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Vas de sealizacin mediadas por R fuertemente conservadas

1.

Unin L-R activa un R


asociado a una K (parte del
R o asociada a l)

2.

R activan protenas G
(trimricas o monomricas)
que activan K que fosforilan
targets

3.

Unin L-R desencadena


desensamblaje de complejos
multiproticos que incluyen
TF que migran al N y
activan genes targets

4.

El corte proteoltico de un
inhibidor o del propio
R libera un TF
activo que viaja al N

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Transmisin de seales por R acoplados a protenas G (GPCRs)


-Mayor familia de R superficiales en todas clulas eucariotas
-Ligandos de muy distinta naturaleza (hormonas, neurotransmisores, aa, cidos grasos,
fotones, mols gusto, tacto)
-La misma mol puede activar distintos R de esta familia (Adrenalina 9; Acetilcolina 5;
Serotonina, al menos, 14). Adems, para la misma mol distintos R expresados en cls
distintas generan respuestas distintas
-Todos R igual estructura:
una sola cadena polipeptdica
TM (7 spans) que utiliza
protenas G trimricas para
enviar la seal. Una protena
efectora unida a la MP;
protenas que participan en
regulacin feedback y
desensibilizacin
-Podran haber evolucionado
desde R sensoriales de
eucariotas unicelulares: R
para mating factors en
levadura; Rodopsina retina;
R olfativos

7 dom TM (H1-H7); 4 segm


E y 4 CitoplasmC4) + lazo C3 y,
a veces, C2 unin a protena G
Cad laterales 15 aa en las hlices TM y E2 unen no covalentemente al L

Protenas G trimricas transmiten las seales de los GPCRs


-Unin L a GPCR induce cambio conformacional y se activa protena G trimrica de cara
citosol MP que acopla el R a una enzima o canal de la MP
-Protena G puede estar unida siempre al R o hacerlo solo tras activacin de ste
-Aunque hay subtipos de protenas G todas tienen estructura similar y operan de igual
forma, constando de 3 subunidades: , y

G y G unidas covalentemente a
lpidos MP
G y G siempre juntas (G)
A veces G no activa si no que
inhibe (Gi)
A veces G libre de G traduce
seal a un efector

inactivada une GDP, cuando se activa


GPCR acta como un GEF (guanine
nucleotide exchange factor) haciendo que
libere el GDP y una GTP
-La protena G se activa al sufrir un gran
cambio conformacional: sus subunidades,
sin disociarse, exponen nuevos motivos
con los que interaccionan con sus targets
-G que es una GTPasa puede hidrolizar
el GTP unido y volver a inactivarse; a ello
contribuye su interaccin con el propio
target o con una RGS (Regulator of G
protein signaling)
-Hay 25 genes GRS en el genoma humano
interaccionando cada una con un set
concreto de protenas G

Mecanismo general de activacin de protenas efectoras por GPCR


Estado G-GTP dura poco: GTP
rpidamente hidrolizado por actividad
GTPasa intrnseca de G, porque la
unin GGTP-Efector acelera la
hidrlisis (acta como una GAP) y por
el concurso de otra GAP, RGS

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Estructura de un GPCR, el -adrenrgico activo e inactivo:


Interaccin con protenas G monomricas

Hlices embebidas en MP rodean completamente un segmento central al que se une L no


covalentemente
La unin provoca movimiento hlices 5 y 6 y
cambia el lazo C3 creando una superficie que
puede unir la subunidad G
Una gran superficie G-GDP, que incluye el
NH3+ (N) interacciona con G (no con G)
Unin N de G a hlices 5 y 6 en R activados
induce apertura de G, salida de GDP, sustitucin
por GTP y cambio conformacional en SwI y SwII
que rompen las interacciones G/G y disocia
la subunidad
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Protenas G con distintas funciones y molculas efectoras

Al menos 21 h G codificadas por 16 genes; 6 G y 12 G. Las distintas G son


intercambiables funcionalmente, pero G es especfica:
R adrenrgicos 1 y 2 se acoplan a Gs y activan Ad ciclasa (AMPc)
R adrenrgicos 2 se acoplan a Gi e inhiben Ad ciclasa
R adrenrgicos 1 se acoplan a Gq y activan PLC (Fosfolipasa C) (DAG, IP3)

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Algunas protenas G trimricas regulan la produccin de AMPc


-AMPc pequeo mediador intracelular en

procariontes y todas las clulas animales


-Su [ ] aumenta mas de 20 veces en seg tras signalling
fruto del balance entre sntesis (a partir de ATP con
el concurso de la Adenilato ciclasa en MP-) y
degradacin (mediada por AMPc fosfodiesterasa que
lo hidroliza a 5-AMP (5 adenosina monofosfato)
-Adenilato ciclasa es una gran protena TM
(multipass) con el dominio cataltico en citoplasma
-8 isoformas en mamferos, la mayora reguladas
tambin por Ca++
-GPCRs que aumentan AMPc estn acopladas a
protenas G estimuladoras (Gs) que activan adenilato
ciclasa (Otras G, Gi, inhiben adenilato ciclasa y
actan regulando canales inicos)

-Distintos tipos celulares responde de forma distinta a un aumento de la [AMPc]


-Un tipo celular responde de igual forma independientemente del estimulo que lo genera: 4
hormonas distintas generan un aumento de [AMPc] en adipocitos y todas inducen la
transformacin de triglicridos en acs. grasos
-Deficiencias en G generan una menor respuesta a estas hormonas que cursa con
alteraciones metablicas, desarrollo anormal del hueso y retraso mental

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Activacin de la Adenilato ciclasa (Ad Cl) por interaccin con Gs


Ad Cl es una TM multispan
con dos grandes segmentos
catalticos en citosol que
convierten ATP en AMPc
En Gs 2 regiones: la hlice
SwII y el lazo 35,
contactan con fragmentos de
la Ad Cl y activan el enzima
puesto que SwII es uno de los
puntos de G que cambia
conformacionalmente cuando
est unida a GDP o GTP

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En mucho tipos celulares G activa y/o inhibe la Adenilato ciclasa


En adipocitos 3 R (Glucagn, Adrenalina, ACTH) activan AdCl va Gs para
degradar triglicridos a ac.grasos y glicerol, mientras dos (PGE1 , Adenosina)
inhiben el proceso: el complejo Gs-GTP se disocia de G ste se une a Gi y
los niveles de AdCl caen

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La kinasa dependiente de AMPc (PKA) media la mayora de los


efectos del AMPc fosforilando en Ser/Thr sustratos especficos

PKA inactiva consta de 2 subunidades catalticas mas 2 reguladoras

-La unin de AMPc a las subunidades reguladoras altera su configuracin y las disocia del
complejo
-Las subunidades catalticas solas quedan activadas para fosforilar sustratos especficos

-Las subunidades reguladoras (A-kinase) determinan la localizacin de la kinasa dentro de


la clula: Hay AKAPs (A-kinase anchoring proteins) (ver luego) que unen las subunidades
reguladoras al citoesqueleto, la MP o un orgnulo localizando el complejo enzimtico
-Hay, por tanto, respuestas dependientes de AMPc que ocurren en segundos y otras que
requieren cambios en la transcripcin gnica

AMPc activa PKA liberando subunidades inhibitorias de la Kinasa


PKA inactiva es un tetrmero (2R + 2Cat)
Cada R se une al sitio activo de una Cat
inhibiendo su actividad y tiene dos puntos
de unin a AMPc, CNB-A y CNB-B
Binding AMPc a estos dos sitios produce c.
conformacional la subunidad R suelta la
Cat destapando su punto cataltico y la
Kinasa se activa
La unin de AMPc es secuencial: el primer
AMPc se une a CNB-B facilitando la unin
de un 2nd AMPc a CNB-A

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Efectos mediados por AMPc-PKA. Regulacin metabolismo del


Glucgeno en hepatocitos y msculo esqueltico (R. rpida)
-En presencia de Adrenalina se genera AdCl-AMPc-PKA, cuya funcin es inhibir la sntesis
de glucgeno y estimular su degradacin a G-1-P y G-6-P que generar ATP en la va de
la glucolisis o se de-fosforilar a G se trasporta a travs de Glut 2
-PKA inhibe sntesis de glucgeno fosforilando e inhibiendo la glucgeno sintetasa y
activando la sntesis de G-1-P va fosforilacin y activacin de la glucgeno fosforilasa
-En ausencia de Adrenalina, cae AMPc, se inactiva PKA y se activa la Pasa que elimina P
aadido por PKA a glucgeno sintetasa, glucgeno fosforilasa y glucgeno fosforilasa
kinasa, aumentando los depsitos de glucgeno

-AMPc activa genes target (Respuesta lenta) va regiones especficas (CRE AMPc
response elements -) del ADN a las que se une una protena reguladora especfica del gen
(CREB CRE-binding protein -) presente solo en el N
-PKA activada por AMPc, libera sus unidades catalticas que migra al ncleo, fosforilan
CREB en una sola Ser
-CREB P* recluta un co-activador transcripcional llamado CREB-binding protein (CBP) y
ambos se unen a CRE estimulando la transcripcin del gen target

Una familia protenas AKAPs (A kinase associated proteins)


restringe isoformas PKA a zonas concretas celulares (sin activar
toda la clula)
-AKAP 15 co-localiza PKA en cara citoslica MP junto a canal Ca++; en presencia
Adrenalina, PKA fosforila el canal, entra Ca y el cardiomiocito (CM) se contrate
-Otra AKAP en CM ancla PKA y PDE (cAMP fosfodiesterasa, que hidroliza
AMPc a AMP y acta como regulador negativo de PKA) a la EN externa; el
aumento de AMPc activa PKA que fosforila PDE activndola, se hidroliza el
AMPc y se inactiva finalmente PKA

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La desaparicin del L down-regula la va


GPCR/AMPc/PKA
La afinidad L-R cae cuando GDP es sustituida
por GTP-Gs (aumenta posibilidades de
disociacin de L y limita nmero de Gs
estimuladas)
Activacin GTPasa de Gs convierte GTP en
GDP, inactiva Gs y disminuye activacin Ad
ciclasa
De hecho Ad Cl (y cualquier target de Gs)
aumenta la hidrlisis de GTP cuando se une a
Gs, actuando como GAP
AMPc fosfodiesterasa hidroliza AMPc a 5-AMP
y la respuesta celular finaliza

Gs expuesta mucho tiempo al L desensibilizan el R


PKA fosforila Ser/Thr del d citoslico del R. El R-P* puede unir L
pero no activar eficazmente G y se produce menos Ad Cl activa
(en este caso se desensibilizan R y G (Desensibilizacin
Heterloga)
Otros residuos citoslicos del R pueden ser fosforilados por otra
K, BARK (-adrenergic R kinase), solo cuando el R est activado
( unido a L) (Desensibilizacin Homloga)
Una protena similar a Arrestina (-arrestina) (ver luego)
desensibiliza los R adrenrgicos internalizndolos y
degradndolos, en parte

Otras vas reguladas por Protenas G trimricas


aparte de la activacin de enzimas MP
Subunidad de G12 activa una GET (factor intercambiador de
nucletidos de guanina) que activa una GTPasa monomrica de la
fam Rho que regula citoesqueleto Act
Protenas G activan/inactivan directamente canales inicos de la
MP alterando su permeabilidad inica y excitacin elctrica:
- Acetilcolina liberada por el nervio vago reduce nivel y fuerza
contraccin cardiomiocitos (efecto inhibitorio) a travs de R
muscarnicos (distintos nicotnicos de la unin neuromuscular)
que activa Gi: inhibe adenilato ciclasa y abren canales K+ lo
que hace ms difcil despolarizacin MP
Otras protenas regulan canales inicos indirectamente:
- Estimulando la fosforilacin del canal con PKA, PKC o CaMKinasa
- Induciendo la produccin/destruccin de nucletidos cclicos que
directamente activan/desactivan los canales (Olfacin/visin)

El R de acetilcolina (muscarnico) en msculo cardiaco activa una


protena Gi que abre canales K+
La unin L abre el canal
K; la salida de K hace
ms la cara citoslica
(hiperpolarizacin)
disminucin del latido)
Aqu el R trasmite la
seal por G, que se
une y activa el canal,
ms que por G

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GPCRs en epitelio olfativo regulan canales inicos dependientes de


nucletidos cclicos
-Cls nerviosas olfativas reconocen ms de 10.000 olores via GPCRs especficos (R olfativos)
localizados en cilios modificados
-1000 R en ratn y unos 350 en humanos, cada uno codificado por un gen; reconocen un
grupo de olores especficos y activan un grupo concreto de neuronas olfativas
-La estimulacin activa una G especfica (Golf) que activa adenilato ciclasa; el aumento de
AMPc abre canales catinicos permitiendo la entrada de Na+ despolarizando la MP de la
neurona olfativa cuyo axn transmite el impulso nervioso al cerebro
-Feromonas en animales (no humanos) actan de manera similar

Las respuestas visuales son las ms rpidas mediadas por


protenas G trimricas
-Bastones (responsables visin B/W y luz
opaca); conos (visin color y luz brillante)
-Bastones constan de segmentos exterior e
interior, cuerpo celular y regin sinptica
(transmisin seal qumica a neurona
retiniana impulso nervioso)
-Aparato foto-transductor en segmento
externo (sacos membranosos aplanados
empaquetados repletos de Rodopsina)
-MP que rodea segmento externo contiene
canales catinicos dependientes de GMPc

-Rodopsina es un GPCR; cada molcula contiene un cromforo unido covalentemente, el


11-cis retinal, que isomeriza casi instantneamente a trans-retinal cuando absorbe un fotn
-La isomerizacin altera la forma del retinal que fuerza un cambio conformacional en la
protena
-Oscuridad: la clula
constantemente despolarizada
(numerosos canales Na y Ca
abiertos) (potencial membrana -30
mV)
-Absorcin luz cierra los canales
(no directamente) haciendo ms () el interior celular
-En oscuridad, [GMPc]
mantiene abiertos lo canales; con
luz se activa PDE (GMPc
fosfodiestererasa) que hidroliza
GMPc a GMP; cada GMPc
cierra los canales

Gt-GTP (Transducina) libre tras absorcin luz por Rhodo se une a las 2 subn de la
PDE (fosfodiesterasa) , liberando subn catalticas y que convierten GMPc en GMP.
Cada GMPc cierra canales y reduce release neurotrasmisores
Gt-GTP se inactiva a Gt-GDP con concurso GAP
Gt permanece activa una fraccin de sec, PDE tb se inactiva rpido y los niveles de
GMPc aumentan gradualmente al desaparecer luz

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Para volver al estado resting (PDE inactiva + canales MP abiertos)


los bastones deben inactivar toda la va de la Rhodopsina-I

El complejo formado por las subn inhibidoras del PDE + Gt-GTP recluta un
complejo de 2 protenas: RGS (regulators of G protein signaling) y G5 que acta como
GAP hidrolizando a Gt-GTP a GDP. Se libera la subn y finaliza la activacin de
PDE
Protenas sensoras de Ca activan la Guanilato K: la luz cierra canales Ca y cae Ca++
citosol, lo que siente una Ca-binding protein, GCAP (Guanilatociclasa-activating
protein); hay una rpida estimulacin de la sntesis de GMPc por la guanilato ciclasa y
se reabre el canal

Para volver al estado resting los bastones deben inactivar toda la va


de la Rhodopsina- II
Desactivacin de Rhodo implica la fosforilacin de su forma activa
(dark-Rhodo), pero no de la inactiva, por otra GPCR Rhodo Kinasa
(cada Rhodo tiene 3 P en Ser del segmento C4 COO- en cara
citoslica)
Cuanto ms fosforilada est Rhodo menos capaz de activar Gt

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Para volver al estado resting los bastones deben inactivar toda la va


de la Rhodopsina- III
Arrestina se une a las 3 Ser-P y bloquea totalmente la forma GtGTP y con ello la activacin de PDE
Al mismo tiempo,
los P de Rhodo
estn siendo
constantemente
eliminados por
fosfodiesterasas lo
que induce la
separacin de la
arrestina y se
restablece la
Rhodo

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Vas de sealizacin que utilizan GPCR responden


a ciertos principios generales similares
-Numerosas posibilidades de amplificacin:
Una sola Rodopsina activa cientos de
Transducinas (G) cada una de las cuales
activa una GMPc fosfodiesterasa que, a su
vez, hidroliza aproximadamente 4000 mols
GMPc/seg (En resumen, la activacin de 1
Rodopsina resulta en la hidrlisis de 105
mols GMPc)
-Estos procesos de amplificacin estn
sujetos a estrictos controles feedback en
cada paso

Figure 15-50 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

Otros GPCRs actan a travs de protenas G trimricas (Gq) que


activan una va de signalling de Fosfatidilinositol mediada por
Fosfolipasa C-

Mismas clulas (hepatocitos) hacen lo mismo (metabolismo


glucgeno) utilizando GPCRs pero activando vas de sealizacin
distintas
Table 15-2 Molecular Biology of the Cell ( Garland Science 2008)

PI (Fosfatidilinositol) en cara citoslica MP es fosforilado dando PIP


(Fosfatidilinositol bifosfato) que la PLC- corta en:
-DAG (lipoflica queda en la MP), y
-IP3 que difunde al citoplasma

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Va activada por PLP C- mediada por


IP3
IP3 soluble en agua difunde desde la MP al RE donde se une y
abre un canal de Ca++ dependiente de IP3 (IP3 R). Consta de 4
subunidades iguales cada una con un punto de unin altamente
especfico para IP3 (no se unen otros fosfatidil inositoles)
El Ca++ sale al citoplasma y aumenta su concentracin disparando
numerosas vas (el Ca++ del RE se recarga mediante un canal Ca++
de la MP y un sensor de Ca++ del RE en regiones donde las dos
membranas estn cerca)
IP3 se modifica rpidamente por:
- desfosforilacin via Pasas a IP2, o
- fosforilacin va kinasas a IP4 que funciona como nuevo
mediador
El Ca++ citoplsmico tambin se elimina rpidamente fuera de la
clula

Prdida Ca citoplsmico por efecto de IP3 se restituye rellenando los


depsitos del RE:
-Tras deplecin Ca en RE
se abre un canal en la MP
(Store operated channel)
que contiene la protena
Orai 1, con el concurso del
sensor de Ca de la
membrana del RE, STIM
-Cuando hay Ca un dom de
esta protena hacia la luz
del RE lo une; cuando cae,
STIM pierde el Ca,
oligomeriza y se recoloca
cerca de la MP unindose,
va el d. CAD, a Orai 1 y el
canal se abre entrando Ca
extracelular
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Mecanismos para mantener baja la [Ca++] citoplsmica

-Todos eucariotas una bomba Ca++

(dependiente ATP) en MP
-Clulas nerviosas y musculares que
utilizan mucho Ca transportador adicional
(Antiporte Na+/Ca++)

-Bomba Ca RE capta Ca citoplsmico en contra


gradiente
-Bomba de baja afinidad en MMI capta Ca
citoplsmico utilizando el gradiente
electroqumico de esa membrana (Ca en
mitocondrias activa algunas enzimas del ciclo de
Krebs, pero a altas [ ] mata a la clula)

Varias protenas que unen Ca, especialmente Calmodulina,


colaboran en la sealizacin Ca dependiente
-Calmodulina acta como un R intracelular de Ca que gobierna muchos de sus efectos
-Es un polipptido nico muy conservado con 4 puntos de unin de Ca de afinidad
-La unin de Ca induce un cambio conformacional y la activacin de la Calm; a mas Ca
mayor activacin (un incremento de [Ca] de 10 veces produce una activacin Calm de 50
veces)
-Ca++/Calm, a diferencia de AMPc/PKA, no tiene actividad enzimtica, actan uniendo y
activando otras protenas (enzimas, transportadores)
-La unin al target genera un
nuevo cambio conformacional
en la Ca/Calm diferente segn
el target

Va activada por PLP C- mediada por Diacilglicerol

Permanece en la MP
Puede transformarse en:
- Ac. Araquidnico
capaz de generar
muchos mediadores
(Icosanoides,
Prostaglandinas) (dolor,
inflamacin), o
- Activar la
proteinkinasa C (PKC)
(Ser/Thr dependiente de
Ca++) que se mueve a la
MP cuando el IP3
aumenta la [Ca++] citosol
PKC acta como PKA
activando otros targets
va scaffold o
adaptadores en distintos
compartimentos

Acetilcolina une un GPCR en clulas endoteliales activando PLC


que..
-Aumenta Ca intracitoplsmico que se une a Calmodulina y el
complejo activa ntrico (NO) sintetasa que forma NO
-NO difunde al msculo liso del vaso (vida media 2-30 sec);
interacciona con su R citoplsmico que cambia conformacionalmente
aumentando su
actividad intrnseca
guanilato ciclasa y la
produccin de GMPc
-GMPc activa PKG
que inhibe la
contraccin Act-Mios,
relaja la clula
muscular y dilata el
vaso
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Figure 16.1 Several common cell-surface receptors and signal transduction pathways.

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R superficiales acoplados a enzimas (RTK)


-Protenas TM unispan con un dominio ext de unin al L y otro citoplsmico que es un enz
o se asocia directamente a una
-GPCRs y RTKs utilizan frecuentemente iguales rutas de sealizacin
Tirosinkinasas: fosforilan Tyr especficas en la misma mol o en mediadores
R asociados a Tyr-K: no tienen actividad kinasa intrnseca, reclutan Tyr-Kinasas del
citoplasma para transmitir la seal
R Ser/Thr kinasas: fosforilan Ser/Thr en la misma mol o en reguladores gnicos asociados
R histidina kinasa: activan una va con 2 componentes: la kinasa se fosforila a si misma en
His y transfiere inmediatamente el grupo fosforilo a un segundo mediador
R guanidilciclasas: catalizan
directamente la produccin de GMPc
que acta como mediador
Tyr Pasas parecidos a R (no se
conocen sus L): eliminan grupos P de
Tyr de mediadores intracelulares
especficos

R que activan Tyr-K se agrupan en dos grandes categoras


-Tyr-K es una parte del R, los dos estn codificados por el mismo gen
-R y K estn codificados por distintos genes, pero estn ntimamente relacionados
-L son pptidos solubles o unidos a membrana, muchos hormonas o GF que
estimulan proliferacin y/o diferenciacin

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Activacin RTK
-Mayora RTK son monmeros con un punto de unin al L, una hlice TM y un d. kinasa
citoplsmico
-RTK, como otras K, tienen un d. flexible, labio de activacin (LdA), cuya configuracin sin L bloquea
la activacin K
-Unin L induce c. configuracin, dimerizacin d. externos (imprescindible para activar RTK),
acercamiento de los dominios TM y citoplsmicos
-La K de un monmero fosforila la Tyr del LdA del otro
- LdA-P* cambia conformacionalmente, desaparece el bloqueo y se activa la K fosforilndose nuevas
Tyr en el d. kinasa y otros sustratos

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Otros mecanismos de dimerizacin de RTK

-Binding EGF a su R produce c. conformacional que empuja un lazo entre los


dos d. de unin; la interaccin de los dos lazos permite la dimerizacin funcional
-Cada uno de los 2 L de FGFR se unen simultneamente a los d. extracelulares de
las dos subn del R. FGF une adems heparan sulfato para aumentar su binding y
favorecer la dimerizacin
Hay L de RTK que son dmeros y el binding rene dos R, y
R (el de Ins) que forman dmeros an sin L, que al unirse simplemente activa el R

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Como la dimerizacin del R activa la Kinasa? (Ejemplo EGFR)


-Los d. kinasa estn separados de los TM por un segmento yuxtamembranoso (SY)
-R inactivo (monmero): una parte del SY (JM-B) est unido a la parte superior
(lbulo N) del d. kinasa haciendo que el LdA tape el punto activo de la K
bloqueando su activacin
-- Dimerizacin genera un dmero asimtrico: un d. kinasa (activador) se une a SY
de la otra mol (receptor) cambiando la conformacin del lbulo N del receptor
desplazando el LdA del p.activo de la kinasa y activndola

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La dimerizacin en la familia HER (h EGFR) muestra variantes del


patrn general
HER 1 se une a 3 EGF distintos: EGF, HB-EGF
(heparin-binding EGF) y TGF (Tumor
derived GF). La unin genera homodmeros
como se ha explicado)
NRG 1 y 2 (Neuroregulina) unen HER3 y 4
(HB-EGF tb une HER4)
HER 2 (25% cncer mama lo sobre-expresa) no
se une a ningn L pero forma heterodmeros
con HER1, 2 y 3 unidas a sus L, aumentando la
sensibilidad y signaling

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Receptores de Citocinas (sin dominio K citoplsmico)


Todas las citocinas evolucionan de un ancestral comn y tienen la
misma estructura 3D: 4 largas hlices
R tb evolucin conjunta
y similar estructura: d.
extracelular con 2 subd.
Cada uno con 7 hojas
plegadas

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El binding de una citocina a su R activa la PTK, JAK asociada al R


JAK unida al d. citoplsmico del R consta de: d unin al R (en NH3+); d. kinasa
(en COO-) y d. intermedio, que regula la actividad kinasa
Dimerizacin del R tras unin L. las JAK asociadas se aproximan fosforilando una
a la otra en Tyr del LdA
Fosforilacin produce c. conformacional que aumenta afinidad de JAK por ATP u
otros sustratos

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Cmo se transmiten las seales va motivos Tyr-P ?. A travs de


dominios que los reconocen
-A travs dominios SH2 (PLC Fosfoinositol + Diacilglicerol Aumento [Ca++] +
Activacin PKC)
-A travs dominios SH3
- Hay 215 dominios SH2 y 295 SH3 en genoma humano
-En ambos casos la sealizacin contina en otros se activan seales (-) (C-Cbl cataliza la
ubiquitinizacin del R activado Internalizacin y degradacin en lisosomas)
Dominio SH2

Unin a P-Tyr

SH2 (Src homology 2 domain) estructura 3D muy similar en


distintas protenas pero cada una une aa prximos al dominio
distintos (p.ej., SH2 de la TyrK Src une cualquier pptido que
contenga la sec Tyr-P*-Glut-Glut-IsoLeu)

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PTB (Phosphotyrosine binding domain), frecuente en protenas


multidocking, sirven de puntos de interaccin a otras protenas tb
implicadas en signalling ; p.ej., IRS-1 es una protena multidocking
que une Tyr-P* tras activacin de InsR y CitokR
Las protenas
multidocking expanden
el nmero de seales
intracelulares que
pueden ser activadas
por el R

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-En receptores que son tetrmeros (Ins, IGF-1) la unin de los L genera
reordenaciones del dominio TM que aproximan los dos dominios kinasa
-Aqu la mayora de los Tyr-P no estn en el R sino en una protena accesoria IRS
1 (Insulin receptor substrate 1)
-El R activado transfosforila primero sus dominios kinasa que, a su vez, fosforilan
IRS1 en mltiples Tyr generando muchos docking, a los que se unen otros R
formando un complejo de sealizacin

Todas las JAK activan TF de la familia Stat


Stat consta de: un d unin a ADN (en NH3+); un SH2, un COOcon una Tyr reguladora
Stat monomrico se una al R va SH2 y JAK fosforila la Tyr de
COOStat-P* se disocia espontneamente
del R y dimeriza con otra Stat-P*
(el SH2 de cada una une la Tyr-P*
de la otra)
Dimerizacin provoca un cambio
conformacional que expone una
NLS; el dimero migra al N e
interacciona con los genes target

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Down-regulacin de la sealizacin de RTK y R de citocinas. I. Por


Internalizacin
R endocitados en poros clathrina (ritmo bajo en ausencia L, se
multiplica x 10 con l y pocos vuelven a MP) (Nivel degradacin R
depende adicin ubiquitina a Lys del d. citoplsmico R; Ubiquitin
ligasa E3, c-Cbl se une al R-P* y un d. RING finger recluta enz
conjugantes de Ubiq que median su transferencia al R). R
ubiquitinizados se incorporan a c. multivesiculares y son degradados
x lisosomas

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Down-regulacin de la sealizacin de RTK y R de citocinas por


defosforilacin de Tyr-P con Pasa
-SHP1 se une al R e inactiva JAK (contiene dos SH2; en cls resting uno est bloqueando el
p. cataltico de la Pasa, con estimulacin este SH2 bloqueante se une a Tyr-P* del R
produce un c conformacional desenmascarando el p. cataltico de SHP1 y ubicndolo cerca
de la Tyr-P* del LdA de Jak. Se elimina el P y SHP1 inactiva Jak que no fosforila el R
-Protenas SOCS, que son targets finales de la va de los R citok, down-regulan dicha va:
- en varias SOCS, un SH2 une Tyr-P* del R activo impidiendo el binding de las protenas
de la va de sealizacin
- Todas las SOCS tienen un SOCS box que recluta ubiquitin ligasa E3; unin de SOCS1 a
Jak la poliubiquiniza y es degradada en proteasomas

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Otras vas de transmisin de seales


RTK
Va Ras, Ras-GEF, MAPK
Va Rho, Rho-GEF, Citoesqueleto
Va PI3-K, Akt (= PKB)

RTKs activan GTPasas monomricas de las


familias Ras y Rho

-Interaccionando con distintos mediadores Ras y Rho


extienden la seal RTK a varias rutas de sealizacin
(proliferacin y diferenciacin; tumorognesis)
-Ras (las 3 formas H, K, N funcionan igual) tiene 1
mas lpidos unidos covalentemente para anclarse a la
MP donde se activan via RTK activadas
-Ras-GDP inactivada y unida a GTP se activa con el
concurso de Ras-GEF ( Ras guanine nucleotide
exchange factors) o se desactiva con el de Ras-GAPs
(Ras GTPase-activating proteins)

-RTK utiliza Ras-GEF que determina donde se activa


la GTPasa y que protenas se activarn downstream

RTKs activan adaptadores va Ras y GEFs. El modelo del omatidio de insectos


Ojo compuesto: 8 unidades idnticas (Omatidios), cada una con 8 cls fotoreceptoras (R1-R8) ms 12
clulas accesorias
El ojo se desarrollo como una lmina epitelial monoestratificada
Las clulas de cada omatdio son reclutadas de acuerdo a un patrn fijo: cada fotoR en desarrollo,
empezando por R8, induce a su vecino no comprometido un fate especfico y lo ensambla en el omatidio
Defecto en R7 (sevenless, ciego a la luz UV); gen Seven codifica una TRK expresada en R7
Mutantes con desarrollo R7 bloqueado pero seven normal tienen defectos en el L de RTK seven
(Brigde of sevenless Boss-)
Boss es una protena TM 7-span expresada exclusivamente en R8 que une y activa seven induciendo la
diferenciacin del precursor R7 al fotoR R7 (Seven se expresa en otros progenitores pero al no estar
cerca de R8 no interaccionan con Boss y diferencian a R7)

Desarrollo de R7 explica la sealizacin RTK a travs de Ras y RasGEF

-Defecto parcial en Seven identific una Ras: moscas con 2 copias mutadas letales, pero solo
con 1 sobrevivan pero no desarrollaban R7
-Si el gen Ras se sobreexpresaba se desarrollaba R7 incluso en mutantes Seven y Boss (Ras
acta down y es necesario y suficiente para diferenciar R7)
-Otros genes identificados en estos mutantes: Sos (Son of sevenless) codifica una Ras-GEF
necesaria para que Seven active Ras, y
-DRK codifica un adaptador que acopla Sev y Sos (su dominio SH2 une Sev activado y sus
dos SH3 une Sos

En mamferos el proceso es igual


Acoplamiento de RTK a Ras se
realiza con el concurso del
adaptador Grb2 (Drk) y una
Ras-GEF (Sos)
Ras activada estimula an ms a
Sos reforzando el proceso
Otros mediadores (Ca++,
diacilglicerol) tambin activan
Ras-GEF y, por tanto, Ras, aqu
sin necesidad de adaptador

RTK y Jak se unen a Ras va los


adaptadores Grb2 y Sos

-Grb2 es un adaptador sin actividad


enzimtica, con un SH2 que une Tyr-P* del R
activado y un SH3 que une Sos (SH3 une
secuencias ricas en Pro)
-Tras activacin del RTK se forma en la MP
un complejo R-P*-Grb2-Sos
-Sos lo lleva cerca de Ras-GDP y se une a l
generando un c. conformacional en Sw1 y
Sw2 que abre el pocket GDP y libera Ras que
se une a GTP
-Ras-GTP provoca otro cambio y activa la
va Ras-MAPK

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Ras contina internalizando la seal activando MAPKs


Tyr-fosforilaciones y activacin Ras son procesos cortos (Tyr-Pasas y GAPs,
respectivamente desactivan rpidamente)
Las seales han de convertirse en otras de mayor duracin y que lleguen hasta el ncleo
regulando expresin gnica:
MAPKs (Mitogen-activated protein kinases): MAPK (Erk) MAPKK (Mek)
MAPKKK (Raf) (Nombres en la va de Ras; hay muchas otras)
Raf fosforila distintos reguladores
gnicos que afectan, entre otros, a genes
de ciclo (Ciclinas G1)
Actividad MAPK depende:
- Duracin seal extracelular
- Mecanismos feedback (-) que
aumentan la [DPPase] (Dual-specificity
protein phosphatase) que elimina P de
Tyr (MAPK fosforila en Tyr) y de Thr
(MAPKK lo hace en Thr)

Cascada Ras-MAPK
-Ras-GTP une el d. regulador en NH3+ de Raf, una Ser/Thr K activndola
-En cls resting Raf est P y unida a la protena que une la fosfoserina 14-3-3;
hidrlisis de Ras-GTP a Ras-GDP libera Raf de 14-3-3 y Raf fosforila MEK (K de
Tyr, Ser/Thr)
-MEK fosforila y activa MAPK (=ERK) (otra Ser/Thr K) que fosforila targets,
como TF

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La fosforilacin de MAPK resulta en c. conformacional que aumenta


su actividad cataltica y promueve dimerizacin de la K
-Sitio cataltico MAPK inactiva
est bloqueado por grupo aa en
LdA
-Unin MEK-MAPK
desestabiliza LdA que expresa
Tyr 185; MEK fosforila la Tyr
y luego Thr 183
-Los dos aa-P* interaccionan
con otros alterando LdA y
permitiendo la unin de ATP
al p. cataltico de la hendidura
entre los d. kinasas sup e inf.
Tyr 185-P tambin clave para
unir sustratos especficos a
MAPK
-Fosforilacin, adems de
activacin cataltica, promueve
dimerizacin MAPK,
migracin al N y activacin TF
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Muchos GF inducen expresin de unos 100 genes de respuesta


MAPK fosforila y
temprana
activa la K p90RSK
que migra al N y
MAPK migra y
fosforila en Ser un
fosforila en N y tb en C
TF SRF (serum
response element)
MAPK-P* migra
al N y fosforila
otros TF, TCF
(terciary complex
factor)
Asociacin de
TCF-P* y 2 mols
de SRF-P* activan
c-fos otro TF de
resp temprana
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Scaffold distintos regulan diferentes respuestas mediadas por


MAPKs
- Las 3 MAPKs antes mencionadas operan en todas las clulas eucariotas utilizando
distintos mdulos para mediar respuestas especficas
- Scaffolds distintos permiten que las respuestas sean especficas y evitan el crosstalk entre
rutas pero disminuye la extensin de la respuesta

Procesos de mating u osmoregulacin en levaduras ejemplifican


como distintas vas de sealizacin, incluidas GPCR, que confluyen
en MAPKs pueden producir respuestas especficas con el concurso
de distintos scaffolds

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Levaduras N son a , secretan feromonas que inducen mating: Una a secreta el


factor mating a cuyo R est en una cl. y viceversa
La unin de a a cualquier GPCR dispara el intercambio GTP-GDP en G y la
disociacin G/G
G inicia la cscada en la MP uniendo la subn a la protena Ste 5 que acta
de scaffold para reclutamiento mas protenas (Ste 11, Ste 7, Fus 3) a la MP
Ste 11 fosforila Ste 7 que, a su vez, fosforila Fus3 (equivalente a MAPK); Fus3-P*
migra al N y fosforila Dig1 y Dig2 que liberan de su inhibidor al TF Ste 12, que
activa los genes de mating

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G activa cdc24, una GEF para Cdc42, una protena G monomrica similar a Ras
Cdc42-GTP activa la K Ste 20 que fosforila Ste 20 y activa Ste 11,
una Ser/Thr K (equivalente a Raf) y otras MEKK
MAPK en las dos vas interacciona con distintas molculas
Ste5 es el scaffold en va mating y Pbs2 en la de osmoregulacin
En la va mating,
Ste11 est
restringida al
complejo de Ste5
y solo puede
activar Fus3
En la va
osmoreguladora,
Ste11 restringida
por Pbs2 y activa
Hog1
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La otra gran familia de GTPasas, Rho, acopla funcionalmente R


superficiales al citoesqueleto
Rho (GTPasas monomricas) regulan citoesqueleto Act y Mtb
interviniendo en forma, movilidad, adhesin, ciclo celular,
transcripcin, transporte MP, etc
3 miembros Rho, Rac y Cdc42 cada uno afectando numerosos
targets downstream
Se activan con GEF (60 Rho-GEF) e inactivan con GAP (70 RhoGAP)
Algunas GEF y GAP son especficas de un miembro particular de
la familia, otras son menos especficas
Rho inactiva no est unida a la MP sino a GDIs (guanine
nucleotide dissociation inhibitors)

RTK y CitoK R activan, adems de Ras/MAPK y Rho/citoesqueleto, vas que


implican la participacin de Fosfoinostidos
Incluyen enzs que los sintetizan y protenas que los anclan a MP. Tienen efectos
rpidos (ya visto) sobre metabolismo y otros que afectan expresin gnica a travs
de PKC y PKB (Akt)

Efectos
metablicos
rpidos (PKC)

Efectos sobre
expresin gnica
(PKB)

PKB (Akt) es una Ser/Thr K con un d. PH de alta afinidad por el C3-P* de PI 3, 4


bifosfato y PI 3, 4, 5 trifosfato, que la reclutan a MP liberndola de la accin
inhibidora de PH sobre su punto cataltico
PKB alcanza mxima activacin con otras dos K: PKD1 que reclutada a la MP
por PI3-P la fosforila, y PKD2 que vuelve a fosforilarla en un 2nd Ser del L dA

RTK tambin sealiza va PI3-kinasa produciendo docking en la


bicapa lipdica de la MP
-PI (4, 5) P2 puede defosforilarse por PLC / dando IP3 soluble y Diacilglicerol
(permanece en la MP) (1)
-Puede fosforilarse por PI3-K (Fosfoinostido 3 kinasa) (que se une a la cola citoplsmica
de RTK activados) dando PI (3, 4, 5) P3 (2)
-PI (3, 4, 5) P3 se une a mediadores va motivos PH (Plecktrin homology) algunos
reconociendo tambin PIP3 lo que aumenta la especificidad del binding (2)
-PI (3, 4, 5) P3 puede
tambin ser
defosforilada, no por
PLC, sino por una
fosfoinostido
fosfatasa expecfica
(PTEN) (Mutaciones
en PTEN que hacen
que PI (3, 4, 5) P3 no
se defosforile cursan
con crecimiento
celular incontrolado)
(3)

Efectos de la activacin de PKB (Akt) sobre Apoptosis


PKB activa se disocia de la MP, activa muchas protenas e inhibe apoptosis
-Fosforila e inactiva protenas pro-apoptticas (Bad) (ver ejemplo insulina)
directamente o fosforilando al TF FOXO 3a en mltiples Ser/Thr, reduciendo su
capacidad de inducir expresin genes pro-apoptticos (aumento supervivencia)
-En ausencia de GF, FOXO 3a sin P* est en el N activando g. pro-apoptticos; en
su presencia PKB fosforila FOXO 3 a y a travs de su Ser-P* se une a la protena
14-3-3 y se bloquea
Fosforilacin mediada por PI-3P es revertida por la Pasa PTEN, que elimina P de
Ser/Thr y Tyr pero, sobre todo, el 3-P de PI-3, 4, 5 trifosfato. Sobre-expresin
PTEN promueve apoptosis al reducir PI-3P y, con ello, la actividad anti-apopttica
de PKB

Signaling Insulina implica la activacin de AKT por PI3-kinasa y su


implicacin en supervivencia y crecimiento celular

-Ins se une a RTK, activan PI3-kinasa que produce PI (3, 4, 5) P3 que recluta dos kinasas a
la MP va dominios PH: Akt (Protein kinasa B) y PDK1 (Phosphoinositide-dependent
protein kinase 1)
-Akt activada fosforila varios sustratos induciendo su desactiuvacin que contribuye a
supervivencia y crecimiento celular:

- Bad sin fosforilar implicada en apoptosis, fosforilada expresa puntos de unin Ser-P para
un scaffold 14-3-3 que la secuestra aumentando la supervivencia
- Una Ser/Thr kinasa TOR (Target of rapamycine) (inmunosupresor y anti-tumoral)
-TOR forma dos complejos
multiproteicos funcionalmente distintos:
- mTOR complejo I
contiene Raptor (protena
sensible a Rapamicina),
estimula el crecimiento celular
- mTOR complejo II contiene Rictor (protena
insensible a Rapamicina) ayuda activar Akt y
regula citoesqueleto Act va Rho-GTPasa

mTOR complejo I integra inputs de distintas rutas


-Factores de crecimiento y nutrientes activa TOR y promueven crecimiento celular
-GF activan mTOR va PI3-kinasa/Akt
-Akt activa mTOR complejo
I indirectamente por
fosforilacin e inhibicin de
una GAP (Tsc2), que acta
como una Ras-related
GTPasa monomrica
llamada Rheb
-RheB activada (Rheb-GTP)
activa TOR

Las rutas finales de los mediadores intracelulares hacen confluir las


vas de sealizacin de RTKs y GPCPs

Figure 16.1 Several common cell-surface receptors and signal transduction pathways.

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R asociados a Ser/Thr kinasas (SF TGF) sealan


directamente al ncleo va Smads

SF TGF, gran nmero de protenas dimricas,


secretadas que actan como hormonas o mediadores
locales:
- Desarrollo (Patrones de formacin, proliferacin,
especificacin, diferenciacin, apoptosis, produccin
ECM)
- Adultas: Reparacin tisular, regulacin inmune
Dos grandes familias: TGF/Activina y BMPs
Actan va R (Tipos I y II, homodmeros
estructuralmente similares) acopladas con un dominio
Ser/Thr kinasa citoplsmico, junto a un RIII que
acumula TGF en la superficie cerca de RII
Otros R Ser/Thr kinasas pueden actuar a travs de otras
vas, adems de Smads, y otros R de otras familias
pueden fosforilar Smads

-Cada miembro SF se une a una combinacin especfica de dmeros I y II que unen sus
dominios kinasas de forma que el R II fosforile y active el I (complejo tetramrico activo)
-El complejo se une y fosforila un regulador gnico de la fam Smads (Sma, Cianorhabditis y
Mad de Drosophila):
- R TGF/Activina fosforila Smad
2 y Smad 3
- R BMPs fosforila Smad 1, Smad
5 o Smad 8
-Smads activadas (R-Smads) se
disocia del R y se una a Smad 4
(Co-Smad), que forma complejos
con cualquier R-Smad
-El complejo transferido al ncleo
controla actividad genes targets
junto con otras protenas
reguladoras gnica

Signaling va receptores TGF


RIII un proteoglicano TM que une y concentra TGF facilitando su
unin a RII
RI y RII son dmeros TM con d.
citoplsmicos Ser/Thr Kinasa. RII
tiene actividad K constitutiva, en
ausencia de TGF
Binding TGF forma complejos
con dos copias de RI y de RII;
una subn RII P* en Sr/Thr une
una secuencia conservada de
una subn RI, activando su d.
kinasa

Receptores TGF activados fosforilan TF Smads


3 Smads: R-Smads (2, 3) (Regulated Smads);
Co-Smads (4); I-Smads (Inhibidoras)
R-Smads tienen dos dominios MH1 y MH2
separados por un linker flexible; MH1
contiene un ADN binding segment y una NAS
(R-Smads inactivas NAS enmascarado)
P* en tres Ser del COO- de una R-Smad por
RI separa los dos dominios y permite unin
importina a NAS; simultneamente dos de las
Ser-P* de cada Smad 3 se unen al p. de unin
de fosfoserina en los d. MH2 de una Smad3 y
una Smad 4: se forma un complejo estable con
dos Smad 3 ( 2) y uno Smad 4
La importina trasloca el heterocomplejo al N
y all se separa: Smad 2/3 y Smad 4 se unen a
otros TF y activa genes target
Dentro N, R-Smads son continuamente defosforiladas por Pasa, disociando el complejo
Smad 2/3-Smad 4 y sacndolo fuera del N

Varias protenas intracelulares down-regulan TGF /Smad


Dos oncoprotenas (expresadas en melanomas y cncer mama) SnoN
y Ski bloquean la transcripcin mediada por la unin del
heterocomplejo al ADN, de-acetilando histonas prximas
Estimulacin con TGF , Ski y SnoN son rpidamente degradadas
pero aumentan a las pocas horas por binding de Smad 2/4 al
promotor SnoN
La estimulacin con
TGF induce ISmads que bloquean
la capacidad de RI
activados para
fosforilar R-Smads y
degradan los R

Figure 16.1 Several common cell-surface receptors and signal transduction pathways.

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Sealizacin dependiente de la proteolisis de


reguladores gnicos latentes
Distinto de todo lo visto; especialmente
importante durante el desarrollo
Mecanismo general: Una parte liberada del R
viaja al ncleo y afecta los genes target
(Stats y Smads funcionan parcialmente as pero
se activan por fosforilacin no por proteolisis)
Receptores Notch; Protenas secretadas: Wnt y
Hedgehog; vas de sealizacin que utilizan
NF-B

La familia Notch y sus Ligandos (Jagged, Delta, etc)


-Claves para la determinacin del cell fate; patrones formacin en desarrollo y
renovacin tejidos adultos

Desarrollo neural en Drosophila


-Precursor comprometido linaje neuronal enva seales a clulas vecinas impidiendo el
mismo compromiso (Inhibicin Lateral): diferenciacin a epitelio
-Proceso mediado por Delta (L de Notch): una protena TM unipass expresada en los
progenitores neurales.
-Interaccin Delta-Notch impide
que las clulas que expresan
Notch se hagan tambin neurales
y, entonces, diferencian a epitelio
(sin la interaccin toda la lmina
de clulas se convierten en
neuronas)
-Notch y Delta son gp y sus
interacciones estn mediadas por
la glicosilacin de Notch por
Glicosiltransferasas de la familia
Fringe que alteran la
especificidad de Notch por sus L

- Notch es una TM onepass; activada por Delta (u otro L) se corta inicialmente con el
concurso de una proteasa asociada a la MP
-La cola citoplsmica migra al ncleo y activa genes target Notch unindose a una DNAbinding protein que pasa de ser un represor a ser un activador transcripcional
-Genes regulados dependen del tejido y las condiciones pero, en general, pertenecen a la
familia Hes que codifican inhibidores gnicos
-Notch sufre realmente 3 proteolisis:
- Se sintetiza como un precursor y se corta
en el Golgi formando un heterodmero
maduro que migra a la MP
- Inmediatamente despus de la activacin
y del corte de su dominio extracelular por la
proteasa de la MP, hay un tercer corte que
elimina el dominio TM con el concurso de un
complejo de proteasas (-secretasa) que
incluye la Presenilina (demencia presenil)

Protenas Wnt se unen a R Frizzled e


inhiben la degradacin de -catenina

Wnt molculas sealizadoras secretadas; mediadores locales y morfgenos


(control desarrollo animal)
Wnt = Wingless (Drosophila) + Int1 (Ratn)
Son protenas que tienen un cido graso unido covalentemente al NH3 para
aumentar su interaccin con MP
19 Wnt (Humanos): cada una con funciones distintas aunque solapantes
Activan, al menos, 3 vas de sealizacin:
- Wnt/-catenina (Cannica) centrada en el regulador gnico -catenina
- Va de la polaridad planar: coordina la polarizacin de clulas en el plano de
un epitelio en desarrollo; dependiente de Rho-GTPasas
- Via Wnt/Ca++: estimula un aumento de la [Ca++]
Las tres se inician por la unin de Wnt a un R de la familia Frizzled (TM 7span, recuerda estructuralmente a GPCRs) (7 en humanos)
Unin Wnt hace que R reclute un scaffold Dishevelled necesario para enviar la
seal a las 3 vas

Va Wnt/-catenina funciona regulando


la proteolisis de -catenina (Armadillo)

En esta va, no en las otras Wnt se une a


Frizzled y un co-R, LRP (LDL receptorrelated protein), relacionado con los R
LDL
Clulas epiteliales concentran -catenina
en uniones adherentes uniendo cadherina
a actina citoesqueleto
En todas las clulas -catenina no
asociada a cadherinas es degradada en un
Complejo de Degradacin (CD) que une
-catenina y lo mantiene fuera del ncleo
CD contiene, al menos, otras 4 protenas:
- CKI (Caseine kinase I), una Ser/Thr
kinasa que fosforila -catenina en Ser
- GSK3 (Glycogen synthetase kinase) otra
Ser/Thr- kinasa que tb fosforila catenina marcndola para ser
ubiquinizada y degradada en los
proteosomas
- Dos adaptadores: Axin y APC
(Adenomatous polyposis coli) (mutaciones
resultan en plipos benignos) mantienen
el complejo proteico unido

Mecanismo de funcionamiento
-La unin de Wnt a Frizzled y LRP aproxima los dos R que forman un complejo que es fosforilado (la cola
citoplsmica de LRP) por mecanismos ?? Por CKI y GSK3, reclutando Axina inactiva
-La separacin de Axina rompe el complejo de degradacin lo que impide la fosforilacin y posterior degradacin de
-catenina, que se acumula y transloca al ncleo afectando el patrn de transcripcin:

- En ausencia de Wnt, los genes dependientes de Wnt


permanecen silenciados asociados a un complejo inhibidor
que incluye protenas fam LEF1/TCF unidas a un corepresor de la fam Groucho
- En presencia de Wnt, -catenina entra al ncleo, se une
a LEF1/TCF desplazando a Groucho y actuando como un
co-activador induciendo transcripcin de genes target Wnt
(c-myc: crecimiento, proliferacin)
- Mutaciones en gen APC (80% carcinomas coln)
inhiben la capacidad de APC para unir -catenina que se
acumula en el ncleo, estimula transcripcin c-myc:
crecimiento y proliferacin descontrolada
-Varias protenas secretoras inhibidoras regulan
sealizacin Wnt:
- Unas unindose a LRP y promoviendo down-regulacin
- Otras compitiendo con R Frizzled por la unin Wnt
-Adems, al menos en Drosophila, Wnt fosforila genes que
apagan las respuestas (feedback -): por inhibicin de
Dishevelled o porque son inhibidores secretados

Hedgehog acta de manera similar a Wnt


- Ambas protenas secretadas (mediadores locales y
morfgenos)
-Las dos modificadas por lpidos a los que se unen
covalentemente
-Para funcionar han de ser secretadas o
presentarse asociados a componentes de la ECM
(proteoglicanos: Heparan sulfato)
-Activan reguladores gnicos latentes inhibiendo
su proteolisis
-Cambian represores por activadores gnicos y la
excesiva sealizacin genera cncer en ambos casos
-Utilizan algunos mediadores comunes y, a veces,
colaboran en la gnesis de la respuesta
-En Drosophila una sola forma Hedgehog (mutante
con dentculos); en vertebrados 3: Sonic, Desert e
Indian
-Las formas activas en todos los casos unidas
covalentemente a colesterol y a una cadena de cido
graso durante el procesamiento de un precursor

Tres Receptores: Patched, Smoothened e iHog


-Patched: TM 12 spans; expresada en vesculas intracelulares y en la MP donde
interacciona con Hgg
-iHog: 4/5 dominios SF Ig y 2/3 FN tipo III; en MP podra actuar como co-R para Hgg con
Patched
-Smoothened: Tm 7spans; estructura
similar a protenas Frizzled
En ausencia de Hgg; Patched a travs
mec ?? mantiene a Smoothened
secuestrada e inactiva en vesculas
La unin de Hgg a Patched e iHog
inhibe la actividad Patched induciendo
su endocitosis y degradacin;
Smoothened se fosforila, se trasloca a la
superficie celular y trasmite la seal
dwonstream

Efectos downstream mediados por el regulador gnico Ci


(Cubitus interruptus)
Ausencia Hgg: PKA, GSK3, CK1 fosforilan
Ci
Ci ubiquitinizado y parcialmente degradado
en proteosomas: la pequea protena
resultante se acumula en ncleo y acta
como represor de los genes target
El procesamiento de Ci depende de su
fosforilacin por 3 Ser/Thr kinasas: PKA y
dos kinasas de la va Wnt (CK1 y GSK3)
Antes de ser procesado Ci est unido a un
complejo, que lo mantiene alejado del ncleo,
asociado a Mtb y que incluye la Ser/Thr
kinasa Fused y el scaffold, Costal 2 donde se
reclutarn las 3 kinasas

Activacin va Hgg
Smoothened recluta a la MP
al complejo proteco Ci,
Fused y Costal 2 haciendo
que Costal no interaccione
con las 3 kinasas y, por
tanto, que Ci no se pueda
procesar
PKA y CK1 fosforilan aqu a
Smoothened y este a Costal
Ci sin procesar entra al
ncleo y activa los genes
target, entre ellos Patched
que aumenta su expresin en
la MP e inhibe el signaling
Hgg (feedback negativo)

En vertebrados la va Hedgehog es ms
compleja
Tres protenas Hgg: Sonic, Desert, Indian
Tres protenas reguladoras similar a Ci: Gli1, Gli2 y
Gli3
Solo Gli 3 parece sufrir proteolisis parcial y actuar,
como Ci, como represor o activador gnico
Gli1 y Gli2 podran ser solo activadores
Smmothened tras activarse se concentra en la superficie
del cilio primario; las protenas Gli tambin se
concentran all y acta como un centro de sealizacin
Hgg
Sobre sealizacin Hgg genera cncer (Mutaciones
inactivan 1 de los 2 genes Patched induce carcinoma de
clulas epidrmicas basales)

NF-B clave en numerosas vas de sealizacin


(inflamacin, inmunidad innata)
Entre ellas TLR, IL1R, TNFR
Activacin dispara una multiprotena ubiquinizadora y
una cascada de fosforilacin que libera NF-B de un
complejo inhibidor; migra al ncleo y activa cientos de
genes target
Mamferos 5 protenas NF-B: RelA, RelB, c-Rel, NFB1 y NF-B2 que forman distintos homo y
heterodmeros, cada uno de los cuales activa un distinto
set de genes
Protenas inhibidoras IB (, y ) se unen a los
dmeros y los mantienen inactivados en el citoplasma en
clulas sin activar
La sealizacin libera NF-B y, al tiempo, fosforila
ubiquitiniza y degrada IB

Fosforilacin IB depende de la IB-kinasa (IK), un complejo multiproteico que contiene


dos Ser/Thr kinasas (IK, IK) y una protena reguladora IK o NEMO (NF-B
essential modifier)
Entre los genes activados por NF-B en el
ncleo est IB que se une a NF-B y lo
inactiva (feedback negativo)

En la va de sealizacin de TNF, la regulacin negativa de NF-B


genera dos tipos de respuesta
Tras una corta estimulacin (1 hora): hay una corta activacin
de NF-B, independientemente del nivel del estmulo; el
feedback negativo mediado por IB corta la respuesta en
apenas 1 hora
Tras estimulacin larga: Oscilaciones en la activacin NF-B);
pulsos de activacin seguidos de otros de inactivacin mediados
por IB. Tras degradacin de IB nueva activacin de NFB
En ambos casos las respuestas son distintas pues algunos genes
solo se activan tras larga estimulacin, pero
En las dos hace falta la participacin de IB (Clulas IB-/no hay oscilaciones y todos los genes se activan)

Sealizacin en clulas vegetales


Clulas vegetales se comunican para coordinar sus
actividades a luz/oscuridad y temperatura, los
principales reguladores de su vida
Mecanismos menos conocidos que en cls animales e
importantes diferencias (evolucionan
independientemente desde hace un billn de aos)
Cels veg utilizan NO, GMPc, Ca++ y GTPasas Rho, pero
no se conocen homlogos de R nucleares, Ras, Jak, Stat,
TGF, Notch, Wnt, Hedgehog, AMPc
Pero las estrategias generales de funcionamiento son
similares
Hay pocos R Tyr-kinasas superficiales pero muchos
mediadores citoplsmicos Tyr-K y
fosforilacin/defosforilacin es importante en la
sealizacin vegetal

Ser/Thr kinasas son lo R superficiales ms frecuentes en plantas (300


en Arabidopsis)
Estructuralmente son muy diferentes: los ms frecuentes (175 en Arabidopsis)tienen
repeticiones ricas en Leu en el segmento extracelular, LRR (leucine-rich repeats) R kinasas
(recuerdan TLR)

Complejos R Clavata 1 (Clv1)/Clavata 2 (Clv2)


En meristemos se unan a una pequea protena secretada por
las clulas vecinas (Clv 3)
Unin Clv3 a Clv1/Clv2 suprime crecimiento meristemo por
estimulacin diferenciacin ms que por inhibicin
proliferacin celular

Sealizacin implicada poco conocida:


-Incluye una Ser/Thr Pasa que inhibe la
sealizacin
-Una Rho-GTPasa, y
-Un regulador gnico ( que recuerda a las
protenas homeodominio animales); su inactivacin
tiene efectos opuestos a los de la inactivacin del R
Clv1/Clv2: no diferenciacin del meristemo; la
planta produce pocos rganos
La activacin de Clv1/Clv2 estimula
diferenciacin celular mediante inhibicin de una
protena reguladora que normalmente inhibe la
diferenciacin

Otros R Ser/Thr kinasas de plantas


Bri 1, de una familia de R superficiales de
hormonas esterodicas (Brassinoseteroides) que
regulan crecimiento y diferenciacin celular
La unin de la hormona a Bri 1 activa cascada de
sealizacin que incluye la kinasa GSK3 y una
Pasa que regulan fosforilacin y degradacin de
protenas reguladoras especficas y as
transcripcin gnica (mutantes Bri 1 -/- son
insensibles a la hormona y enanas)
Al menos 6 familias ms con sus propios sets
especficos de dominios extracelulares (Lectin T
kinasas que unen ligandos carbohidratados)

Factores de crecimiento en plantas


Participan en desarrollo: Etileno, auxina,
citokininas, giberelinas, brassinosteroides, cido
absctico
Pequeas molculas fabricadas por la mayora de
las cls vegetales que difunden a travs de las
paredes celulsicas: actan localmente o son
transportadas afectando otras clulas
Sus efectos dependen de: condiciones
ambientales, estado nutricional, respuesta cls
target, actuacin otros reguladores crecimiento

Sealizacin mediada por etileno


Pequea molcula gaseosa con varios R estructuralmente relacionados en RE
Son protenas TM multispan, dimricas, con dominio unin etileno que lleva Cu y otro que
interacciona con la Ser/Thr kinasa CTR1 (secuencialmente similar a Raf MAPKKK-)
En ausencia de etileno (R vacio) la va est
activada y CTR1 est activo
Por mecanismos ?? CTR1 activo estmula
ubiquitinizacin y degradacin proteosomal
de un regulador gnico EIN3 necesario
tarnscripcin genes target (En ausencia de
etileno CTR1 elimina EIN3 y los genes target
no se activan)
Binding etileno inactiva R, alterando su
configuracin e impidindoles unir CTR1
(bloqueado), EIN3 no se degrada y activa los
genes target

Patrones de crecimiento vegetal: Papel de auxinas


Auxinas = Acido indol 3 actico; une R
proteicos nucleares
En MP hay transportadores de auxina
independientes para entrada y salida (genes
distintos y regulados independientemente)
Funciones: Crecimiento haca la luz y
del tallo () y la raz ()
En ausencia auxina: el represor
Aux/IAA une y suprime un regulador
gnico ARF (auxin-response factor)
necasrio para activar genes target
En presencia auxina: el complejo Rauxina recluta complejos ubiquitinaligasa que ubiquitinizan las protenas
Aux/IAA (degradacin en
proteosoma); ARF activa libremente
la transcripcin de genes target de
auxina

Fitocromos y Criptocromos
Plantas tienen fotoprotenas altamente sensibles a la luz, va cromforos que absorben
fotones, cambian conformacionalmente y hacen cambiar a las fotoprotenas

Fitocromos son Ser/Thr kinasas, dimricas, citoplsmicas que responden al espectro de la


luz roja: dentro de l la kinasa se activa y fuera se inactiva
El fitocromo activado se autofosforila y fosforila otras protenas celulares pudiendo:
-Traslocarse al ncleo y modificar la
transcripcin
-Activar un regulador gnico que se trasloca
al ncleo
-Disparar varias rutas de sealizacin que
modifican el comportamiento celular sin
implicar al ncleo

Fototropina y Criptocromos
responden a la luz azul
Fototropina se expresa en MP; parcialmente
implicada en fototropismo junto a auxina
determinando elongacin celular direccional
Criptocromos: flavoprotena, similares a las
Fotoliasas reparadoras de ADN por UV

Abreviaturas

K, kinasa
GPCRs, receptores acoplados a protenas G
Mol, molculas
aa, aminocidos
Dom, dominio
Ad Cl, Adenilato ciclasa
PLC, Fosfolipasa C
Ser/Thre, serina/treonina
Multispan, protenas que atraviesan varias veces la MP
Act, actina
B/W, oscuridad/luz blanca
Subn, subunidades
Rhodo, rhodopsina
RE, retculo endplsmico
PKG, proteinquinasa G
Act-Mio, actina-miosina
Ext, dominio exterior
GF, factor de crecimiento
LdA, labio de activacin
TF,factor de trsnacripcin Fate, destino