UJI STERILITAS

Tujuan : untuk menetapkan apakah bahan farmakope yang harus steril memenuhi syarat
berkenaan dengan uji sterilitas seperti yang tertera pada masing masing monografi.
MEDIA
Media yang dapat digunakan untuk pengujian adalah :
1. Media Tioglikolat Cair (Fluid Thioiglikolat Medium), media ini digunakan untuk
2.

menumbuhkan bakteri.
Media Tioglikolat Alternatif, media ini digunakan untuk menumbuhkan bakteri terutama

pada alat yang mempunyai lumen kecil.

3. Soybean Casein Digest Medium, media ini digunakan untuk menumbuhkan jamur.
Komposisi dan cara penyiapan masing masing media dapat dilihat di FI IV hal 856
I. Media Tioglikolat Cair
L sistin P
0,5 g
Natrium Chlorida P
2,5 g
Glukosa P (C6H12O6.H20)
5,5 g
Agar P, granul (kadar air tidak lebih dari 15 %)
0,75 g
Ekstrak ragi P ( larut dalam air)
5,0 g
Digesti pancreas kasein P
15,0 g
Natrium tiglikolat P atau
0,5 g
Asam tioglikolat
0,3 g
Larutan Natrium Resazurin P ( 1 dalam 1000) dibuat segar 1,0 ml
Air
1000 ml
pH setelah sterilisasi 7,1 0,2
Campur dan panaskan hingga larut. Atur pH larutan hingga setelah sterilisasi 7,1 0,2
menggunakan Natrium Hidroksida 1 N. Jika perlu saring selagi panas menggunakan
kertas saring. Tempatkan media dalam tabung yang sesuai yang memberikan
perbandingan permukaan dengan kedalaman media sedemikian rupa sehingga tidak lebih
dari setengah bagian atas media yan mengalami perubahan warna sebagai indikasi
masuknya oksigen pada akhir masa inkubasi sterilisasi dalam autoklaf. Jika lebih dari 1/3
bagian atas terjadi warna merah muda media dapat dipeerbaiki satu kali dengan
pemanasan di atas tangas air atau dalam tiap yang mengalir bebas hingga warna merah
muda hilang. Media siap digunakan jika tidak lebih dari 1/10 bagian atas media berwarna
merah muda. Gunakan media tioglikolat cair untuk inkubasi dalam kondisi aerob.

II. Soybean Casein Digest Medium

Digesti pancreas kasein P
17,0 g
Digesti papaik tepung kedele
3,0 g
Natrium klorida P
5,0 g
Kalium pospat dibasa P
2,5 g
Glukosa P (C6H12O6.H20)
2,5 g
Air
1000 g
pH setelah sterilisasi 7,3 0,2
Larutkan semua bahan padat dalam air, hangatkan hingga larut. Dinginkan larutan
hingga suhu kamar dan jika perlu atur pH larutan hingga setelah sterilisasi 7,3 0,2
menggunakan Natrium Hidroksida 1N. Saring jika perlu dan bagikan dalam tabung yang
sesuai sterilisasi dengan uap air.
Gunakan Soybean Casein Digest medium untuk inkubasi dalam kondisi aerob
Catatan jikan digunakan Media Tiglikolat Cair dan Soybean Casein Digest
Medium dalam prosedur Uji Inokulasi langsung ke dalam Media Uji untuk menetapakan
specimen yang mengandung antibiotik golongan penicillin atau sefalosporin, secara
aseptik tambahkan sejumlah penisilinase ke dalam tabung media untuk menginaktifkan
antibiotik dalam spesimen uji. Tetapkan jumlah penisilinase yang diperlukan dengan
menggunakan sediaan penisilinase yang sebellumnya telah diuji daya penginaktif
penisilin atau sefalosporin. Atau tetapkan jumlah penisilinase yang diperlukan dengan
menambahkannya ke dalam tabung media tiglikolat cair dan sejumlah antibiotik dalam
specimen uji, inokulasi media dengan 1 ml. Pengenceran ( 1 dalam 1000) biakan 18 jam
sampai 24 jam Staphylococcus aereus ( ATCC 29737) dalam media tioglikolat cair dan
inkubasi selama 24 jam pada suhu 30 0C sampai 350C pada saat itu harus teramati
pertumbuhan mikroba yang spesifik. Lakukan uji konfirmasi di daerah yang benar
benar terpisah dari tempat uji sterilitas.
METODE UJI STERILITAS
Terdapat dua metode uji sterilitas.
1. Uji inokulasi langsung ke dalam media uji
Pada uji inokulasi langsung, sediaan atau bahan yang diperiksa diinokulasikan ke dalam
media

uji

secara

langsung.

Cara

ini

umumnya

dilakukan

terhdap

sediaan

antibiotika/antimikroba, terlebih dahulu dihilangkan daya menghambat atau membunuh

mikrobanya dengan menambahkan inaktivator atau dengan cara pengenceran
menggunakan media denga volume besar sampai zat tersebut inaktif.
2. Uji dengan cara penyaringan membrane

Pengujian sterilitas dengan cara penyaringan dilakukan untuk sediaan larutan dengan
volume besar, serbuk yang dapat larut, sediaan yang mengandung antibiotika/antimikroba
serta sediaan lemak/minyak.
Untuk pengujian bahan farmakope uji penyaringan membrane merupakan metode pilihan.
CARA MEMBUKA WADAH
Bersihkan permukaan luar ampul dan tutup vial dan tutup botol menggunakan bahan
dekontaminasi yang sesuai dan ambil isi secara aseptic. Jika isi vial dikemas dalam hampa udara,
masukkan udara steril dengan alat steril yang sesuai, seperti alat suntik dengan jarum yang
dilengkapi bahan penyaring untuk sterilisasi.
Untuk kapas murni, perban, pembalut benang bedah dan bahan farmakope sejenis, buka kemasan
atau wadah secara aseptis.
PEMILIHAN JUMLAH SPESIMEN UJI
Penetapan jumlah spesimen uji mengikuti tabel di bawah ini
Isi (ml)

Vol. sampel min yg

Volume media

Volume media

Jumlah

harus diambil per

(ml)

(ml)

wadah per

wadah

Metode Inokulasi

Metode Filtrasi

media

< 10

1 atau semua

langsung
15

Membran
100

20 40

10 - < 50

40

100

20

50 - < 100

10

80

100

20

50 - < 100 (iv)

Semua

100

10

100 500

Semua

100

10

> 500

Semua

100

10

PROSEDUR :
Metode Inokulasi Langsung
Pindahkan cairan dari wadah uji menggunakan pipet atau jarum steril
Secara aseptic inokulasikan sejumlah tertentu bahan dari tiap wadah uji ke dalam tabung
media
Campur cairan dengan media uji tanpa aerasi berlebihan
Inkubasi dalam media tertentu selama tidak kurang dari 14 hari

 Amati pertumbuhan pada media secara visual sesering mungkin, sekurang kurangnya
pada hari ke 3 atau ke 4 atau ke 5, pada hari ke 7 atau ke 8 serta pada hari
terkahir masa uji
Metode Penyaringan Membran
Peralatan unit penyaring membrane yang sesuai terdiri dari atau perangkat yang dapat
memudahkan penanganan bahan uji secara aseptis dan membrane yang telah diproses dapat
dipindahkan secara aseptis untuk inokulasi ke dalam medaia atau satu perangkat yang dapat
ditamabahkanmedia steril ke dalam penyaringnya dan membrane di inkubasi in situ. Membran
yang sesuai, umumnya mempunyai porositas 0,45 m, dengan diameter lebih kurang 47 mm, dan
kecepatan penyaringan air 55 75 ml/menit pada tekanan 70 cm Hg.
KONTROL UJI
Validitas hasil uji sterilitas dipengaruhi oleh kondisi dari media yang digunakan, untuk
mendapatkan hasil yang valid diperlukan dua jenis kontrol uji yaitu kontrol positif dan kontrol
negatif.
Kontrol positif dibuat untuk mengetahui

kemampuan media dalam menumbuhkan

mikroorganisme.
Pembuatan kontrol positif dilakukan dengan menginokulasikan 10 100 mikroorganisme uji
(Tabel) kemudian diinkubasi sesuai persyaratan masa inkubasi.
Kontrol negatif dibuat untuk mengetahui sterilitas media yang digunakan, dilakukan dengan
menginkubasikan media yang telah disterilkan.
Tabel Mikroorganisme Uji yang digunakan untuk Uji Fertilitas
Media
Fluid

Mikrorganisme Uji
Staphylococcus aereus (ATCC 6538)

Suhu Inkubasi

Kondisi

( 0 C)
32,5 2,5

aerobik

Thioglycollate

Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)

32,5 2,5

aerobik

Alternative

Clostridium sporogenes (ATCC 11437)

Clostridium sporogenes (ATCC 11437)

32,5 2,5
32,5 2,5

aerobik
aerobik

Soybean casein

Bacillus subtilis ( ATCC 6633)

32,5 2,5

aerobik

digest

Candida albicans ( ATCC 10231)

32,5 2,5

aerobik

Thioglycollate

Aspergillus niger ( ATCC 16404)

32,5 2,5

aerobik

MASA INKUBASI
Jika tidak dinyatakan lain dalam monografi atau bab ini, inkubasi campuran uji dengan Media
Tioglikolat Cair ( atau Media Tioglikolat Alternatif, jika dinyatakan) selama 14 hari pada suhu 30
350C dan untuk Soybean Casein Digest Medium pada suhu 20 250C.
PENAFSIRAN HASIL UJI STERILITAS
Tahap pertama
Pada interval waktu tertentu dan pada akhir periode inkubasi, amati isi semua wadah akan
adanya pertumbuhan mikroba seperti kekeruhan dan atau pertumbuhan pada permukaan. Jika
tidak terjadi pertumbuhan maka bahan memenuhi syarat.
Jika ditemukan pertumbuhan mikroba, tetapi peninjauan dalam pemantauan fasilitas pengujian
sterilitas, bahan yang digunakan, prosedur pengujian dan kontrol negative menunjukkan tidak
memadai atau teknik aseptis yang salah digunakan dalam pengujian, tahap pertama dinyatakan
tidak absah dan dapat diulang.

Tahap kedua
Jumlah specimen uji yang diseleksi minimum dua kali jumlah tahap pertama. Volume minimum
tiap specimen yang diuji dan media dan periode inkubasi sama seperti tertera pada tahap
pertama. Jika tidak ditemukan pertumbuhan mikroba, bahan yang diuji memenuhi syarat. Jika
ditemukan pertumbuhan, hasil yang diperoleh membuktikan bahwa bahan uji tidak memenuhi
syarat. Jika dapat dibuktikan bahwa uji pada tahap kedua tidak absah karena kesalahan atau
teknik aseptic tidak memadai, maka tahap kedua dapat diulang.
HASIL PENGAMATAN
Thioglycollate

Sampel
uji

Kontrol
negatif

Sampel
uji

Kontrol
positif

Soybean - Casein
Kontrol
negatif

Sampel
uji

Kontrol
positif

PEMBAHASAN
Pada praktikum uji sterilitas digunakan kontrol negative yang digunakan untuk
memastikan bahwa media dalam keadaan steril, sedangkan kontrol untuk mengetahui
kemampuan media dalam menumbuhkan mikroorganisme yang ditunjukkan larutan
keruh yang ada gumpalan gumpalan pada larutan.
Pada hasil pengamatan praktikum yang saya lakukan, pengamatan menunjukkan
bahwa media setelah ditambahkan dengan sampel uji dan di inkubasi selama 2 minggu
(14 hari) menunjukkan sediaan baik memakai tioglikolat maupun dengan soy-bean masih
steril yang ditunjukkan dengan sampel uji masih jernih yang sama dengan kontrol
negative. Perlakuan inkubasi selama 14 hari dimaksudkan karena masa bakteri untuk

menyesuaikan diri dengan media selama 14 hari, sehingga dengan begitu jika sampel uji
selama 14 hari masih jernih sama dengan kontrol negatif menunjukkan bahwa sampel uji
masih dalam keadaan steril.

LAPORAN PRAKTIKUM FARMASETIKA SEDIAAN STERIL

UJI STERILITAS

Oleh :
Citra Rachma Nurulia
09040115
Kelompok 3 B ( PAGI )
Dosen :
Drs. Sugiyartono, M.S.,Apt
M. Agus Syamsu Rizal,S.Si., Apt.,M.Si
Arina Swastika Maulita,S.Farm.,Apt
Dra. Uswatun Chasanah, M.Kes.,Apt
Heru Prabowo,S. Farm., Apt

PROGRAM STUDI FARMASI

FAKULTAS ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH MALANG

2012