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Bioprospeccin, aislamiento y caracterizacin de microalgas del lago del

Jardn Botnico de Medelln.


Juan Diego Ortega Mesa; Maria Fernanda Gutirrez; Carolina Arias Gallego

Las microalgas son seres protistas microalgas al igual que su seguimiento de

unicelulares, en mayora, de metabolismo cintica molecular. Si bien, en hiptesis el

fotoauttrofa del que se conocen ms proyecto buscaba la produccin de

29000 especies, lo que indica su pigmentos a partir de microalgas

diversidad. Tienen una estructura simple,


Semana 0. Recoleccin de la muestra:
se reproducen por mitosis y pueden ir
El muestreo se llev a cabo el da 18 de
desde 1micormetro hasta varios
abril de 2016 al medioda en medio de
centmetros de longitud. Por otra parte, su
una poca de altas temperaturas y escasez
estudio comenz a principios del siglo
de lluvias en el lago del Jardn Botnico
XIX con el fitoplancton y hasta hoy en
de Medelln Joaqun Antonio Uribe tras
da se le han atribuido diversas
haber obtenido el permiso del directivo
aplicaciones y se ha reconocido su
encargado del lago. Como hiptesis se
importancia en la evolucin. En cuanto a
tiene que, debido a la notoria reduccin
sus cultivos, pueden producir gran
del nivel del lago por la sequa, la
cantidad de biomasa, tienen alta eficiencia
concentracin de microorganismos,
fotosinttica, requieren nutrientes simples
especialmente de microalgas, en el lago
y luz sin necesidad de tierra cultivable. En
era mayor por lo que posteriormente se
este proyecto se busca principalmente la
vio beneficiado el cultivo realizado. La
determinacin y caracterizacin de
muestra presenta un color verde-amarillo
ligeramente turbio. Para conservar la Chlamydomonas ya que son algas verdes

muestra, se deja en reposo hasta el da en lago con condiciones diversas. No se

siguiente en un lugar fresco y con el realiza una cuantificacin en la cantidad

recipiente tapado. Sin embargo, al cabo

de unas horas se nota una ligera

precipitacin verde similar a lama, pero

se ignora la causa y se agita el recipiente Imagen 2. Muestras recolectadas en el lago del


Jardn Botnico de Medelln.
para tener homogeneidad de nuevo.

Debido al color, se espera, segn Edward

G. Bellinger et all en el libro Freshwater


de muestra ya que es irrelevante a la hora
Imagen 1. Lago del Jardn botnico de
Medelln. Foto recuperada de: de realizar las disoluciones sucesivas,
https://www.youtube.com/ watch?
v=pYF4mOxku0Y mtodo por el cual se tratarn las
Algae: Identification, Enumartion and
muestras para el posterior cultivo en cajas
use as bioindicators en la tabla 1.8.
de Petri con medio CHU.
Ecological Diversity of Freshwater Green
Semana 0. Siembra de la muestra:
Algae, que la morfologa encontrada est

dentro de estas variedades: Scenedesmus,

Pedastrum,
Imagen 3. De izquierda a derecha: Diluciones de la muestra original en medio CHU lquido de 10 -
1
, 10-2 y 10-3. Caja de Petri con siembra de dilucin 10-1. Caja de Petri con siembra de dilucin 10-2.
Tetraedron y Caja de Petri con siembra de dilucin 10-3.
La muestra seleccionada es la primera de microscopio y observar una morfologa

izquierda a derecha en la imagen 2. De caracterstica de microalgas que se

esta se realizan disoluciones seriadas de mostrar con mayor detalle ms adelante.

las siguientes concentraciones en medio Una apreciacin general de la vista de los

CHU lquido en tubos de ensayo y agar microorganismos es, diminutas formas

en cajas de Petri: 10-1, 10-2 y 10-3. Para la que se movan aleatoriamente a travs del

disolucin 10-1, se hizo siembra por medio acuoso sobre el portaobjetos.

agotamiento; para 10-2, siembra por estra Visibles sin necesidad de tinciones debido

y para 10-3, siembra por agotamiento. Para a la presencia de clorofila (color verde)

ambos medios, se observa que las generada por los cloroplastos soportado

muestras no afectan el color de los por las condiciones necesarias para su

medios, por lo tanto, en los tubos se crecimiento: medio de cultivo con

contina viendo un lquido de leve nutrientes y gran cantidad de luz continua

consistencia transparente y las cajas de para facilitar la fotosntesis y favorecer su

Petri conservan su color caf traslcido crecimiento.

debido al agar.
Macroscpicamente, se ven pequeas

1 Semana: Observacin microscpica colonias dispersas de coloracin verde,

de dilucin 10-1 y determinacin este verde indica que son microalgas

morfolgica: clorofitas fotosintetizadoras. La colonia

en la Imagen 4 denota que no puede


En un primer instante, se sabe que
determinarse a simple vista qu
macroscpicamente no hay aparente
microalgas de encuentran en crecimiento,
contaminacin de la muestra. Eso se
por lo que
evidencia al mirar a travs del Imagen 4. Paste superior: Cultivo de
microalgas con dilucin de la muestra original
10-1 tras 1 semana. Parte inferior: Cultivo 10-1
tras 2 semanas.
es necesario realizar observaciones a
Tabla 1. Composicin de medio de cultivo
CHU.

nivel microscpico como se ve en la

Imagen 5. Chroococcus turgidus: En estas se

De acuerdo con la imagen 5 se pueden puede observar turgencia en cada

observar las siguientes morfologas que una de las clulas presentes.

permiten saber qu microalgas se

reproducen en la muestra tomada bajo

condiciones ptimas para el metabolismo


Scenedesmus quadricauda
de estos microorganismos.

Cenobios: tienen formas bien

definidas, de tamao y nmero de


Scenedesmus ecornis
clulas constante.

Filamentos: Clulas organizadas

en filas.
Semana 2. Inculo y preparacin del

medio de cultivo.

En esta parte del proceso, se realiza el

aislamiento del inculo que es una

muestra representativa de la colonia a

aislar depositada en un tubo de ensayo

con el medio preparado. Como fue

mencionado anteriormente el medio que

se consider como el ms acertado para el

cultivo fue CHU, del cual se muestra su

composicin en la Tabla 1, sin embargo,

no fue necesario realizar este

procedimiento pues ya estaba listo para

depositar en el erlenmeyer donde se


Crecimiento
realizara el seguimiento de la cintica del

microorganismo.

Por otra parte, se realiz el aislamiento

del inculo en un tubo de ensayo con el

medio tomando con el haza una parte de

un cultivo con significativa densidad de


Tras realizar la preparacin del medio y
microorganismos.
conservar bajo nevera, se incorpora el
Semana 3. Resultados. Cintica de los
medio del tubo de ensayo donde se
microorganismos.
encuentra el inculo al Erlenmeyer y se
Crecimiento

realizan las mediciones de absorbancia y


f(x) = 0.09x - 0.12
conteo celular durante 6 das. El

procedimiento se realiz de la siguiente

manera durante los 6 das: Se toma 1ml

de muestra del medio de cultivo en la

cmara de extraccin bajo condiciones de


Las siguientes graficas presentan la
asepsia incorporando este en una celda de
informacin sobre el crecimiento de las
espectrofotmetro. Leer la absorbancia a
microalgas en el seguimiento realizado
Grfica 1. Crecimiento de microalgas en 438nm y
por durante ocho das.
Absorbancia (a 438nm) vs. Tiempo (das).
posteriormente, de la celda tomar
Esta primera grafica es de absorbancia
10microlitros y depositar en la cmara de
(que fue la manera en que se midi la
Neubauer. Observar en el microscopio y
biomasa) vs el tiempo en das que dur el
realizar el conteo celular en los cuadros
seguimiento.
extremos. Vale aclarar que no todos los
La grfica nos permite identificar las
das se llev a cabo el conteo y por ello
fases del crecimiento de los
ste se tom como una experiencia que
microorganismos:
permiti ver la movilidad de las clulas y

una forma de sustentar el proceso de Fase de latencia: Es el periodo de

crecimiento, reproduccin y muerte adaptacin de un microorganismo al

celular. medio de cultivo. En este caso, podemos

observar que la fase de latencia esta entre


los valores de absorbancia de 0.097 y dividen. Se puede notar que la grfica

0.099. termina en crecimiento (fase exponencial)

debido a que el seguimiento no fue


Fase exponencial: fase en que se da el
durante tanto tiempo como para poder
aumento regular de la poblacin que se
comenzar a notar una fase de declinacin.
duplica a intervalos regulares de tiempo.

Podemos notar que la grfica tiene una


Velocidad especifica de crecimiento
fase exponencial de crecimiento mayo

entre los das 3 y 4 donde el valor de la

absorbancia vario en mayor cantidad: de


f(x) = 1.1x - 5.61

0.099 a 0.296.

Fase estacionaria: Cese de crecimiento

por agotamiento de nutrientes, entre otras En la curva puede notarse una

disminucin debido al cambio de la


Grfica 2. Tendencia lineal del crecimiento
de las microalgas y su respectiva ecuacin. absorbancia entre los das 1 y 2, que
causas. En la grfica se nota una fase

estacionaria entre los das cuatro y cinco

(donde no hay pendiente o es muy

pequea) Indicando que durante esos das

el crecimiento se detuvo o disminuyo

significativamente.
Tabla 2. Datos correspondientes a la Grfica
Fase de declinacin o muerte: Fase en la 3.
disminuyo de 0.097 a 0.097 por errores en
que el nmero de clulas que mueren es
el espectrofotmetro utilizado. Es por eso
mayor al nmero de clulas que se
que a partir de ahora utilizaremos la que va a tener la mayor pendiente, siendo

segunda grfica, despreciando el valor esta la velocidad especifica MAXIMA de

obtenido entre los das 1 y 2. crecimiento. En la ecuacin de la recta

obtenida es posible afirmar entonces que


La Grfica 2 slo tiene en cuenta los
la max es 1.1.
valores obtenidos del da 2 al 6, para

poder obtener una lnea de tendencia


Grfica 3. Velocidad especfica de crecimiento
acorde con el crecimiento de los determinada a travs del tiempo y el logaritmo
natural de biomasa.
microorganismos.
Conteo de clulas y concentracin de
La tercera grafica proporciona
clulas obtenidas:
informacin sobre la velocidad especifica
Primer conteo:
mxima de crecimiento (max) que se

obtiene a partir de tomar los valores del

logaritmo natural de la biomasa, en este

caso medida usando la absorbancia. As,

se tomarn rectas con esos valores, y las Cantidad total Imagen 5. Capturas del primer conteo en
de cmara de Neubauer.
pendientes de dichas rectas sern la microorganismos: 10
velocidad especifica de crecimiento. 10
Promedio: =2.5
4
Para la grfica se toman los dos valores

del Ln(Absorbancia) correspondientes a

los dos das entre los que se dio el mayor

crecimiento exponencial de las Tabla 3. Datos correspondientes al conteo


1.
microalgas (siendo estos los das tres y
C=N 104 dil
cuatro). De este modo se obtiene la recta
La dilucin se despreciar. Entonces se
tiene que:

C=2.5 104

celulas
C=25000
ml

Segundo conteo:

Se us el Imagen 6. Capturas del ltimo conteo en


cuadro del cmara de Neubauer.
centro. Se
contaron 28 unidades de microorganismo.
Tabla 4. Datos correspondientes al conteo 28
2. Promedio: =1.12
25
Cantidad total de microorganismos: 17
N
17 C= 6
dil
Promedio: =4.25 (4 10 )
4
Nuevamente se desprecia la dilucin,
C=N 104 dil
entonces se tiene que:

La dilucin se desprecia nuevamente. 1.12


C=
Entonces se tiene que: 4 106

C=4.25 10 4 celulas
C=280000
ml
celulas
C=42500
ml
Conclusiones.

A pesar de la variedad de especies de

microalgas existentes en la naturaleza, se

obtuvo como resultado de esta

experiencia prctica que el agua del

Jardn Botnico de Medelln est


Ultimo conteo:
compuesta por algas verdes clorofitas
fotosintticas con una alta capacidad para utilizado. El mtodo de diluciones

reproduccin celular debido a su mitosis. seriadas requiere paciencia pero brinda

Si bien no hay una alta diversidad mayor especificidad para los cultivos.

morfolgica en este y se asume que lagos


Referencias.
con caractersticas similares al trabajado
Hoek, C. Van den, Mann, D.G., Jahns,
pueden tener el mismo tipo de algas
H.M. (1995). Algae. An introduction to
encontradas. No se realiz produccin de
phycology. Cambridge University Press.
pigmentos como fue propuesto
Cambridge.
inicialmente debido al trabajo en baja

escala. Quevedo, C., Morales, S., Acosta A.

(2008) Crecimiento de Scenedesmus sp


Durante los procedimientos realizados en
en diferentes medios de cultivo para la
las practicas se llev a cabo
produccin de protena microalgal.
correctamente los mtodos de siembra en
Revista Vitae. Medelln, Colombia.
las cajas de Petri, los procedimientos de
Recuperado de:
esterilizacin, las condiciones de
https://aprendeenlinea.udea.edu.co/revista
incubacin y el manejo de implementos
s/index.php/vitae/article/viewFile/762/65
como el microscopio.
4
Igualmente es notable que, las
(s.f.) Microalgas. Instituto de biologa,
condiciones de incubacin fueron las
Universidad de la repblica de Uruguay,
adecuadas evidenciado por la presencia
Uruguay. Recuperado de:
de clulas turgentes y por la no presencia
limno.fcien.edu.uy/pdf/teorico_microalga
de rastros de lisis. Estas condiciones
s.pdf
fueron brindadas por el medio de cultivo
Fernndez, J.M. (2014) Microalgas: 207/tema-1---generalidades/1-1-

definicin y caractersticas. Universidad microalgas.html

de Almera, Espaa. Recuperado de:

http://www.ual.es/~jfernand/ProcMicro70801