ISOLAT II
PCR dan Gel Kit
Pedoman produk
Halaman 2
Produk manual www.bioline.com/isolate
2
halaman 3
PCR dan Gel Kit
3
ISOLAT II PCR dan Gel Kit
ISOLAT II PCR dan Gel Kit
1
isi kit
04
2
Deskripsi
04
3
Penyimpanan
04
4
Informasi keselamatan
04
5
Spesifikasi Produk
05
6
Peralatan dan reagen yang harus diberikan oleh pengguna
07
7
Catatan penting
07
7.1 Penghapusan fragmen DNA kecil dan primerdimer
07
Indikator 7.2 pH
07
7.3 Faktor-faktor yang mempengaruhi pemulihan DNA
08
7.4 Salt carry-over
08
7,5 persiapan Buffer dan parameter
08
8
protokol
09
8.1 PCR bersih-bersih
09
8.2 ekstraksi DNA dari gel agarose
10
8.3 ekstraksi DNA dari gel poliakrilamida
10
9
Panduan mengatasi masalah
11
Informasi Umum
A. Dukungan teknis
14
B. informasi Pengurutan
14
Produk C. Associated
14
Jaminan produk D. dan disclaimer
14
halaman 4
Produk manual www.bioline.com/isolate
4
1. ISI KIT
Komponen
10 Preps
50 Preps
250 Preps
ISOLAT II PCR dan Gel Kolom
(kuning)
10
50
250
Koleksi Tabung (2ml)
10
50
250
Binding Buffer CB
10ml
2 x 25ml
2 x 120ml
Wash Buffer CW (konsentrat)
6ml
20ml
2 x 50ml
Elusi Buffer C
5ml
15ml
50ml
Pedoman produk
1
1
1
Bench Protocol Lembar
1
1
1
Sebelum digunakan, menambah volume ditunjukkan dari 96-100% etanol dan menandai mencuci label botol penyangga.
2. PENJELASAN
The ISOLAT II PCR dan Gel Kit adalah metode sederhana, handal dan cepat untuk isolasi
fragmen DNA berkualitas tinggi dari reaksi enzimatik, seperti PCR, serta dari agarosa
gel. Menggunakan buffer dan koleksi tabung mengikat untuk silika-membran berbasis mengikat
DNA
fragmen, di hadapan garam chaotropic. Kontaminan dihapus dengan mencuci sederhana
langkah dan DNA murni dielusi dalam kondisi rendah garam. DNA terisolasi cocok untuk
digunakan
dengan semua aplikasi biologi molekuler hilir.
Silakan baca panduan ini dengan seksama untuk membiasakan diri dengan ISOLAT II PCR dan
Gel
protokol sebelum memulai (juga tersedia di www.bioline.com). Pengguna yang lebih
berpengalaman bisa
mengacu pada protokol bangku-top untuk referensi cepat selama prosedur.
3. STORAGE
Semua komponen kit harus disimpan pada suhu kamar (18-25 C) dan stabil hingga
1 tahun.
INFORMASI 4. SAFETY
Ketika bekerja dengan bahan kimia, selalu memakai jas lab yang cocok, sarung tangan dan
kacamata pelindung.
Binding Buffer CB mengandung garam chaotropic.
Untuk informasi selengkapnya, silahkan berkonsultasi lembar data keamanan bahan (MSDS)
yang tersedia di
website kami di www.bioline.com.
halaman 5
PCR dan Gel Kit
5
5. SPESIFIKASI PRODUK
The ISOLAT II PCR dan Gel Kit dirancang khusus untuk isolasi yang cepat dan efisien
DNA dari yang sangat murni dari reaksi enzimatik, serta TAE atau TBE gel agarosa. Itu
kit menawarkan kapasitas pengikatan DNA yang sangat tinggi hingga 25g dan memastikan
penghapusan lengkap
kontaminan seperti nukleotida, primer, enzim, minyak mineral, PCR aditif (misalnya garam,
betaine, deterjen DMSO), yang umum digunakan (Tween 20 atau Triton X-100), pewarna
(misalnya ethidium
bromida, crystal violet) dan label terikat atau tag.
ISOLAT II PCR DAN GEL SPESIFIKASI KIT
kapasitas pengikatan
25g
materi sampel
Hingga 200l produk PCR atau 200mg gel
pemulihan yang optimal
<15g
100-500bp
30l
Volume elusi
15-30l
panjang fragmen
50bp ke 20kb
PCR primer dari reaksi dieliminasi sementara fragmen DNA kecil masih terikat dan
dimurnikan dengan recovery yang tinggi. Cut-off untuk fragmen DNA kecil dapat bergeser dari
<50bp
untuk beberapa ratus pasang basa dengan mengencerkan Binding Buffer CB untuk menghapus
primer-dimer dari
produk sasaran PCR.
Sebuah indikator pH kuning Binding Buffer CB memastikan kondisi mengikat optimal dan
membuatnya
lebih mudah untuk mengidentifikasi agarosa larut selama ekstraksi DNA gel.
Waktu persiapan 10 menit untuk 6 pemurnian PCR, atau 20 menit untuk 6 ekstraksi gel.
DNA dimurnikan cocok untuk aplikasi seperti hibridisasi, sequencing, PCR,
pembatasan, pencernaan, ligasi, in vitro transkripsi, pelabelan atau berbagai jenis enzimatik
reaksi.
halaman 6
Produk manual www.bioline.com/isolate
6
PCR dan Gel Cleandup
PCR bersih-bersih
Tambahkan 200l Binding Buffer
CB per 100l dari PCR
produk
Campuran
ekstraksi gel
Fragmen Cukai DNA
elusi DNA
Tambahkan 15-30l Elusi Buffer C
nd
st
nd
halaman 7
PCR dan Gel Kit
7
6. PERALATAN DAN REAGENTS UNTUK DISEDIAKAN OLEH PENGGUNA
Ketika bekerja dengan bahan kimia, selalu memakai jas lab yang cocok, kacamata pelindung dan
sarung tangan sekali pakai.
96-100% etanol
Tabung microcentrifuge (1.5ml)
Steril kiat DNase bebas
pipet
Vortex mixer
Difusi penyangga (500mm amonium asetat, pH 8,0, 0,1% SDS, 1mM EDTA, 10mm
magnesium asetat) jika mengekstrak DNA dari gel poliakrilamida
Molekuler etanol biologi kelas direkomendasikan. Jangan menggunakan alkohol didenaturasi yang berisi
aditif yang tidak diinginkan seperti metanol dan aseton.
7. CATATAN PENTING
7.1 PENYISIHAN KECIL fragmen DNA DAN PRIMERdDIMERS
Penghapusan DNA beruntai ganda> 50bp dapat dicapai dengan mengencerkan suatu aliquot dari
Binding
Buffer CB dengan air steril dalam rasio yang tepat dan kemudian melanjutkan dengan standar
hasil.
Ketika penggalian slice gel, paparan sinar UV harus diminimalkan dan hanya sampai 200mg
gel per 400l dari Binding Buffer CB digunakan. Hampir jumlah yang tidak terbatas dari gel
dapat Namun,
dimuat tanpa menyumbat kolom, dengan meningkatkan Binding Buffer CB proporsional dan
menggunakan beberapa langkah pembebanan.
Jika konsentrasi DNA yang lebih tinggi diperlukan, mengelusi dalam waktu kurang dari 30l
(meskipun konsentrasi
bisa lebih dari dua kali lipat, jumlah pemulihan DNA akan dikurangi secara signifikan untuk
volume kurang
dari 15l).
7.4 SALT CARRYdOVER
Garam carry-over ke eluat selalu terjadi dengan garam chaotropic. Meskipun ini hanya dapat
diminimalkan dengan mencuci luas, ini tidak perlu, karena konsentrasi akhir
garam chaotropic di eluat terlalu kecil untuk memiliki efek negatif.
7.5 PERSIAPAN BUFFER DAN PARAMETER
Mempersiapkan Wash Buffer CW
Tambahkan 96-100% ethanol (tidak disertakan) ke Wash Buffer CW Konsentrat: 24ml untuk 10
persiapan
kit, 80ml untuk kit 50 persiapan dan 200ml x 2 untuk kit 250 persiapan.
elusi penyangga
Kami sangat dianjurkan DNA eluting dengan Elusi Buffer C (pH 8,5), yang disediakan dengan
halaman 9
PCR dan Gel Kit
9
kit. Buffer TE standar juga dapat digunakan, namun EDTA dalam buffer dapat menyebabkan
masalah dalam reaksi enzimatik berikutnya. Jangan menggunakan air deionisasi karena pH-nya
biasanya terlalu asam, bukan encer Elusi Buffer C dengan air suling dan pastikan pH
masih> 7.0. Unbuffered elusi penyangga sebaiknya tidak digunakan.
Elusi setelah ekstraksi gel adalah 10-20% kurang efisien daripada elusi produk PCR dimurnikan.
Selain itu, elusi beberapa kb fragmen DNA panjang adalah 10-30% kurang efisien dibandingkan
elusi
dari 500bp fragmen. Untuk meningkatkan pemulihan DNA setelah ekstraksi gel, atau untuk
DNA besar
fragmen, modifikasi berikut dapat diterapkan untuk prosedur elusi standar:
Panas Elusi Buffer C sampai 70 C dan menetaskan pada kolom pada 70 C selama 5 menit.
Terapkan Elusi Buffer C untuk kolom dan centrifuge di 30-50 x g selama 1 menit dan kemudian
11.000 xg selama 1 menit.
Lakukan hingga 3 langkah elusi dengan 20 atau 30l segar Elusi Buffer C.
8. PROTOKOL
8.1 PCR CLEANdUP
Cocok untuk PCR bersih-bersih, konsentrasi DNA dan penghapusan garam, primer, enzim,
Catatan: Untuk menghilangkan fragmen kecil seperti primer-dimer pengenceran Binding Buffer
CB bisa
digunakan bukan 100% Binding Buffer CB. Lihat bagian 7.1.
Sejumlah kecil diendapkan SDS tidak mempengaruhi pemurnian dan dapat diabaikan.
5
DNA bind
Lanjutkan dengan langkah 2 dari protokol bersih-bersih PCR (lihat bagian 8.1).
halaman 12
Produk manual www.bioline.com/isolate
12
9. MASALAH GUIDE
Tidak lengkap TERLARUT GEL SLICE
KEMUNGKINAN PENYEBABNYA
SOLUSI YANG DISARANKAN
Waktu tidak cukup dan suhu
Memeriksa suhu inkubasi dan volume Binding Buffer
CB. Meningkatkan waktu inkubasi, pusaran setiap 2 menit dan memeriksa
integritas slice gel. Irisan gel yang sangat besar dapat dihancurkan
sebelum penambahan Binding Buffer CB untuk mempersingkat waktu leleh.
PENAMPILAN DARI BAND TAMBAHAN PADA gel agarosa SETELAH GEL EKSTRAKSI
KEMUNGKINAN PENYEBABNYA
SOLUSI YANG DISARANKAN
DNA terdenaturasi selama
pemurnian
Jika air digunakan untuk elusi atau agarosa dengan konten ion rendah
digunakan untuk elektroforesis gel agarosa, pembentukan
denaturasi DNA (single-stranded) mungkin dipromosikan. untuk kembali
anil DNA, cukup menambahkan semua komponen berikutnya
Reaksi enzimatik menghilangkan enzim. Inkubasi pada 95 C selama 2
min dan biarkan campuran dingin perlahan-lahan ke suhu kamar. Tambahkan
enzim dan melanjutkan aplikasi hilir.
Menggunakan penyangga berjalan segar dan dijalankan pada tegangan rendah untuk menurunkan
suhu. Suhu tinggi dapat mempromosikan denaturasi DNA
selama elektroforesis.
LOW YIELD DNA
KEMUNGKINAN PENYEBABNYA
SOLUSI YANG DISARANKAN
Slice gel tidak lengkap terlarut
Meningkatkan waktu atau menambah dua volume lain Binding Buffer CB
dan Vortex tabung setiap 2 menit selama inkubasi pada 50 C.
Silika kurang kering
selaput
Centrifuge 5 menit pada 11.000 rpm atau menetaskan kolom selama 2-5 menit pada
70 C sebelum elusi untuk menghapus etanol. Hapus
berputar kolom hati-hati dari Koleksi Tube dan menghindari kontak
TM
TM
Bioline menjamin bahwa produknya akan sesuai dengan standar dinyatakan dalam produknya
lembar spesifikasi yang berlaku pada saat pengiriman. Bioline akan menggantikan gratis setiap
produk yang tidak sesuai dengan spesifikasi. Garansi ini membatasi kewajiban Bioline ini
hanya untuk penggantian produk.
halaman 15
www.bioline.com
united Kingdom
Reagen Bioline Ltd
16 The Edge Pusat Bisnis
Humber Jalan
London NW2 6EW
Telp: +44 (0) 20 8830 5300
Fax: +44 (0) 20 8452 2822
email: info.uk@bioline.com
Jerman
Bioline GmbH
Im Biotechnologiepark, TGZ 2
D-14943 Luckenwalde
Telp: +49 (0) 3371 68 12 29
Fax: +49 (0) 3371 68 12 44
email: info.de@bioline.com
Australia
Bioline (Aust) Pty Ltd
PO Box 122
Alexandria NSW 1435
Telp: +61 (0) 2 9209 4180
Fax: +61 (0) 2 9209 4763
email: info.aust@bioline.com
Amerika Serikat
Bioline USA Inc.
305 Konstitusi drive
Taunton MA 02780
Telp: +1 508 880 8990
Fax: +1 508 880 8993
Agar Bebas Pulsa: +1 888 257 5155
email: info.us@bioline.com
PM0812V1.0