Ultracentrifugacin

Es una centrifugadora optimizada para girar su rotor a velocidades

muy elevadas, capaces de generar una aceleracin tan alta como de
1 00 000 rmp o 803000 xg g (9,800 km/s). Existen dos clases de
ultracentrfugas, la de preparado y la analtica. Ambas clases de
instrumentos
la ciencia

de

tienen
los

importantes

usos

embriologa, bioqumica y

polmeros. Theodor

Svedberg invent

la

ultracentrfuga analtica en 1923, mereciendo por ello el Premio

Nobel de qumica en 1926 por sus investigaciones en los coloides y
protenas utilizando la ultracentrifugadora.
La ultracentrifugadora de vaco fue inventada por Edward Greydon
Pickels. Su contribucin con la aportacin del vaco fue lo que permiti
una reduccin en la friccin generada a altas velocidades. Los
sistemas de vaco tambin permitieron el mantenimiento de una
temperatura constante.
En 1946, Pickels cofund Spinco (Specialized Instruments Corp.) y
comercializ una ultracentrifugadora basada en su diseo. No
obstante, lo consider demasiado complicado y desarroll una versin
"a prueba de torpes". Pero incluso con el diseo mejorado, las ventas
siguieron siendo bajas y Spinco casi acab en bancarrota. La
compaa sobrevivi y fue la primera en fabricar ultracentrifugadoras
comerciales en 1947. En 1949, Spinco introdujo el modelo L, la
primera ultracentrfuga de preparacin, para alcanzar una velocidad
mxima

de

40

000 rpm,

En 1954,

Beckman

Instruments

(ahora Beckman Coulter) adquiri la compaa haciendo de ella la

base de su divisin de centrifugadoras Spinco.
Permite estudiar las caractersticas de sedimentacin de estructuras
subcelulares (lisosomas, ribosomas y microsomas) y biomolculas.
Utiliza rotores (fijos o de columpio) y sistemas de monitoreo. Existen
diferentes maneras de monitorear la sede las partculas en la
ultracentrifugacin.

Velocidad: a partir de 50000 rpm.

Presentan sistemas auxiliares:

sistemas de refrigeracin, sistemas de
alto vaco.

Hay dos 2 tipos:

Analticas: Obtencin de datos precisos de propiedades de

sedimentacin (s, PM).

Preparativas: Aislamiento de partculas

(microsomas, virus, macromolculas).

de

bajo

La Ultracentrifugacin analtica
Consiste en un conjunto de mtodos (velocidad y equilibrio de sedimentacin) que
permiten la determinacin del tamao, la forma global aproximada, y el grado de
homogeneidad de protenas y otras macromolculas biolgicas en disolucin. Estos
mtodos estn especialmente adaptados para la deteccin y la caracterizacin
cuantitativa de las interacciones (proporcin de especies, estequiometra,
reversibilidad y afinidad) que dan lugar a la formacin de complejos macromoleculares,
incluyendo las interacciones protena-protena, DNA- protena y receptor-ligando

La Unidad posee una ultracentrfuga analtica modelo XL-I equipada con dos
sistemas pticos de deteccin: UV-VIS de longitud de onda variable e
interferencia de Raleigh. Esta ltima tcnica permite el estudio de
macromolculas en disoluciones con alta absorcin en el UV-VIS.

Desde su creacin en 1994, esta Unidad del CIB ha dado apoyo cientficotcnico en la caracterizacin biofsica de protenas y sus interacciones a un gran
nmero de grupos de investigacin del CSIC, universidades, empresas, as como
a otros centros de investigacin nacionales y extranjeros. Esta Unidad cuenta
con el asesoramiento y la colaboracin de grandes expertos internacionales en
estas metodologas. En 2009 el laboratorio consigui la certificacin conforme a
la norma ISO9001 con el cdigo ER-0286/2009.

La dispersin de luz dinmica

Proporciona informacin rpida y complementaria a la obtenida mediante
ultracentrifugacin analtica, aportando dos grandes ventajas frente a otros mtodos
analticos como el bajo volumen de muestra requerido (15-45 l) y la rapidez en la
obtencin de los resultados (<10 min). La tcnica permite conocer el grado de
polidispersidad de una muestra, determinar el coeficiente de difusin traslacional de
las especies macromoleculares en disolucin y calcular suradio hidrodinmico. Este
equipo (modelo DynaPro MS/X, Wyatt Inc.) tiene un manejo muy sencillo (cubeta) con
un sistema de regulacin de la temperatura por Peltier (4-60C) y se puede utilizar
para el anlisis de diferentes tipos de macromolculas como protenas, polisacridos y
micelas lipdicas.

Con posterioridad se ha introducido en la Unidad un equipo de dispersin de

luz esttica multingulo (modelo DAWN-EOS, Wyatt Inc.) conectado a un equipo
de determinacin de la concentracin por ndice de refraccin (modelo Optilab
rEX, Wyatt Inc.), con dos posibles aplicaciones en nuestro laboratorio. Puede
acoplarse a un sistema de cromatografa lquida de exclusin molecular
(mtodo SEC-MALS) para la determinacin de la masa molecular de las
macromolculas separadas por columna. Tambin se puede utilizar para el
estudio de interacciones macromoleculares en disolucin mediante la formacin
de un gradiente de concentraciones (mtodo CG-SLS). En este ltimo caso se
utiliza una bomba programable de triple jeringa (modelo CALYPSO, Wyatt Inc.)
para la inyeccin secuencial de concentraciones variables de protena/s y buffer.
La informacin sobre la interaccin se obtiene en pocos minutos (importante
cuando la

Recientemente se han realizado en esta Unidad diferentes estudios sobre los

procesos de oligomerizacin y polimerizacin de protenas, mediante el uso
combinado de las tcnicas de ultracentrifugacin y dispersin de luz.

ROTOR
El motor se compone de varias partes, la parte central se le llama ROTOR, sta la
mayora de las veces es la parte que gira, pero puede que no siempre sea as. El
ESTATOR es la otra parte, y generalmente es la parte que no gira, la exterior.

Tipos de Rotores
Se tres tipos de rotores en las centrfugas:
- Rotores flotantes.
- Rotores de ngulo fijo o
angulares.
-Rotores verticales.
Cada tipo de rotor es adecuado para un tipo determinado de
separacin.
Rotores Flotantes
En este tipo de rotor, los tubos que se utilizan para centrifugar
estn unidos al brazo del rotor por su parte superior.
Durante la centrifugacin, debido a la fuerza centrfuga, los
tubos pierden la verticalidad y se sitan perpendiculares al eje
de rotacin.

Rotores de ngulo fijo o angulares

En este tipo de rotores la centrifugacin se lleva a cabo siempre en un ngulo
fijo respecto al eje de rotacin.

Rotores verticales
En los rotores verticales, se sostienen los rotores en forma vertical durante la
rotacin.

Este tipo de rotor no resulta adecuado para peletizar sino que es es ms

eficiente para separaciones isopcnicas (en base a la densidad) debido la corta
longitud de trayectoria.

Control del Rotor, el rotor es un eje en el centro de la centrifuga, con un sistema de

tuercas que es el que se gira gracias al motor, y lleva la porta tubos. El rotor de la
centrifuga tiene que girar en el sentido
adecuado, (sentido de la aguja de reloj), tiene que estar bien recto sin inclinarse a
ninguna parte. Porque si est inclinado, puedes romper los tubos.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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mantenimiento hospitalario, San Salvador, El Salvador, GTZ-Ministerio de
Salud Pblica, 1998, pgina 5.
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Centrfugadora de laboratorio / vertical / de mesa / refrigerada [Pgina principal
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