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Experimento 3 Propriedades cido-base das protenas e seus

efeitos sobre a solubilidade das mesmas: Aplicao na


purificao de protenas.

OBJETIVO
Verificar o efeito da adio de polietilenoglicol sobre a solubilidade da
albumina modulada pelo pH do meio (abaixo, igual e acima de seu pI), em
condies de baixa e alta fora inica, para tanto, ajustaremos o pH da
soluo de protena com KOH.
TERICA
Ao se fazer a titulao de um aminocido com uma base forte na escala de
pH de zero a 14, o aminocido atua como um tampo e apresenta
alteraes de carga lquida de sua estrutura.
Quando os aminocidos estabelecem as ligaes peptdicas, suas cadeias
laterais no perdem as propriedades de ionizao, porm, podem ter seus
valores de pKa bastante alterados devido vizinhana de outros grupos
carregados.
No ponto isoeltrico, uma protena apresenta carga lquida igual a zero e
essa propriedade pode ser utilizada para separar e purificar protenas.
01

Eletroforese bidimensional
Uma estratgia bastante usada em protemica a eletrofocalizao na
qual uma mistura de protenas colocada em uma matriz (fita) que
apresenta diferentes valores de pH ao longo de sua extenso.
Ao submeter a amostra, nesse meio, a uma diferena de potencial, as
protenas migram para o polo oposto ao de sua carga lquida no pH da
regio de partida e estacionaram na regio da fita no qual o pH igual
ao seu pI.
Em seguida, efetua-se a separao das protenas de mesmo pI e massas
moleculares diferentes submetendo a amostra a uma eletroforese em
sentido perpendicular.
A precipitao de protenas pode ser induzida por: adio de sais
(Precipitao salina),adio de solventes, variao de pH (Precipitao
isoeltrica) e adio de polmeros sintticos.

Sais se dissociam em soluo aquosa e competem com as protenas pela


gua de solvatao. Em baixa concentrao salina, a solubilidade das
protenas aumenta, pois os ons do sal ajudam a reforar a camada de
solvatao (salting in).
Em alta concentrao salina, a solubilidade das protenas diminui pois os
ons do sal competem pelas molculas de gua disponveis para formar a
sua prpria camada de solvatao (salting out).
Sais com nions divalentes so mais eficientes do que os monovalentes na
precipitao de protenas. Solventes miscveis com a gua diminuem a
constante dieltrica do meio e desorganizam a camada de solvatao das
protenas.
Os mais utilizados so etanol e acetona. Protenas colocadas em meio com
pH igual ao seu pI tendem a precipitar, pois tendo carga neutra, suas
molculas no se repelem e tendem se agregar.

No pI, uma protena apresenta a mais baixa solubilidade em meio aquoso e


pode ser facilmente precipitada pelo uso de solventes ou do polmero
polietilenoglicol.
Os fatores que governam a precipitao da albumina pelo polmero
sinttico polietilenoglicol (PEG) foi previamente investigado por Ingham
(1978).
A concentrao de PEG 4000 requerida para precipitao da albumina foi
mnima no ponto isoeltrico da protena. Porm, o aumento da
concentrao de sal desviou para valores mais altos a quantidade de PEG
necessria para precipitao no pI.
Efeito oposto do sal foi observado em pH abaixo do pI. Assim, essa
propriedade pode ser explorada no processo de separao e purificao de
protenas.

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