Unidad 1

Microbiologa
Se puede definir como la ciencia que estudia los seres vivos muy pequeos, concretamente de
aquellos cuyo tamao se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano
Entre las ramas que estudia la microbiologa tenemos:
Bacteriologa: procariotas. 1 a 20 um
Micologa: Eucariotas: levadura: unicelular, asexual
Moho: filamentosa, asexual o sexual
Dimorficos: ambas morfologias (histoplasma)

Virologia: 18 a 600 nm. ADN o ARN o priones (no tiene ADN)

Necesitan para replicarse cubierta de protenas
Existen 2000 virus, 650 infectan a los humanos o animales

Parasitologia: Eucariotas pueden ser unicelulares o pluricelulares

2 um a 10 mt

El objeto de esta disciplina viene determinado por la metodologa apropiada para poner en
evidencia, y poder estudiar, a los microorganismos. Esta determinado por:
- Microscopio
- Tcnicas de cultivo puro en laboratorio
Los microorganismos estn presentes en todos los hbitats y ecosistemas de la Tierra y sus
actividades presentan una gran incidencia en numerosos mbitos de inters.
Los primeros seres que aparecieron en la Tierra se alimentaban de las sustancias orgnicas que se
producen constantemente en la A: eran quimioorganotrofos anaerobios, pues en ese momento no
exista el aire. La competencia por los nutrientes hizo que muchos de ellos se especializaran e
realizar procesos de fotosntesis o de quimiosntesis y que surgieran las bacterias fotolitotrofas.
Todos las clulas eucariotas heredaron la capacidad de realizar la respiracin celular y algunas la
de hacer la fotosntesis utilizando el agua como dador de electrones. La presencia de O2 origino la
capa de ozono, por ello los seres vivos pudieron abandonar el agua.
Se descubri que todos los organismos vivos se podran dividir en dos tipos celulares bsicos:
procariotas y eucariotas, Todos los animales y plantas son eucariotas, como tambin lo son tres
grupos importantes de microorganismos: algas, hongos y protozoos. Dentro de los procariotas se
encuentran las bacterias y cianobacterias.

Bacterias
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Son relativamente pequeas 0,5m

Su dimetro no sobrepasa 1 m
Son tpicamente unicelulares
Pueden existir en tres formas bsicas: cocos (esfricos), bacilos (bastones) y espirilos
Pueden clasificarse segn la tincin diferencial de Gram en: Gram positivas y Gram
negativas, evidenciando segn la coloracin estructuras de pared bacteriana diferentes
Crecen rpidamente y algunas especies pueden dividirse en 20 minutos en condiciones
ptimas
Su rpido crecimiento y su versatilidad bioqumica hacen de estos microorganismos una de
las elecciones obvias para investigacin gentica y biolgica, as como en el estudio de
procesos bioqumicos.

Clasificacin de las bacterias

Eucariotas:
Poseen un ncleo y multitud de orgnulos
Carece de pared clula
La membrana celular contiene esteroides que imparten estabilidad osmtica
Cromosomas: cadenas de ADN, genoma diploide
El transporte electrnico (respiracin) se verifica en la memb de la mitocondrias
La actividad metablica es limitada
Ribosoma 80s
Reproduccin sexual y asexual

Movimiento a travs de flagelos con complejos

Procariotas:
No poseen ncleo
Tienen pared celular
Memb celular sin esteroides
Cromosomas: ADN nico y circular, genoma haploide
El transporte electrnico (respiracin) se produce en la memb citoplasmtica
La actividad metablica es diversa
Ribosoma 70s
Reproduccin asexual (fisin binaria)
Movimiento a traes de flagelos simples
Clasificacin de las bacterias segn su forma
Cocos
~ Aislados
~ Diplococos (pareja)
~ Ttradas
~ Estreptococos (cadena)
~ Estafilococos (grupos irregulares)

Bacilos
~ Aislados
~ Diplobacilos
~ Estreptobacilos

Otras formas
~ Espirilos (ondulados)
~ Espiroquetas (espirales)
~ Vibrio (forma de coma)

Clasificacin de las bacterias segn su coloracin

Un mtodo muy utilizado es la tincin de Gram. La reaccin de la tincin de Gram se basa en la
cantidad de peptidoglucano que se encuentra en las paredes celulares de estas bacterias.
Las bacterias Gram positivas tienen muchas capas de peptidoglucano, las cuales a su vez,
sostienen molculas de cido teicoico. El cido teicoico reacciona con el cristal violeta y el
yodo utilizado en este proceso de tincin. Un complejo de las molculas cristal violeta-yodocido teicoico es muy difcil de remover. Como la pared celular de las clulas Gram positivas
retiene estos compuestos, es ms difcil decolorar una clula Gram positiva que una Gram
negativa. Una mezcla de alcohol remueve el cristal violeta de la clula Gram negativa, pero no
de la Gram positiva. Esta mezcla de alcohol tambin disuelve mucho de la capa exterior de
lipopolosacrido de la pared celular de la pared Gram negativa, lo cual acelera la remocin del
colorante primario cristal violeta de estas clulas. Cuando otro colorante, usualmente safranina,
se aade, las clulas Gram positivas siguen de color azul-violeta mientras que las Gram
negativas absorben el color rojizo de la safranina.
Al final del procedimiento de tincin, las clulas Gram positivas sern del color del cristal violeta y
las clulas Gram negativas sern del color de la safranina que es el colorante de contraste.
Parte experimental
Preparacin del frotis: Colocar sobre un portaobjeto limpio una gota de agua destilada o solucin
fisiolgica estril y sobre ella depositar con un ansa una pequea porcin del material a observar,
homogeneizar y extender la suspensin de manera que se obtenga un preparado muy delgado.
Secar lentamente sobre la llama de un mechero, a una distancia de 20 cm aproximadamente.
Fijacin del frotis: Cuando est seco, fijar el extendido pasndolo dos o tres veces por la llama.
Dejar enfriar y colorear.
Reactivos necesarios para la coloracin de Gram:

Cristal Violeta: Se utiliza para aumentar la permeabilidad de la membrana al colorante.

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Solucin de iodo (Lugol): Acta como mordiente haciendo que el cristal violeta se fije con
mayor intensidad a la pared de la clula bacteriana formando un complejo insoluble con el
colorante, en solucin acuosa.

Alcohol-acetona o alcohol-eter: (1:1): Sirve para realizar la decoloracin, penetrando en

las clulas y extrayendo el complejo (iodo-cristal violeta) en las Gram negativas.

Safranina o fucsina: Se utiliza como colorante de contraste para identificar clulas Gram
negativas

Tincin diferencial de Gram

Cubrir el frotis con cristal violeta durante 30 segundos a 1 minuto.
Lavar cuidadosamente el frotis con agua de la llave o destilada para eliminar el exceso de
colorante.
Sacudir un poco y dejar secar, cubrir el frotis con lugol por 30 segundos.
Lavar cuidadosamente el frotis con agua de la llave o destilada para eliminar el exceso de lugol.
Inclinar el portaobjeto y aplicar el decolorante por 10 segundos.
Lavar cuidadosamente el frotis con agua de la llave o destilada para eliminar el exceso del
decolorante.
Aplicar el colorante de contraste (safranina) durante 30 segundos.
Lavar cuidadosamente el frotis con agua de la llave o destilada y secar al aire.
Observar al microscopio (Objetivo de 100x con el agregado de aceite de inmersin).
Estructura bacteriana
Estructura citoplasmtica
- Contiene ADN cromosmico, ARNm, ribosomas, protenas y metabolitos
- El cromosoma bacteriano se compone de una nica molcula circular de doble cadena de
ADN que no esta contenida en un ncleo sino en una zona llamada nucloide
- Este cromosoma carece de histonas que mantengan la conformacin del ADN
- Posee plsmidos: molculas extracromosmicas circulares mas cortas de ADN, suelen
encontrarse en las bacterias gram -, le proporciona resistencia a antibiticos
- La ausencia de membrana nuclear simplifica las necesidades y los mecanismos de control de
la sntesis de protenas
- El ribosoma bacteriano consta de 2 subunidades de 30s y 50s forman el ribosoma de 70s
- La membrana citoplasmtica: posee una estructura lipdica de doble capa, no contiene
esteroides con excepcin de los Mycoplasmas. Esta memb lleva a cabo el trasporte y la
produccin de energa. Contiene protenas de transporte que permiten la captacin de
metabolitos y la liberacin de otras sust como bombas de iones y enzimas
- La cara interna de la memb esta tapizada de filamentos proteicos tipo actina, determina la
forma de la bacteria y el lugar de formacin del tabique en la divisin celular
Pared celular
Gram positivas +
~ Gruesa consta de varias capas
~ Formada principalmente por pptidoglicano que rodea la memb citoplasmtica, este es
un exoesqueleto en forma de malla con una funcin semejante al de los insectos, es
poroso por lo que permite la difusin de los metabolitos a la memb plasmtica. Es un
elemento clave para la estructura, replicacin y supervivencia. Puede degradarse con
lisozimas, es una enzima presenta en la mucosidad y lgrimas del humano. Sin el
pptidoglicano la bacteria experimenta un fenmeno de lisis. El pptidoglicano est
formado por cadenas lineales de polisacridos unidas a travs de pptidos, a su vez el
polisacrido se compone de disacridos repetidos de N-acetilglucosamina y acido Nacetilmuramico
~ cido teicoico: polmeros hidrosolubles de fosfatos de poliol unidos al pptidoglicano
mediante enlaces covalentes, son fundamentales para la viabilidad celular. Constituyen
el factor de virulencia
~ cido lipoteicoico: posee un cido graso y se encuentra unido a la memb citop. Estas
son ag de superficie que diferencian los serotipos bacterianos y favorecen la fijacin a
otras bacterias y a recep especficos localizados en la superficie de las cel de los
mamferos. Son expulsados hacia el medio circundante y al medio intercelular del

organismo anfitrin capaces e desencadenar rta inmunitaria. El ac teicoico y el

lipoteicoico son polmeros de ribosa o glicerol modificados y unidos por grupos fosfatos

Gram negativas
~ Mas compleja
~ Contiene dos capas en el exterior de la memb citoplasmtica
~ Inmediatamente por fuera de la membrana citop se encuentra una delgada capa de
pptidoglicano, no contiene acido teicoico ni acido lipoteicoico
~ En la parte externa e la capa de pptidoglicano se encuentra la membrana externa
~ El espacio entre la memb externa y la memb citoplasmtica se llama espacio
periplasmtico, es un compartimento que contiene enzimas hidrolticas para la
degradacin y metabolizacin de las macromolculas de gran tamao, estas enzimas
son proteasas, fosfatasas, lipasas, nucleasas y enzimas metabolizadoras de
carbohidratos. Muchos de las factores de virulencia lticos se encuentran en este espacio
~ La pared esta atravesada por distintos sistemas de transporte que incluyen dispositivo
de secrecin tipo I, II, III, IV y V, estos aportan mecanismos para la captacin y liberacin
de metabolitos y otros compuestos
~ La memb externa mantiene la estructura bacteriana y constituye una barrera
impermeable a molculas de gran tamao (lisozimas) y molculas hidrfobas
(antimicrobianos), ofrece proteccin frente a condiciones ambientales adversas
~ La zona interna de la memb contiene los fosfolpidos y la zona externa esta formada por
LPS, es conocido como endotoxina y constituye un potente estimulador de la rta
inmunitaria. Los LPS se desprenden hacia el medio de cultivo y el anfitrin, activan a los
linf B e inducen la liberacin de IL-1, IL-6, TNF- y otros por parte de los macrfagos.
Ocasionan fiebre y provocan shock. El LPS esta formado por 3 regiones estructurales:
lpido A (responsable de la actividad endotxica), regin central del polisacrido (clave
para la estructura y viabilidad de la bacteria) y antgeno O (diferencia los serotipos o
cepas de una especie bacteriana. Ej. el serotipo O157:H7 se emplea para identificar
cepas de E. coli que producen el SHU)
~ Porinas: protenas transmembrana, permite el paso de metabolitos y antibiticos
hidrfilos de pequeo tamao
~ La memb externa se conecta a la memb citoplasmtica a trasvs de unas zonas de
adhesin, se une al pptidoglicano por medio de una lipoprotena por enlace covalente

Estructuras externas
- Capsula: es poco antignica y antifagoctica, constituye un factor de virulencia significativo.
Puede acta como barrera frente a molculas hidrfobas toxicas as como facilitar la
adherencia a otras bacterias o superficies de los tej anfitriones
- Biofilms: apunte
- Flagelos: son propulsores en forma de cuerda que estn formados por unas subunidades
proteicas enrolladas helicoidalmente (flagelina), se unan a la memb de las bacterias y se
impulsan por el potencial de memb. Estos proporcionan motilidad a las bacterias y permiten
que la cel se dirija hacia los nutrientes y evite las sust toxicas (quimiotaxis), tambin portan
factores antignicos y determinantes de la cepa bacteriana
- Fimbrias o pili: son estructuras piliformes que se localizan en la parte externa de la
bacteria y esta formada por unas subunidades proteicas llamadas pilinas. Favorecen la
adhesin a otras bacterias o al organismo anfitrin. Constituyen un determinante de
virulencia en la colonizacin e infeccin del ap uri por E. coli
Esporas: algunas gram + pero no gram son capaces de formarlas (Bacillus anthracis, Clostridium
tetani o botulinum). En condiciones ambientales adversas, como la desaparicin de un nutriente,
estas bacterias pueden pasar de un estado vegetativo a un estado de latencia o de espora. La
espora es una estructura deshidratada formada por mltiples capas que protege a la bacteria y le
permite vivir en un estado de latencia. Posee una mem interna, 2 capas de pptidoglicano y una
capa semejante a la queratina externa. En el examen al MO aparece como una estructura brillante.
La estructura de la espora protege el ADN del genoma bacteriano del calor intenso, la irradiacin y
la accin de enzimas y sust qumicas. Las esporas son muy resistentes, difciles de descontaminar
mediante los desinfectantes convencionales.