VICERRECTORADO DOCENTE

Cdigo: GUIA-PRL-001

CONSEJO ACADMICO

Aprobacin: 2016/04/06

Formato: Gua de Prctica de Laboratorio / Talleres / Centros de Simulacin

FORMATO DE INFORME DE PRCTICA DE LABORATORIO / TALLERES /

CENTROS DE SIMULACIN PARA ESTUDIANTES
CARRERA: Ingeniera Ambiental
NRO. PRCTICA:

ASIGNATURA: Microbiologa

TTULO PRCTICA: Tincin Gram

OBJETIVO(S) ALCANZADO(S):
Mostrar la importancia de una tincin para la diferenciacin de bacterias basndose en las propiedades
estructurales de la pared celular.
Observar en el microscopio los dos portaobjetos con sus respectivos medios de cultivo teidos.
ACTIVIDADES DESARROLLADAS
1. Colocamos una pequea gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca
cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su
filamento queda retenida una mnima gota de agua que resulta suficiente.
2. Flameamos el asa de siembra, tomamos, en condiciones aspticas, una pequea cantidad del cultivo
bacteriano en medio slido y transferimos a la gota de agua. Removimos la mezcla con el asa de siembra
hasta formar una suspensin homognea que queda bastante extendida para facilitar su secado. Si la
muestra se toma de un cultivo en medio lquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que
basta con colocar y extender una gota de la suspensin bacteriana, que se toma con el asa de siembra,
directamente sobre el portaobjetos.
3. Pasamos tres veces el portaobjetos por la llama durante unos segundos. Dejamos enfriar el portaobjetos
durante los pases.
4. Agregamos cristal violeta o violeta de genciana durante 1 min.
5. Enjuagamos con agua y agregamos lugol y esperar un minuto.
6. Enjuagamos con agua y agregamos alcohol-acetona durante 4 segundos.
7. Enjuagamos con agua y agregamos safranina o fucsina bsica y esperar de 1 a 2 minutos, este tinte
dejara de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
8. Lavamos con agua, dejamos secar y observamos al microscopio con el objetivo de 100x
RESULTADO(S) OBTENIDO(S): Colocar las fotografas obtenidas en 4X, 10X, 40X y 100x.

Portaobjetos N# 1:

Medida 4x

Medida 10x
Resolucin CS N 076-04-2016-04-20

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CONSEJO ACADMICO

Aprobacin: 2016/04/06

Formato: Gua de Prctica de Laboratorio / Talleres / Centros de Simulacin

Medida 40x

Medida 100x

Portaobjetos N# 2:

Medida 100x
Medida 40x

CONCLUSIONES:

La tincin de Gram es una herramienta muy til en el laboratorio de microbiologa as como en los anlisis
clnicos y diagnstico mdico.

Gracias a la ayuda del microscopio se pudo comprobar que las muestras observadas, una vez finalizada
la tincin, pertenecan a dos bacterias completamente distintas.

Resolucin CS N 076-04-2016-04-20

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Aprobacin: 2016/04/06

Formato: Gua de Prctica de Laboratorio / Talleres / Centros de Simulacin

RECOMENDACIONES:

Es recomendable manejar con mucho cuidado las muestras y siguiendo los procedimientos adecuados,
ya que un pequeo error puede evitar que se obtengan los resultados deseados.

CUESTIONARIO:
El fundamento de la tincin de Gram consiste en que las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas tien de
forma distinta debido a las diferencias constitutivas en la estructura de sus paredes celulares.
Este mtodo se basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y bacterias contienen cido graso|cidos
grasos (por ejemplo, el cido miclico) de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la
propiedad de resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorants bsicos. Por esto se
denominan cido-alcohol resistencia|bacilos cido-alcoholresistentes o BAAR.

BIBLIOGRAFA

Daniel RA, Errington J: Control of cell morphogenesis in bacteria: two distinct ways to make a rod-shaped.
Camacho, A., M.Giles, A.Ortegn, M.Palao, B. Serrano y O.Velzquez. 2009. Tcnicas para el Anlisis
Microbiolgico de Alimentos. 2 ed. Facultad de Qumica,UNAM. Mxico.
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

Gabriel Carpio
Stalyn Arboleda
Edwin Pastua
Andrs Moreno
John Lucas Villacs
Nombre de los estudiantes: _____________________________

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