suprieur 85%.
Les semences doivent scelles hermtiquement dans des
conteneurs appropris.
La taille de lchantillon peut tre plus petite, mais elle doit tre
suffisante pour raliser au moins trois rgnrations (en prenant
en compte le facteur de scurit). Pour gagner du temps, les
chantillons prvus pour la duplication de scurit peuvent tre
prpars en mme temps que lon prpare les semences pour la
collection de base.
Des accords spcifiques doivent tre passs avec linstitut destinataire
pour conserver un double de la collection. Idalement, les duplications
de collections doivent tre maintenues dans les mmes conditions que
les collections de base, pour assurer la survie long terme, bien que
plusieurs types de duplication soient reconnus :
106
Bote noire : quand la seule responsabilit de la banque

de gnes receveuse est de conserver les doubles sans les
manipuler. En plus de fournir les conditions de stockage
les meilleures possible, linstitut receveur na pas de
responsabilit supplmentaire vis--vis des chantillons.
Cest la responsabilit de linstitut dorigine dtablir un
schma de contrle de la viabilit et de rgnrer la collection
lorsque cest ncessaire. Si les conditions de stockage pour
la collection de sauvegarde sont les mmes que celles de
la collection de base, la perte de viabilit peut tre prdite
partir des rsultats du contrle de la collection de base.
Aprs la rgnration de la collection de base, linstitut
dorigine remplace galement le double de scurit. Pour
une duplication en bote noire hors du pays dorigine,
une permission spciale est ncessaire pour exporter les
semences, sans certificats phytosanitaires du pays dorigine.
De manire similaire, les autorits phytosanitaires du pays de
destination doivent permettre au destinataire dimporter les
semences sans examen de quarantaine de routine.
Base : maintenues dans des conditions adaptes la conservation
long terme et incorpores dans la collection du receveur.
Active : lorsque le double de la collection est incorpor dans
la collection du receveur, et est donc sujet la rgnration, la
multiplication et la distribution par le receveur.
Collection archive
Les banques de gnes peuvent choisir de stocker les chantillons
de matriel gntique qui nont pas besoin dtre reprsents dans
une collection de base ou distribus dans une collection archive.
Ces chantillons sont conservs dans les conditions optimales pour
leur survie long terme, mais sans investissement supplmentaire
dans le contrle et la rgnration. Le matriel gntique inclus
dans une collection archive peut tre :
des lignes exprimentales protges par des droits de proprit
intellectuelle les chantillons peuvent tre conservs dans des
collections bote noire et restitus la demande du dtenteur
des droits de proprit ;
du matriel gntique qui est en dehors du mandat de la
banque de gnes les chantillons peuvent tre stocks
temporairement, jusqu ce quune autre banque de gnes ayant
un mandat appropri soit identifie ;
des accessions identifies comme des doublons la suite dune
rationalisation dune collection de base existante ;
des accessions dont on na plus besoin dans la collection, suite
une rvaluation du mandat de la banque de gnes ou de
matriel abandonn cause du manque de fonds.
107
Documentation
Une bonne documentation de lempaquetage des semences permet
laccession rapide aux nouveaux chantillons, la rponse des
demandes concernant le matriel gntique conserv et le suivi
de la qualit et de la quantit du matriel stock pour raliser la
rgnration et la distribution. Les descripteurs suggrs sont les
suivants :
Conditions de stockage/type de collection
Type de conteneur, si cela varie dans la banque de gnes
Nombre de conteneurs
Quantit totale de semences stockes (en poids ou nombre)
Date de stockage
Localisation dans la banque de gnes
Quantit minimale de semences autorise (unit de base) pour la
dissmination/rgnration
Localisation du double de scurit, si disponible
Cromarty A.S, Ellis, R.H. et Roberts, E.H. 1982. The design of seed
storage facilities for genetic conservation. IBPGR, Rome, Italie.
Engels, J.M. et Visser, L. (eds.). 2003. A guide to effective management
of germplasm collections. IPGRI Handbook for Genebanks No. 6.
FAO/IPGRI, 1994. Genebank standards. FAO and IPGRI, Rome, Italie.
Linington, S. H. 2003. The design of seed banks. Pp. 591636 in Seed
conservation: Turning science into practice. (R.D. Smith, J.B. Dickie,
S.H. Linington, H.W. Pritchard and R.J. Probert, eds.). Royal Botanic
Gardens, Kew, GB.
108
7. Distribution
1. Introduction
2. Acquisition et
enregistrement du
matriel gntique
2.1 Acquisition du
matriel gntique
matriel gntique
et dshydratation
4.1 Dtermination du
taux d'humidit
semences
des semences
des semences
des semences
pour l'introduction
par inadvertance
de transgnes
6. Empaquetage et
6.1 Empaquetage des
semences
6.2 Stockage des
semences
gntique
du matriel gntique
gntique
8.2 Rgnration du
matriel gntique
7. DISTRIBUTION DU
MATERIEL GENETIQUE
Quest-ce que la distribution de matriel
gntique ?
La distribution de matriel gntique est
la fourniture dchantillons reprsentatifs
daccessions de semences dune banque de
gnes, en rponse aux demandes des utilisateurs
de matriel gntique. En gnral, les semences
sont distribues partir des collections actives
(voir Diagramme de flux 7.1).
Pourquoi le matriel gntique est-il

distribu ?
Le but de la conservation de matriel gntique
dans une banque de gnes est soit damliorer
des varits de plantes cultives au moyen de la
slection vgtale et des activits de recherche
lies, soit de restaurer la diversit perdue dans
les fermes et dans les habitats naturels, afin
de rpondre aux besoins des agriculteurs et
des communauts. Cela contribue directement
amliorer les moyens de subsistance des pauvres
et protger lenvironnement.
Dans le pass, on na pas assez mis lemphase
sur la distribution de matriel gntique. Il est
maintenant largement reconnu que lutilisation du
matriel gntique doit conduire sa conservation.
Les banques de gnes doivent tre plus proactives
dans ltablissement de liens avec les utilisateurs
de matriel gntique, les slectionneurs, les
chercheurs, les agriculteurs et dautres groupes.
Comment le matriel gntique doit-il

tre distribu ?
Le matriel gntique doit tre distribu dune
manire qui assure quil atteint sa destination en
bon tat. Les conditions denvironnement pendant
le transport peuvent tre nfastes la qualit
des semences ; les semences doivent donc tre
empaquetes avec soin et distribues dans des
enveloppes scelles rsistantes lhumidit pour
tre protges pendant le transit (voir ci-dessous).
109
Diagramme de ux 7.1. Distribution du matriel gntique.

VERIFIER SI LE DEMANDEUR A FOURNI LA LISTE DES NUMEROS D'ACCESSIONS
Les numros
d'accessions sont-ils
spcis ?
SELECTIONNER LES
ACCESSIONS EN SE BASANT
SUR LE BUT DE LA DEMANDE
NON
OUI
VERIFIER LA DISPONIBILITE DES ACCESSIONS DEMANDEES POUR LES DISTRIBUER AVEC UN MTA STANDARD
OUI
Peuvent-elles
tre distribues avec un
MTA standard ?
NON
VERIFIER SI LE MATERIEL PEUT ETRE DISTRIBUE EN UTILISANT UN MTA ARRANGE
Peut-il tre
distribues avec un
MTA arrang ?
NON
INFORMER LE DEMANDEUR
QUE LE MATERIEL NE PEUT
PAS ETRE DISTRIBUE
OUI
VERIFIER DANS LE DOSSIER DE DONNEES S'IL YA ASSEZ DE SEMENCES POUR LA DISTRIBUTION
Y a-t-il assez
de semences ?
NON
INFORMER LE DEMANDEUR
QUE L'ACCESSION DESIREE
DOIT ETRE REGENEREE
OUI
VERIFIER S'IL S'AGIT D'UNE DISTRIBUTION NATIONALE OU A L'EXPORTATION
L'exportation
de semences est-elle
ncessaire ?
NON
OUI
VERIFIER SI UN PERMIS D'IMPORTATION EST NECESSAIRE ET SI LE DEMANDEUR L'A ENVOYE
Un permis
d'importation est-il
ncessaire ?
Le permis
d'importation a-t-il
t reu ?
OUI
NON
OBTENIR LE PERMIS
D'IMPORTATION
OUI
ENREGISTRER LA DEMANDE
PREPARER LE "MTA" ADEQUAT
PREPARER LES ECHANTILLONS POUR LA DISTRIBUTION
PREPARER LA LISTE D'ACCESSIONS A ENVOYER
OBTENIR DANS LES FICHIERS DE DONNEES LES DONNEES PASSEPORT MINIMALES POUR CHAQUE ACCESSION
VERIFIER SI DES TRAITEMENTS PARTICULIERS ET/OU UN CERTIFICAT PHYTOSANITAIRE SONT NECESSAIRES
Des traitements
particuliers sont-ils
ncessaires ?
ENVOYER LES ECHANTILLONS

A LA QUARANTAINE POUR QU'ILS
REOIVENT LES TRAITEMENTS
SPECIAUX ET POUR OBTENIR UN
CERTIFICAT PHYTOSANITAIRE
OUI
NON
OUI
Un certicat
phytosanitaire est-il
ncessaire ?
NON
ENVOYER LES ECHANTILLONS
ENREGISTRER LES INFORMATIONS
110
Le cadre et ltendue de la distribution varient avec chaque banque

de gnes. Le matriel gntique peut tre distribu lintrieur dun
pays ou lextrieur, selon le mandat de la banque de gnes et
selon que la banque de gnes est nationale, rgionale ou globale.
Procdures pour la distribution lintrieur dun pays

Etape 1 : Dcider si laccession peut tre distribue
Vrifier la base de donnes dinventaire, pour voir si la quantit

de semences dans la banque de gnes est suffisante pour la
distribution.
Distribuer seulement si un minimum de quatre six fois le
nombre de semences ncessaires pour un cycle de rgnration
reste en stock aprs avoir rpondu la demande. Une certaine
flexibilit peut tre permise dans les cas o laccession est
rarement demande.
Lorsque la quantit de semences nest pas suffisante pour
la distribution, informer le demandeur que les accessions ne
peuvent tre fournies quaprs une rgnration, et prparer les
accessions pour la rgnration.
Vrifier les donnes passeport pour dterminer le statut du
matriel en relation avec laccs et le partage des avantages
selon le Trait international sur les PRGFA et les autres
accords internationaux. Sil y a des restrictions concernant la
distribution selon laccord dacquisition de matriel gntique
avec le donateur (voir Annexe I), informer le demandeur en
consquence.
Etape 2 : Prparer lchantillon pour la distribution

Si
1.
2.
3.
les semences sont disponibles pour la distribution :

Enregistrer la demande en lui assignant un numro de demande.
Prparer la liste des accessions disponibles pour la distribution.
Vrifier la ncessit dun accord de transfert de matriel (MTA) ;
si le matriel ne peut pas tre envoy avec un accord standard
de transfert de matriel, utiliser un MTA adapt aux accessions
slectionnes (voir Annexe I pour de plus amples informations).
4. Prparer deux jeux dtiquettes pour les accessions slectionnes
et en coller un sur les enveloppes (de prfrence en aluminium
plastifi) qui vont tre utilises pour envoyer les semences au
demandeur.
5. Vrifier le fichier dinventaire et noter la localisation des conteneurs
dans la banque de gnes.
6. Transfrer les conteneurs de la banque de gnes dans une pice
dshumidifie le soir prcdent la distribution, pour leur permettre
de remonter jusqu temprature ambiante avant ouverture.
111
Sassurer de lexactitude absolue de lidentification des accessions

lorsque lon sort les semences de la banque de gnes.
7. Ouvrir le conteneur et transfrer rapidement la quantit de
semences requise dans les enveloppes tiquetes. Utiliser
un chantillonnage au hasard, de telle sorte quune bonne
reprsentation de laccession soit fournie. Il est suggr que
50100 semences viables doivent tre distribues pour satisfaire
chaque demande, en fonction du systme de reproduction de
lespce (plus pour les espces pollinisation croise et moins
pour les espces autogames).
8. Refermer le conteneur immdiatement aprs en avoir retir
les semences pour la distribution, pour empcher labsorption
dhumidit de lair ambiant.
9. Pour assurer une scurit supplmentaire, une seconde tiquette
doit tre place lintrieur des enveloppes avant de sceller les
paquets.
10. Comparer la liste des accessions sorties de la banque de gnes
avec les tiquettes sur les enveloppes.
Etape 3 : Prparer la liste dinformations pour

accompagner les semences
1. Imprimer la liste finale, incluant les dtails du passeport tels que
le numro de laccession, lidentit alternative, le pays dorigine,
la localisation et le statut biologique, de mme que les donnes
de caractrisation utilises pour vrifier les accessions, ainsi que
toute information requise par le demandeur.
2. Prparer une lettre de couverture.
Etape 4 : Envoyer les semences

Les semences de matriel
gntique sont prcieuses
et elles doivent tre
empaquetes avec soin
pour lenvoi. Lempaquetage
doit assurer la scurit
des semences et viter
la contamination par des
pathognes ou des insectes
au cours du transit.
1. Empaqueter les enveloppes de semences, la lettre de couverture,

le MTA et la liste des semences dans un sac en plastique,
puis dans une enveloppe renforce (sil ny a que quelques
chantillons) ou dans une bote en carton (utiliser des matriaux
de remplissage pour viter que des dommages soient causs
aux semences pendant le transit). Etiqueter les enveloppes ou
la bote avec ladresse complte du demandeur. Le MTA doit
tre coll lextrieur de lenveloppe, dans les cas o ouvrir
le conteneur et utiliser les semences signifie laccord avec les
termes et les conditions daccs.
2. Inclure un bulletin rponse complter et retourner la banque
de gnes par le demandeur, pour confirmer que les semences
ont t reues en bon tat.
3. Envoyer les colis de semences par les moyens les plus rapides,
tels que les socits de messagerie, pour viter les retards et la
112
dtrioration de la qualit des semences au cours du transit. Sil

y a la moindre crainte que le matriel puisse tre perdu au cours
du transport, utiliser le courrier en recommand ou le transporter
la main si cest possible.
4. Enregistrer les dtails de lenvoi dans le dossier de donnes de
distribution.
5. Mettre jour linventaire des semences en dduisant le poids ou
le nombre de semences envoyes.
Distribution de matriel gntique lextrieur du pays

Suivre la mme procdure pour slectionner les accessions et
remplir les conditions du MTA comme dcrit dans les tapes 1 et 2
ci-dessus. Des exigences supplmentaires peuvent tre ncessaires
pour la distribution de matriel gntique au-del des frontires avant
de passer aux tapes 3 et 4. Elles concernent le respect des rgles
phytosanitaires (voir ci-dessous) pour viter le danger dintroduire des
ravageurs et des maladies dans des zones nouvelles.
Comment les mesures phytosanitaires affectent-elles le

mouvement des semences ?
Le mouvement de toute semence peut potentiellement dissminer
des parasites.12 Il existe de nombreux endroits dans le monde o
cela sest dj produit, avec des effets dvastateurs. Reconnaissant
ce danger, tous les pays ont des mesures phytosanitaires pour
rglementer lentre de plantes, de fragments de plantes et de
leurs produits. Il est donc essentiel de se conformer aux exigences
nationales du pays importateur, lorsque lon fait passer des
semences des barrires internationales.
Que sont les mesures phytosanitaires ?
Une mesure phytosanitaire est toute lgislation, rglementation
ou procdure visant empcher lintroduction ou la dissmination
de parasites pour lesquels il existe une quarantaine, ou limitant
limpact conomique de parasites contrls sans passage par une
quarantaine. Ces mesures sont tablies par le pays importateur,
aprs une analyse des risques poss par les parasites selon des
standards internationaux.
La documentation officielle requise pour lexportation de semences
inclut un certificat phytosanitaire dlivr par lorganisme national de
protection des plantes ou linstitut officiellement autoris du pays
exportateur, qui certifie que lenvoi est conforme aux rglements
12
La Convention internationale pour la protection des vgtaux (CIPV) dfinit les parasites comme
tout agent biotique nuisible et potentiellement nuisible, allant des virodes aux mauvaises herbes.
113
Les envois de matriel

gntique infest par
des parasites ou sans la
documentation adquate
verront leur entre refuse ou
seront dtruits. Le personnel
des banques de gnes
doit tre au courant des
rglements phytosanitaires qui
gouvernent le mouvement du
matriel gntique au del des
frontires.
phytosanitaires du pays importateur. Les certificats phytosanitaires

aident sassurer que les denres sont exemptes de parasites des
plantes nocifs aprs une inspection dans le pays dorigine par un
membre de lorganisme charg de la protection des plantes de ce
pays. Le pays qui certifie fait gnralement payer chaque certificat.
Des informations
phytosanitaires pour de
nombreux pays peuvent tre
trouves sur le site Web ofciel
de la Convention internationale
pour la protection des vgtaux
(CIPV) sur www.ippc.int. Les
contacts nationaux de la CIPV
doivent tre contacts pour :
dterminer les exigences
phytosanitaires pour
limportation de
semences ;
demander une certication
phytosanitaire pour
lexportation de semences.
Lorsque lon prpare des semences pour la distribution, observer

les directives suivantes :
Vrifier la destination finale et les dernires conditions
phytosanitaires dimportation pour le pays importateur (dans
de nombreux pays, les rglements sont frquemment modifis,
cela doit donc tre effectu avant chaque expdition voir
quarantaine post-entre au Chapitre 2).
Sassurer que lorganisme national de protection des plantes
dans le pays exportateur fournit les documents appropris,
comme un certificat phytosanitaire officiel, qui se conforme aux
exigences du pays importateur.
Dterminer les procdures suivre pour obtenir un certificat
phytosanitaire dans le pays dexportation.
La connaissance des autorits appropries qui dlivrent les
certificats assurera le succs tous les stades.
Procdure pour lexportation des semences

1. Prparer une liste des accessions dont on a besoin pour
satisfaire la demande.
2. Prlever les semences dans la banque de gnes, comme dcrit
pour la distribution lintrieur dun pays.
3. Demander un certificat phytosanitaire, disponible chez lorganisme
national de protection des plantes ou linstitut dsign.
4. Envoyer la demande lautorit phytosanitaire approprie et
organiser les traitements et inspections ncessaires pour la
dlivrance dun certificat phytosanitaire.
5. Obtenir des dclarations supplmentaires pour des traitements
spciaux, comme demand par le pays importateur.
6. Lorsque les chantillons sont prts tre envoys, prparer une
lettre de couverture et une liste finale des accessions, ainsi que les
donnes passeport, les donnes de caractrisation et toute autre
information, comme dcrit dans ltape 3 ci-dessus. Toute accession
retenue en quarantaine doit tre enleve de la liste finale.
7. Envoyer les semences leur destinataire13 avec le certificat
phytosanitaire, toute autre dclaration ncessaire, le MTA et la
lettre de couverture.
13
Dans certains pays, les rglements phytosanitaires stipulent que les envois doivent tre adresss
directement aux autorits phytosanitaires et non au destinataire, et quils doivent passer par des
points dentre spcifiques.
114
8. Se conformer toute exigence supplmentaire, comme

lobtention dun permis dimportation dune plante ou un
permis CITES pour une espce menace (voir Annexe I) avant
dexpdier les semences.
9. Enregistrer les dtails de lenvoi dans le fichier de donnes
de distribution et mettre jour linventaire des semences en
soustrayant le poids ou le nombre de semences envoyes.
Si des traitements obligatoires sont prescrits comme une mesure
phytosanitaire, ou que des endos sont requis, ils doivent tre
fournis par une autorit gouvernementale exactement comme ils
ont t requis. Par exemple, une fumigation peut tre demande,
les chantillons peuvent devoir tre tremps dans un insecticide
ou un fongicide, ou un traitement peut tre requis par le pays
importateur. Les traitements doivent tre dtaills sur le certificat
phytosanitaire en mme temps que tout autre endos demand par le
pays importateur. Si aucun traitement nest exig, aucun traitement
ne doit tre administr car ces traitements peuvent masquer les
symptmes causs par des pathognes transmis par les semences
et interfrer avec des tests de laboratoire. Un prtraitement effectu
avant lentre qui va lencontre des spcifications du pays
importateur peut srieusement mettre en pril le matriel expdi.
Lorsque des chantillons de semences doivent tre envoys plus
dun pays, il est ncessaire dobtenir un certificat phytosanitaire pour
chaque destination. Deux exemplaires du certificat phytosanitaire
doivent tre obtenus et loriginal doit accompagner lenvoi. Toute
modification non certifie ou rature rendra le certificat phytosanitaire
non valide.
Avec lexpansion de la culture de plantes cultives transgniques
ou modifies gntiquement, de nombreux pays exigent maintenant
un certificat dune entit indpendante accrdite que le matriel
expdi ne contient pas dOGM (voir aussi lAnnexe I).
Avis sur lutilisation du matriel gntique

Obtenir un avis sur lutilit du matriel envoy aux utilisateurs
intervalles de six mois. Ceci aidera identifier les dficiences dans
le service et rester inform sur toute nouvelle caractristique ou
sources de rsistance identifie.
Documentation
Il est important que les banques de gnes gardent des enregistrements
des receveurs de matriel gntique, du nombre dchantillons
envoys, des dtails des accessions et de lobjectif dans lequel la
demande a t faite, afin de suivre lutilisation et dvaluer limpact
115
du matriel gntique distribu. Il est recommand de conserver

ces informations dans deux fichiers avec un champ lien commun.
Assigner un numro de rfrence lorsque lon enregistre une
demande de semences peut servir de champ liant les deux fichiers.
Les descripteurs de la distribution peuvent galement tre organiss
en deux fichiers, savoir :
un fichier principal avec les dtails du demandeur, le numro des
accessions envoyes, etc. ;
un fichier avec le dtail des accessions contenant les informations
sur le matriel.
Les descripteurs suivants sont suggrs pour la distribution.
Fichier principal
Numro de rfrence de distribution

Adresse du demandeur
Date de la demande
Date de la fourniture
Nombre total daccessions distribues
But de la demande
Certificat phytosanitaire (si applicable)
Numro de permis dexportation (si applicable)
Numro du permis dimportation du demandeur (si applicable)
Fichier avec les dtails des accessions
Numro de rfrence de distribution

Numro daccession
Quantit de semences distribue
Statut lgal du matriel, en fidicommis ou sous le Trait
international
116
8. Contrle et rgneration
1. Introduction
2. Acquisition et
enregistrement du
matriel gntique
2.1 Acquisition du
matriel gntique
matriel gntique
et dshydratation
4.1 Dtermination du
taux d'humidit
semences
des semences
des semences
des semences
pour l'introduction
par inadvertance
de transgnes
6. Empaquetage et
6.1 Empaquetage des
semences
6.2 Stockage des
semences
gntique
du matriel gntique
gntique
8.2 Rgnration du
matriel gntique
8. CONTROLE ET
REGENERATION DU MATERIEL
GENETIQUE
gntique
Quest-ce que le contrle ?
Le contrle est la vrification rgulire de la qualit
(viabilit) et de la quantit (nombre ou poids)
des accessions de matriel gntique stockes
dans une banque de gnes. Lobjectif est de
dterminer si la rgnration ou la multiplication
dune accession est ncessaire.
Pourquoi les accessions doivent-elles

tre contrles ?
Les accessions sont contrles pour deux raisons
principales :
La viabilit des semences stockes dans
la banque de gnes diminue au cours du
stockage ; il est important de contrler la
viabilit des accessions pour sassurer quelles
ne perdent pas leur capacit de produire des
plantes viables lorsque lon en a besoin.
Le prlvement de semences pour la
distribution et les tests de germination
conduisent une diminution de la quantit
des semences au cours du temps.
Afin dviter une dtrioration excessive de la
qualit ou de la quantit des semences, les
accessions dune banque de gnes doivent tre
contrles, la fois pour la viabilit et la quantit
des semences pendant le stockage.
A quelle frquence les accessions

doivent-elles tre contrles ?
La quantit des semences, en nombre ou en poids,
doit tre contrle chaque fois que des semences
sont distribues depuis la banque de gnes. Cela
facilite lidentification immdiate des accessions
qui ont une quantit insuffisante de semences pour
une conservation ultrieure. Les tests de contrle
de la viabilit doivent tre conduits rgulirement.
117
Lintervalle des contrles dpend de lespce, de lenvironnement

de stockage (taux dhumidit des semences et temprature) et de la
viabilit au dbut du stockage.
Les Standards pour les banques de gnes FAO/IPGRI (1994)
recommandent que le premier test de contrle doit tre conduit
au bout de dix ans, pour des semences stockes dans des
collections de base dans les meilleures conditions (-18C) et
ayant une viabilit initiale leve (>90% de germination).
Les semences despces qui sont connues comme ayant une
faible longvit, qui incluent la plupart des espces olagineuses
et les accessions avec une viabilit initiale relativement basse
(8590% de germination) dans les collections de base, ainsi que
les semences stockes dans les collections actives dans les
meilleures conditions (voir Tableau 6.2), doivent tre contrles
pour leur viabilit au bout de cinq ans.
Lintervalle entre des tests successifs doit tre bas sur
lexprience et peut tre ajust positivement ou ngativement,
selon ltendue de la perte de viabilit observe lors du premier
test de contrle (voir Tableau 8.1).
Tableau 8.1. Intervalle suggr pour contrler la germination de collections actives ou de base chez les semences
olagineuses et non olagineuses.
Niveau actuel de
germination (%)
<80
8085
8595
>95
Intervalle de contrle (annes)

Collection active (45C)
Collection de base (-20C)
Semences non
olagineuses
Semences
olagineuses
Semences non
olagineuses
Semences
olagineuses
3
5
8
12
1
3
5
8
5
10
15
20
2
5
8
12
Contrle de la viabilit
La viabilit est contrle en ralisant un test de germination sur un
chantillon fix ou par germination squentielle (voir Diagramme de
flux 8.1).
Test de germination avec un chantillon de taille fixe

Pour le test de germination avec une taille dchantillon fixe, il
est recommand dutiliser un minimum de 200 semences (en deux
rplications de 100 semences). Si la quantit est limite, 50100
semences peuvent tre testes en deux rplications.
1. Identifier et lister toutes les accessions qui ont besoin dtre
testes, et planifier les tests sur une base hebdomadaire ou
mensuelle (selon la disponibilit en espace dans les germinateurs
et les ressources humaines).
118
Diagramme de ux 8.1. Contrle de la viabilit.

VERIFIER LES DOSSIERS ET DETERMINER QUELLES ACCESSIONS DOIVENT ETRE CONTROLEES
PREPARER UNE LISTE DE TOUTES LES ACCESSIONS QUI DOIVENT ETRE CONTROLEES
SORTIR LES CONTENEURS DU STOCKAGE ET LES LAISSER A LA TEMPERATURE DE LA PIECE JUSQU'A CE
QU'ILS ATTEIGNENT LA TEMPERATURE AMBIANTE
DECIDER DE LA METHODE DE TEST
Est-ce un
test taille d'echantillon
fixe ?
NON
Est-ce un
test squentiel ?
OUI
OUI
PREPARER DEUX REPLICATIONS DE

50 OU 100 SEMENCES
PREPARER LE PREMIER GROUPE

DE 40 SEMENCES
TESTER LA GERMINATION EN
UTILISANT LA METHODE ET LES
CONDITIONS RECOMMANDEES
TESTER LA GERMINATION EN
UTILISANT LA METHODE ET LES
CONDITIONS RECOMMANDEES
CALCULER LE POURCENTAGE DE
GERMINATION
COMPTER LE NOMBRE DE
SEMENCES GERMEES
La viabilit
correspond-t-elle aux
standards ?
Trente
semences ou plus
ont-alles germ ?
OUI
NON
NON
PROGRAMMER LA REGENERATION
REPETER AVEC LE SECOND

GROUPE DE 40 SEMENCES
GARDER EN STOCKAGE
PROGRAMMER LA
REGENERATION
NON
Plus de 64
semences ont-elles
germ ?
OUI
REPETER LE TEST
AVEC UN 3EME
GROUPE DE 40
SEMENCES
NON
Plus de 75
semences ont-elles
germ ?
OUI
GARDER EN STOCKAGE
ENREGISTRER LES DONNEES
DANS LES DOSSIERS
119
OUI
2. Localiser les conteneurs stocks partir de linventaire.

3. Sortir les conteneurs du stockage et les laisser une nuit
temprature ambiante pour quils remontent en temprature.
4. Ouvrir chaque conteneur, prlever un chantillon de semences
pour le test et immdiatement refermer les conteneurs.
5. Mener les tests de germination en utilisant les mthodes et les
conditions dcrites dans le Chapitre 5.
6. Calculer le pourcentage moyen de germination partir des rsultats
des deux rplications. Rpter le test de germination si la diffrence
entre les deux rplications dpasse 10% ou les limites maximales
de tolrance la probabilit de 2,5% (voir Ellis et al., 1985).
Si le pourcentage de germination est au dessus de 85%
du pourcentage de germination initial, continuer stocker
laccession. Fixer la date du test suivant en fonction du
pourcentage actuel de germination (voir Tableau 8.1).
Si le pourcentage moyen de germination est en dessous
de 85% du pourcentage de germination initial, programmer
laccession pour la rgnration (voir Tableau 8.2).
Tableau 8.2. Pourcentages seuils de germination pour la rgnration des

accessions.
Germination
initiale
Rgnrer si le pourcentage de germination

aprs contrle est en dessous de
100
85
99
84
98
83
97
82
96
82
95
81
94
80
93
79
92
78
91
77
90
77
89
76
88
75
87
74
86
73
85
72
Test squentiel de germination

Le test squentiel de germination utilise moins de semences par
rplication que le test de germination standard. Autrement, les
120
mthodes et les conditions de germination sont les mmes que celles

dcrites pour le test de germination taille dchantillon fixe.
Le nombre de semences ncessaire par rplication peut varier, mais
il est recommand dutiliser au moins 40 semences par rplication.
1. Conduire le test de germination selon les mthodes dcrites
dans le Chapitre 5 en utilisant (par exemple) 40 semences.
2. Compter le nombre de semences germes aprs la priode de
test prescrite.
3. Comparer les rsultats avec le nombre de semences germes
dans le Tableau 8.3, en faisant attention la ligne avec la valeur
de 40 dans la premire colonne (nombre de semences testes).
Si le nombre de semences germes est 29 ou moins,
laccession a besoin dtre rgnre.
Si le nombre de semences germes est suprieur 29, le test
doit alors tre rpt avec un autre chantillon exactement
comme dcrit ci-dessus.
Tableau 8.3. Plan de test squentiel de germination pour un standard de
rgnration de 85% lorsque lon teste la germination de semences par
groupes de 40.
Nombre de
semences
testes
Rgnrer
si le nombre
de semences
germes est
infrieur ou gal
Rpter le test
si le nombre
de semences
germes est dans
lintervalle de
Stocker si le
nombre de
semences germes
est suprieur ou
gal
40
80
120
160
200
240
280
320
360
400
29
64
100
135
170
205
240
275
310
340
3040
6575
101110
136145
171180
206215
241250
276285
311320
-
76
111
146
181
216
251
286
321
341
Lorsque 400 semences ont t testes, le test peut tre termin parce quun nombre suffisant de
tests a t ralis pour prendre une dcision base sur des informations.
Il est important dutiliser le mme nombre de semences lorsque

lon rpte le test, pour que les chantillons diffrents puissent tre
traits comme des rplications.
4. Compter le nombre de semences germes lors du second test
et additionner ce nombre au rsultat du premier test.
5. Comparer les rsultats du test avec le nombre de semences
germes dans le Tableau 8.3, en suivant la ligne avec la valeur
121
Se souvenir de mettre jour la

quantit de semences dans la
base de donnes dinventaire,
en dduisant le nombre de
semences prleves pour le
test de germination. Mettre
aussi jour les donnes de
germination dans la base de
donnes dinventaire aprs
que le rsultat nal a t
obtenu.
gale au nombre total de tests utiliss pour tous les tests (80
semences) dans la premire colonne (nombre de semences
testes).
Si le nombre de semences germes est 64 ou moins,
laccession doit tre rgnre.
Si le nombre de semences germes est suprieur 75,
laccession peut tre garde en stockage.
Si le nombre de semences germes se situe entre 65 et 75,
laccession doit tre reteste avec un autre chantillon de 40
semences et les rsultats compars avec la valeur gale au
nombre total de semences utilises dans tous les tests (120
semences) dans le Tableau 8.3.
6. Continuer le test de cette manire, jusqu ce quune dcision
concernant la rgnration ou la continuation du stockage
puisse tre prise, ou jusqu ce que le test soit rpt dix
fois.
Pour plus dinformations sur les plans des tests pour dautres tailles
de groupes (20, 25, 50 ou 100 semences) et sur les standards
de rgnration entre 65% et 85%, se rfrer Ellis et al. (1985).
Le test squentiel nest ncessaire que quand les nombres de
semences sont limits. Les plantes petites graines comme le mil
ont normalement des nombres de semences adquats pour utiliser
le test taille dchantillon fixe.
Contrle de la quantit de semences

La quantit de semences peut tre contrle en consultant le fichier
de donnes dinventaire. Cela est plus facile faire avec un systme
informatis de documentation de la banque de gnes.
1. Enregistrer le poids de semences transfr initialement dans la
banque de gnes.
2. Enregistrer tous les prlvements suivants pour la distribution, la
rgnration et les tests de germination.
3. Immdiatement mettre jour la documentation des stocks de
semences, en ajustant le total aprs tous les prlvements de
semences.
4. Prparer une liste des accessions chez lesquelles le nombre
de semences en stockage est tomb sous le niveau
critique (gnralement le nombre requis pour au moins trois
rgnrations).
Les accessions de matriel gntique identifies comme ayant une
viabilit faible ou une quantit inadquate au cours des contrles
doivent tre rgnres le plus tt possible en utilisant la mthode
dcrite dans la section suivante.
122
Documentation
Le contrle est une activit cruciale dans la gestion dune banque
de gnes car il aide fournir des informations sur les stocks de
semences qui diminuent, les accessions qui ont besoin dtre testes
pour leur viabilit et celles qui ncessitent une rgnration. Sans
vritable documentation des donnes des activits prcdentes de
la banque de gnes, un contrle efficace est difficile raliser.
8.2 Rgnration du matriel gntique

Quest-ce que la rgnration du matriel gntique ?
La rgnration est le renouvellement des accessions, ralis en
semant et en rcoltant des semences qui possdent les mmes
caractristiques que lchantillon dorigine. La rgnration du
matriel gntique est lopration la plus critique dans la gestion
dune banque de gnes.
Pourquoi la rgnration est-elle critique pour la gestion

dune banque de gnes ?
La rgnration du matriel gntique entrane des risques pour
lintgrit gntique des accessions de matriel gntique dues aux
pressions de slection, aux croisements extrieurs, aux mlanges
mcaniques et dautres facteurs. Le risque de perte de lintgrit
gntique est lev lorsque lon rgnre des accessions de
matriel gntique gntiquement htrognes. La rgnration du
matriel gntique est galement trs coteuse.
Pourquoi faut-il rgnrer le matriel gntique ?

Le matriel gntique est rgnr pour les objectifs suivants :
Augmenter la quantit initiale de semences
Dans les nouvelles collections ou avec le matriel reus en donation,
la quantit de semences reue par la banque de gnes est souvent
insuffisante pour une conservation directe. Les semences peuvent
galement tre de mauvaise qualit cause dune faible viabilit
ou dinfections. Tous ces matriels requirent une rgnration. Le
matriel gntique nouvellement acquis dorigine trangre peut
devoir tre rgnr initialement en conditions de confinement
ou dans une zone disolation, sous la supervision des autorits
phytosanitaires nationales, comme dcrit dans le Chapitre 2.
Restaurer les stocks de semences dans les collections
actives et de base
Augmenter les stocks de semences des accessions qui ont :
une faible viabilit identifie lors des contrles priodiques ;
des stocks insuffisants pour la distribution et la conservation.
123
Les banques de gnes

doivent adopter des standards
de rgnration levs
(tels que le pourcentage
de germination quune
accession conserve dans
une banque peut atteindre
avant rgnration) an
dviter les drives gntiques
rsultant de la slection
naturelle des semences
ayant une longvit plus
grande au sein daccessions
gntiquement htrognes.
Les Standards FAO/IPGRI
pour les banques de gnes
(1994) recommandent que la
valeur initiale de germination
doit dpasser 85% pour la
plupart des semences et
que la rgnration doit
galement tre ralise quand
la viabilit passe en dessous
de 85% de sa valeur initiale.
La rgnration doit tre
ralise quand le nombre de
semences dans une collection
de base tombe en dessous du
nombre requis pour effectuer
au moins trois cycles de
rgnration.
Les collections actives doivent tre rgnres partir des

semences dorigine dans une collection de base ; ceci est
particulirement important pour les espces exogames. Il est
galement acceptable dutiliser les semences dune collection
active pour jusqu trois cycles de rgnration, avant de retourner
aux semences dorigine (collection de base) (FAO/IPGRI 1994).
Les collections de base doivent normalement tre rgnres en
utilisant les semences rsiduelles du mme chantillon.
Rpondre des exigences particulires

Il peut exister des exigences spciales pour la rgnration
daccessions ayant des caractristiques spciales que les
slectionneurs et les chercheurs utilisent frquemment comme
les accessions haut rendement, rsistantes aux maladies et aux
ravageurs et les stocks gntiques ou sil y a un nombre insuffisant
de semences pour un double de scurit et un rapatriement.
Considrer les facteurs suivants lorsque lon rgnre des accessions
de matriel gntique :
un environnement appropri pour minimiser la slection naturelle ;
des exigences particulires, si cest le cas, pour lever la
dormance et stimuler la germination (comme la scarification) ;
un espacement correct pour une leve optimale des semences ;
le systme reproductif de la plante et le besoin dune pollinisation
contrle ou dun isolement.
Procdures de rgnration
Si possible, rgnrer le matriel gntique dans sa rgion

cologique dorigine. Alternativement, chercher un environnement
qui ne slectionne pas des gnotypes au dtriment dautres
dans une population.
Si on ne trouve pas de site appropri, rechercher une collaboration
avec un institut qui peut fournir un site appropri, ou rgnrer
dans un environnement contrl tel quune chambre de culture.
Examiner lenvironnement biotique dans le contexte dinformations
pralables sur les plantes et de lexprience passe un
environnement biotique inappropri peut tre nuisible pour les
plantes, la qualit des semences et lintgrit gntique dune
accession.
Slection des accessions
La rgnration des accessions qui ont une qualit inadquate

(faible viabilit) doit tre prioritaire par rapport celles qui ont un
nombre de semences insuffisant.
La rgnration des accessions des collections de base doit tre
prioritaire par rapport celle des accessions des collections actives.
124
Prparation des parcelles de rgnration

Sol
La parcelle de rgnration doit tre aussi uniforme que possible.
Le champ doit tre bien drain.
Considrer la ncessit dune analyse de sol et appliquer les
traitements appropris la plante et au site (engrais, chaux,
irrigation ou lime, irrigation ou solarisation).
Solarisation
La solarisation consiste chauffer le sol en le couvrant avec des feuilles
de polythylne pendant lt sous les tropiques, pour contrler les
maladies transmises par le sol ; elle est ralise pendant au moins six
semaines au cours de la priode la plus chaude de lanne.
1. Cultiver soigneusement le terrain et lgaliser pour minimiser les
protrusions.
2. Donner 50 mm dirrigation avant dtaler les feuilles de
polythylne.
3. Utiliser des feuilles en polythylne clair transparent, d12 mm
dpaisseur.
4. Insrer deux cts de chaque feuille de polythylne dans les
sillons et enterrer profondment les cts dans le sol.
5. Placer des poids pour viter que les feuilles de polythylne
battent et se dchirent cause du vent.
6. Lors de la plantation, laisser une zone tampon dau moins 0,5
m autour des cts de la zone solarise pour la dilution de la
chaleur prs des cts.
7. Empcher que de leau dirrigation ne vienne dautres endroits
aprs la solarisation et lors de la croissance des plantes.
Mauvaises herbes et ravageurs et maladies contenus dans

le sol
Identifier les mauvaises herbes, les ravageurs et pathognes par
inspection et grce lexprience passe.
Penser rduire de tels problmes pendant la prparation des
parcelles de rgnration en appliquant les traitements suivants :
pulvrisation dherbicides ;
strilisation du sol ;
bchage pour encourager la germination des mauvaises
herbes, suivi par une pulvrisation dherbicide ;
bchage profond pour tuer les mauvaises herbes mergentes.
Propret
Garder les parcelles absolument exemptes de semences et de
plantes trangres.
125
Penser au risque de contamination par du pollen tranger et

prendre les mesures appropries au cours de la prparation de
la parcelle, et par des cultures intercalaires et le dsherbage la
main.
Sassurer que la mthode de prparation de la parcelle est
approprie pour la mthode choisie dtablissement des plantes
(par exemple des billons et des planches plates).
Prparer la parcelle de rgnration en prenant en compte :
le nombre daccessions rgnrer ;
le nombre de plantes par accession ;
lespacement entre les ranges et entre les plantes ;
laccs mcanique pour le dsherbage.
La mthode de prparation dpend de :
la structure du sol ;
les espces semer ou transplanter ;
le besoin en tuteurs, pour les plantes grimpantes.
Prparation des semences

1. Scher, battre et nettoyer les semences si les chantillons ont
t nouvellement acquis.
2. Pour celles en stockage :
a) Identifier les accessions candidates qui requirent une
rgnration ;
b) Retirer les accessions de la banque de gnes et les laisser
remonter en temprature ;
c) Prlever les chantillons de semences, en ayant lesprit la
taille minimale de lchantillon requis et le niveau actuel de
germination.
3. Sassurer de lexactitude absolue de lidentification des
chantillons lorsque lon sort les semences de la banque de
gnes, quon les emballe et quon tiqute les chantillons de
semences. Afin de minimiser les erreurs, il est suggr dutiliser
des systmes de gestion des informations informatiss pour
produire les tiquettes.
Le nombre minimum de semences pour la rgnration peut tre
estim partir de la taille de lchantillon standard et de la viabilit
de lchantillon, en utilisant lquation suivante :
Nombre de semences requises pour la rgnration = Population
de plantes dsire pour la rgnration/ (% de germination14 x %
dtablissement attendu au champ15).
14
Les pourcentages de germination et dtablissement au champ sont exprims en dcimales : 95%

est exprim comme 0,95.
15
Ltablissement des plantes au champ est gnralement infrieur de 5% au pourcentage de
germination dans de mauvaises conditions et infrieur de 1% dans de bonnes conditions.
126
Exemple :
Population de plantes dsire = 150
Pourcentage de germination = 85
Etablissement au champ attendu = 80
Nombre de semences taler =
150
= 220 semences
0.85 x 0.80
Prtraitements des semences

Un prtraitement spcifique peut tre ncessaire pour amliorer la
germination des semences et leur tablissement. Si les semences
sont trs dshydrates (taux dhumidit <8%), lever le taux
dhumidit par humidification comme dcrit dans le Chapitre 5.
Lever la dormance pour lespce ou les accessions (en utilisant
la scarification, la stratification, etc.).
Appliquer un traitement des semences appropri pour rduire
les dommages dus aux maladies et aux insectes.
Inoculer les symbiotes appropris (traitements avec Rhizobium
pour les lgumineuses).
Pour les accessions avec un nombre limit de semences,
prgermer en conditions contrles et transplanter les plantules
en pots avec du sol strilis et les cultivars en serre en les
surveillant avec attention.
Semis et gestion des cultures

La gestion des cultures pour la rgnration diffre des pratiques
commerciales normales, chez lesquelles la variation inter-plantes
nest pas une considration primaire.
Pour viter des pertes importantes dallles et maximiser le
rendement en semences :
utiliser 100 plantes ou plus chez les accessions gntiquement
htrognes ;
bien prendre en compte les besoins en longueur de jour de
lespce, ou les plantes risquent de ne pas fleurir ;
fournir des conditions appropries pour la croissance pour
dclencher une floraison abondante ;
liminer la comptition en arrachant les plantes trangres ;
sassurer dune source en eau stable, en irriguant si ncessaire.
Date du semis
Semer un moment optimal, de telle sorte que la maturit et la
rcolte concident avec les conditions atmosphriques les plus
favorables.
127
La miose et lanthse sont

des stades sensibles du
dveloppement des plantes. Il
faut prendre soin dviter tout
stress tel que les tempratures
leves et la scheresse.
Sil y a beaucoup de variations entre les accessions en ce qui

concerne le moment de la floraison, classer les accessions par
maturit prcoce et tardive et adapter les dates de plantation en se
basant sur la documentation existante, de telle sorte que toutes les
accessions arrivent maturit dans un environnement uniforme.
La plantation en se basant sur la maturit rend la gestion des
cultures et la rcolte commodes.
Semer en rangs uniformment espacs et avec des espacements
uniformes entre les plantes dun mme rang.
Eviter la comptition pour la lumire et les lments nutritifs en
utilisant de larges espacements.
Assurer un contrle total des pathognes et des ravageurs en
utilisant les mesures standards de protection des plantes.
Lclaircissement ne doit pas tre normalement pratiqu sil
est ncessaire, claircir les plantes au hasard.
Assurer une absence continue de plantes trangres aux
alentours pendant tout le cycle de rgnration, par dsherbage
la main ou en utilisant une culture intermdiaire.
Irrigation
Irriguer le champ lorsque cela est ncessaire.
Ne jamais soumettre les plantes un stress hydrique.
Assurer un drainage de leau et viter tout excs deau.
Une inspection rgulire des plantes est obligatoire pour atteindre
ces objectifs.
Vrier lidentit dune accession

Lidentit dune accession doit tre vrifie lorsque les plantes
sont en train de pousser en comparant :
Les donnes morphologiques dans le systme de
documentation ;
Le matriel de rfrence tel que des spcimens dherbier
originaux ou des semences.
Llimination des types aberrants doit tre ralise avec prcautions
et seulement lorsquil est absolument clair que les plantes aberrantes
sont de vrais mlanges dautres accessions ou varits.
Lorsque les matriels sont cultivs en rangs, les plantes qui
poussent en dehors des rangs doivent tre limines.
Biologie de la pollinisation
A moins quune espce ne soit autogame obligatoire, un contrle appropri
de la pollinisation doit tre appliqu. Un compendium des mcanismes
de croisements peut tre trouv sur le site www.bioversityinternational.
org/Themes/Genebanks/Species_Compendium/default.asp.
128
Pour les plantes allogames, llimination du pollen tranger peut tre

obtenu par :
isolement spatial (ce nest pas pratique lorsque lon a affaire
un grand nombre daccessions de la mme espce, mais cest
trs utile lorsque lon a affaire un nombre limit daccessions
de nombreuses espces) ;
isolement temporel ;
barrires naturelles ou artificielles en cultivant les accessions
au milieu despces croissance importante comme le tournesol
et le chanvre ;
ensachement des inflorescences slectionnes avec des sachets
en lin ou en papier lpreuve du pollen ou des pollinisateurs et
en rigeant des filets temporaires lpreuve du pollen et des
pollinisateurs autour des parcelles. Une pollinisation manuelle de
remplacement est parfois ncessaire pour augmenter la mise
graines.
Les plantes pollinises par les insectes doivent tre cultives dans
des cages en filet ou en nylon avec des ruches spcialement
conues pour les insectes pollinisateurs tels que les abeilles ;
une accession de chaque espce cultive doit tre plante dans
chaque cage. Les insectes pollinisateurs sont lchs lintrieur
de la cage au moment de la floraison. Une pollinisation manuelle
supplmentaire peut tre ncessaire pour amliorer la mise graines
(comme chez les espces sauvages de tomate et de courgette).
Les cages disolement peuvent tre coteuses et lombrage peut
affecter la croissance des plantes. Une solution efficace peut tre
lensachage et la pollinisation manuelle contrle. Cependant, si
les plantes fleurissent pendant ou la fin de la saison humide, les
sacs de pollinisation peuvent tre abms par la pluie. Lhumidit
excessive et lhumidit dans les sacs autour des fleurs peut
galement conduire une augmentation des infections bactriennes
et fongiques. Dans des conditions dhumidit importante, il vaut
mieux tiqueter les fleurs et enlever les sacs ds que la pollinisation
est termine, de telle sorte que les fruits puissent se dvelopper
dans les conditions de champ normales.
Rcolte et gestion aprs rcolte
Rcolter la maturit maximale (aprs que les semences aient

atteint le point de maturit physiologique) :
lorsque le maximum de semences sont mres ;
lorsque les semences deviennent tolrantes la dessiccation
et peuvent tre battues sans dommages mcaniques ;
avant que la dtrioration commence ;
avant que la dispersion naturelle se produise.
129
Echelonner la rcolte sil y a des diffrences dans la maturit des

accessions.
Rcolter des plantes individuelles au sein dune accession quand il
y a des diffrences dans la floraison et la maturit entre les plantes.
Mlanger une proportion gale de semences des diffrentes
plantes mres pour viter les effets maternels.
Les sacs contenant les semences ou les pis rcolts doivent tre
faits de matriau permable permettant une bonne circulation de
lair pour la dshydratation.
Les options pour la rcolte dpendent de la plante :
Rcolter les plantes individuellement, prfrablement
manuellement. Si lon rcolte la machine, utiliser une
machine spcialement conue parce que les machines
commerciales ne peuvent pas tre nettoyes correctement
entre deux parcelles de rgnration.
Rcolter les infructescences individuellement la main.
Commencer la dshydratation des semences immdiatement
aprs la rcolte pour empcher la dshydratation des semences.
Si les semences ne peuvent pas tre traites rapidement, elles
doivent tre places dans une zone de stockage temporaire,
dans un environnement contrl tel quune pice climatise.
Documentation
La rgnration est ralise comme une rsultante des informations
gnres par le contrle des semences. Comme les mthodes de
rgnration varient selon lespce, les types de descripteurs utiliss
pour enregistrer les informations varient galement. Les descripteurs
suivants aideront documenter les donnes :
Site de rgnration
Collaborateur (quand applicable)
Rfrence de la parcelle
Date de semis
Germination au champ
Nombre de plantes tablies
Jours entre le semis et la floraison
Systme reproductif
Mthode de contrle de la pollinisation utilise
Date de rcolte
Nombre de plantes rcoltes
Quantit de semences rcoltes
Ellis, R.H., Hong, T.D. et Roberts, E.H. 1985. Handbook of seed technology
for genebanks. Volume 1. Principles and Methodology. Handbooks for
Genebanks. No. 2, IBPGR, Rome, Italie.
FAO/IPGRI. 1994. Genebank Standards. FAO and IPGRI, Rome, Italie.
130
Sackville Hamilton, N.R. et Chorlton, K.H. 1997. Regeneration of accessions

in seed collections: A decision guide. (J. Engels, ed.). Handbook for
Genebanks No. 5. IPGRI, Rome, Italy.
Thormann, I., Metz, T. et Engels, J.M. 2004. IPGRI species compendium, Version
1.0, December 2004. IPGRI, Rome, Italie. www.bioversityinternational.
org/Themes/Genebanks/Species_Compendium/default.asp
131
Tableau 8.4. Comportement reproductif et mcanismes de contrle de la pollinisation pour la rgnration de

plantes cultives importantes.
Plante
Espce
Comportement vis--vis de la
pollinisation (taux de croisement)
Mcanisme de
pollinisation
Mthode de rgnration
Amaranthe
Amaranthus spp.
AL
Vent
Isolement ; ensachage
Arachide
Arachis hypogaea
AU
Aubergine
Solanum
melongena
Partiellement AU ; jusqu 48% de

fcondations croises naturelles
Insectes
Vent, insectes
Isolement spatial, cages

grillages avec pollinisateurs
Avoine
Avena sativa
AU
Betterave
Beta vulgaris
AL ; auto-incompatible
Bl
Triticum aestivum
AU
Buffel grass
Cenchrus ciliaris
AL
Vent
Calebasse
Lagenaria siceraria
AL ; monoque
Insectes
Ensachage et pollinisation
manuelle
Carotte
Daucus carota
AL; protandre
Insectes
Cages grillages avec

pollinisateurs
Chicore
Cichorium intybus
AL ; fortement auto-incompatible
Insectes
Isolement spatial ; ensachage;

cages insect-proof
Choux
Brassica oleracea
var. capitata
AL
Insectes

pollinisateurs
Choux fleur
Brassica oleracea
var. botrytis
Principalement AL
Insectes
Ensachage
Concombre
Cucumis sativus
AL; monoque
Insectes
manuelle
Coton
Gossypium spp.
Principalement AL ; 1050% de
Insectes
Ensachage ; cages insect-proof
Courge
Cucurbita
moschata
AL ; monoque
Insectes
manuelle
Crotalaire
Crotalaria juncea
Principalement AU
Dolique
pourpre
Lablab purpureus
Eleusine
Eleusine corocana
AU
Epinard
Spinacea oleracea
AL ; dioque
Vent
Isolement spatial
Fve
Vicia faba
Principalement AU ; 48% de
fcondations croises
Insectes
Fraisier
Fragaria ananassa
Principalement AL
Insectes
Cages insect-proof
Gombo
Abelmoschus
esculentus
Partiellement AU ; 419% de
fcondations croises
Insectes
Isolement ; cages insect-proof

ou ensachage
Haricot
commun
Phaseolus vulgaris
Principalement AL ; pollinisation croise Insectes

8-20%
Isolement ; cages insect-proof ;

ensachage
Haricot de
Lima
Phaseolus lunatus
Principalement AU ; jusqu 18% de

fcondations croises naturelle
Insectes
Isolement
Vent
Ensachage
Haricot mungo
Vigna mungo
AU
Ivraie vivace
Lolium perenne
AL
Jarosse
gesse
Lathyrus sativus
AU ; des niveaux significatifs dAL

peuvent tre observs
Laitue
Lactuca sativa
Lentille
Lens culinaris
AU
Lin
Linum
usitatissimum
Lupin
Lupinus spp.
Ensachage
Insectes
Ensachage ; cages insect-proof
Normalement AU ; jusqu 12% de

croisements naturels
Insectes
Principalement AU ; une certaine AL

peut tre observe
Insectes

ou ensachage
132
Plante
Espce
Comportement vis--vis de la
pollinisation (taux de croisement)
Mcanisme de
pollinisation
Mthode de rgnration
Luzerne
Medicago sativa
Principalement AL (8494%)
Insectes
(dplacements)
Isolement ; cages grillages

avec pollinisateurs
Mas
Zea mays
AU ; Monoque
Vent
Ensachage de lpis et
pollinisation manuelle avec un
mlange de pollen
Vent
Ensachage ; croisements manuels

avec un mlange de pollen
Insectes
Ensachage
Insectes

pollinisateurs
Insectes
manuelle
Insectes

ou ensachage
Mlilot blanc
Melilotus albus
AU
Mil
Pennisetum
glaucum
Principalement AL ; protogyne
Millet des
oiseaux
Setaria italica
AU
Moutarde
brune
Brassica juncea
pollinisations croises
Nib
Vigna unguiculata
Principalement AU
Oignon
Allium cepa
Principalement AU ; protandre
Orge
Hordeum vulgare
AU
Pastque
Citrullus lanatus
AL ; monoque
Pois
Pisum sativum
Principalement AU
Pois dAngole
Cajanus cajan
Normalement AU ; 540% de
pollinisations croises naturelles
Pois-chiche
Cicer arietinum
AU
Poivron, piment Capsicum annuum
Souvent AL ; htrostylie
Insectes
Ensachage
Pomme de
terre
Solanum
tuberosum
Principalement AL
Insectes
Radis
Raphanus sativus
Insectes

pollinisateurs
Ricin
Ricinus communis
AL; monoque
Vent
manuelle
Riz
Oryza sativa
AU
Sainfoin
Carthamus tinctorius
AU
Sarrasin
Fagopyrum
esculentum
AL ; auto-incompatible
Vent
manuelle
Seigle
Secale cereale
Wind
Bagging and Pollinisation

manuelle avec un mlange de
pollen
Ssame
Sesamum indicum
Principalement AU ; jusqu 5% de
pollinisation croise
Insectes
Soja
Glycine max
AU
Soja vert
Vigna radiata
AU
Sorgho
Sorghum bicolor
Principalement AU ; jusqu 150% de Vent

pollinisations croises
Tabac
Nicotiana tabacum
AU
Tomate
Lycopersicon
esculentum
Tournesol
Helianthus annuus
Normalement AU ; certaines espces

auto-incompatibles avec AL modre
leve
Partiellement AL ; protandre
Insectes
manuelle
Trfle violet
Trifolium pratense
Insectes

pollinisateurs
Vent
Triticale
Triticosecale
AL
Vesce
Vicia sativa
AU
AU= Autogame ; AL= Allogame.
133
ANNEXE I
Politiques et cadres internationaux qui inuencent
laccs au matriel gntique et son change
Lassemblage de matriel gntique et sa distribution impliquent
essentiellement le mouvement de semences entre des endroits ou
des rgions diffrentes. En assemblant du matriel gntique, les
banques de gnes acquirent ou importent du matriel provenant
des collecteurs de matriel gntique ou dautres fournisseurs
lintrieur ou lextrieur du pays. La distribution implique
lexportation dchantillons de semences des utilisateurs dans le
monde entier. En plus des rglements phytosanitaires dcrits dans
les Chapitres 2 et 7, les politiques, cadres et accords internationaux
suivants influencent laccs au matriel gntique et son change.
Convention sur la diversit biologique (CDB)

La Convention sur la diversit biologique (CDB), qui est entre en
action en dcembre 1993, a fourni un cadre lgal pour la conservation
et lutilisation durables des ressources phytogntiques. Avant
la CDB, les ressources gntiques taient considres comme
lhritage commun de lhumanit et taient disponibles gratuitement
pour leur utilisation sans restrictions. La CDB a affirm la souverainet
nationale sur les ressources gntiques ; dans lArticle 15, elle a
fourni des directives pour laccs et lutilisation, incluant un partage
juste et quitable des bnfices dcoulant de lutilisation des
ressources (www.biodiv.org/convention/articles.asp).
Code de conduite international pour la collecte et le

transfert du matriel phytogntique
Le Code international, adopt par la confrence de la FAO en 1993,
fournit un cadre gnral pour la collecte et le transfert du matriel
gntique. Il tablit les responsabilits minimales des collecteurs
et des curateurs en ce qui concerne la collecte et le transfert de
matriel gntique. Bien quil soit un instrument volontaire, le code
est compatible avec la CDB et sert de rfrence aux pays pour
tablir leurs propres rglements pour la collecte et lchange de
matriel gntique (www.fao.org/ag/agp/agps/pgr/icc/icce.htm).
Accords dacquisition de matriel gntique

LArticle 15 de la CDB stipule que laccs aux ressources gntiques
se fera selon des termes agrs mutuellement et sous condition de
consentement pralable en connaissance de cause. Le consentement
pralable en connaissance de cause signifie que le pays fournisseur
peut permettre ou refuser laccs au matriel gntique aprs une
requte du demandeur. Laccs se fait selon des termes agrs
mutuellement quand le fournisseur et le receveur sont daccord.
134
Ceci sous-entend normalement un arrangement contractuel excut

sur une base bilatrale, qui prend souvent la forme dun accord
dacquisition de matriel gntique qui prcise les termes selon
lesquels le matriel gntique est acquis et transfr.
Trait international et systme multilatral daccs et de

partage des avantages
En 2001, la Confrence de la FAO a adopt le Trait international sur
les PGRFA, reconnaissant que : (i) dans tous les pays, lagriculture
dpend largement des PGRFA qui sont originaires dailleurs ; (ii) les
avances futures dans lamlioration des plantes ncessitent laccs
continu une large base gntique sans restrictions majeures ;
(iii) une approche purement bilatrale laccs et au partage des
avantages nest pas bien adapte aux ressources gntiques des
plantes alimentaires majeures. Le Trait cre un Systme multilatral
daccs et de partage des avantages qui couvre 64 plantes cultives
et fourragres, et fournit un accs facilit aux ressources gntiques
dans le Systme multilatral. Les parties contractantes sont obliges
de fournir laccs dans un but de recherche pour lagriculture et
lalimentation, damlioration et de formation quand :
elles sont requises de le faire par une autre partie, une
entit lgale sous la juridiction dune partie ou par un institut
international qui a sign un accord avec lorgane directeur, et
les PGRFA ont t acquises sous ces termes.
Selon les termes du trait, les pays acceptent que le consentement
pralable en connaissance de cause nest pas requis pour laccs
une catgorie dfinie de PGRFA, mais quune srie de termes
accepts mutuellement vont sappliquer. Laccord standard
de transfert de matriel (SMTA) permet laccs aux ressources
gntiques et tablit la partage des avantages base sur des
royalties perues sur les produits commerciaux qui utilisent le
matriel obtenu par le systme multilatral. Pour plus de dtails, voir
www.fao.org/ag/cgrfa/itpgr.htm
Permis CITES
La Convention sur le commerce international des espces de faune
et de flore sauvages menaces dextinction (CITES) est un accord
international entre les gouvernements nationaux qui aide les pays
membres contrler et surveiller les populations animales et vgtales
menaces. La CITES rgule le commerce et lchange au travers de
permis et de certificats. Lorsque lon importe des chantillons dune
espce qui est liste dans les appendices de la CITES, un permis
dimportation CITES du pays importateur et un permis dexportation
CITES du pays dorigine doivent tre obtenus.
135
Les espces couvertes par la CITES sont listes dans trois

appendices selon le degr de protection dont elles ont besoin.
1. LAppendice I liste les espces qui sont le plus en danger.
2. LAppendice II liste les espces qui ne sont pas aujourdhui
menaces mais qui risquent lextinction sauf si leur commerce
est troitement contrl.
3. LAppendice III est une liste despces pour lesquelles la
coopration dautres pays est ncessaire pour empcher leur
exploitation non durable ou illgale.
Les semences des plantes de lAppendice II et les semences des
hybrides propags artificiellement des plantes de lAppendice I
sont exemptes de contrles CITES. Cependant, les plantes issues
de semences exemptes sont protges et ncessitent un permis
pour leur importation et leur exportation. La base de donnes des
espces listes dans la CITES, incluant les trois appendices et les
points focaux pour les permis et les certificats est disponible sur
www.cites.org.
Organismes gntiquement modifis (OGM)

Plusieurs pays ont tabli des cadres lgislatifs pour limportation
et la manipulation des OGM. Ils sont bass en grande partie sur le
Protocole de Carthagne sur la bioscurit qui est entr en application
en septembre 2003 (voir www.biodiv.org/biosafety/default.aspx).
Les autorits nationales de bioscurit, en collaboration avec les
autorits phytosanitaires, sont responsables de la dlivrance de
permis dimportation, de la conduite dvaluation des risques et
de lapplication des directives de bioscurit. Les chercheurs qui
souhaitent importer des OGM doivent soumettre une demande
fournissant : les dtails concernant le matriel gntique introduire,
les informations sur les recherches et les tests des OGM en question,
et un plan de mesures de scurit suivre lors de lintroduction.
Laccord est donn si lautorit nationale dtermine que lOGM ou
les produits de lOGM ne posent pas de risques lenvironnement,
la diversit biologique ou la sant humaine. Avant lexportation
dOGM, lautorisation de lautorit de bioscurit du pays exportateur
est aussi requise. Aucune autorisation dexportation ne sera donne
si le pays exportateur interdit lOGM ou le produit de lOGM.
136
ANNEXE II
Mthodes srologiques de dtection des pathognes
des vgtaux
Procdure gnrale utilisant lACPELISA
1. Rcolter des chantillons frais de feuilles des plantes tester
et des tmoins et peser 0,2 g de chaque. Broyer chaque
chantillon de feuilles dans 2 ml de tampon de revtement
(tampon carbonate 0,05 M) +2% p/v polyvinyle pyridine et 0,2%
p/v Na2SO3. Transfrer la sve dans un tube Eppendorf tiquet.
Centrifuger pendant cinq minutes 10 000 rpm.
2. Etiqueter la plaque de microtitration et dposer les chantillons
raison de 100 l par puits. Couvrir la plaque avec du parafilm et
incuber une nuit 4C. Peser 4 g de lchantillon sain et broyer
dans 10 ml de solution saline tamponne au phosphate avec du
Tween (PBST), qui agit comme une solution bloquante. Elle est
prpare en dissolvant 80,0 g de NaCl, 2,0 g de KH2PO4, 11,0 g
de Na2HPO4 and 2,0 g de KCl dans 2000 ml deau distille, en
ajustant le pH 7,4 et en ajoutant 5,0 ml de Tween pour arriver
10 l. Peser les chantillons et dissoudre. Filtrer au travers de laine
de coton et ajuster le filtrat 80 ml. Utiliser cela pour faire des
dissolutions de lantisrum. Laisser absorber une nuit 4C.
3. Prparer une solution de srum albumine bovine 0,1% dans du
PBST.
4. Rincer la plaque sous un lger courant deau du robinet et laver
trois fois avec du PBST.
5. Ajouter du PBST tous les puits de la plaque, raison de 150 l
par puits. Couvrir la plaque avec du parafilm et incuber pendant
30 minutes temprature ambiante.
6. Vider compltement la solution bloquante de la plaque. Sans
laver, ajouter lantisrum dilu ; utiliser 100 l par puits. Couvrir
la plaque avec du parafilm et incuber trois ou quatre heures
temprature ambiante.
7. Faire la dilution du conjugu de lenzyme alcaline phosphatase
dans du PBST (1/1000 frachement prpar).
8. Laver la plaque trois fois avec du PBST, puis ajouter le conjugu
dilu en suivant le pattern du diagramme de charge, en
commenant avec le plus dilu. Utiliser 100 l par puits. Couvrir
la plaque et incuber une nuit 4C.
9. Laver la plaque trois fois avec du PBST.
10. Dissoudre la tablette de substrat (p-NPP, Sigma) dans du tampon
substrat (1mg/ml) (dithanolamine 10%, pH 9,8, stocke au
rfrigrateur).
11. Ajouter le substrat dissous tous les puits, raison de 150 l
par puits. Incuber temprature ambiante pendant 30 minutes.
137
Evaluer et noter lintensit de la couleur de chaque puits avec le

lecteur ELISA.
Procdure gnrale dutilisation du test dimmunoempreinte (TBIA) sur membranes de cellulose

1. Rcolter des tissus (feuilles, ptioles, tiges, etc.).
2. Pour les tissus fins comme les feuilles, les rouler en un noyau
serr. Pour les chantillons en vrac, les attacher ensemble avec
du parafilm.
3. Couper un morceau de membrane de nitrocellulose (NCM),
couper le coin suprieur gauche et dessiner une grille avec un
marqueur.
4. Tenir les tissus dune main et, avec lautre main, couper dun
seul mouvement avec une lame de rasoir neuve pour obtenir une
surface plane.
5. Presser doucement mais fermement la surface nouvellement
coupe sur un carr de la NCM. Marquer quel matriel a t
press sur quel carr sur un dessin prpar. Continuer faire
des taches avec les feuilles jusque la grille soit remplie.
6. Laver trois fois la NCM avec du PBST intervalles de cinq
minutes.
7. Diluer lantisrum dans de la sve saine dans du PBST (dilution
1/5001/2000) et laisser absorber deux heures temprature
ambiante ou une nuit 4C.
8. Bloquer le NCM dans 2 g/ml dalcool polyvinyle dans du PBST
et incuber une minute temprature ambiante.
9. Laver comme ltape 6.
10. Ajouter lantisrum et incuber une heure temprature
ambiante.
12. Ajouter le conjugu anti-lapin (dilution 1/10001/5000 dans
du tampon conjugu) et incuber une heure temprature
ambiante.
14. Ajouter la solution de substrat (NBT/BCIP).
15. Pour arrter la raction, laver avec de leau d-ionise.
138
ANNEXE III
Glossaire
Accession : Un chantillon de semences distinct, identifiable de
manire unique reprsentant un cultivar, une ligne de slection ou
une population, qui est maintenu en stockage pour la conservation
et lutilisation.
Akne : Fruit sec, non dhiscent graine unique avec la graine
attache au pricarpe par un seul point unique.
Banque de gnes : Un centre dans lequel sont conserves
des ressources gntiques dans des conditions adaptes pour
prolonger leur vie.
Base de donnes : Un ensemble organis de donnes connectes
entre elles assembles pour un but spcifique et conserves dans
un ou plusieurs systmes de stockage.
Battage : Le processus de battre les plantes avec une machine ou
la main pour sparer les semences.
Capsule : Un fruit sec dhiscent drive dun ovaire avec un ou deux
carpelles qui souvrent partiellement maturit.
Caractrisation : Lenregistrement de caractres hautement
hritables qui peuvent tre aisment vus et qui sont exprims dans
tous les environnements.
Certificat phytosanitaire : Un certificat fourni par le personnel du
service de protection des plantes dun gouvernement pour vrifier
que le matriel est substantiellement exempt de ravageurs et de
maladies.
Code barre : Un systme de codage informatis qui utilise un
motif imprim ou des barres sur des tiquettes pour identifier
des accessions de matriel gntique. Les codes barres sont lus
en scannrisant optiquement le motif imprim et en utilisant un
programme informatique pour dcoder le motif.
Collection : Un groupe daccessions de matriel gntique maintenu
dans un but spcifique dans conditions dfinies.
139
Collection active : Une collection daccessions de matriel

gntique qui est utilise pour la rgnration, la multiplication,
la distribution, la caractrisation et lvaluation. Les collections
actives sont conserves en stockage court moyen terme et
gnralement dupliques dans une collection de base maintenue en
stockage moyen long terme.
Collection de base : Une collection de matriel gntique qui est
conserve en stockage long terme, en scurit et qui nest pas
utilise comme source de distribution en routine. Les semences
sont gnralement stockes des tempratures infrieures zro
et avec un faible taux dhumidit.
Collection en champ : Une collection de matriel gntique
maintenue sous la forme de plantes vivantes du matriel
gntique qui serait autrement difficile maintenir sous forme de
semences est communment maintenu dans des collections en
champ.
Collection in vitro : Une collection de matriel gntique maintenue
sous la forme de tissus vgtaux, allant de protoplastes et de
suspensions cellulaires jusqu des cultures de cals, des mristmes
ou des embryons.
Conservation long terme: Le stockage de matriel gntique
pendant une longue priode, comme dans des collections de base
ou des duplications de collections. La priode de stockage avant que
les semences doivent tre rgnres varie, mais elle est au moins de
plusieurs dcades, si ce nest dun sicle ou plus. La conservation
long terme se droule des tempratures infrieures zro.
Conservation moyen terme : Le stockage de matriel gntique
moyen terme comme dans des collections actives ou de travail ;
on assume gnralement quil y aura peu de perte de viabilit
pendant environ dix ans. La conservation moyen terme se droule
des tempratures comprises entre 0 et 10C.
Conservation ex situ : La conservation de la diversit biologique
en dehors de son habitat naturel dans le cas des ressources
phytogntiques, cela peut tre dans des banques de semences,
des banques in vitro ou des collections vivantes en champ.
Contrle : La vrification priodique des accessions pour leur
viabilit et leur quantit.
140
Cultivar : Une varit de plante cultive produite par des mthodes

damlioration scientifique ou de slection par les agriculteurs.
Drive gntique : Les changements dans la composition dune
population lorsque le nombre dindividus est rduit au dessous de
la frquence de certaines allles quelle contient.
Descripteur : Un trait, une caractristique ou un attribut mesurable et
identifiable observ dans une accession qui est utilis pour faciliter la
classification, le stockage, la recherche et lutilisation des donnes.
Dessiccateur : Un petit rcipient en verre avec un couvercle tanche
lair et contenant un agent dessiccant tel que du silicagel ou du
chlorure de calcium, au dessus duquel le matriel dshydrater est
plac sur une plateforme perfore.
Distribution : Le processus de fournir des chantillons daccessions
de matriel gntique des slectionneurs et dautres utilisateurs.
Diversit gntique : La varit de traits gntiques qui rsultent
en des caractristiques diffrentes.
Documentation : La collecte organise denregistrements qui
dcrivent la structure, le but, le fonctionnement, lentretien et les
demandes de donnes.
Dommage du limbibition : Dommage caus par une absorption
rapide de leau chez une semence trs dshydrate (voir aussi
humidification).
Donateur : Une institution ou un individu responsable de la donation
de matriel gntique.
Donnes passeport : Informations de base sur lorigine dune
accession, telles que les dtails enregistrs sur le site de collecte,
le pedigree et toute autre information pertinente qui aide
lidentification dune accession.
Dormance : Ltat dans lequel certaines semences vivantes ne
germent pas, mme dans des conditions normalement adquates.
Duplication de scurit : Une duplication dune collection de
base stocke dans les mmes conditions pour la conservation
141
long terme, mais un endroit diffrent pour empcher la perte

accidentelle de matriel de la collection de base.
Echantillon : Une partie dune population utilise pour estimer les
caractristiques de lensemble.
Echantillon au hasard : Un chantillon tir au hasard dans un
groupe plus important.
Echantillon le plus original (MOS) : Un chantillon de semences
qui ont subi le nombre de rgnration le plus bas depuis que le
matriel a t acquis par la banque de gnes, recommand pour
le stockage comme collection de base. Cela peut tre un souschantillon du lot de semences dorigine ou un chantillon de
semences du premier cycle de rgnration si le lot de semences
dorigine a ncessit une rgnration avant le stockage.
Evaluation : Lenregistrement des caractristiques dont lexpression
est souvent influenc par des facteurs environnementaux.
Exploration : Laction de chercher de la diversit gntique au champ.
Exogame : Accouplements contrls ou naturels entre des
individus sans relations entre eux. Exogame peut galement faire
rfrence une espce qui possde des barrires spcifiques
lautofcondation ou qui montre une telle dpression consanguine
que les individus consanguins natteignent jamais la maturit.
Follicule : Un fruit sec, unicellulaire contenant de nombreuses
graines consistant en un seul carpelle, dhiscent par une suture
ventrale.
Fruits dhiscents : Des fruits qui souvrent maturit pour
dissminer leurs semences (voir follicule, capsule).
Fruit indhiscent : Fruit qui ne souvre pas maturit (voir aussi
akne).
Funicule : Une tige par laquelle un ovule ou une graine se rattache
la paroi du fruit.
Gnotype : La constitution gntique dune plante ou dun organisme
individuel.
142
Germination : Le processus biologique qui conduit au dveloppement

dune plantule partir dune graine. Lmergence de la radicule est
le premier signe visible de la germination, mais peut ntre suivi par
aucune croissance ultrieure ou par un dveloppement anormal.
Selon les rgles de lISTA, seules les plantules montrant une
morphologie normale sont considres comme ayant germ.
Germination normale : Germination au cours de laquelle les
plantules montrent toutes les structures racinaires et caulinaires
essentielles et sont capables de se dvelopper en plantes matures
avec des conditions favorables.
Humidification : Le processus par lequel le taux dhumidit de
semences trs dshydrates est augment en les plaant dans
un environnement humide ; lhumidification aide empcher les
dommages causs aux semences par une absorption rapide de leau.
Humidit absolue : Quantit de vapeur deau prsente dans une
unit de volume dair, gnralement exprime en kilogrammes par
mtre cube.
Humidit relative (HR) : Une mesure de la quantit deau prsente
dans lair compare la quantit la plus grande que peut contenir
lair une temprature donne, exprime en pourcentage. Elle
diffre de lhumidit absolue, qui est la quantit de vapeur deau
prsente dans une unit de volume dair, gnralement exprime en
kilogrammes par mtre cube.
Intervalle de contrle : La priode de stockage entre deux tests
de vrification.
Inventaire : Une liste dchantillons (et leurs caractristiques) qui
sont stocks dans une banque de gnes.
Isotherme : Un graphe montrant la relation entre le taux dhumidit
des semences et le pourcentage dhumidit relative (voir aussi
isothermes de sorption).
Isotherme de sorption : Voir isotherme.
Ligne de slection : Un groupe dorganismes identiques diplodes
ou polyplodes de pur croisement qui se distinguent dautres individus
de la mme espce par un phnotype et un gnotype uniques.
143
Liste de descripteurs : Une collection de tous les descripteurs

individuels dune plante cultive ou dune espce donne.
Matriel gntique : Le matriel gntique qui forme la base
physique de lhrdit et qui est transmis dune gnration la
suivante par les cellules germinales.
Maturit de masse : Le stade de dveloppement auquel les
semences atteignent leur poids sec maximal.
Multiplication : Lchantillon reprsentatif dune accession que lon
fait pousser pour multiplier la quantit de matriel conserv pour la
distribution.
Numro daccession : Un identifiant unique qui est assign par le
curateur lorsquune accession est entre dans une collection. Ce
numro ne doit jamais tre assign une autre accession.
Organisme gntiquement modifi (OGM) : Un organisme dont
le matriel gntique a t dlibrment altr (voir aussi plante
transgnique).
Pathogne : Un microorganisme vivant tel quun virus, une
bactrie ou un champignon qui cause une maladie chez un autre
organisme.
Pedigree : Lenregistrement du lignage dune ligne gntique ou
dune varit.
Phnotype : Lapparence externe dune plante qui rsulte
de linteraction entre sa composition gntique (gnotype) et
lenvironnement.
Plantes transgniques : Des plantes qui ont t modifies
gntiquement en utilisant des techniques dADN recombinant pour
leur donner de nouvelles caractristiques. Les plantes transgniques
sont produites en ajoutant un ou plusieurs gnes au gnome dune
plante en utilisant un processus appel transformation.
Pollinisation : Le processus dans lequel le pollen est transfr
dune anthre un stigma rceptif par des agents pollinisateurs
tels que le vent, les insectes, les oiseaux, les chauves-souris ou
louverture de la fleur elle-mme.
144
Population : Un groupe de plantes ou danimaux individuels

qui partagent une zone ou rgion gographique et qui ont des
caractres communs.
Potentiel hydrique : Le potentiel chimique de leau pour une
raction ou un mouvement. Le potentiel hydrique est important pour
la dshydratation des semences parce quil mesure la capacit de
leau bouger. Leau bouge toujours de zones potentiel hydrique
lev vers des zones potentiel hydrique bas.
Propagule : Toute structure ayant la capacit de donner naissance
une nouvelle plante, que ce soit par reproduction sexue ou
asexue (vgtative). Cela inclut les semences, les spores et toute
partie du corps vgtatif capable dune croissance indpendante si
on la dtache du parent.
Quarantaine : Le confinement de matriel gntique introduit
soumis des rglements phytosanitaires pour sassurer quil ne
transporte pas de maladies ou de ravageurs nocifs pour le pays
importateur.
Race locale : Un cultivar de plante cultive qui a volu au cours
de la slection dirige par les agriculteurs et qui est spcifiquement
adapt aux conditions locales ; les races locales sont gnralement
gntiquement htrognes.
Ravageur : Un organisme considr comme nuisible ou nocif.
Rgnration : Culture dune accession de semences pour obtenir
un chantillon frais ayant une viabilit leve et comprenant de
nombreuses semences.
Rgion micropylaire : Le point sur une semence qui tait lorifice
(pore) de lovule.
Sachets en feuilles daluminium plastifies : des sachets constitus
dun laminat compos dun feuillet interne de polythylne, dun
feuillet intermdiaire de feuille daluminium et dun feuillet extrieur
de polyester.
Semences dures : Semences qui ne simbibent pas et ne germent
pas lorsquelles sont places dans un milieu humide parce quelles
sont impermables leau.
145
Semences orthodoxes : Semences qui peuvent tre dshydrates

jusqu une teneur en humidit faible et stockes basse temprature
sans dommages pour augmenter la longvit des semences.
Semences rcalcitrantes : Semences qui perdent leur
viabilit lorsquelles sont dshydrates ou stockes basse
temprature.
Silicagel : Un agent chimique inerte qui absorbe leau de son
environnement et va relarguer cette eau par vaporation lorsquon
le chauffe.
Silique : Fruit dshydrat, dhiscent et allong compose de deux
carpelles spars par une partition portent les graines.
Solarisation : Une mthode non toxique pour tuer les mauvaises
herbes et les insectes ravageurs qui consiste couvrir le sol avec
des couches de plastique clair et laisser le soleil crer assez de
chaleur.
Standard de rgnration : Le pourcentage de viabilit des
semences auquel ou en dessous duquel laccession doit tre
rgnre pour produire des semences fraches.
Systme de gestion de base de donnes : une partie de logiciel
qui contrle lorganisation, le stockage, la recherche, la scurit
et lintgrit des donnes dans une base de donnes elle
accepte des demandes de lapplication et commande au systme
oprationnel de transfrer les donnes appropries. Les principaux
vendeurs sont Oracle, IBM, Microsoft et Sybase. MySQL est un
produit en source ouverte trs populaire.
Taux dhumidit (par rapport au poids frais) : Le poids dhumidit
libre divis par le poids de leau plus la matire sche, exprim en
pourcentage.
Teneur en humidit lquilibre : La teneur en humidit
laquelle une semence est en quilibre avec lhumidit de lair
environnant.
Test au ttrazolium : Un test de viabilit dans lequel les semences
humides sont imbibes dans une solution de chlorure de triphnyl
ttrazolium.
146
Test de germination : Une procdure pour dterminer le pourcentage

de semences qui sont capables de germer dans un ensemble donn
de conditions.
Test de germination squentiel : Une srie de tests discontinus
dans laquelle la dcision de continuer tester les semences ou
arrter les tests dpend du rsultat cumulatif.
Test de viabilit : Un test ralis sur un chantillon de semences
dune accession qui est conu pour estimer la viabilit de laccession
entire.
Trait : Une qualit ou un attribut reconnaissable qui rsulte
de linteraction dun gne ou dun groupe de gnes avec
lenvironnement.
Transformation : Altration gntique dune cellule rsultant de
lintroduction, de labsorption et de lexpression dADN tranger.
Transgne : Un gne utilis en transformation (voir plantes
transgniques).
Unit de base : Le nombre de semences ncessaire pour
assurer la russite dune procdure comme lenregistrement ou la
rgnration.
Varit obsolte : Une varit de plante que lon ne cultive plus
commercialement.
Varit : Une division reconnue dune espce, en dessous de la
sous-espce ; elle est diffrenciable par des caractristiques telles
que la couleur des fleurs, la couleur des feuilles et la taille de la
plante. Ce terme est considr comme un synonyme de cultivar.
Viabilit des semences : La capacit des semences germer dans
des conditions favorables.
Vie au stockage : Le nombre dannes pendant lequel une semence
peut tre stocke avant que la mort de la semence ne survienne.
147
Annexe IV
Equipement spcialis pour les banques de semences
(La liste nest pas exhaustive et la mention des fournisseurs ne
constitue pas ncessairement leur approbation)
148
No
Item
Spcication
Fournisseur
Balance, analytique
Doit peser jusqu quatre

dcimales, ncessaire pour
la dtermination du taux
dhumidit des semences en
utilisant des chantillons de
petite taille
Mettler-Toledo (Schweiz) AG
Im Langacher
CH-8606 Greifensee
Suisse
Tl : (41) 1 944 45 45
Fax : (41) 1 944 45 10
Email : info.ch@mt.com
Web : www.mt.com
Ohaus Corporation
P.O. Box 2033
19A Chapin Road
Pine Brook, NJ 07058
USA
Tl : (1) 973 377 9000
Fax : (1) 973 593 0359
Email : Sales@Ohaus.com
Web : www.ohaus.com
Sartorius AG
Weender Landstrasse 94-108
D-37075 Goettingen
Allemagne
Tl : (49) 551 308 0
Fax : (49) 551 308 3289
Email : wt.sales@sartoriuscorp.com
Web : www.sartorius.com
Cole-Parmer Instruments Co.
625 East Bunker Court
Vernon Hills, IL 60061-1844
USA
Tl : (1) 847 549 7600
Fax : (1) 847 549 1700
Email : sales@coleparmer.com
Web : www.coleparmer.com
Fisher Scientic
2000 Park Land Dr.
Pittsburg, PA 15275-9943
USA
Tl : (1) 973 467-6511
Fax : (1) 800 926 1166
Web : www.fishersci.com
Osaw Industrial Products Pvt. Ltd.
Osaw Complex, Jagadhri Road
P.O. Box No. 42,
Ambala Cantt. - 133 001
Haryana
Inde
Tl : (91) 171-2699347/2699267
Fax : (91) 171-2699222/2699102
Email : eenquiry@indosaw.com
Thomas Scientic
P.O. Box 99
Swedesboro, NJ 08085
USA
Tl : (1) 800-524-0018
Fax : (1) 856-467-3087
Email : global@thomassci.com
Web : www.thomassci.com
149
Balance,
dtermination de
lhumidit
Combine un chauffage avec

une technologie de pese
trs prcise pour fournir une
mthode rapide et prcise
danalyse de lhumidit
Mettler-Toledo (Schweiz) AG
Im Langacher
CH-8606 Greifensee
Suisse
Tl : (41) 1 944 45 45
Fax : (41) 1 944 45 10
Email : info.ch@mt.com
Web : www.mt.com
Ohaus Corporation
P.O. Box 2033
19A Chapin Road
Pine Brook, NJ 07058
USA
Tl : (1) 973 377 9000
Fax : (1) 973 593 0359
Email : Sales@Ohaus.com
Web : www.ohaus.com
Sartorius AG
Weender Landstrasse 94-108
D-37075 Goettingen
Allemagne
Tl : (49) 551 308 0
Fax : (49) 551 308 3289
Email : wt.sales@sartoriuscorp.com
Web : www.sartorius.com
Hoffman Manufacturing Co.
353 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Email : info@hoffmanmfg.com
Web : www.hoffmanmfg.com
Seedburo Equipment Co.
1022 W. Jackson Blvd.
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312-738-3700
Fax : (1) 312-738-5329
Email : sales@seedburo.com
Web : www.seedburo.com
150
Chambres froides
moyen/long terme
Chambres froides modulaires

faites de panneaux
prfabriqus isolants en
polyurthane; les panneaux
doivent tre pais dau moins
150 mm et construits pour le
stockage long terme (-20C)
ou de 75 mm dpaisseur
pour le stockage moyen
terme (+5C) ; plancher isol
et porte rsistante articule
; joint tanche chauff pour
le stockage long terme,
quipe avec un rideau
en panneaux de PVC ;
environnement contrl de
-20C +10C ; systme
de dshumidification pour
fournir une HR de 3040%
selon les besoins ; tableau
de contrle indiquant la
temprature et lHR plac
lextrieur
BMIL International, Inc.

61 Broadway
Suite 1900
New York NY 10006-2701
USA
Tl : (1) 212 898 9699
Fax : (1) 212 514 9234
Email : bmil@bmil.com
Web : www.bmil.com
Huurre Group Oy.
PO Box 127
FIN-33101
Tampere
Finlande
Tl : (358) 20 5555 11
Fax : (358) 20 5555 360
Email : info@huurre.com
Web : www.huurre.com
Foster Refrigerator
Oldmedow Road
Kings Lynn
Norfolk, PE30 4JU
Royaume Uni
Tl : (44) 1553 691122
Fax : (44) 1553 691447
E-mail : sales@foster-uk.com
Web : www.Fosterrefrigerator.co.uk
Watford Refrigeration & Air Conditioning Ltd.
Wiggenhall Industrial Estate
Watford, WD1 8AW, UK
Royaume Uni
Tl : (44) 1923 227726
Fax : (44) 1923 233525
Email : sales@watref.co.uk
Web : www.watref.co.uk
Conteneurs
a. Sachets en feuilles
daluminium
Sachets en feuilles
daluminium lamins, faits
de trois couches : polyester
lextrieur, aluminium au
milieu et polythylne
lintrieur, et rsistants la
perforation.
b. Botes en
aluminium, bouteilles
en verre
Botes, scelles ou avec des

couvercles vissants avec
un joint en caoutchouc ;
Bouteilles en verre avec des
couvercles en polypropylne
Barrier Foil Products Co.

Hollands Mill
61 Shaw Heath
Stockport, SK3 8BH
Royaume Uni
Tl : (44) 161 4804007
Fax : (44) 161 4747412
Email : BARRIERFOIL@aol.com
Embarcadero Home Cannery
2026 Livingston Street
Oakland, CA 94606
USA
Tl : (1) 510 535 2311
Fax : (1) 510 535 2235
Email : contact_ehcan@hotmail.com
Web : www.ehcan.com
151
Enregistreurs de
donnes
Enregistrement continu de la
temprature et de lHR dans
les chambres froides et les
conglateurs et permettant
denregistrer des donnes au
champ
OAKTON Instruments
P.O. Box 5136,
Vernon Hills, IL 60061,
USA
Tl : (1) 888 462 5866
Fax : (1) 847 247 2984
Email : info@4oakton.com
Web : www.4oakton.com
Dshumidificateur
Type rotatif avec un rotor

de dessiccation hautes
performances avec du
silicagel activ ou un autre
agent dessiccant
Bry-Air Inc.
10793 St. Rt. 37W
Sunbury, Ohio 43074
USA
Tl : (1) 740 965 2974
Fax : 740 965 5470
Email : bryair1@aol.com
Web : www.bry-air.com
Munters Limited,
Blackstone Road
Huntingdon
Cambridgeshire PE29 6EE
Royaume Uni
Tl : (44) 1480 432243
Fax : (44) 1480 413147
Email : info@munters.co.uk
Web : www.munters.com
Appareil distiller
Eau distille pour tests de

germination, etc.

USA
Tl : (1) 847 549 7600
Fax : (1) 847)549 1700
Fisher Scientic
2000 Park Land Dr.
USA
Tl : (1) 973 467 6511
Fax : (1) 800 926 1166
P.O. Box No. 42,
Haryana
Inde
Tl : (91) 171 2699347/2699267
Fax : (91) 171 2699222/2699102
Thomas Scientic
P.O. Box 99
USA
Tl : (1) 800 524 0018
Fax :(1) 856 467 3087
152
Enceinte/chambre de
dshydratation
Dshumidificateurs rotatifs
absorption avec un
quipement de rfrigration
secondaire qui peut fournir
un environnement de
15C et 1520% HR pour
la dshydratation des
semences
Bry-Air Inc.
10793 St. Rt. 37W
Sunbury, Ohio 43074
USA
Tl : (1) 740 965 2974
Fax : (1) 740 965 5470
Email : bryair1@aol.com
Web : www.bry-air.com
353 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Huurre Group Oy. PO Box 127
FIN-33101
Tampere
Finlande
Tl : (358) 20 5555 11
Fax : (358) 20 5555 360
Email : info@huurre.com
Web : www.huurre.com
Munters Limited,
Blackstone Road
Huntingdon
Cambridgeshire PE29 6EE
Royaume Uni
Tl : (44) 1480 432243
Fax : (44) 1480 413147
Email : info@munters.co.uk
Web : www.munters.com
Watford Refrigeration & Air Conditioning Ltd.
Wiggenhall Industrial Estate
Watford WD1 8AW
Royaume Uni
Tl : (44) 1923 227726
Fax : (44) 1923 233525
Email : sales@watref.co.uk
Web : www.watref.co.uk
153
Balance lectronique
Pesant jusqu deux

dcimales ncessaire
divers stades du processus
de manipulation des
semences

353 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
USA
Tl : (1) 847 549 7600
Fax : (1) 847 5491700
Fisher Scientic
2000 Park Land Dr.
USA
Tl : (1) 973 467 6511
Fax : (1) 800 926 1166
P.O. Box No. 42,
Haryana
Inde
Tl : (91)171 2699347/2699267
Fax : (91)171 2699222/2699102
Thomas Scientic
P.O. Box 99
USA
Tl : (1) 800 524 0018
Fax : (1) 856 467 3087
10
Conglateurs
(verticaux/
horizontaux)
Conglateurs domestiques
standards, fournissant -20C
pour la conservation long
terme des semences
Disponibles localement (ex. Revco, Kelvinator,

Westinghouse et autres)
154
11
Enceinte de
germination
(germinateur)
Germinateurs fournissant des

niveaux dHR trs levs,
clairs, avec contrle du
cycle diurne permettant une
slection indpendante de
la temprature et lhumidit
relative jour/nuit.
Controlled Environments Limited

590 Berry Street
Winnipeg, Manitoba
Canada R3H 0R9
Tl : (1) 204 786 6451
Fax : (1) 204 783 7736
Email : sales@conviron.com
Web : www.conviron.com
353, 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany, OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
1022, W. Jackson Blvd.
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
Weiss Gallenkemp Ltd.
Willowbank House,
84 Station Road
Marlow,
Buckinghamshire SL7 1NX
Royaume Uni
Tl : (44) 1494 43 43 24
Fax : (44) 1494 43 43
Web : www.weisstechnik.co.uk
12
Systme de
positionnement
global (GPS)
Portable et se tenant la
main pour emporter lors des
missions de collecte
Garmin International Inc.

1200 East 151st Street
Olathe, KS 66062-3426
(Kansas City metro area)
USA
Tl : (1) 913 397 8200
Fax : (1) 913 397 8282
Web : www.garmin.com
13
Broyeur (moulin
caf)
Doit pouvoir broyer de petites

quantits de semences pour
la dtermination du taux
dhumidit
Disponibles localement (Braun, Moulinex, etc)
155
14
Incubateur
Avec contrle des cycles

diurnes permettant une
slection indpendante des
tempratures jour/nuit
Percival Scientic, Inc

505 research Drive
Perry, Iowa 50220
USA
Tl : (1) 515 465 9363
Fax : (1) 515 465 9464
Email : info@percival-scientific.com
Web : www.percival-scientific.com
Weiss Gallenkemp Ltd
Willowbank House,
84 Station Road
Marlow,
Buckinghamshire SL7 1NX
Royaume Uni
Tl : (44) 1494 43 43 24
Fax : (44) 1494 43 43
Web : www.weisstechnik.co.uk
USA
Tl : (1) 847 549 7600
Fax : (1) 847 549 1700
Fisher Scientic
2000 Park Land Dr.
USA
Tl : (1) 973 467 6511
Fax : (1) 800 926 1166
Thomas Scientic
P.O. Box 99
USA
Tl : (1) 800 524 0018
Fax : (1) 856 467 3087
15
Lampe grossissante
Nettoyage des semences
156

353, 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany, OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
1022, W. Jackson Blvd.
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
16
17
Humidimtres
a. Mesure rapide
Mesure rapide du taux

dhumidit
b. Hygropalm
Mesure de lhumidit non

destructrice
Etuve (mcanique/
convection par
gravit)
Gamme de tempratures
de 30C 200C, avec
convection par ventilateur et
contrle de la temprature
avec thermostat rglable et
minuteur

353 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
Rotronic Instruments (UK) Ltd
Unit 1a, Crompton Fields, Crompton Way, Crawley,
West Sussex, RH10 9EE
Royaume Uni
Tl : (44) 1293 571000
Fax : (44) 1293 571008
Web : www.rotronic.co.uk

USA
Tl : (1) 847 549 7600
Fax : (1) 847 549 1700
Fisher Scientic
2000 Park Land Drive
USA
Tl : (1) 973 467 6511
Fax : (1) 800 926 1166
Email : sales@fishersci.com
P.O. Box No. 42,
Haryana
Inde
Tl : (91) 171 2699347/2699267
Fax : (91) 171 2699222/2699102
Thomas Scientic
P.O. Box 99
USA
Tl : (1) 800 524 0018
Fax : (1) 856 467 3087
157
18
Table de puret

353, 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany, OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Chicago, IL 60607
USA
Tl :: (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
P.O. Box No. 42
Haryana
Inde
Tl : (91) 171 2699347/2699267
Fax : (91) 171 2699222/2699102
19
Machine sceller
(botes, sachets
daluminium)
Machines chaleur
constante qui utilisent des
contrleurs thermostatiques
pour maintenir la barre une
temprature slectionne
pour sceller les matriels
lamins faits de couches
de film plastique ayant des
proprits et des points de
fusion diffrents
Sachets en feuilles d'aluminium

Audion Elektro BV
P.O. Box 389
1380 AJ WEESP
Pays Bas
Tl : (31) 294 491717
Fax : (31) 294 491761
Email : holland@audion.nl
Web : www.aud.com
Hulme-Martin Tavak
317 Guildford Road
Bisley
Woking
Surrey GU24 9BB
Royaume Uni
Tl : (44) 1483 476767
Fax : (44) 1483 486343
Web : www.hulmemartin.co.uk
Machine sceller les botes:
Embarcadero Home Cannery
2026 Livingston Street
Oakland, CA 94606
USA
Tl : (1) 510 535 2311
Fax : (1) 510 535 2235
Email : contact_ehcan@hotmail.com
Web : www.ehcan.com
158
20
Souffleur de
semences

sparation des matriaux
lgers davec les semences

353, 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany, OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
P.O. Box No. 42
Haryana
Inde
Tl : (91) 171 2699347/2699267
Fax : (91) 171 2699222/2699102
21
Compteur de
semences
Compte un nombre
prdetermin de semences
ou enregistre le comptage
dune portion pralablement
pese ou dont le volume a
t mesur

353, 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
Osaw Complex, Jagadhri Road,
P.O. Box No. 42
Haryana
Inde
Tl : (91)171 2699347/2699267
Fax : (91)171 2699222/2699102
159
22
Planches compter
les semences
Pour compter et espacer les

semences de grande taille
dans le milieu de plantation

353 29th Ave. S.W.,
P.O. Box 547
Albany, OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
23
Diviseur de semences
Pour prparer des

chantillons reprsentatifs
partir dchantillons
composites

353, 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Seedburo Equipment Co
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
E-mail : sales@seedburo.com
P.O. Box No. 42
Haryana
Inde
Tl : (91)171 2699347/2699267
Fax : (91)171 2699222/2699102
24
Etagres (mobiles/
statiques)
Cadres mobiles en acier

galvanis avec un revtement
en PVC, semblables des
rayons de bibliothque
prfrables
Crown Industrial
213 Michelle Court
San Francisco, CA 94080
USA
Tl : (1) 650 952 5150
Fax : (1) 650 873 1495
Email : autodor@crown-industrial.com
Web : www.mobileshelving.net
Montel
225, 4th Avenue, C.P 130
Montmagny, Qubec
G5V 3S5
Canada
Fax : (1) 418 248 7266
Tl : (1) 877 935 0236
Email : system@montel.com
Web : www.montel.com
160
25
Tamis, gradus
Nettoyage et sparation des

semences

353, 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
P.O. Box No. 42
Haryana
Inde
Tl : (91)171 2699347/2699267
Fax : (91)171 2699222/2699102
26
Stromicroscope
Evaluation de la qualit et de
ltat sanitaire des semences

USA
Tl : (1) 847 549 7600
Fax : (1) 847 549 1700
Fisher Scientic
2000 Park Land Dr.
USA
Tl : (1) 973 467 6511
Fax : (1) 800 926 1166
P.O. Box No. 42
Haryana
Inde
Tl : (91) 171 2699347/2699267
Fax : (91) 171 2699222/2699102
Thomas Scientic
P.O. Box 99
USA
Tl : (1) 800 524 0018
Fax : (1) 856 467 3087
161
27
Plateaux de stockage
(mtal/plastiques)
28
Fournitures gnrales
a. Papier
germination
Doivent supporter des

tempratures infrieures zro
Fournisseurs locaux
353, 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
Whatman plc.
27 Great West Road
Brentford
Middlesex
TW8 9BW
Royaume Uni
Tl : (44) 208 326 1740
Fax : (44) 208 326 1741
Email : information@whatman.com
USA
Tl : (1) 847 549 7600
Fax : (1) 847 549 1700
Fisher Scientic
2000 Park Land Drive
USA
Tl : (1) 973 467 6511
Fax : (1) 800 926 1166
P.O. Box No. 42,
Haryana
Inde
Tl : (91) 171 2699347/2699267
Fax : (91) 171 2699222/2699102
Thomas Scientic
P.O. Box 99
USA
Tl : (1) 800 524 0018
Fax : (1) 856 467 3087
b. Matriel de
laboratoire (botes
de Petri, pinces,
dessiccateur, autre
verrerie, etc.)
162
b. Champ
(enveloppes pour
semences, sacs
pour pollinisation,
tiquettes, etc.)
c. Produits chimiques
(Chlorure de
ttrazolium, agar,
dessiccants, etc.)
A.P. Burt & Sons

Severn Paper Mill
Portishead
Bristol BS20 7DJ
Royaume Uni
Tl : (44 ) 1275 842454
Fax : (44) 1275 84 96 13
PBS International
Salter Road
Scarborough YO11 3UZ
Royaume Uni
Tl : (44) 1723 584091
Fax : (44) 1723 581664
Emal : pbs@duraweld.co.uk
Web : www.pbs.co.uk
M/S Ajay Kumar & Co.
C-149 Moti nagar
New Delhi 100 015
Inde
Tl : (91) 11 5100776
Fax : (91) 11 5441950
Sigma-Aldrich
Customer Service
PO Box 14508
St. Louis, MO 63178
USA
(Voir site Web pour les autres pays)
Tl : (1) 800 325 3010
Fax : (1) 800 325 5052
Web : www.sigmaaldrich.com
Merck Chemicals Ltd.
Boulevard Industrial Park
Padge Road, Beeston
Nottingham NG9 2JR
Royaume Uni
Tl : (44) 115 9430840
Fax : (44) 115 9574237
Email : information@merckchem.co.uk
163
29
Thermohygromtre et
hygrothermographes
Pour mesurer la temprature

et lHR dans les chambres
froides

USA
Tl : (1) 847 549 7600
Fax : (1) 847 5491700
Fisher Scientic
2000 Park Land Dr.
USA
Tl : (1) 973 467 6511
Fax : (1) 800 926 1166
Thomas Scientic
P.O. Box 99
USA
Tl : (1) 800 524 0018
Fax : (1) 856 467 3087
30
Batteur, mcanique
Conu pour battre des

plantes individuelles et les
pis des crales petites
graines

353, 29th Ave. S.W.
P.O. Box 547
Albany OR 97321
USA
Tl : (1) 541 926 2920
Fax : (1) 541 926 3949
Chicago, IL 60607
USA
Tl : (1) 312 738 3700
Fax : (1) 312 738 5329
164
ANNEXE V
Liste des acronymes
ACIAR
Australian Centre for International Agricultural Research
ACP
Plaque recouverte dantignes
ADN
Acide dsoxyribonuclique
AOSA
Association of Seed Analysts
ARN
Acide ribonuclique
CDB
Convention pour la diversit biologique
GCRAI
Groupe consultatif pour la recherche agricole internationale
CGN
Centre for Genetic Resources, Pays Bas
CIPV
Convention internationale pour la protection des vgtaux
CITES
Convention sur le commerce international des espces de faune et de flore sauvages menaces dextinction
CPB
Protocole de Carthagne sur la scurit biologique
CTA
Centre technique de coopration agricole et rurale ACP-EU
ELISA
enzyme-linked immunosorbent assay
FAO
Organisation des Nations Unies pour lalimentation et lagriculture
GAA
Accord dacquisition de matriel gntique
HRe
Humidit relative lquilibre
GPS
Systme de positionnement global
GRPC
Genetic Resources Policy Committee
HR
Humidit relative
IBPGR
Conseil international des ressources phytogntiques (maintenant Bioversity International)
ILRI
Institut international de recherche sur le btail
IPGRI
Institut international des ressources phytogntiques (maintenant Bioversity International)
ISTA
International Seed-Testing Association
MCPD
Descripteur passeport multi-plantes
MOS
Echantillon le plus original
MTA
Accord de transfert de matriel
NASH
Hybridation de spots dacides nucliques
MNC
Membrane de nitrocellulose
OGM
Organisme gntiquement modifi
PBST
Solution saline tamponne au phosphate avec du Tween
PCR
Raction en chane par polymrase
PGRFA
Ressources phytogntiques pour lagriculture et lalimentation
PI
Proprit intellectuelle
SMC
Taux dhumidit des semences
SMTA
Accord de transfert de matriel pour les espces incluses dans lAnnexe I du Trait international sur les PGRFA
SPGRC
SADC Plant Genetic Resources Centre
TBIA
Immuno essai dempreinte de tissus
UPOV
Union internationale pour la protection des obtentions vgtales
WorldVeg
AVRDC The World Vegetable Center
165
lIPGRI et lINIBAP
oprent conjointement
sous la dnomination
"Bioversity International"
Avec lappui du GCRAI
ISBN 978-92-9043-741-3

Manuel de Manipulation Des Semences Dans Une Banque de Génes PDF

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Manuels pour les banques de gnes No.

manipulation des semences

Manuels pour les banques de gnes No. 8

manipulation des semences

Manuels pour les banques de gnes No. 8

Manuel de manipulation des semences

TABLE DES MATIERES

Partenaires de cette publication

Liste des relecteurs

2. Acquisition et enregistrement du matriel gntique

2.1 Acquisition du matriel gntique

2.2 Enregistrement du matriel gntique

3. Nettoyage des semences

4. Dtermination du taux dhumidit des semences et dshydratation

4.1 Dtermination du taux d'humidit

4.2 Dshydratation des semences

5. Contrle de la qualit des semences

5.1 Test de la viabilit des semences

5.2 Test de l'tat sanitaire des semences

5.3 Test des semences pour l'introduction par inadvertance de transgnes

6. Empaquetage et stockage des semences

6.1 Empaquetage des semences

6.2 Stockage des semences

7. Distribution du matriel gntique

8. Contrle et rgnration du matriel gntique

8.1 Contrle du matriel gntique

8.2 Rgnration du matriel gntique

Annexe I: Politiques et cadres internationaux influenant

Annexe II: Mthodes srologiques de dtection des pathogens

Annexe III: Glossaire

Annexe IV: Equipement spcialis pour les banques de semences

Annexe V: Liste des acronyms

Manuels pour les banques de gnes No. 8

Diagramme de flux 2.1. Enregistrement du matriel gntique

Diagramme de flux 3.1. Nettoyage des semences

Diagramme de flux 4.1. Dtermination du taux d'humidit des semences

Diagramme de flux 4.2. Dshydratation des semences

Diagramme de flux 4.3. Protocole de dtermination du comportement au stockage

Diagramme de flux 5.1. Test de germination

Diagramme de flux 6.1. Empaquetage des semences

Diagramme de flux 7.1. Distribution du matriel gntique

Diagramme de flux 8.1. Contrle de la viabilit

Tableau 4.2. Espces pour lesquelles le broyage est obligatoire

Tableau 4.3. Enregistrement et calcul du taux d'humidit des semences

Tableau 4.4. Taux d'humidit l'quilibre (approximatifs) de certaines espces cultives

Tableau 5.3. Concentration, tempratures et dures de coloration au chlorure

Tableau 6.2. Temprature de stockage et taux d'humidit suggrs pour

Tableau 8.1. Intervalle suggr pour contrler la germination de collections actives

Tableau 8.2. Pourcentages seuils de germination pour la rgnration des accessions

Tableau 8.3. Plan de test squentiel de germination pour un standard de rgnration

Manuel de manipulation des semences

Tableau 8.4. Comportement reproductif et mcanismes de contrle de la pollinisation

Figure 4.1. Isotherme de taux d'humidit

Figure 4.2. Prdiction du temps de dshydratation

Figure 5.3. Test de germination des semences dans la sable

Figure 5.4. Anomalies chez des plantules de pois

Figure 5.5. Anomalies chez des plantules d'arachide

Figure 5.6. Anomalies chez des plantules de bl

Figure 5.7. Anomalies chez des plantules d'oignon

Figure 5.8. Scarification manuelle de l'enveloppe des semences

Encadr 4.1. Options pour la dshydratation initiale

Encadr 5.1. Humidification des semences sches

Manuels pour les banques de gnes No. 8