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Aula Prtica

Escola

EEFM MONSENHOR DOURADO


Disciplina

Biologia

Tema

Prtica

DNA

Extrao de DNA

Aluno

Professor
N.

John Washington
Turma

Turno

Data
____/___/____

provvel que voc tenha visto na mdia que, hoje em dia, muito fcil fazer um teste de paternidade e obter resultados
confiveis, ou que o mapeamento e seqenciamento do genoma humano pode abrir portas para a cura de muitas doenas.
Para ter acesso a todas as informaes contidas no DNA, o primeiro procedimento a ser realizado seu isolamento. A
tcnica de isolamento foi desenvolvida h mais de 50 anos e foi a partir dela que os cientistas conseguiram desvendar a
estrutura da molcula de DNA em 1953. Mas onde o DNA est presente e como podemos isol-lo?
Objetivo
Conhecer como se d o procedimento de extrao do DNA;
Identificar o local onde o DNA encontrado;
Visualizar um aglomerado de fitas de DNA.
Material
1/4 de cebola grande e/ou 1/3 de banana e/ou 1 morango;
01 potinho graduado;
01 coador de ch ou peneira;
sacos plsticos para macerao;
Tubos de ensaio;
copos de vidro transparente;
01 colher de ch;
lcool comercial 98% gelado (a cerca de 10o C);
detergente (sem cor) de lavar loua;
gua quente (60o C);
pano para limpeza;
bastes de vidro, plstico ou madeira.
soluo de lise (gua + detergente + sal de cozinha);
Procedimentos
Colocar o material dentro de um saco plstico e macer-lo pressionando-o com os dedos at obter uma pasta
quase homognea. Transferir a pasta para um copo. Se necessrio acrescentar uma quantidade mnima de gua;
Em outro copo misturar 150 ml de gua quente, uma colher (sopa) de detergente e uma colher (ch) de sal de
cozinha. Mexer bem com o basto de vidro, porm devagar para no fazer espuma.
Colocar cerca de 1/3 da mistura de gua, sal e detergente sobre o macerado. Misturar levemente com o basto.
Incubar em temperatura ambiente por 30 minutos. Mexer de vez em quando com o mesmo basto.
Colocar uma peneira sobre um copo limpo e passar a mistura pela peneira para retirar os pedaos de morango que
restaram.
Colocar metade do lquido peneirado em um tubo de ensaio. Colocar apenas cerca de 3 dedos no fundo do tubo.
Despejar delicadamente no tubo (pela parede do mesmo), sobre a soluo, dois volumes de lcool comum. No
misturar o lcool com a soluo. Aguardar cerca de 3 minutos para o DNA comear a precipitar na interfase.
Usar um palito de vidro, plstico ou madeira para enrolar as molculas de DNA. Gire o palito na interface entre a
soluo e o lcool.
Questes
1. Por que o material precisa ser macerado para isolar o DNA?
2. Em que etapa do procedimento ocorre o rompimento das membranas das clulas do morango? Explique.
3. Qual a funo do sal de cozinha?
4. Qual o papel do lcool?
5. Por que voc no pode ver a dupla hlice do DNA extrado?

6. Considerando os procedimentos da extrao do DNA genmico, voc espera obt-lo sem quebras mecnicas e/ou
qumicas?
7. De que composta a molcula de DNA?

]RECOMENDAES
Os alunos devero responder a questo prvia individualmente e por escrito antes de iniciar a
atividade. No final, o professor dever discutir novamente a questo com os alunos;
Comentar com seus alunos que o procedimento para extrao do DNA em clulas animais
basicamente o mesmo;
A totalidade do DNA extrado ser composta por vrias rplicas das mesmas molculas, uma
vez que inmeras clulas do mesmo organismo sero degradadas para que possamos
visualizar o DNA;
Chamar a ateno dos alunos para o fato de que a estrutura de dupla hlice do DNA s pode
ser visualizada de modo indireto e por meio de metodologias sofisticadas. O que ser
observado ao final do experimento so milhares de fitas de DNA juntas.

OBSERVAES
Explicao do procedimento e da utilizao dos reagentes utilizados no experimento.
Maceramento
A cebola (morango ou banana) deve ser macerada para que a parede celular (estrutura
espessa e rgida presente em clulas vegetais) seja rompida. A aplicao de fora mecnica pode
tambm romper a membrana celular de algumas poucas clulas, embora esta estrutura deva ser
desestruturada quimicamente, conforme explicado no prximo item. Alm disso, o maceramento
dissocia os tecidos, permitindo que a soluo de lise (detergente + sal) aja sobre um nmero maior
de clulas, liberando um grande nmero de molculas de DNA. Assim, a cebola (morango ou
banana) deve ser muito bem macerada para garantir um bom rendimento do experimento.
Peneirar
Peneirando o material possvel separar restos de estruturas celulares da soluo contendo
DNA de outras molculas.
Detergente
As membranas plasmtica e nuclear so compostas principalmente por lipdios. A funo do
detergente desestruturar as molculas de lipdio das membranas biolgicas. Desta maneira, as
membranas sofrem ruptura e todo o contedo celular - inclusive o DNA - fica disperso na soluo.

O lcool gelado, em ambiente salino, faz com que as molculas de DNA se


aglutinem, formando uma massa filamentosa e esbranquiada.
DNA
1. Extrao
Banho-maria
O aumento da temperatura promove uma maior agitao molecular, o que ajuda o detergente
a desestabilizar as membranas lipdicas. Alm disso, a alta temperatura inativa enzimas que podem
degradar o DNA (DNAses).
Sal
A adio do sal (NaCl) no incio da experincia proporciona um ambiente favorvel para a
extrao, pois o sal, depois de dissolvido na gua, se dissocia e contribui com ons positivos que
neutralizam a carga negativa do grupo fosfato do DNA. As molculas de DNA passam a no sofrer
repulso de cargas entre si, o que favorece sua aglomerao.
lcool
O lcool desidrata o DNA, de forma que este no mais fica dissolvido no meio aquoso. Alm
disso, o DNA tende a no ser solvel em lcool e, deste modo, suas molculas se agrupam. Como
o DNA tem menor densidade que os outros constituintes celulares, ele surge na superfcie do
extrato. Quanto mais gelado o lcool, menos solvel ser o DNA.
Preparao da soluo
Preparar a soluo de lise na jarra de vidro.
Colocar 450 mL de gua, adicionar duas colheres de sopa de detergente incolor e uma
colher de caf de sal de cozinha. Agitar bem para que o sal e o detergente se dissolvam
totalmente.

Respostas para as questes:

1. O morango precisa ser macerado para que os produtos qumicos utilizados para a extrao
cheguem mais facilmente em todas as suas clulas.
2. Na etapa 4. Os detergentes so normalmente empregados para dissolver gorduras ou lipdios.
Como a membrana celular tem em sua composio qumica uma grande quantidade de lipdios,
sob a ao do detergente, estes se tornam solveis e so extrados junto com as protenas que
tambm fazem parte das membranas.
3. O sal de cozinha ou NaCl (cloreto de sdio) fornece ons que so necessrios para a fase de
precipitao do DNA (veja complementao na resposta seguinte).
4. O DNA extrado das clulas do morango encontra-se na fase aquosa da mistura, ou seja,
dissolvido
na gua. Na presena de lcool e de concentraes relativamente altas de Na+ (fornecidas pelo
sal
de cozinha) o DNA sai de soluo, isto , ele precipitado. O precipitado aparece na superfcie da
soluo, isto , na interface entre a mistura aquosa e o etanol.
5. A molcula de DNA pode ser extremamente longa, mas seu dimetro de apenas 2
nanmetros,
visvel apenas em microscopia eletrnica. Assim sendo, o que se v aps a precipitao um
emaranhado formado por milhares de molculas de DNA.
6. O DNA genmico formado por molculas muito longas (lembre-se que cada cromossomo
formado por uma nica molcula de DNA). Por exemplo, o maior cromossomo humano possui
263 milhes de pares de bases. Assim sendo, praticamente impossvel extrair o DNA sem que
inmeras quebras mecnicas ocorram durante os procedimentos de extrao.