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FACULDADE ASSIS GURGACZ

CURSO DE AGRONOMIA
PROF. DRA GLUCIA CRISTINA MOREIRA

MANUAL DE AULA PRTICA DE


BIOLOGIA CELULAR

RECOMENTAES SOBRE AS AULAS PRTICAS


Para melhor aproveitamento das aulas prticas, as seguintes normas sero
adotadas:
1.
2.
3.
4.

Comparecer pontualmente, munido do jaleco e do manual de laboratrio;


Ler cuidadosamente o roteiro, antes da execuo da aula prtica;
Dividir os trabalhos eqitativamente com os companheiros do grupo;
Realizar os trabalhos com calma e organizao, mantendo silncio no
laboratrio;
5. Tomar notas das observaes e resultados, levando em considerao
todos os pormenores relevantes ao estudo posterior;
6. Discutir com o professor ou com o monitor, todos os pontos em dvida;
7. Usar apenas o material estritamente necessrio, evitando desperdcios e
danos;
8. Antes de retirar-se, limpar o balco de trabalho, colocando o lixo slido e
lquido nos locais designados;
9. Ao final de cada aula, colocar as vidrarias e os aparelhos em locais
previamente designados;
10. As prticas sero consideradas como terminadas, desde que seus
resultados tenham sido aprovados pelo professor;
11. As notas referentes s aulas prticas somente podem ser obtidas
perante a apresentao do relatrio e comprovada sua presena no dia
da aula prtica, com exceo de justificativa de falta aprovada pelo
colegiado do curso, no dispensando nesse caso, a apresentao do
relatrio e reviso bibliogrfica sobre o assunto abordado.

1. Instrues para o uso do labortorio de Biologia Celular


1. Antes de iniciar a aula prtica de Biologia Celular, verifique se o microscpio
est ligado corrente eltrica.
2. Antes de colocar a lmina sobre a platina, verifique se a laminula no esta
voltada para baixo, pois com a objetiva de 40X no possivel o ajuste do foco
nessa situao
3. Ao iniciar sua observao, focalize primeiro com a objetiva de menor
aumento (10X).
4. Aps observar com a objetiva de 10x, passe para a de a proxima de maior
aumento
5. Para a observao mais detalhada passe para a objetiva de 40x. Nesta
objetiva o foco deve ser ajustado somente com o micromtrico.
6. Caso necessite utilizar a objetiva de 100x, proceda da seguinte maneira:
a) aps obtido o foco com a objetiva de 40x, gire o revolver, sem contudo
encaixar a objetiva de 100x.
b) pingue uma gota de leo de imerso sobre a lmina no ponto onde incide a
luz.
c) encaixe a objetiva de 100x e ajuste o foco com o auxilio do micromtrico.
d) aps a observao, limpe a lmina e a objetiva com auxlio de um leno de
papel ou papel higienico.
2. Algumas Dicas sobre o uso e cuidado com o microscpio
a) Verifique se as objetivas esto encaixadas, caso contrrio voc ver o
campo completamente escuro ou parcialmente iluminada.
b) Algumas estruturas podem ser melhor, observadas com o auxlio do
diafragma. Caso seja esse dispositivo em seu microscpio, experimente us-lo.
c) Se aps tomar todos esses cuidados voc ainda no obtiver o foco, limpe os
oculares e lmina com o auxlio de papel higinico.
d) No coloque os dedos e nem apoie qualquer parte do corpo sobre o
micrscpio.

3. Normas gerais para o trabalho dirio nos laboratrios da FAG


- obrigatrio o uso de jalecos dentro do laboratrio para assistir as aulas
prticas em todos os laboratrios;
- obrigatrio o uso de proteo individual, como luvas, calado fechado,
mscaras e culos de segurana, quando necessrio;
- proibido beber, comer e fumar dentro do laboratrio;
- No permitida entrada ou permanncia de pessoas estranhas ao
laboratrio;
- O aluno responsvel por possveis perdas causadas pela falta de cuidado
ou mau comportamento no laboratrio;
- Ao utilizar as vidrarias, proceda com cuidado para evitar danos e cortes
perigosos;

- No circule no laboratrio com frascos de produtos volteis e inflamveis,


quando a chama do bico de Bunsen estiver acesa;
- No ligue o bico de Bunsen, se no for necessrio, voc poder causar um
incndio;
- No jogue material slido na pia;
- Procure no desperdiar reagentes;
- Utilizar somente o material que est a sua disposio na bancada de trabalho;
- No pipetar material txico, cidos concentrados ou outras substncias
perigosas com a boca;
- No colocar materiais quentes diretamente sobre superfcies frias, evitandose acidentes;
- Ao trmino de cada aula deixar sua bancada em ordem e fechar todos os
bicos de gs;
- O trabalho em grupo deve ser encarado com seriedade e no como
oportunidade para brincadeiras;
- Em caso de acidente comunicar imediatamente ao professor ou responsvel
pelo laboratrio;
- Seguir o regulamento geral e normas especficas de cada laboratrio.

PRTICA N 01 MICROSCPIO
Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:
Introduo: Descrio do microscpio fotnico
A palavra microscpio de origem grega (micros =pequeno, scopein
=observar, olhar com ateno). um instrumento ptico que amplia a
imagem de um pequeno objeto utilizando um sistema de lentes e fontes de
iluminao.
Todo microscpio composto de partes mecnicas e partes pticas, que
juntas nos permitem a observao detalhada de materiais em estudo.
Material:
Microscpio
Partes mecnicas:
Base ou p: o suporte do microscpio, pea que sustenta todas
as outras partes do aparelho.
Brao ou coluna: pea que liga o p parte superior do
microscpio.
Mesa ou platina: pea de apoio da lmina contendo o material
para estudo, no centro da mesa existe um orifcio para a
passagem da luz.
Charriot: pea ligada platina que permite movimentar a lmina
no plano horizontal da esquerda para a direita e vice-versa, e de
trs para frente e vice-versa.
Parafuso macromtrico: localiza-se em ambos os lados do
brao, serve para ajustar o foco grosseiramente atravs de
avano ou recuo da mesa em relao objetiva.
Parafuso micromtrico: ajusta o foco finamente atravs de
pequenos avanos ou recuos da mesa.
Canho: parte superior do microscpio constituda por um tubo
contendo um prisma. Sustenta lentes objetivas e oculares, e
serve para focalizao do material.
Revolver: pea onde se encaixam as lentes objetivas.
composto por um disco de ranhuras que permite a mudana das
objetivas.

Partes pticas:
Condensador: conjunto de lentes situado abaixo da platina que
concentra a luz e fornece iluminao uniforme preparao
biolgica.
Boto do condensador: permite a movimentao do
condensador.
Diafragma: regula a intensidade de luz que atinge a preparao
atravs de uma alavanca para sua abertura ou fechamento.
Objetivas: conjunto de 4 ou mais lentes superpostas que
proporcionam aumentos diferentes para observao do material.
O valor do aumento est gravado na objetiva.
Oculares: possui 2 lentes convergentes que ampliam e corrigem
os defeitos da imagem. O valor do aumento proporcionado est
gravado na ocular.

MICROSCPIO PTICO

Identificao dos componentes do microscpio:

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PRTICA N 02 VISUALIZAO DE LETRAS AO MICROSCPIO


Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:
Objetivo:
Fazer observaes de materiais ao microscpio relacionando as imagens
formadas e os aumentos obtidos com seu funcionamento.
Materiais:

Microscpio ptico comum;


Letras recortadas do jornal;
Pina;
Lminas e lamnulas;
Descarte.

Procedimento:
Lminas com letras:

Coloque sobre a lmina uma letra que voc recortou do jornal;

Coloque esta lmina sobre a platina do microscpio, de modo a


manter a letra na posio em que lida por voc;

Focalize a letra, conforme o procedimento descrito anteriormente;

Observe a posio da letra, na imagem formada pelo microscpio


com a objetiva de 4X e 10X;

Desenhe o observado.

1. Que diferenas voc observou entre a posio da letra a olho nu e no


MO?

2. Nas objetivas de diferentes aumentos, o que voc notou quanto ao


tamanho da imagem e quanto rea do campo de observao?

3. Por que a lamnula deve estar sempre voltada para cima quando se
observa ao microscpio?

4. Por que necessrio o leo de imerso quando se observa na objetiva


de 100x?

PRTICA N 03 CARACTERIZAO DE CLULA ANIMAL E VEGETAL


Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:
Objetivo:
Diferenciar clula animal e vegetal;
Materiais:
Microscpio;
Palito ou esptula;
Lmina;
Lamnula;
Descarte;
Soluo de azul de metileno;
Soluo Salina;
Elodea.

1. Clula animal:
Raspar a mucosa bucal com palito de picol e fazer um esfregao na
lamina de microscopia. Pingar uma gota de soluo de azul de metileno e
cobrir com lamnula. Observar ao microscpio at a objetiva de 40X. Ao final da
observao, descartar a lamina e lamnula em local devido.
2. Preparao a fresco de Elodea sp.
Destaque uma folha de Elodea sp. Coloque-a sobre uma lmina limpa e
sobre ela uma gota de gua. Cubra o material com a lamnula sem que se
formem bolhas de ar. Retire o excesso de gua com papel filtro. Observe ao
MO com objetiva de 4X e desenhe o material. Passe para os aumentos
seguintes e esquematize de novo com a objetiva de 40X.

1. Esquematize as clulas observadas e identifique os componentes.

PRTICA N 04 IDENTIFICAO DE COMPONENTES QUMICOS


CELULARES
Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:
Objetivos:
Identificar macromolculas constituintes das clulas em batata-inglesa,
laranja e leite em p.
Materiais:
Lmina;
Lamnula;
Bisturi;
Tubrculo de batata;
Vidro de relgio;
Soluo de lugol;
Acar;
Reagente de Benedict;
Leite em p;
Suco de laranja;
Bico de bunsen;
Tubo de ensaio;
Grampo de madeira;
Laranja;
Bisturi;
Azul de metileno;
Pincel.
Procedimento:
Experimento 1:
Cortar uma fatia de batata com bisturi. A espessura dever ser muito
fina. Colocar esta fatia em uma lmina. Pingar 1 a 2 gotas de lugol e deixar
corar por 3 minutos. Cobrir com lamnula e observar nas objetivas de 4x, 10x e
40x. Desenhar apenas na de 40x. Observar a colorao dos gros de
amiloplasto, morfologia e estrutura celular (parede celular).

Experimento 2:
Numerar tubos de ensaio de 1 a 3.
Colocar no tubo 1: um grama de acar comum, 1 ml de gua e 5 gotas
de reagente de benedict.
Colocar no tubo 2: 1ml de leite em p j dissolvido em gua e 5 gotas de
reagente de benedict.
Colocar no tubo 3: 1ml de suco de laranja e 5 gotas de reagente de
benedict.
Acender o bico de bunsen e aquecer os tubos com auxlio do grampo de
madeira at levantar fervura. Observar possveis alteraes nas coloraes e
descrev-las.
Experimento 3:
Fazer um corte tangencial na casca da laranja. A espessura do corte
dever ser fina de tal maneira que possa transpassar a luz que nela incidir.
Pingar algumas gotas de ou azul de metileno em um vidro de relgio e
acrescentar a este o corte efetuado na laranja.
Aguardar aproximadamente 7 minutos. Retirar o corte com um pincel e
transferi-lo para uma lmina. Cobrir com lamnula e observar nas objetivas de
4x e 10x. Desenhar em ambas.

PRTICA N 05 OBSERVAO DE BACTRIAS


Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:
Objetivos: Identificar as bactrias e suas diferenas em relao s clulas
eucariontes.
Materiais:

Lmina;
Lamnula;
Esptula;
Microscpio;
leo de imerso;
Azul de metileno;
Fucsina bsica.

Procedimento
Retire um pouco da placa bacteriana dos seus dentes com a ajuda da
esptula. Espalhe esse material em uma lmina, junte uma gota de fucsina
bsica e cubra com a lamnula
Observe ao microscpio (AT 1000x),

desenhe e anote suas

observaes
Repita o procedimento adicionando agora 1 gota de azul de metileno.
1. O que so bactrias?

2. Quais as diferenas entre uma bactria (organismo procarionte) e uma


clula animal (organismo eucarionte)?

PRTICA N 06 OBSERVAO IN VITRO DE SERES UNICELULARES


Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:
Objetivos: Reconhecer alguns seres unicelulares protozorios e identificar
algumas de suas caractersticas
Materiais:

Cultura caseira de protozorios;


Lminas;
Lamnulas;
Soluo aquosa de iodo;
Algodo;
Soluo de fermento para po;
Vermelho congo;
Seringa.

Procedimento:
Preparao da cultura: 15 dias antes da aula separe um vidro de
maionese limpo e coloque uma amostra de gua do ambiente (poas de
terreno vazio, margens de rios, crregos ou lagos...), coloque dentro do
vidro folhas de alface, couve, capim...., feche com uma gaze e prenda-a
com um elstico. Deixe essa cultura parada em um ambiente que receba
luz solar indireta. No dia da aula traga a amostra de preferncia cuidando
para que ela no balance muito.
Coloque uma gota da amostra (de preferncia da superfcie) em uma
lmina com lamnula. Em outra lmina coloque uma gota da amostra e um
pouco de algodo desfiado (procedimento padro). Observe as duas, desenhe
e anote suas observaes.
Siga o mesmo procedimento padro mas deixe algumas bolhas de ar,
observe desenhe e anote suas observaes? Os seres so atrados ou

repelidos pela bolha de ar? Por que?

Siga o mesmo procedimento mas adicione uma gota da soluo aquosa


de iodo. Observe. Preste ateno aos movimentos ciliares dos organismos
Siga o mesmo procedimento padro mas adicione uma gota da soluo
de fermento. Observe, desenhe e anote suas observaes.
1. Os microorganismos observados apresentam diferenciao entre eles?

2. A forma dos microorganismos se altera quando se movimentam?

3. O que acontece quando encontram um obstculo?

4. Qual a funo dos clios e flagelos?

5. Comente sobre a ingesto de partculas alimentares pelos protozorios.

PRTICA N 07 PERMEABILIDADE SELETIVA E OSMOSE


Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:
Objetivos:
animais;

Demonstrar a presena da membrana em clulas vegetais e

Observar

comportamento

da

membrana

quanto

sua

permeabilidade seletiva a diferentes substncias e tratamentos.


Materiais:

Beterraba (Beta vulgaris);


Leveduras (fermento biolgico);
Epiderme de cebola (Allium cepa);
Tubos de ensaio;
Acetona
Vermelho Congo 1%;
Lmina, lamnula, bisturi;
gua destilada, NaCl 3.0%;
Banho Maria, M.O.

1. Procedimento:
Experimento 1: efeito da acetona
Numere os tubos de ensaio e coloque em cada um deles 5ml das
seguintes solues, respectivamente:
o gua destilada
o acetona 25%
o acetona 50%
o acetona 75%
o acetona pura
Adicione a cada tubo um pequeno pedao de beterraba (1cm 3); Espere
cerca de 1 hora e observe o que ocorreu em cada tubo.

Experimento 2: Efeito do calor


Numere 2 tubos de ensaio e coloque em cada um 5ml da soluo de
vermelho Congo 1%; Adicione 5ml de suspenso de fermento nos 2 tubos; O
tubo 1 deixe temperatura ambiente. O tubo 2 incube a 50C por 5 minutos.
Monte uma lmina com a suspenso do tubo 1 e observe ao MO, nas objetivas
de 10X e 40X. Faa o mesmo com o tubo 2. Desenhe e anote o que observou
nos dois casos.
Experimento 3: Efeito da diferena de concentrao
Retire um fragmento da epiderme inferior de cebola e coloque-a sobre a
lmina; Cubra com uma gota de gua e lamnula; Observe ao MO em 10X e
40X. Desenhe o que observou. Em seguida retire a lamnula, seque o excesso
de gua e coloque uma gota de soluo NaCl 3.0% sobre a epiderme; Observe
ao MO em 10X e 40X e desenhe. Agora retire a lamnula e a epiderme que
voc observou. Coloque-a em outra lmina limpa com duas gotas de gua
destilada; Observe ao MO em 10X e 40X e desenhe.
1. Anote os resultados observados, comparando as solues de cada tubo.

2. Que diferenas voc observou nas clulas submetidas aos dois


tratamentos?

3. Que nome se d ao movimento de gua atravs da membrana


plasmtica?

4. Qual a diferena entre os fenmenos de difuso e osmose?

PRTICA N 08 EXTRAO DE DNA


Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:
Objetivos: Extrair o DNA de cebola; Verificar a funo de alguns reagentes
utilizados na tcnica.
Materiais:

Cebola;
Detergente (SDS) Sdio dodecil sulfato;
H2O destilada;
Banho Maria;
Papel filtro;
Etanol 95%;
NaCl;
Microbalana;
Gelo ou nitrognio lquido.

Procedimento:
Pique uma cebola com cerca de 250g, em pedaos quadrados de 5
milmetros. Misture em um Becker 10ml de SDS 10%, 3g de NaCl e complete
com gua at obter 100ml de soluo. Agite at dissolver. Juntar a esta soluo
a cebola levando ao banho-maria 60C por 15 minutos. Em seguida resfrie
rapidamente em nitrognio lquido ou gelo. Agite novamente. Coe a mistura em
papel filtro, exclua o material slido aproveitando somente o lquido resultante
em um tubo de ensaio. Verifique que o DNA (nuvem) precipita-se no etanol,
pois suas molculas so insolveis em lcool.

1. Onde se encontra o DNA na clula?

2. Qual a funo dos reagentes usados na experincia? Sal, detergente e


lcool?
PRTICA N 09 CROMOSSOMOS HUMANOS
Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:
Objetivos: Observar cromossomos humanos.
Materiais:
Lminas permanentes de cromossomos humanos;
leo de imerso.
Procedimento:
Observar e caracterizar os diferentes cromossomos na maior objetiva
(100 x), utilizando leo de imerso para a visualizao.
1. Esquematizar os cromossomos.

PRTICA N 10 IDENTIFICAO DE NCLEO E NUCLOLO


Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:

Objetivo: Identificao de ncleo e nuclolo.


Materiais:
Fgado bovino fresco;
Lmina;
Lamnula;
Azul de metileno;
Microscpio tico;

Procedimento:
Tocar uma lmina levemente na superfcie do fgado bovino; Deixar secar
as clulas sobre a lmina; Corar o material por 5 minutos com Azul de metileno;
Cobrir com lamnula e observar ao MO em 4X, 10X e 40X;

1. Esquematize o que foi observado. Qual a importncia do ncleo para


uma clula? O que o nuclolo representa em uma clula eucarionte?

PRTICA N 11 MITOSE EM RAIZ DE CEBOLA


Data:
Acadmico (a):
Assinatura da professora:

Objetivo: Identificar as diferentes fases da mitose atravs de observao ao


MO.
Material:
Laminas permanentes de raiz de cebola
Materiais:
Lminas permanentes em corte longitudinal de pontas de raiz de Allium
cepa (cebola).
Procedimento:
Utilizando a objetiva de 4X localize a regio meristemtica da raiz que fica
entre a coifa, bem na extremidade, e a zona de alongamento e diferenciao
celular, na parte posterior do corte.
Centralize o tecido meristemtico e passe para as objetivas de 10X e 40X.
Ao longo do tecido meristemtico, identifique clulas nas diferentes fases do
ciclo celular, com objetiva de 40X ou 100X (imerso).

1. Esquematize e identifique as diferentes fases encontradas: prfase,


anfase e metfase na mitose.