biorremediacion
4. Geobacter Sulfurreducens
Introduccin
Geobacter Sulfurreducens se encuentran en hbitats acuticos anaerobios, sedimentos de
agua fresca, ambientes marinos, incluso, en el tracto gastrointestinal de animales.
La actividad elctrica en microorganismos no es un tema nuevo, los primeros estudios los
realiz Michael Potter en 1910 en Durham, Inglaterra, empleando la bacteria Escherichia
Coli y electrodos de platino.
En 1931 Barnet Cohen, interesado por los estudios de Potter, construy una celda de
combustible microbiana, obteniendo una corriente de 0.35 mA y 0.35 V. Estos resultados
no causaron impacto en la comunidad cientfica de ese tiempo, y el empleo de este tipo
energa no prospero.
Es hasta la dcada de 1980 cuando se despierta el inters en los microorganismos
capaces de producir electricidad: Shewanella Oneidensis y Geobacter Metallireducens,
descubiertas en los sedimentos del ro Potomac (EUA), y en 1987 la especie Geobacter
Sulfurreducens fue aislada en una muestra del suelo de Oklahoma contaminado por
hidrocarburos. En la figura 4.1 se aprecia la bacteria Shewanella Oneidensis.
La mayora de los microorganismos capaces de generar electricidad pertenecen a la
familia Geobacteraceae, como son las especies Rhodoferax ferrireducens, Aeromonas
hydrophilia, Clostridium butyricum y Enterococcus gallinarum.
Actualmente se tiene conocimiento de otras especies que generan electricidad (las
mencionadas anteriormente) aunque sus mecanismos an no son estudiados.
Esta bacteria puede generar electricidad de los desechos orgnicos y materia renovable,
mediante el empleo de celdas de combustible microbiano, en adelante CCM.
El inters por estas CCM radica en su potencial empleo como fuentes de energa en
lugares remotos sin acceso a la red elctrica, zonas afectadas por desastres naturales, o
incluso en el fondo del mar o en el espacio exterior.
Las primeras investigaciones del Dr. Lovely demostraron que es posible obtener voltaje
colocando un nodo de grafito en el sedimento anaerbico y conectndolo a travs de a
un ctodo en una superficie aerbia; la respiracin bacterial del carbn dona electrones al
nodo, finalmente la energa elctrica es obtenida por medio de un circuito que conecta al
2
nodo con el ctodo. Obtenindose como resultado una produccin de 10 mW/m ,
durante un periodo experimental de semanas a meses.
En el laboratorio, esta pila biolgica puede abastecer de electricidad por unos meses, y
cada tanto se debe renovar el lodo para que las bacterias tengan nueva materia orgnica
para degradar. Esto no es necesario si el sistema se usa directamente en la naturaleza.
33
44
55
Como producto final metablico se obtiene sulfuro del hidrgeno (H2S). Algunas bacterias
reductoras del sulfato auttrofas inusuales pueden utilizar el fosfito (HPO 3- ) como
donador de electrones o son capaces de generar dos compuestos a partir del azufre, en
este caso un donador de electrones y un receptor de electrn) usando el tiosulfato
2
(S2O3 ).
Su clasificacin cientfica se resume en la Tabla 4.1:
Geobacter Sulfurreducens
Reino
Bacteria
Divisin
Proteobacteria
Clase
Delta
Familia
Geobacteraceae
Gnero
Desulfuromonas
Especie
Geobacter Sulfurreducens
Dimensiones
30 C
pH ptimo de crecimiento
Nutricin
Hetertrofa
Estas bacterias se agrupan formando una pelcula muy delgada, tambin llamada biofilm.
Los biofilms se definen como comunidades de microorganismos que crecen embebidos
en una matriz de exopolisacridos (carbohidratos complejos producidos por las bacterias)
y adheridos a una superficie inerte o un tejido vivo, el crecimiento en biofilms representa la
forma habitual de crecimiento de las bacterias en la naturaleza.
La caracterstica que ms llama la atencin de esta bacteria es la existencia de unos
filamentos delgados llamados Pili, los cuales funcionan como cables conductores de
electrones, lo que evita el empleo de transportadores de electrones entre la bacteria y su
medio. Estos biocables tienen una longitud de 10 a 20 m y un dimetro aproximado de
3 a 5 nm, es decir, 20 mil veces ms delgados que un cabello, estn formados de una
protena llamada pilina.
Se sabe que el Pili contiene citocromos del tipo C, las Geobacter tienen alrededor de 100
distintos citocromos de estas molculas, cuando por lo general otros grupos poseen slo
cinco o seis.
Los citocromos son protenas de color oscuro que desempean una funcin vital en el
transporte de energa qumica en todas las clulas vivas. Las clulas animales obtienen la
energa de los alimentos mediante un proceso llamado respiracin aerobia; las plantas
capturan la energa de la luz solar por medio de la fotosntesis. Los citocromos intervienen
en los dos procesos.
Los citocromos estn incorporados en la membrana celular de las bacterias y en las
membranas internas de las mitocondrias (orgnulos presentes en las clulas animales y
vegetales) y de los cloroplastos (que slo se encuentran en las clulas vegetales).
Durante la respiracin y la fotosntesis, las molculas de citocromo aceptan y liberan
alternativamente electrones, que pasan a otro citocromo en una cadena de reacciones
qumicas llamada transferencia de electrones, que funciona con liberacin de energa.
Esta energa se almacena en forma de adenosn trifosfato (ATP). Cuando la clula
necesita energa, la toma de sus reservas de ATP.
En la Figura 4.3 se puede apreciar el Pili de la bacteria
60
Fig. 4.3 La bacteria Geobacter Sulfurreducens donde se puede apreciar el Pili, o cables
conductores.
Fuente: Geobacter Project
61
As como tambin sustentabilidad a largo plazo, existen reportes de CCM que han sido
operadas por ms de dos aos sin disminuir su produccin de electricidad.
Los microorganismos ms estudiados son los de la familia Geobacteraceae, ya que su
genoma se conoce completamente.
Otra bacteria de gran importancia es Rhodoferax ferrireducens, la cual es capaz de oxidar
azcares como glucosa, sacarosa (azcar de mesa), fructosa, lactosa y xilosa (azcar de
la madera), todas ellas a dixido de carbono.
Transferencia por medio de cables bacterianos o Pili
Los ltimos estudios en microorganismos han descubierto la presencia de nanocables en
algunos microorganismos electrgenos. Encontrndose en bacterias como Geobacter
Sulfurreducens, Synechocystis y Pelotomaculum thermopropionicum.
El crecimiento en Fe (III) requiere de Pili (Fig. 4.3), los cuales son conductores de
electrones y se encuentran localizados a un costado de la clula.
Estos Pili son los encargados de realizar la conexin elctrica entre la clula y los xidos
de Fe (III) y deben estar en contacto directo con el nodo de la CCM o formando una red
entre las clulas para facilitar la transferencia de electrones a travs de la biopelcula.
La conversin de energa qumica en elctrica es posible en las llamadas celdas o pilas
de combustible, una variante de stas es la celda de combustible microbiana o CCM.
4.3 Celdas de combustible
Una CCM, opera como una batera, genera electricidad combinando hidrgeno y oxgeno,
sin combustin, por lo que se evita la generacin de emisiones nocivas como slidos en
suspensin (generalmente carbn y plomo), xidos de nitrgeno y azufre.
Convierten sustratos biodegradables directamente a electricidad, no se agotan, ni
necesitan recargarse siempre que se les provea de combustible.
La pieza clave en la generacin de una corriente elctrica es el microorganismo
empleado; as como tambin el tipo de inculo, es decir el medio de comunicacin. El
inculo puede provenir de lodos activados o anaerobios, aguas residuales (domsticas o
industriales), sedimentos marinos o sedimentos acuticos.
Como cualquier tipo de pila, consiste de un nodo, un ctodo y una membrana o
electrolito.
El nodo alberga a las bacterias, es el borde negativo y se debe mantener libre de
oxgeno.
El ctodo recibe los electrones y los transfiere al exterior de la celda, es el borde positivo,
puede estar expuesto al aire. Esto se debe a que el oxgeno es el aceptor ms adecuado
para su empleo en una CCM, ya que posee un alto potencial de oxidacin, disponibilidad,
bajo costo y carece de residuos qumicos.
El electrolito es una membrana semipermeable que separa al nodo del ctodo y
bloquea el paso de los electrones, limitando as la distribucin de oxgeno del ctodo al
nodo.
El carbn es el material idneo para emplearse como electrodo, pues es barato, fcil de
manejar y posee un rea de contacto definida.
Funcionamiento de una Celda de Combustible Microbiana
Los microorganismos en la cmara nodica oxidan los compuestos orgnicos como parte
de su metabolismo, durante este proceso generan electrones y protones. Los electrones
son transferidos al nodo y transportados al ctodo a travs de un circuito externo.
Este proceso genera protones, los cuales atraviesan la membrana o electrolito, llegando
al ctodo y de este modo formar agua.
La Figura 4.4 nos muestra los componentes de una Celda de Combustible.
Celda de Combustible
cido
Fosfrico
(PAFC)
Carbonato
Fundido (MCFC)
xido slido
(SOFC)
Membrana de
intercambio de
protones (PEM)
Eficiencia
40- 85
60-85
60-85
60-40
Temperatura
de operacin
(C)
150-200
650
1000
80
Electrolito
cido fosfrico
lquido
Solucin lquida
de litio o sodio
Circonio slido
cido de polmero
orgnico
Rendimiento
[kW]
200
100
100
50-250
Ventajas
* Alta eficacia
* Hidrogeno
como
combustible
*No
requiere
catalizadores
*Empleo en donde
se requiera gran
potencia (centrales
generadoras e
industriales)
*Poca corrosin
* Las altas
temperaturas
refuerzan la
corrosin y la
avera de
componentes
celulares
(CeldaSistema) (%)
Desventajas
*Variedad de
combustibles a
emplear
* Las altas
temperaturas
refuerzan la
corrosin y la avera
de componentes
celulares
* Silenciosos
* Rapidez de arranque
* Extremadamente
sensible a la
contaminacin por CO2.
Cuando los electrodos estaban listos con un potenciostato , ambas cmaras se llenaron
idnticamente con los medios de crecimiento y la muestra del electrodo se lav con una
cmara de vapor de N2-CO2 (80:20). Como la cmara de electrodo auxiliar fue
anaerbica, se produjeron pequeas cantidades de hidrgeno en el
electrodo de
muestreo, donados al electrodo de trabajo por los microorganismos. El lavado de esta
cmara previene el paso de hidrgeno a partir de la difusin en la cmara de electrodo de
trabajo y acta como un donante de electrones para las bacterias.
Las mediciones de corriente y tensin para los estudios a largo plazo fueron recabados
directamente de los resultados potenciostato cada 10 segundos con una unidad de
energa 4SP Lab conectada a una computadora Macintosh, y los datos se registran con
el software Chart 4.0 (ADInstruments, Mountain View, California). La produccin de
energa de la clula de combustible fue medido por la tensin a travs de una resistencia
(500 ) en la CCM.
10
C = 6.24 x 10 electrones
23
Para la construccin de los electrodos, se utilizo en este primer prototipo, las pilas viejas
comunes en desuso o pilas tipo Eveready a las que se le extrajo los ncleos, Se les lav
con cido clorhdrico diluido en agua destilada en una proporcin de 40% y 60% durante
unas horas, luego se repiti el procedimiento pero en menor concentracin de acido
clorhdrico por un tiempo similar al anterior, se les lav y se les dejo secar. El proceso de
construccin de electrodos se muestra en la Figura 4.6
Construccin de los electrodos
Luego se armaron los electrodos utilizando los ncleos de pilas a los cuales se uni por
medio de una soldadura de estao a un cable de cobre, al que se revisti con Poxipol
para protegerlo y darle forma al electrodo.
Luego se ensamblaron los tubos de PVC que daran forma a la celda de combustible
segn los diseos 3D anteriormente realizados, a stos se les acopl acrlico en dos
secciones: la primera entre los tubos de PVC, la segunda en donde se coloc la
membrana separadora y se realizaron las perforaciones respectivas para introducir los
electrodos y las mangueras, quedando de la siguiente forma.
El mediador difunde libremente a y desde el compartimiento andico, transportando
electrones liberados por el metabolismo microbiano hacia en nodo. Debido al poco
rendimiento obtenido con los primeros electrodos se decidi realizar una nueva
conformacin de electrodos (nodo y ctodo) y el cable que los una. Se utilizaron barras
de grafito (15.8 cm de alto, 3.8 cm de ancho y 1.2 cm de espesor) con un rea superficial
2
de 60 cm .
La conexin de los electrodos se realiz como en los anteriores. En la primera fase de
operacin se realizaron las muestras de forma manual con un tester DT 9205 A y se midi
la celda a voltaje directo obtenindose como valor mximo de 0.35mV, luego se coloc
una resistencia y se midi su corriente y su cada de voltaje. Los valores de corriente se
calcularon con la ley de Ohm
Donde I = corriente (mA); V = voltaje (mV); R = resistencia (). La potencia fue calculada
con la ecuacin:
2
P = I xR
A
I= V/R
71
Fue diseado originalmente para funcionar con 100 cm de membrana de Nafin, pero
despus fue modificado para utilizar una membrana de solamente 4 x 4 cm de Nafion,
para reducir al mnimo los costos debido al alto precio del Nafion, quedando de la
siguiente forma:
El volumen de cada compartimiento de la celda es de 1 L. Una pelcula gruesa de acetato
de 1 mm (amarilla) separa ambos compartimientos, para reducir al mnimo la membrana
de Nafion necesitada para cada experimento. En este caso ambos electrodos estn
conectados a travs de una resistencia para posibilitar la circulacin de corriente por un
circuito externo. El compartimiento catdico est aireado en tanto que el andico est
cerrado y anaerbico. El compartimiento andico se rellena con una solucin rica en
sustratos orgnicos y se inocula con bacterias capaces de utilizarlos. Como consecuencia
de la acumulacin de compuestos reducidos producto del metabolismo bacteriano se
establece una diferencia de potencial a ambos lados de la membrana que es posible
utilizar para la produccin de energa elctrica.
Las Grficas 4.3 y 4.4 muestran los resultados de estas investigaciones.
Voltaje obtenido variando las resistencias
Mxico
En Mxico se encontraron 2 diferentes estudios.
El primero correspondiente al equipo interdisciplinario de la Universidad del Mar en
11
Oaxaca, la UAM Iztapalapa y el INPT de Toulouse, Francia .
Se empleo una celda de PVC, con Geobacter Sulfurreducens provenientes de una planta
de tratamiento de aguas residuales.
El tiempo de estudio fue de 31.5 das presentando un valor mximo de 0.741 V a los 25
das.
12
11
Ana Villareal Rojas, Miguel Velzquez Manzanares, Carlos Estrada Vzquez, Bibiana Cercado
Quezada. Universidad del Mar, San Pedro Pochutla, Puerto ngel, Oaxaca; Sergio Revah, UAM
Iztapalapa y Alain Bergel INPT Toulouse.
12
Liliana Alzate Gaviria, Centro de Investigacin Cientfica de Yucatan; Carmen Fuentes Albarrn, Alberto
lvarez Gallegos, Universidad Autnoma del Estado de Mxico; P.J Sebastian, UNAM.
73
La CCM tena un volumen de 350 ml, con electrodos de papel carbn, el tiempo de
experimentacin fue de 140 das.
El voltaje mximo fue de 1.05 V y una corriente de 0.170 mA.
Los resultados obtenidos por el CICY se muestran en la Grfica 4.5
Generacin de electricidad en etapa de medicin contina
Grfica 4.5 Esta grfica nos muestra los valores obtenidos de voltaje y corriente
obtenidos empleando Geobacter Sulfurreducens.
Fuente: Generacin de electricidad a partir de una celda de combustible microbiana tipo PEM
Como podemos observar los valores obtenidos de los parmetros elctricos (voltaje,
corriente y potencia) son similares.
En la Tabla 4.3 se muestran los valores obtenidos en los diferentes estudios
mencionados.
EUA
COREA
ARGENTINA
4g C6H12O6
0.1 g de KCl,
5 g NH4Cl
-----------
310 mg NH4Cl
0.2 g de NH4Cl
0.6 g NaH2PO4
130 mg KCl
0.6 g de NaH2PO4,
0.1 g NaHCO3
4.97 g NaH2PO4
2 g NaHCO3
0.82 g acetato de
sodio
40
30
30
Entre 5 y 6
6.8
---------------------
-------------------
Barras de grafito
sin pulir(2.5
x7.6x1.2)
------------------
15.8 x 3.8 x 1.
Resistencia []
1000 y 600
500
1000
100 a 4000
Corriente mxima
[mA]
0.08 y 0.17
0.45
0.24
0.02
0.08 y 0.102
0.225
0.24
0.35mV
335
880
470
701
Composicin (por
litro)
2.75 g Na2HPO4
Temperatura [ C]
Ph
Electrodos [cm]
Potencia mxima
2
[mW/m ]
---------
Pilas lavadas
previamente