Immeuble Le Dufy

1, Place de Turenne
94417 SAINT-MAURICE
Tel : 01.49.76.52.52
Fax : 01.49.76.52.42

Stage effectu
du 12 avril au 28 mai 2010 sous
la responsabilit de
Mme Florence Poty

ANALYSE
MICROBIOLOGIQUE
DE LEAU

Jai effectu ce stage au Centre dAnalyses Environnementales situ Saint-Maurice aussi appel Laboratoire
central. Sa mission est danalyser des chantillons deau provenant de divers sites de prlvement.
Mon rle tait deffectuer diffrentes analyses sur des chantillons deau provenant dusine de traitement et de
canalisation domestique. Ces analyses ont pour but de vrifier la propret microbiologique de leau c'est--dire si
celle-ci ne contient pas de micro-organismes pathognes pour lHomme, conformment aux rglementations de
la sant publique.
I did this internship in Centre dAnalyses Environnementales located in Saint-Maurice (94) also called Laboratoire
central. Its mission is to analyze water samples taken from different sites. I had to analyse water samples
from pipeline servant and plant treatment. These tests aim to control the microbiological cleanliness of the
water, in order to determine if it is dangerous to humans, conformly to public health regulations.

Anne scolaire 2009/2010

L2 chimie
Marie Mligne

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Analyse microbiologique de leau

2010

REMERCIEMENTS
Je tiens remercier :
-

Mme Florence POTY, responsable du service technique de microbiologie et de chimie et directrice

adjointe du laboratoire, pour mavoir accueillie au sein de son service dans le cadre de mon stage.

Mme Stphanie HOUDARD, responsable de lunit technique de microbiologie ainsi que Mme Sophie
MOREAU, responsable de lunit technique lgionelle pour leur disponibilit et pour mavoir encadr
tout au long de mon stage.

Mme Aurore FAURE et Melle Marie-ve BERCHERY, pour mavoir forme en bactriologie et en
DAPI/CTC, ainsi que pour leur aide quotidienne pendant mon stage.

Toute lquipe de production du laboratoire danalyse pour leur accueil, leurs conseils, leur
disponibilit et leur patience tout au long de mon stage : Isabelle BONANNI, Florian DARCO, Sandra
DA SILVA, Virginie DEL, Sophie DELGADO, Fabien GADY, Stphanie HOUVET, Sbastien JEAN, Antoine
JICQUEL, Benjamin LALOE, Emilie NATALI, Camille NEGRE.

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SOMMAIRE
Remerciements ....................................................................................................................................................... 2
Sommaire ................................................................................................................................................................ 3
Glossaire .................................................................................................................................................................. 4
Introduction ............................................................................................................................................................ 5
1)

Prsentation du Centre dAnalyses Environnementales (CAE) ............................................................... 5

2)

Activits et organisation du laboratoire de Saint Maurice .................................................................... 6

3)

Le service microbiologie ........................................................................................................................ 6

Matriel et mthode du service de bactriologie ................................................................................................... 7

1)

Matriel utilis dans le laboratoire de microbiologie ............................................................................ 7

A.

Les consommables et petits quipements ............................................................................................ 7

B.

Appareillage ........................................................................................................................................... 7

2)

Mthode danalyse des divers chantillons ........................................................................................... 7

A.

Recherche des Entrocoques et des bactries coliformes (Escherichia coli) par filtration ................... 8

B.

Recherches des micro-organismes revivifiables .................................................................................... 8

C. Recherche et dnombrement des spores de micro-organismes anarobies sulfito-rducteurs par

filtration sur membrane ................................................................................................................................. 8
Lectures et Repiquages ......................................................................................................................................... 10
1)

Dnombrement des Entrocoques ...................................................................................................... 10

2)

Dnombrement des coliformes et des Escherichia coli ....................................................................... 10

3)

Dnombrement des micro-organismes revivifiable ............................................................................. 10

4)

Dnombrement des spores de micro-organismes anarobies sulfito-rducteurs ............................... 11

Conclusion ............................................................................................................................................................. 12
Bibliographie ......................................................................................................................................................... 13
1)

Sites internet........................................................................................................................................ 13

2)

Notices techniques .............................................................................................................................. 13

Annexe 1................................................................................................................................................................ 14
Annexe 2................................................................................................................................................................ 17
Annexe 3 : Composition des divers milieux de culture ......................................................................................... 20
Annexe 4 : Composition des divers milieux de repiquage ..................................................................................... 21
Annexe 5 : Schma simplifi des relations entre diffrents acteurs du domaine de leau dalimentation ............ 22

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GLOSSAIRE
Anarobiose : dsigne la capacit d'un organisme ou micro-organisme se dvelopper en labsence oxygne
AFNOR : Association Franaise de NORmalisation
AFSSA : Agence Franaise de Scurit Sanitaire des Aliments
BEA : Glose Esculine Azide
CAE : Centre dAnalyses Environnementales
Catalase (positif ou ngatif) : enzyme catalysant la dismutation de leau oxygne (peroxyde dhydrogne)
CEN : Commissions Europen de normalisation
COFRAC : COmit FRanais dAccrditation
CSHPF : Conseil Suprieur d'Hygine Publique de France
DASS : Direction des Affaires Sanitaires et Sociales
GIE : Groupement dIntrt Economique
Gram (positif ou ngatif) : les bactries Gram positif sont mises en vidence par une technique de coloration
appele coloration de Gram, elles apparaissent alors mauves au microscope. La technique de coloration repose
sur les caractristiques membranaires et de paroi de la bactrie
ISO : International Organization for Standardization
Oxydase (positif ou ngatif) : enzyme catalysant la raction d'oxydo-rduction impliquant une molcule de
dioxygne, qui est rduit en eau H2O ou en peroxyde d'hydrogne.
PCA : Plate Count Agar, milieu ordinaire, sans inhibiteurs, permettant la croissance de l'ensemble des bactries
PCR : Raction en chane par polymrase (de l'anglais polymerase chain reaction), mthode de biologie
molculaire d'amplification d'ADN in vitro
TTC : Chlorure de Triphnyl Ttrazolium, milieu de culture slectif utilis pour le dnombrement des bactries
coliformes
TSC : Tryptose Sulfite
Slanetz (glose de) : milieu de culture slectif utilis pour le dnombrement des Entrocoques

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INTRODUCTION
Leau est essentielle la vie et au bien-tre. La quantit moyenne deau contenue dans un organisme adulte est
de 65 %. Or le corps humain ne peut la stocker : lhomme doit donc chaque jour subvenir ses besoins en eau.
Cest pourquoi elle a besoin dtre protge, traite et conomise. De plus en raison de son caractre vital,
leau consomme doit tre de bonne qualit sanitaire afin dviter la survenue de certaines pathologies
hydrique.
Actuellement, les principaux risques sanitaires susceptibles dtre engendrs par lingestion de leau du robinet
sont de deux types :
- Le risque microbiologique
- Le risque chimique
Des laboratoires danalyses tels que les Centres dAnalyses Environnementales (CAE) de Veolia Environnement
sont l pour procder un contrle complet de leau afin dassurer une bonne qualit et une protection de
lenvironnement. Lors de mon stage, je me suis intresse ce premier type de risque.
La recherche dans leau de tous les micro-organismes potentiellement dangereux savre irraliste, tant pour
des raisons techniques quconomiques. Ainsi, actuellement, la stratgie de contrle repose sur la recherche
de bactries dites germes tmoins de contamination fcale , faciles dtecter, non directement
pathognes, mais dont la prsence laisse supposer lexistence de germes autrement dangereux. Le contrle de
la conformit de la qualit microbiologique de leau porte sur la vrification de labsence dEscherichia coli et
dentrocoques dans un chantillon de 100 millilitres deau prlev dans le cadre du contrle sanitaire courant.
Par ailleurs, la recherche de spores de bactries anarobies sulfito-rductrices telles que les Clostridium, dans
le cadre du contrle sanitaire renseigne sur lefficacit des systmes de filtration.
Les efforts mens par lensemble des acteurs (collectivits, responsables de la production, financeurs,
administrations, etc.) ont permis damliorer fortement la qualit microbiologique des eaux au cours des
dernires annes. Ainsi, la proportion de population ayant t expose des eaux non conformes vis--vis de la
qualit microbiologique a diminu de moitir depuis 2000 (4,4 % contre 8,8 % en 2006).

1) Prsentation du Centre dAnalyses Environnementales (CAE)

Le Centre dAnalyse Environnementales a t cr afin de regrouper les diffrentes activits analytiques du
groupe Veolia Environnement, leader mondial des services de lenvironnement. Il est compos dun rseau de
sept laboratoires rpartis en France. Les laboratoires Saint-Maurice, Arras, Caen, Florange, Lyon,
Rennes et Toulouse. Il emploie environ 200 collaborateurs et traite environ 200 000 chantillons par an. Le
site de Saint-Maurice (94) se compose du Laboratoire Central, charg des prestations analytiques de routine,
dune quipe support (informatique, logistique, achat et administration), ainsi que de deux quipes de
recherche, principalement responsables du perfectionnement des mthodes analytiques existantes et du
dveloppement de techniques innovantes, dans les domaines de la microbiologie et de la chimie.

Les quipes du CAE ont pour mission dvaluer les besoins, les prlvements et transports des chantillons, de
lanalyse, de la validation et de la restitution des rsultats. Le domaine dexpertise se situe au-del des eaux
propres et rsiduaires, puisquil recouvre lensemble des domaines de lenvironnement : l'air, les dchets et
combustibles et les matriaux.
De plus, le laboratoire central doit sassurer de la conformit des oprations et propose un accompagnement et
des services complmentaires. Ces prestations font du CAE un ple dexpertise reconnu de lanalyse
environnementale. Membre du GIE (Groupement dIntrt conomique), il est accrdit par le COFRAC (COmit

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FRanais dACcrditation) dans les domaines de la mesure physico-chimique et de la microbiologie des eaux. Il
est galement membre des commissions de normalisation en France (AFNOR), en Europe (CEN) et au niveau
international (ISO).

2) Activits et organisation du laboratoire de Saint Maurice

Le laboratoire a pour mission de raliser des analyses microbiologiques et physico-chimiques pour le contrle
de l'environnement. Les analyses effectues se situent dans le domaine plus particulier de la qualit de l'eau,
des boues et des dchets.
Il existe quatre types d'chantillons diffrents reus par le CAE qui proviennent de stations de distribution deau
potable, de rivires, de forage, ou encore de particulier :
- Eaux propres : eaux destines la consommation
- Eaux sales : rejets liquides d'usines, eaux non traites
- Dchets : rsidus solides, dchets mnagers et industriels
- Boues
Le CAE de Saint Maurice comporte trois grands services :
- Chimie minrale (Mtaux lourds, Sels minraux, Phnols, Dtergents, Hydrocarbures, dosage dions)
- Microbiologie (test de contamination, virologie, test de toxicit, analyse algologique, pifluorescence,
saveurs, parasitologie)
- Chimie organique (Micro-polluant, composs phnoliques, solvants, rsidus de pesticides)

3) Le service microbiologie
Le laboratoire danalyses microbiologiques traite chaque anne 80 000 chantillons. Selon la nature des
chantillons et la demande faite par les clients, ils y subiront des analyses diffrentes. Ce service comprend une
Unit Technique Microbiologie (bactriologie, parasitologie, algologie, virologie, bactriophage) et une
Unit Legionelle (mthode par culture et par PCR). Toutes ces analyses constituent un moyen de contrler et
de garantir la qualit de leau pour le consommateur.
Au cours de mon stage, j'ai donc pu voluer dans le service de microbiologie dont voici l'organigramme :

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MATRIEL ET MTHODE DU SERVICE DE

BACTRIOLOGIE
1) Matriel utilis dans le laboratoire de microbiologie
Outre le matriel courant de laboratoire, la manipulation en laboratoire de microbiologie doit imprativement
se faire de faon strile pour viter toutes sources de contamination extrieures des chantillons. Pour se faire
on utilise donc le matriel suivant :

A. Consommables et petits quipements

Des rampes de filtration et fritts striliss intervalles rguliers (plusieurs fois par jour au bec benzen et une
fois par semaine lautoclave) sur lesquelles on ajoute des membranes filtrantes striles de porosit 0,45 m,
et des entonnoirs striles en plastique. Des pinces permettant de saisir les membranes sans les altrer sont,
elles aussi, rgulirement strilises la flamme (Cf Annexe 1, figure 1). Lors des diverses manipulations, on
peut tre amen se servir de pipettes pasteur striles, de Tubes essais PYREX gradus de 100 ml et 20 ml, de
Bouchons en caoutchouc silicon, mais aussi de botes de Petri en plastique strile de 90 mm et de 55 mm de
diamtre, ainsi que des pipettes gradues de capacit 10 ml, 5 ml et 2 mL striles et coulement total.

B. Appareillage
Dans la salle, toutes les manipulations se font soit sous un plafond laminaire, une hotte flux laminaire ou
encore proche dune flamme pour assurer la strilit de lenvironnement de lanalyse. (Cf Annexe 1, figure 2)
Sont aussi prsents plusieurs bains marie. Un premier bain-marie rgl sur environ 100C pour fondre les
milieux pendant une heure maximum, et deux autres rgls (45 1)C et 50C pour les maintenir en
surfusion. Un dernier bain-marie, rgl une temprature de (75 5)C, pour la slection des spores de
bactries anarobies sulfito-rductrices de type Clostridium.
Pour permettre toutes les flores de se dvelopper 4 types dtuves thermostates sont prsents. Des tuves
rgles (36 2) C, dautres rgles (22 2) C, certaines (44 2) C, et enfin (37 2) C (Cf Annexe 1,
figure 3).

2) Mthode danalyse des divers chantillons

Pour mener bien ces recherches bactriennes, le service effectue des analyses sur des chantillons d'eaux
propres qui arrivent au cours de la journe dans des bouteilles en plastiques striles de 500 mL. Le rcipient
utilis pour le prlvement contient du thiosulfate de sodium raison de 10 mg afin de neutraliser un ventuel
oxydant et le chlore. (Cf Annexe 1, figure 4)
Les chantillons sont analyss le jour mme ou au plus tard dans les 24 heures suivant le prlvement pour
limiter lexpansion de la flore bactrienne.
Les bactries sont, les plus petits organismes unicellulaires connus, doues de mtabolisme et capables de
crotre ainsi que de se diviser aux dpens de substances nutritives. Le contrle bactriologique des eaux uses
et distribues consistent en la recherche des germes indicateurs et germes totaux :
- Bactries coliformes et Escherichia coli par filtration sur membrane selon la norme NF EN ISO 9308-1
- Entrocoques intestinaux par filtration sur membrane selon la norme NF EN ISO 7899-2
- Micro-organismes revivifiables 36C et 22C par inclusion selon la norme NF EN ISO 6222
- Spores de bactries anarobies sulfito-rductrices par filtration sur membrane selon la norme NF EN
ISO 26471-2

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A. Recherche des Entrocoques et des bactries coliformes (Escherichia

coli) par filtration
a. Les entrocoques
Les entrocoques sont des bactries Gram positif et catalase ngative qui entrane notamment des
infections urinaires.
Elles se multiplient en arobie. Ainsi, la recherche des celles-ci dans un chantillon deau passe par les tapes
suivantes :
1. Filtration de 100 mL de lchantillon deau sur membrane au travers dune membrane filtrante strile
de porosit 0.45 m.
2. Dpt de la membrane sur milieu glos slectif contenant de lazoture de sodium destin inhiber la
croissance des bactries Gram ngatif (Slanetz). (Cf Annexe 1, figure 5)
3. Incubation pendant (444) heures (362) C.

b. Les bactries coliformes

Les coliformes sont des bactries Gram ngatif et oxydase ngative. Elles peuvent former des colonies en
arobiose sur un milieu de culture lactos slectif. La plus connue dentre elles est lEscherichia coli, qui peut
entraner gastro-entrites, infections urinaires, mningites, ou septicmies.
La recherche de ces bactries dans un chantillon deau reprend le mme mode opratoire que pour les
entrocoques. lexception du milieu slectif utilis qui est le T.T.C (Chlorure de Triphnyl Ttrazolium). De plus,
une seconde bote avec une membrane supplmentaire est incube (44 1)C pendant (44 4) heures
permettant la recherche des coliformes thermotolrants mais aussi vitant le problme de la flore interfrente.
(Cf Annexe 1, figure 6)
Une autre mthode existe pour dterminer la prsence de bactrie coliforme, toutefois celle-ci reste
qualitative. Cette dtection se fait grce des kits, appels Colilert (dtection des coliformes totaux). Ils offrent
la possibilit de suivre la qualit de leau en cours de traitement et permettent dagir plus rapidement, car le
temps dincubation nest que de (24 1) heures. On met en vidence la prsence de coliformes par
lapparition dune couleur jaune/orange. En prsence de cette couleur, une lecture visuelle sous UV 365 nm
est ralise : une fluorescence bleue mettra en vidence la prsence dE. coli. (Cf Annexe 1, figure 7)

B. Recherches des micro-organismes revivifiables

Le principe de la recherche et du dnombrement des micro-organismes revivifiables dans un chantillon deau,
repose sur les tapes suivantes :
1. Ensemencement de 1 mL dchantillon deau en bote de ptri de 90mm de diamtre, le milieu de
culture utilis est le Plate Count Agar (PCA).
2. Incubation des botes (362) C pendant (444) heures et (222) C pendant (684) heures.
Le milieu PCA tant trs peu slectif, on cherche ici dnombrer le nombre de micro-organismes vivants
prsent dans lchantillon. (Cf Annexe 1, figure 8)

C. Recherche des spores de micro-organismes anarobies sulfitorducteurs par filtration sur membrane
Ces micro-organismes sont capables de sporuler, ces spores rsistent un chauffage de 15 minutes (755) C.
Ils sont capables de se dvelopper (371) C en (444) heures en anarobiose, sur un milieu glos contenant
des sels de fer.

Le principe de la recherche et du dnombrement de ces micro-organismes est proche des autres modes

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opratoires.
1. On slectionne les spores bactriennes dans lchantillon par un chauffage au bain-marie (755) C
pendant 15 minutes, pour que les cellules vgtatives soient dtruites.
2. Filtration de ces 100 mL dchantillon au travers dune membrane filtrante strile dont les pores
prsentent une dimension de 0.45 m pour que les spores de bactries soient retenues lintrieur de
la membrane filtrante.
3. Dpt de la membrane lenvers sur un milieu de culture spcialement slectif (glose Tryptose
sulfite). (Cf Annexe 1, figure 9)
4. Lanarobiose est cre par une seconde couche de ce milieu sur la membrane.
5. Incubation des botes (371) C pendant (444) heures.

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LECTURES ET REPIQUAGES
1) Dnombrement des Entrocoques
Aprs 48 heures dincubation, on dnombre toutes les colonies prsentant une couleur rouge caractristique et
pouvant tre limite leur centre ou leur priphrie (Cf Annexe 2, figure 1).
Toute membrane prsentant ce type de colonie suspecte est transfre sur un milieu de confirmation qui est
une glose bilie lesculine (BEA). Ce milieu permet lisolation slectif des Entrocoques, car ils tolrent
jusqu 40 % de bile contrairement de nombreux autres germes et lazoture de sodium limine toutes les
bactries Gram ngatifs.
Aprs deux heures dans une tuve (44 1)C, les colonies confirmes comme entrocoques prsentent un
halo noir traduisant lhydrolyse de lesculine en escultine qui se lie avec le fer (Cf Annexe 2, figure 2).
La rglementation franaise actuelle impose un seuil limite, stipulant quaucun entrocoque ne soit prsent
dans un chantillon de 100 mL.

2) Dnombrement des coliformes et des Escherichia coli

La lecture des bactries coliformes peut se faire soit aprs 24 heures soient 48 heures dincubation. Ces
bactries sont identifiables grce leur couleur jaune-orange entoure dun halo jaune sur le milieu. Ce
virement de couleur est d au virage de lindicateur color, en effet, les coliformes transforment le lactose
prsent en acide lactique. (Cf Annexe 2, figure 3)
Les colonies ainsi suspectes sont repiques par talement sur du PCA, si elles se sont multiplies aprs
24heures (362) C , alors la proprit oxydase des coliformes sera vrifie. (Cf Annexe 2, figure 4)
En parallle un deuxime test est effectu avec un bouillon tryptophane. Aprs incubation pendant 24 heures
(441) C, si de lindole sest form, la prsence dun E. coli est confirm. (Cf Annexe 2, figure 5)
La rglementation franaise impose que leau distribue ne contienne pas dEscherichia coli dans 100 ml deau.

3) Dnombrement des micro-organismes revivifiable

Ce dnombrement consiste au comptage de micro-organisme, par millilitre dchantillon, partir du nombre
de colonies obtenues dans la bote(s) de Petri, avec un postulat simple ; chaque colonie a t engendre par un
micro-organisme. (Cf Annexe 2, figure 6)
Lors du dnombrement, toutes les colonies sont comptes, quelle que soit leur taille. Le rsultat final est
exprim en UFC (Unit Formant Colonie) par millilitre.
La rglementation franaise ne propose pas de seuil limite pour leau distribue. Une eau contenant plus de 300
UFC par millilitre est considre comme non conforme par le laboratoire.

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4) Dnombrement des spores de micro-organismes anarobies

sulfito-rducteurs
2-

Durant lincubation, il y a rduction du sulfite (SO3 ) de sodium sulfure dhydrogne (H2S) et donc production
de sulfure de fer se manifestant par un halo noir autour des colonies. Seul ce type de colonie est compt. (Cf
Annexe 2, figure 7)
Si le nombre de colonies est compris entre 1 et 10 comprise, on repiquera toutes les colonies. Tandis que si lon
1/2
en observe un nombre X suprieur 10, on repiquera X colonies.
Lors de ce repiquage, on recherche les Clostridium perfringens qui peuvent entraner des gangrnes.
Deux talements sont effectus, un premier sur glose au sang qui permettra dapprcier lhmolyse de ces
bactries. Et un second, sur TTC enrichi en d-cyclosrine, un puissant antibiotique ne laissant pousser que les
clostridium perfringens.
Aprs incubation (362)C pendant 24 heures, trois cas peuvent alors se prsenter :
1. Culture sur la glose au sang : les bactries appartiennent au genre Clostridium . (Cf Annexe 2, figure 8)
2. Aucune culture : les bactries nappartiennent pas au genre Clostridium.
3. Culture sur les deux botes : les bactries sont de type Clostridium Perfringens.
Si le rsultat est positif sur les deux botes et uniquement dans ce cas-l, on procde un test
complmentaire dit test RP . Jai prfr ne pas faire figurer dans ce rapport le mode opratoire
pour ne pas risquer de dcrire un protocole erron ou incomplet, car il est encore en cours de
rdaction.

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CONCLUSION
Tout au long de mon stage, jai pu me familiariser avec le confronter au travail de laboratoire de microbiologie.
En participant une des tapes dune dmarche de contrle qualit contribuant la prservation dune denre
alimentaire prcieuse, leau.
Durant ces sept semaines de stage, jai acquis une exprience professionnelle concrte et largie mes
connaissances pratiques et thoriques dans le domaine de la microbiologie. Et notamment, le respect des rgles
dhygines et de scurit qui sont indispensables pour le maintien de la strilit dans le laboratoire.
Mon intgration et le travail en quipe se sont faits naturellement grce la disponibilit du personnel
technique et la bonne ambiance qui rgne au sein du laboratoire. La confiance que les techniciens mont
accorde ds les premiers jours ma permis de dvelopper mon sens des responsabilits ainsi que mon esprit
dinitiative.
Cette exprience professionnelle m'a donn envie d'approfondir mes connaissances thoriques, de
perfectionner mes manipulations pratiques, mais aussi de connatre dautres tapes du contrle qualit. Ce
stage restera alors comme un excellent aperu de l'organisation et de la rigueur du travail dans un laboratoire.

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BIBLIOGRAPHIE
1) Sites internet
Dpartement des Administrations Sanitaires et Sociales de l'tat
Leau potable en France : http://ile-de-france.sante.gouv.fr/sante-publique/environnement-et-sante/eaupotable
Aspect rglementaire : http://www.sante-sports.gouv.fr/la-qualite-de-l-eau-potable-en-france-aspectssanitaires-et-reglementaires-septembre-2005.html#doc
Divers milieux de cultures
http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/microbio/milieux.html
Journal officiel du 7 novembre 2003
http://www.car-analyse.com/hydro/a170903.htm
Ministre de lcologie
Directives : http://www.developpement-durable.gouv.fr/Directive-cadre-EAU.html
Veolia Environnement, CAE
http://www.veolia.com/fr/solutions/cae/
Wikipdia
http://fr.wikipedia.org/

2) Notices techniques

S. Moreau, F. Poty, Mode opratoire, dnombrement des coliformes ,

Laruelle, S. Houdart, Mode opratoire, dnombrement des entrocoques

Laruelle, S. Houdart, Mode opratoire, dnombrement des spores de bactries anarobies sulfitorductrices

Laruelle, S. Houdart, Mode opratoire, dnombrement des germes revivifiables

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ANNEXE 1
Figure 1 : Matriels de filtration

Figure 2 : Laboratoire de bactriologie

Figure 3 : Salle des tuves

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Figure 4 : Flaconnage des chantillons

Figure 5 : Etiquetage des boites denterocoques

Figure 6 : Etiquetage des boites de coliformes 44C et 36C

Figure 7 : Rsultats du test Colilert

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Figure 8 : Etiquetage des boites de germes totaux 22C et 36C

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ANNEXE 2
Figure 1 : Dnombrement des entrocoques aprs 48h dincubation

Figure 2 : Repiquage positif dentrocoque sur BEA

Figure 3 : Dnombrement des coliformes aprs 24h dincubation

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Figure 4 : Repiquage positif de coliforme sur PCA

Figure 5 : Identification de E. coli grce au bouillon tryptophane

Figure 6 : Dnombrement des germes totaux

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Figure 7 : Dnombrement des bactries type Clostridium

Figure 8 : Dcoloration de la glose au sang par hmolyse

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ANNEXE 3 : COMPOSITION DES DIVERS MILIEUX DE CULTURE

1) Milieu Slanetz
Constituants
Peptones (20g)
Acide de sodium (0,40g)
Glucose (2,0g)
TTC (0,10g)
Hydrognophosphate de sodium (4,0g)
Agar (10g)
Eau (qsp 1,0L)

Rle
Source dazote et dnergie
Inhibiteur de la croissance des Gram
Source de carbone et dnergie
Indicateur de la croissance bactrienne
Source de minraux
Agent glifiant
Solvant

2) Milieu TTC (Chlorure de Triphnyl Ttrazolium)

Constituants
Peptones (10g)
Extrait de viande (5,0 g)
Extrait de levure (6,0 g)
Lactose (20 g)
Tergitol (710 mg)
TTC (25 mg)
Bleu de Bromothymol (50 mg)
Agar (13 g)

Rles
Source d'azote et d'nergie
Source de vitamines et de facteurs de croissance
Source de vitamines et de facteurs de croissance
Source de carbone et d'nergie
Agent slectif
Inhibiteur des Bactries Gram +
Indicateur de pH
Agent glifiant

3) Milieu PCA
Constituants
Peptones (5,0g)
Extrait de levures (2,5g)
Glucose (1,0g)
Agar (12g)
Eau (qsp 1,0L)

Rles
Source dazote et dnergie
Source de vitamines et facteurs de croissance
Source de carbone et dnergie
Agent glifiant
Solvant

4) Milieu TSC (Tryptone, Sulfite, Cyclosrine)

Constituants
Tryptone (15g)
Extrait autolytique de levure (5g)
Peptone papanique de soja (5g)
Mtabisulfite de sodium (1g)
Citrate de fer ammoniacal (1g)
Agar (15g)
Eau qsp (1L)

Rle
Source dazote et dnergie
Source de vitamines et de facteurs de croissance
Source dazote et dnergie
Source de sulfites
Rvlateur de la rduction des sulfites en sulfures
Agent glifiant
phase liquide

20 | P a g e

Marie Mligne

Analyse microbiologique de leau

2010

ANNEXE 4 : COMPOSITION DES DIVERS MILIEUX DE

REPIQUAGE
1) Milieu BEA
Constituants
Peptones (20g)
Extrait de levures (5,0g)
Bile de buf (10g)
Acide de sodium (0,15g)
Esculine (1,0g)
Citrate de fer III (0,50g)
NaCl (5,0g)
Agar (13g)
Eau (qsp 1,0L)

Rles
Source dazote et dnergie
Source de vitamines et facteurs de croissance
Inhibiteur de croissance des Gram+
Inhibiteur de croissance des GramSource de carbone et dnergie
Rvlateur de production descultine
Source de minraux/maintient de la pression osmotique
Agent glifiant
Solvant

2) Milieu PCA
Constituants
Peptones (5,0g)
Extrait de levures (2,5g)
Glucose (1,0g)
Agar (12g)
Eau (qsp 1,0L)

Rles
Source dazote et denergie
Source de vitamines et facteurs de croissance
Source de carbone et dnergie
Agent glifiant
Solvant

3) Milieu Glose au sang

Constituants
Peptones (20g)
Amidon de mas (1,0g)
Extrait de levure (3,0g)
NaCl (5,0g)
Sang de mouton dfibrin (5%)
Agar (13,5g)
Eau (qsp 1,0L)

Rles
Source dazote et dnergie
Source de carbone et dnergie, dtoxifiant
Source de vitamines et de facteurs de croissance
Source de minraux/maintient de la pession osmotique
Mise en vidence du pouvoir hmolytique
Agent glifiant
Solvant

4) Milieu TTC (Chlorure de Triphnyl Ttrazolium)

Constituants
Peptones (10g)
Extrait de viande (5,0 g)
Extrait de levure (6,0 g)
Lactose (20 g)
Tergitol (710 mg)
TTC (25 mg)
D-cyclosrine (0,40g)
Bleu de Bromothymol (50 mg)
Agar (13 g)

Rles
Source d'azote et d'nergie
Source de vitamines et de facteurs de croissance
Source de vitamines et de facteurs de croissance
Source de carbone et d'nergie
Agent slectif
Inhibiteur des Bactries Gram +
Antiobiotique : Agent slectif
Indicateur de pH
Agent glifiant

21 | P a g e

Marie Mligne

Analyse microbiologique de leau

2010

ANNEXE 5 : SCHMA SIMPLIFI DES RELATIONS ENTRE

DIFFRENTS ACTEURS DU DOMAINE DE LEAU DALIMENTATION

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