(BP335)
MANUAL TERICO-
TERICO-PRTICO DE PROCEDIMENTOS
BSICOS EM MICROBIOLOGIA MDICA
3 EDIO
REALIZAO
REALIZAO
Professora
Professora: Dr Cristina Leise Bastos Monteiro (Coordenadora)
Professora:
Professora: Dr Laura Lcia Cogo
Professora:
Professora: Dr Izabel Galarda
Acadmico:
Acadmico: Fernando Carlos Bortolozzi Filho
CURITIBA
2010
SUMRIO
2
A SEGURANA DOS ALUNOS NAS AULAS PRTICAS DE
BACTERIOLOGIA E MICOLOGIA
3
10. Jamais colocar a pipeta usada sobre a bancada ou mesa de trabalho. Ela deve ser
colocada em recipientes que contm desinfetantes (Lisoform, hipoclorito de sdio a
2%, etc.), bem como algodo para vidro (para no quebrar a ponta da pipeta)
disponvel em cada mesa.
11. Evitar a formao de aerossis, que so micropartculas que contm uma quantidade
extremamente pequena de lquido (gua, saliva, etc.) e algumas partculas infectantes
(vrus, esporos bacterianos, etc.). Estes aerossis podem cair sobre a mesa
contaminando-a, ou ainda ficarem suspensos no ar e serem inalados, promovendo um
possvel ciclo de infeco. Tais partculas podem se formar em procedimentos como
flambagem da ala metlica, flambagem de pinas, abertura brusca de tubos ou
frascos com tampa de presso, agitao de tubos com as mos, centrifugao de
tubos abertos, manipulao incorreta de seringas, homogeneizadores, etc.
12. Ao trmino do trabalho:
a) Desinfetar a bancada com um desinfetante disponvel (hipoclorito, lcool 70%,
clorexedine, lcool iodado, etc.).
b) Lavar as mos e antebraos com gua e sabonete lquido. Em seguida utilizar, de
preferncia, soluo degermante base de polivinilpirrolidona-iodo (PVPI) a 10%.
Enxugar com toalha descartvel. Em seguida aplicar lcool 70% nas mos para dar
continuidade desinfeco.
Observao: em caso de acidente, como de pipetas contaminadas, placas e frascos com
material patolgico ou cultura de microrganismos obrigatrio:
a) Derramar sobre o material quebrado um desinfetante (por exemplo lcool 70% ou
clorexedine).
b) Cobrir com toalha de papel.
c) Deixar em contato, no mnimo, por uma hora antes de remover o vidro com uma pina
e com a mo enluvada absorver o lquido com papel toalha, acondicionar em sacos
apropriados e a seguir autoclavar.
4
INTRODUO
Micrbio: termo usado em 1878 por Charles Emmanocl Sedillot (cirurgio francs).
5
reas de aplicao da microbiologia
6
Posio entre os seres vivos
Aps a descoberta dos microrganismos, ficou claro que eles mostravam todas as
combinaes possveis das propriedades dos vegetais e animais, os dois reinos de seres
vivos admitidos na poca, aparecendo vrios absurdos como por exemplo, os fungos foram
classificados como vegetais porque eram imveis, quase no apresentando outras
propriedades dos mesmos sendo tambm que nenhum fungo possui clorofila.
Para evitar a distribuio arbitrria dos grupos intermedirios (entre plantas e
animais), o cientista alemo Ernest Haeckel, discpulo de Charles Darwin em 1866, props o
estabelecimento de um terceiro reino, para eliminar a confuso existente em relao
posio dos microrganismos e para lhes proporcionar uma posio no mundo vivente. Este
terceiro reino foi chamado Protista (da palavra grega que significa primitivo ou primeiro).
O Reino Protista compreendeu as algas, protozorios, fungos e bactrias. .Algumas
vezes os seres classificados em protistas eram denominados Protistas superiores e
Protistas inferiores fundamentando-se em sua estrutura celular. Os superiores possuem
clula eucaritica, como os protozorios, fungos e algas, com exceo das algas azul-
esverdeadas. Os protistas inferiores so procariticos: 'bactrias e algas azul-esverdeadas.
Desde o conceito original deste terceiro reino de seres vivos tm sido desenvolvidos
numerosos critrios para determinar mais adequadamente onde classificar estas microvidas.
Uma abordagem a respeito da classificao microbiana foi oferecida por Stanier e
Van Niel em 1941. Eles propuseram outra designao para outro reino chamado Monera,
que deveria conter algas azul-esverdeadas e as bactrias. As outras algas e protozorios
deveriam permanecer como pertencentes ao reino Protista. Os vrus, no entanto, ainda
permaneciam como um enigma.
Em 1969 foi proposto por Whittaker um outro sistema classificatrio de seres vivos,
compatvel com os recentes estudos ultraestruturais, bioqumicos, genticos e os principais
modos de nutrio: fotossntese, absoro e ingesto. Os cinco reinos de Whittaker so:
Plantae, Fungi, Animmalia, Protista e Monera. Os microrganismos so encontrados em trs
dos reinos:
Monera (bactrias e algas azuis esverdeadas);
Protistas (outras algas e protozorios);
Fungi (fungos: leveduras e bolores).
7
Classificao dos microrganismos
A classificao dos seres vivos serve a vrios propsitos, entre eles a de estabelecer
critrios necessrios para a identificao e acima de tudo, eliminar confuses. A
classificao dos microrganismos apresenta problemas peculiares podendo se basear em
muitas caractersticas. De uma maneira geral as classificaes podem ser: Naturais ou
Filogenticas e Artificiais ou Chaves.
Nas Chaves as caractersticas descritivas so organizadas de tal forma que um
organismo em estudo ser prontamente identificado. Os organismos agrupados numa chave
no precisam necessariamente apresentar relao filogentica; eles so listados juntos
porque apresentam algumas caractersticas em comum, facilmente identificveis. Ser
perfeitamente razovel, por exemplo, colocar numa chave um grupo de bactrias
formadoras de pigmento vermelho, tais como Serraria marcescens e as Sulfobactrias
prpuras. Todavia, este agrupamento ser de muita utilidade, pois um pesquisador com a
responsabilidade de identificar uma cultura com pigmento vermelho, imediatamente ter seu
trabalho reduzido a poucos tipos bacterianos.
Na classificao filogentica, agrupa-se tipos aparentados, isto , aqueles que tem
um ancestral em comum.
Durante os 100 anos da microbiologia como cincia, tm surgido muitas
classificaes. Infelizmente no existe um sistema classificatrio inteiramente aceitvel para
todos os microrganismos, principalmente para as bactrias. Dependendo da autoridade
consultada, so observadas vrias inconsistncias. De tempos em tempos so propostos
novos sistemas no aceitos em sua totalidade internacionalmente.
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a) Algas
b) Protozorios
c) Fungos
2. NATUREZA E
ESTRUTURA Procariticos Eucariticos
CITOPLASMTICA
Correntes
Ausentes Presentes
citoplasmticas
Pinocitose Ausente Presentes
Mesossomos Presentes Ausentes
Dispostos em membranas,
Ribossomos Dispersos no citoplasma retculos endoplasmticos
e cloroplastos
Mitocndrias Ausentes Presentes
Cloroplastos Ausentes Podem estar presentes
Complexo de Golgi Ausentes Presentes
Vacolos limitados por
Ausentes Presentes
membranas
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3. ESTRUTURAS
Procariticos Eucariticos
CELULARES EXTERNAS
Possui parte da No desenvolve atividade
Membrana plasmtica maquinaria respiratria e respiratria ou
fotossntese fotossntese.
Parede celular de
Presente * Ausente
Peptdeoglicano
Multifibrilas com
Organelas locomotoras Fibrilas simples
microtbulos
Pseudpodos Ausentes Presente em alguns
* ausente em Mycoplasma sp.
4. RELAO GUANINA +
Procariticos Eucariticos
CITOSINA
Mols de Guanina e
28 a 73 Cerca de 40
Citosina
Bactrias
O termo bactria, derivado do grego "gotinhas" foi introduzido em 1828 pelo alemo C. G.
Ehrenberg como nome genrico de alguns tipos bacterianos caractersticos.
Bactrias so organismos microscpicos, unicelulares e procariticos.
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Bergey' s Manual of Detenninative Bacteriology ao longo de muitas edies. A 9 edio do
manual de Bergey tem como ttulo: "Bergey' s Manual of Systematic Bacteriology".
O manual de Bergey representa mais de 70 anos de evoluo, sendo mais aceito
que qualquer outro sistema. Devido s incertas relaes filogenticas das bactrias, o
manual admite que sua principal aplicao seja determinativa, isto , permitir aos
pesquisadores determinar se ce11o microrganismo corresponde a uma espcie descrita. A
1 edio data de 1923, j tendo alcanado a 9 edio. Em cada edio subseqente, tm
sido feito vrios avanos significativos, inclusive o acrscimo de novas espcies e excluindo
outras.
Atualmente um dos esquemas da classificao semi-oficial disponvel o que foi
publicado na 9 edio do Bergey's manual de 1984. amplamente utilizada como padro
de referncia na taxonomia bacteriana. Ele reconhece o reino Monera de Whittaker,
chamando-o, no entanto, de Procaryotae, em virtude da natureza procaritica de suas
clulas.
Novos conhecimentos causaro uma grande diferena nas futuras publicaes a
respeito da classificao microbiana. Nos ltimos anos o sistema gentico das bactrias foi
estudado ao nvel molecular a fim de determinar a homologia entre o DNA das clulas. O
parmetro empregado com mais freqncia a porcentagem de molculas de guanina mais
citosina no contedo total de DNA. A composio das bases do DNA uma caracterstica
constante de uma determinada espcie e expressa em porcentagem de guanina mais
citosina sobre o total de mols das bases. Se dois organismos tm propores muito
diferentes de bases, obviamente no so muito relacionados. Centenas de espcies tm
sido caracterizadas desta maneira modernamente.
Em 1980 o Comit Internacional sobre Sistemtica Bacteriolgica, publicou uma lista
de aproximadamente 2500 espcies, substituindo uma lista anterior de 30000. Desde 1 de
janeiro de 1980 apenas a nova lista de nomes considerada vlida. A substituio das
denominaes abandonadas, o acrscimo de novas ou quaisquer outras alteraes, exigem
publicaes no International Journal of Systematic Bacteriology.
Bactrias:
Uma chave classificatria para bactrias estabelece 4 grupos bacterianos, em funo do
metabolismo de movimentao e das caractersticas da parede celular.
11
Vrus: Complexo molecular vivo, possuindo DNA ou RNA.
12
CAPTULO 1:
1: CONTROLE DOS MICRORGANISMOS
13
Sanitizao: usada em restaurantes e indstrias de alimentos, refere-se
eliminao dos microrganismos em utenslios e equipamentos para impedir a deteriorao
ou transmisso de infeces pelos produtos alimentares.
ESTERILIZAO
Calor
- Calor Seco
Flambagem
Forno de Pasteur (estufa)
Incinerao
- Calor mido
Pasteurizao
Tyndallizao ou Tindalizao
gua Fervente
Autoclavao
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Filtrao
- Velas
Chamberland porcelana porosa
Berkefeld infusrios
- Discos
Vidro
Amianto Seitz
- Membranas
Acetato de celulose: Millipore e HEPA
Nitrato de celulose
Radiaes
- Ultravioleta (UV) NO IONIZANTES
- Gama () - IONIZANTES
Agentes Qumicos:
- Lquidos lcoois, detergentes, lcalis, glutaraldedo.
- Gasosos brometo de metila, xido de etileno, formaldedo.
- Slidos pastilhas de formalina.
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CALOR SECO
a) Flambagem
a exposio do objeto chama de bico de Bunsen ou lamparina. Na tcnica
bacteriolgica utiliza-se a flambagem para esterilizar a ala de platina pelo
aquecimento at o rubro. As pinas, as pipetas, as bocas dos tubos e bales em que
se faz a semeadura so aquecidos na chama (chamuscadas) sem, no entanto, lev-
las ao rubro.
c) Incinerao
O mtodo de incinerao, do ponto de vista microbiolgico, consiste em destruir os
microrganismos junto com os materiais orgnicos onde eles se localizam. So
materiais removidos dos curativos, peas anatmicas, animais de experincia
infectados e mortos, etc., (h os incineradores usados na queima de lixo no
hospitalar). Os incineradores que possuem uma s cmara de combusto so
ineficazes e inadequados. Isto porque os materiais no so destrudos por completo,
contaminando a atmosfera por microrganismos e substncias txicas. O incinerador
16
deve ter, alm da cmara de combusto principal, uma cmara de combusto
secundria. Ideal quando a 1a cmara est a 800oC e a segunda aquecida no
mnimo a 1000oC.
A incinerao tem-se tornado um problema social e poltico em muitas comunidades,
principalmente europias. Isto porque, a queima em altas temperaturas de matria
orgnica e plstico, gera substncias altamente txicas, tais como as dioxinas.
Incineradores, na verdade, so indstrias de ultragifte ultravenenos expresso
cunhada pela comunidade cientfica para designar dioxinas e furanos.
Observao: o criminoso Agente Laranja usado na Guerra do Vietn era rico em
dioxinas (Fonte: Proteo no 11 vol. 03).
CALOR MIDO
a) Pasteurizao
Ato de pasteurizar. Processo pelo qual um determinado material (o leite, por
exemplo), aquecido a uma temperatura no elevada (62,8oC por 30 minutos ou
71,7oC por 15 minutos) e a seguir submetido a resfriamento brusco (em torno de
4oC), obtendo-se assim a morte dos germes patognicos, no caso do leite:
Salmonella, brucelas, estreptococos, bacilos da tuberculose, mas no a eliminao
total dos germes contaminantes (bactrias esporuladas). um processo de
desinfeco.
b) Tyndallizao ou Tindalizao
uma esterilizao fracionada.
Tyndall, o idealizador do processo, verificou que o aquecimento descontnuo, ou
seja, aquecimento a 100oC, durante 1 hora, em 3 dias consecutivos, intercalados por
perodos de incubao em temperatura ambiente, conseguia esterilizar a soluo em
estudo.
Os esporos resistentes germinam durante o tempo de incubao e so destrudos
nas subseqentes exposies ao calor.
A temperatura de tindalizao varia de acordo com o material a esterilizar. Alguns
meios de cultura bacteriolgicos, solues de carboidratos, solues de vitaminas ou
enzimas, etc., sero aquecidas temperatura que no altere as suas propriedades.
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c) gua em Ebulio
Os materiais ou objetos contaminados no podem ser esterilizados com segurana
pela simples exposio gua em ebulio. Embora as clulas vegetativas das
bactrias possam ser destrudas em poucos minutos, alguns esporos resistiro
durante muitas horas. A imerso em gua fervente quando usada para esterilizao
de instrumentos cirrgicos, seringas de injeo, etc., oferece o risco de
contaminao por esporulados. S deve ser usada em circunstncias emergenciais.
Pela fervura do material mergulhado em gua ou exposto ao vapor em autoclave
com vlvula aberta (vapor fluente) s se consegue uma desinfeco e no
esterilizao.
18
torneira. Com a continuao do aquecimento, haver aumento de presso acusado
pelo manmetro. Ao ser atingida a temperatura desejada, 120oC por exemplo,
marca-se o tempo. Aps esse perodo desliga-se a corrente eltrica. Para abrir a
autoclave, espera-se at que o manmetro abaixe para zero. S ento se abre a
torneira. O material sai da autoclave impregnado de umidade. Deve-se coloc-lo na
estufa 60oC para a secagem. H autoclaves mais modernas em que o material j
sai seco, como a que existe no departamento de Bioqumica da UFPR.
Observao: a autoclave e seu funcionamento sero mostrados em seminrios,
acompanhando os processos de preparao de material para a esterilizao.
Vantagens:
1. Aquecimento rpido.
2. Grande poder de penetrao em material denso.
3. Maior condutibilidade.
4. No deixa resduos txicos.
5. Mais econmico.
6. Termocoagulao das protenas, catalisada pela gua. O calor mido desnatura
protenas, quebrando ligaes qumicas envolvidas na manuteno da
conformao espacial das protenas, causando sua coagulao.
50 56
25 80
18 90
06 145
00 170
19
Eficincia Comparativa do Calor Seco e do Calor mido como Esterilizantes
20
Embora a temperatura e a presso sejam indicadas pelo termo-manmetro, todos os
laboratrios microbiolgicos fazem testes confirmatrios de esterilidade do material
processado.
Para tanto se pode recorrer a mtodos fsicos e biolgicos.
Nos mtodos fsicos usa-se:
1. Indicadores que tm por base a reao de um composto qumico quando
expostos a um parmetro necessrio esterilizao. Geralmente vm em forma
de fitas ou selos que mudam de cor na temperatura estabelecida.
2. Substncias qumicas em p (acondicionadas em ampolas de vidro) cujo ponto
de fuso conhecido. Aps a autoclavao, observar a substncia que deve
aparecer fundida.
Observao: para cada mtodo de esterilizao existem indicadores qumicos
especficos.
No mtodo biolgico usam-se esporos bacterianos altamente resistentes como os do
Bacillus stearothermophillus. Os esporos podem vir acondicionados em frascos com meio de
cultura ou impregnados em tiras de papel de filtro seco, numa concentrao de 106 esporos
em ambos os casos. Os esporos do Bacillus stearothermophillus morrem quando
submetidos a 121oC por 15 minutos.
Colocar os esporos na autoclave em pontos crticos, centro e fundo da cesta, pontos
em que a temperatura desejada obtida com maior dificuldade.
Aps a autoclavao, incubar a 55 a 57oC os esporos em caldo (ou no caso de usar
as tiras, transferi-las para um caldo) durante 24 a 48 horas. Caso haja turvao, indica que o
bacilo proliferou e que a autoclavao foi insatisfatria.
Os bioindicadores existem no comrcio sob o nome de Esporofars, Steritest e
outros.
FILTRAO
21
As tcnicas de filtrao so tambm usadas para recuperar pequenas quantidades
de bactrias presentes em grandes volumes de lquido, como, por exemplo, gua. Nestes
casos, aps a filtrao, a membrana colocada em meio de cultura adequado, as bactrias
vo proliferar dando colnias que podem ser quantificadas, estudadas e identificadas.
A filtrao pode ser aplicada na descontaminao de gases como o ar. O exemplo
disto dado pelo uso de tampes de algodo que obturam a boca de tubos, bales vazios
ou contendo meio de cultura. O algodo suficientemente poroso para permitir a entrada de
ar e impedir a entrada de germes. Outro exemplo a filtrao do ar nas cmaras asspticas,
salas de cirurgia, etc.
Numerosos so os dispositivos e materiais usados na tcnica da filtrao, como por
exemplo:
Ultrafiltrao
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Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) de Acetato de Celulose
24
- No alterar materiais como borracha, plstico, etc.
AGENTES QUMICOS
xido de Etileno
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anestesia e seringas sem danific-los, o que recomenda muito o seu emprego. Pode ainda
ser utilizado em metais, vidros e materiais eltricos.
O uso de xido de etileno requer equipamentos adequados de alto custo. O aparelho
esterilizador a ETO formado de um conjunto de trs unidades:
- Uma autoclave (cmara grande) tendo o gs ETO e vapor dgua.
- Um painel de controle onde est conectado o cilindro de mistura de gases.
- Uma cmara secadora onde o material, aps a esterilizao, obrigatoriamente
submetido aerao, que consiste na circulao de ar filtrado. O ar passando
pelos materiais faz a remoo dos resduos de gs retido nos mesmo.
Tendo condies adequadas de temperatura, presso de vapor dgua, tempo e
concentrao do gs, o ETO muito eficiente.
Condies:
Temperatura entre 49 e 60oC;
Tempo de exposio de 2 a 12 horas;
Concentrao do gs 450 mg/L;
Umidade de 20 a 40%.
xido de Etileno
Vantagens Desvantagens
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Formaldedo
Glutaraldedo
Age de modo semelhante ao formaldedo, mas menos txico e dez vezes mais
eficiente. Age lentamente porm efetivamente. Usado na desinfeco de endoscpios e
equipamentos de terapia respiratria.
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dissociao, da concentrao de ons hidroxila e do on metlico do lcali. O hidrxido de
clcio um deles. de alto poder desinfetante, usado em quartos de doentes, excretas,
vages, etc.
Metais Pesados: os mais usados so mercrio e prata. Ambos possuem boa atividade
antimicrobiana. O mercrio quando combinado a outras substncias, apresenta-se menos
txico ao organismo humano que o prprio metal. Por exemplo: mercrio cromo, Mertiolato.
A prata combinada com protenas antissptico de mucosas do nariz e garganta: Argirol,
Protargol. Estes metais agem inativando as enzimas bacterianas atravs do grupo sulfidrila.
28
CAPTULO 2:
2: TIPOS MORFOLGICOS DE BACTRIAS E
GRUPAMENTOS BACTERIANOS
Objetivos
Tipos Morfolgicos
COCOS
Coco-oval (alongado)
Exemplo: Streptococcus pyogenes.
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Pneumococo (em forma de gota, chama de
vela)
Exemplo: Streptococcus pneumoniae.
Fonte: Gonococo e Meningococo: Forma
Fernando Bortolozzi
riniforme (em forma de feijo ou rim)
Exemplos: Neisseria gonorrhoeae (G)
Neisseria meningitidis (M).
BACILOS
VARIAES BACILARES:
30
Exemplo: Fusobacterium nucleatum.
FORMAS ONDULADAS
Exemplo: Spirillum
b) Espiroqueta: corpo flexvel e mvel com o auxlio de filamentos axiais presentes sob a
camada externa.
31
c) Vibrio: em forma de vrgula, apenas um seguimento de espiral.
Treponema pallidum
Leptospira interrogans
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GRUPAMENTOS BACTERIANOS
NOMENCLATURA DO
FORMATO EXEMPLOS
GRUPAMENTO
Diplococos (dois a dois) 1. Neisseria gonorrhoeae
Neisseria meningitis
1 (GONOCOCO e MENINGOCOCO)
2. Streptococcus pneumoniae
2 (PNEUMOCOCO)
Estreptococos (cadeias)
Streptococcus pyogenes
Estafilococos (irregular ou
cacho de uva)
Staphylococcus aureus
Ttrades (cocos de 4 em 4
elementos, simetricamente) Micrococcus
Sarcina (8 elementos,
formando cubos
simetricamente) Sarcina (no visvel no plano do MO)
(Geralmente esporulam)
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3. Alguns bacilos podem agrupar-se em paliada, quando o movimento ps-
divisional de deslizamento:
Mycobacterium tuberculosis (PALIADA)
Corynebacterium diphteriae
34
CAPTULO 3:
3: MORFOLOGIA COLONIAL
Objetivos
Introduo
Definio
35
Bordas:
Lisa Denteadas
Lobadas Onduladas
Elevao:
Acuminada Espraiada
Centro-saliente Umbilicada
Centro-deprimida Papiliforme
Superfcie:
36
CAPTULO 4:
4: VERIFICAO DA PRESENA DE
BACTRIAS NO AR E SUA CONTAGEM ATRAVS DE
CULTIVO
Observao
Objetivos
Contagem
Tcnica
37
a. rea da placa de 10 cm de dimetro = 0,007854 m2.
b. Tempo de exposio: 30 minutos.
Exemplo: 10 UFC 0,007854 m2
x 1 m2
x = 1.273 UFC/m2
em uma hora: 1.273 0,5 hora
x 1 hora
x = 2.546 UFC/m2/h
38
CAPTULO 5:
5: PREPARAES MICROSCPICAS
Objetivos
Introduo
Preparaes a Fresco
Campo Claro
- Entre lmina e lamnula.
- Gota pendente.
Campo Escuro
- Entre lmina e lamnula.
Servem para observar a mobilidade e/ou presena de bactrias.
Preparaes Coradas
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Preparaes a Fresco
Nas preparaes a fresco os materiais lquidos como urina, exsudatos, LCR, meios
de cultivo lquidos, podem ser examinados tais como se apresentam ou centrifugados e
examinando-se o sedimento.
Quando se tem material espesso (patolgico ou de cultivo), deve-se dilu-lo em soro
fisiolgico estril.
Podem-se examinar as bactrias ao natural, com pouca luminosidade, mas como as
suas clulas tm um ndice de refrao prximo ao da gua, algumas vezes torna-se difcil
observ-las. Nesses casos recorre-se aos corantes vitais, atxicos (para no prejudicar a
mobilidade). Os mais usados so: azul de metileno, vermelho neutro, azul de Nilo, entre
outros, em soluo aquosa a 1%.
40
VISTA DE CIMA CORTE TRANSVERSAL
(APS A MONTAGEM)
Gota Pendente
Escavao (concavidade)
41
1. Esfregao: consiste em depositar o material a examinar no centro de uma lmina
e espalh-lo numa espessura apropriada. Deixar secar espontaneamente ou
numa estufa a 37oC. Se o material a examinar pela bacterioscopia for muito
espesso (patolgico ou cultivo), deve ser diludo em salina ou gua estril. Se for
material lquido e pobre em microrganismos, deve ser centrifugado (urina, por
exemplo); derrama-se o sobrenadante e examina-se o sedimento.
2. Fixao: tem por objetivo fixar o material lmina para que no se desprenda
durante os procedimentos ulteriores. A fixao pode ser feita a quente ou a frio.
Em ambos os casos h coagulao de clula bacteriana que a faz aderir
lmina.
A Quente
Pode ser feita serrando com a lmina a chama da lmpada
ou bico de Bunsen, duas a trs vezes, com a face que contm
o material voltada para cima, para no ter contato direto com a
chama.
Derrama-se lcool sobre a preparao e inflama-se.
Observao: a exposio excessiva ao calor deforma a morfologia da bactria e
com aquecimento insuficiente haver desprendimento do material.
A Frio
Para no alterar muito a morfologia bacteriana ou quando h
interesse de observar o aspecto citolgico do material, como
exsudatos, sangue, lquor, etc., usa-se fixao a frio, cobrindo
o esfregao com substncias qumicas:
- Mistura de lcool e acetona.
- Formol.
- Soluo de cloreto de mercrio, etc.
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Colorao Simples
Tcnica
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COLORAO DE GRAM
Tcnica
1. Cobrir o esfregao com Violeta de Genciana e deixar agir. (1 minuto)
2. Derramar o corante e cobrir com lugol. (1 minuto)
3. Lavar com gua.
4. Descorar pelo lcool (tempo crtico) - (15 segundos)
5. Lavar com gua.
6. Cobrir com fucsina de Ziehl diluda 1:10. (30 segundos)
7. Lavar com gua.
8. Secar.
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GRAM GRAM +
Microscopia: Rosa Microscopia: Roxo
Possui uma parede celular mais diversificada, Possui filamentos de teicoato, ligados
sem lipoteicoato muranato
1-2 camadas de peptidoglicano (5-10%) 15 a 20 camadas de peptidoglicano (90%)
(+ FINAS) (+ ESPESSAS)
Mais lipdeo (20%) e muitos aa Tem pouco lipdeo (2%) e poucos aa
Possui uma 2 membrana ancorada s Tem adjacente membrana plasmtica uma
camadas de peptidoglicano (chamada parede celular
membrana externa) externa parede celular
Formam ESFEROPLASTOS: quando a Formam PROTOPLASTOS: a membrana de
bactria perde a parece celular. Quando restam uma bactria gram +. Se perd-la, no
partes da PC, em local e condies adequadas, consegue refaz-la. Porm sobrevive s com o
essa PC pode ser refazer. protoplasto.
Mais polissacardeos e presena de lipdeo A Menos polissacardeos
formando os lipopolissacardeos (LPS***)
*** LPS: so pirognios exgenos (geram calor) No organismo humano, podem ser
produtores de febre. Quando os macrfagos fagocitam os produtos bacterianos, produzem
altas concentraes de fator de necrose tumoral. O TNF estimula a produo de Interleucina
1 (IL-1) por outros macrfagos e alguns leuccitos. Esses mediadores estimulam a
expresso de receptores no endotlio para que os neutrfilos migrem, via rolamento, para o
tecido conjuntivo em combate s bactrias patognicas. Alm disso, a IL-1 e o TNF
estimulam a produo de PGE-2 (prostaglandina E2) no hipotlamo, que controla a
temperatura corporal via AMPc. Com o aumento da temperatura corporal, protenas do
choque trmico so expressar e ativam a resposta e a atividade linfocitria. Ou seja, a
elevao da temperatura corporal melhora a resposta imune do indivduo frente a bactrias
patognicas. Outros efeitos do TNF e da IL-1 (quando elevados) so a sonolncia e a
inapetncia, o que explica porque o paciente geralmente fica acamado durante uma
infeco. Detalhes sero vistos na disciplina de Patologia Mdica Molecular (BP337).
45
lactamases, so capazes de destruir esse anel dos antibiticos por hidrlise, deixando o
mecanismo de ao antimicrobiano inativo. Ou seja, UM IMPORTANTE MECANISMO DE
RESISTNCIA AOS ANTIBITICOS! As principais bactrias que a produzem so os
estafilococos (Staphylococcus aureus principalmente), Haemophilus influenzae, Moraxella e
a maioria dos BGNs intestinais como a Escherichia coli. Estreptococos geralmente no so
capazes de produzir -lactamases. No entanto, em uma infeco tipo tonsilite por
Streptococcus pyogenes (Estreptococo beta hemoltico do grupo A de Lancefield produtor
de estreptolisina), por exemplo: esta bactria no produz -lactamases, mas algumas
bactrias da microbiota residente as produzem. Essas enzimas degradam o frmaco que iria
matar a bactria causadora da infeco e o medicamento acaba falhando. Por isso, muitas
vezes, mesmo para infeces estreptocccicas, deve ser prescrever um antibitico JUNTO
COM UM INIBIDOR DAS BETA LACTAMASES. At porque clinicamente no se sabe se
trata-se de uma infeco por estafilococos, estreptococos, Haemophilus, Moraxella, etc.
Prescreve-se um antibitico -lactmico com um inibidor de -lactamases que faz inibio
enzimtica e deixa essas penicilinases sem atividade cataltica. Ex: Clavulanato, Sulbactam,
etc. Eles inibem as -lactamases e deixam o antibitico agir (penicilina). Alm disso, muitas
vezes, a prpria bactria causadora da infeco pode ser produtora dessas enzimas.
Fucsina fenicada
Fucsina bsica 0,3 g
o
lcool 95 10 mL
Fenol fundido 5 mL
gua destilada 95 mL
Observao: em outras coloraes usa-se o fenol aproximadamente em
quantidade 5 vezes maior.
Diferenciador
lcool etlico 95o 99 mL
cido clordrico 1 mL
Corante de fundo
Soluo de azul de metileno.
47
Tcnica
COLORAES DE ESPIROQUETAS
48
Colorao Negativa (Mtodo de Burri)
Mordente Tanino 5g
gua fenicada a 1% 100 mL
49
Processo
50
Tcnica
51
CAPTULO 6:
6: MEIOS DE CULTURA
QUANTO PROCEDNCIA
QUANTO CONSISTNCIA
Slidos
Semi-slidos
Xaroposos
Lquidos
52
1. No metabolizado pelas bactrias de interesse mdico (apenas algumas
espcies marinhas o digerem).
2. Uma vez na consistncia de gel, s se liquefaz temperatura de 100oC (prprio
at para o cultivo de termfilas = 65oC a 70oC).
3. uma vez liquefeito, vai solidificar apenas ao redor de 45oC, fato que se aproveita
para cultivar bactrias incorporadas ao meio de cultura a esta temperatura. Em
seguida deixa-se solidificar (semeadura de Pour-Plate).
Outras substncias usadas para solidificar os meios de cultura so:
a) Gelatina.
b) Slica-gel.
a) A gelatina obtida a partir de ossena, uma protena rica em aminocidos.
Apresenta a desvantagem de ser hidrolisada por algumas bactrias, com o
que perde sua qualidade de gel. Tambm porque temperatura de 36oC
(temperatura prpria para o cultivo da maioria das bactrias de interesse
mdico) ela apresenta-se lquida.
b) A slica-gel obtida pela ao de HCl sobre silicato de sdio, formando cido
silcico. Tem a vantagem de apresentar composio qumica definida, no
possuir nenhum elemento nutritivo, ideal para solidificar os meios sintticos.
QUANTO COMPOSIO
53
QUANTO FINALIDADE
54
CAPTULO 7:
7: ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS
Objetivos
Introduo
Em microbiologia nada pode ser feito antes de isolar a bactria em cultura pura, ou
seja, a cultura deve ser de uma nica espcie. S ento que se pode caracteriz-la.
O cultivo de bactrias requer tcnicas asspticas adequadas, para evitar
contaminaes. Para isso devem ser observados os seguintes cuidados:
Os tubos e placas estreis ou com material em estudo somente devem ser
abertos prximos a uma chama onde se forma uma rea estril (ou se usar
cmara assptica).
Os procedimentos devem ser feitos de preferncia por trs da chama.
As alas ou agulhas devem ser flambadas imediatamente antes e aps o uso
(aps o uso, evitar o aquecimento brusco para evitar os aerossis). As alas
devem ser levadas ao rubro em posio vertical em relao chama de gs ou
lmpada de lcool.
As bocas de tubos, frascos, pipetas, etc., so flambadas ligeiramente antes e
aps a transferncia de material.
Nunca abrir os tubos ou frascos na posio vertical. Para semeadura em meios
lquidos, inclinar o tubo em um ngulo de aproximadamente 40o. O tubo com
meio slido, deixar na horizontal.
55
Isolamento em Placas
O isolamento em placas o mais usado para obter cultura pura de amostras que
contenham populao mista. Com semeadura por esgotamento (para descarregar a ala),
fazem-se estrias superficiais de lado a lado da placa.
Quando se tem material muito rico em bactrias (verificar pela bacterioscopia), pode-
se fazer estrias em quadrantes, flambando a ala na ltima estria do quadrante
anteriormente semeado.
Esgotamento
Ponto de recarregamento
56
prximas umas das outras e de tamanho pequeno. S no final haver espaamento maior
entre as colnias e estas tero o tamanho caracterstico da espcie.
Inicialmente o crescimento exponencial em relao ao tempo. Logo aps,
entretanto, a ordem de crescimento se torna muito complexa, devido proximidade das
clulas acumuladas. Esta proximidade cria uma situao que pode ser chamada
aglomerao fisiolgica na qual as clulas competem entre si pelos nutrientes disponveis
e afetam-se mutuamente pelo acmulo de produtos residuais.
O crescimento em colnias afetado no s pelas interaes celulares dentro de
cada colnia, mas tambm por interaes entre colnias vizinhas, conforme explicado
anteriormente.
Para a prxima etapa de identificao, vai se preferir as colnias bem separadas,
presumindo-se que so formadas por descendentes de uma nica clula, portanto
constituindo cultura pura.
Existem diversas maneiras de fazer estrias, dependendo da preferncia ou
habilidade do laboratorista. O importante que no final se consiga colnias isoladas.
Observao: cultura pura a condio indispensvel para caracterizao e
identificao de bactrias.
Identificao de Bactrias
Objetivos
57
CAPTULO 8:
8: PROVAS BIOQUMICAS DIFERENCIAIS
Provas de Fermentao
Fermentao da Glicose
Fermentao da Lactose
Fermentao da Sacarose
Fermentao do Manitol
58
Caldo simples 1000 mL
Soluo de carboidrato a 10% 100 mL
Vermelho de fenol (indicador de pH) 2 mg
Dentro do tubo com meio de cultura h um tubo pequeno, de boca para baixo
(tubinho de Durham) que vai servir para captar os gases que se formam na decomposio
do carboidrato, em casos que a bactria elaborar a enzima formiase e que vai desdobrar o
cido frmico (metanico) em H2 e CO2.
O FORMIASE
HC H2 + CO2
OH
Meio de cultivo:
gua peptonada de frmula:
Peptona (triptofano) 10g
gua 1000 mL
O triptofano quando metabolizado por desamimao pela enzima triptofanase, libera
indol livre (benzil pirrol), cido pirvico e NH3.
Uma das tcnicas de verificar a presena do indol extra-lo da fase aquosa por
meio de ter e evidenci-lo por meio do reativo de Ehrlich.
TRIPTOFANASE
TRIPTOFANO INDOL + NH4+ +
59
Tcnica
Resultado
Resultado
60
PROVA DO GS SULFDRICO H2S
O meio de cultivo para esta prova contm composto sulfurado (cistena, metionina ou
tiossulfato) e um indicador de reao (sal de metal pesado: ferro, chumbo, etc.).
O substrato sulfurado vai ser hidrolisado pela enzima dessulfidrilase, liberando S na
forma de H2S. A seqncia de etapas que conduzem produo e deteco do H2S a
seguinte:
1. Liberao do S a partir do composto sulfurado;
2. Acoplamento do S (S-2) com o on H (H+) para formar H2S;
3. Deteco do H2S pelos sais de metais pesados na forma de sulfeto do metal
pesado que preto.
Prova positiva = meio de cultivo enegrecido.
PROVA DA UREASE
Uria
61
PROVA DE VM (VERMELHO DE METILA) E VP (VOGES-PROSKAUER)
Lactato acetil-metil-carbinol
Tcnica de VM
62
Tcnica de VP
PROVA DA GELATINASE
63
Na maioria das espcies essa reduo no prossegue alm do estgio de nitritos:
Tcnica
Resultados
RESUMO
64
2a etapa (aps o Zn) Cor vermelha Prova negativa
PROVA DA MOBILIDADE
Na pgina 66, consta uma tabela parcial, simplificada, com algumas provas
bioqumicas e respectivos resultados para bacilos Gram negativos.
65
66
Estas so algumas das provas feitas com o substrato colocado separadamente em
tubos de cultivo individuais. Existem, no entanto, meios que so compostos por diversos
substratos num nico tubo:
1) gar ferro Kligler (KIA) = glicose, lactose, H2S.
2) gar trplice acar (TSI) = glicose, sacarose, lactose e H2S.
3) Baracchini = glicose, lactose, sacarose, uria e H2S.
4) Rugai modificado (IAL) = indol, sacarose, fenilalanina, glicose, H2S, uria, lisina,
motilidade.
Detalhes de composio e interpretao dos resultados do meio Baracchini sero
dados no diagnstico das infeces intestinais.
Alm das provas bioqumicas, descritas acima, existem inmeras outras e a escolha
vai depender do microrganismo a identificar e da disponibilidade de meios de cultura no
laboratrio. Tambm sero levados em considerao os seus custos e a complexidade dos
testes.
Observao: existem disponveis no comrcio os chamados Sistemas Compactos de
identificao de bactrias. As vantagens destes sistemas so:
1. Longo prazo de validez dos meios de cultura, at um ano, o que no ocorre com
os meios convencionais.
2. Precisam de pouco espao para armazenamento e incubao.
3. Caractersticas de crescimento facilmente observadas.
4. Com o registro dos resultados e programas de computao, a identificao torna-
se fcil e precisa.
Entre as desvantagens podem-se citar os custos elevados quando forem
necessrias dez ou mais provas diferenciais.
Alm disso, alguns microbiologistas empregam um nmero mnimo de provas na
identificao de certas bactrias que apresentam aspectos coloniais e bacterioscpicos
altamente caractersticos, j no isolamento primrio. Por exemplo: alguns bacilos Gram
negativos fermentadores de lactose podem ser identificados com poucas provas
bioqumicas, como a Escherichia coli.
Ademais, uma identificao correta no depende, algumas vezes, apenas das provas
bioqumicas diferenciais (como nos Sistemas Compactos). Estas devem somar-se s
caractersticas das colnias, quanto ao tamanho, cor, textura, formato, reao hemoltica,
etc., propriedade tintorial pelo Gram, morfologia da clula bacteriana e grupamento e s
reaes sorolgicas, para a identificao final confivel, como por exemplo, na identificao
da Salmonella.
67
Aparelhos automatizados. Os laboratrios de grande porte onde, por exemplo, so
feitos, em mdia, 150 culturas de urina por dia, tm o seu trabalho facilitado pelos aparelhos
automatizados. Estes podem revelar, em algumas horas (6 12h), o biotipo da bactria
isolada e o antibiograma, saindo o resultado no impresso computadorizado.
Longe de desaprovar os progressos da tecnologia moderna, que prtica e
indispensvel atualmente, e no fazendo apologia das tcnicas convencionais, precisamos
admitir que os futuros bacteriologistas no tenham a satisfao de conhecer o mago da
bactria, as caractersticas de seus componentes celulares, variando com as condies que
se lhe oferece. As suas mutaes, as surpresas com o surgimento de resistncia a um
antibitico. Conhecero apenas os biotipos das bactrias, fornecidas pelos clculos
eletrnicos e impressos computadorizados.
Fleming, ao observar a ao inibidora de um fungo contaminante sobre os
estafilococos em isolamento numa singela placa de Petri, descobriu a penicilina que
revolucionou a medicina. No a teria descoberto, talvez, se estivesse usando os mtodos
sofisticados e apenas apertando os botes de um computador.
68
CAPTULO 9:
9: MICROBIOTA NORMAL DO ORGANISMO
HUMANO
Objetivos
Introduo
O termo microbiota normal refere-se aos microrganismos presentes regularmente
em determinados locais do corpo. Se removidos, prontamente se recompe. a tambm
chamada microbiota residente. De 10 a 20% das pessoas normais da comunidade extra-
hospitalar, so portadoras de Staphylococcus aureus, em concentrao elevada, na
nasofaringe. Esse estado de portador assintomtico que pode ser persistente, intermitente
ou transitrio, pode alcanar 60 a 90% das pessoas em atividades hospitalares. Os surtos
ocasionais devidos ao Staphylococcus aureus, principalmente em enfermarias re recm
natos, podem ser rastreados e relacionados com a pele e fossas nasais das pessoas que
trabalham nestes locais.
H tambm a microbiota transitria, que pode ser constituda por microrganismos
no patognicos (de baixo potencial patognico) ou alto potencial patognico e que habitam
a pele e mucosas por horas, dias ou semanas.
A microbiota residente benfica quando evita a colonizao pelas patognicas, por
diversos mecanismos: competio por substncias nutritivas, inibio por produtos
metablicos txicos, competio por receptores das clulas do hospedeiro, etc.
A microbiota normal tambm pode provocar doenas nos seguintes casos:
1. Quando deslocada do seu ambiente para outros rgos ou tecidos. Exemplo:
Streptococcus do grupo viridans incuo na orofaringe, causa endocardite quando
se instala no corao.
2. Provocando enfermidades em pessoas debilitadas ou imunodeprimidas.
69
A PELE
A pele possui uma microbiota residente bem definida. Porm, pela sua exposio ao
meio ambiente, tem facilidade de apresentar a microbiota transitria. O microrganismo
predominante o Staphylococcus epidermidis, com cerca de 103 a 104/cm2 de pele. A
maioria est localizada no extrato crneo, outros habitam folculos pilosos e atuam como
reservatrio para restabelecimento aps a lavagem.
Staphylococcus epidermidis
Corynebacterium sp.
Pseudomonas aeruginosa
Micrococcus
Streptococcus do grupo viridans
Enterococcus
Staphylococcus aureus
Mycobacterium no patognico" (em regies ricas
em secrees sebceas)
TRATO RESPIRATRIO
OROFARINGE
70
A cavidade bucal apresenta uma das mais concentradas e variadas populaes
microbianas (29 espcies) e cuja localizao principal est no dorso da lngua, sulco
gengival e placa dentria. A contagem bacteriana em material da lngua apresenta nmeros
que variam de 43 milhes a 5,5 bilhes por ml de saliva. Do sulco gengival e da placa a
quantidade pelo menos 100 vezes maior, aproximadamente 200 bilhes por grama. Os
estreptococos constituem o grupo mais numeroso, a metade das viveis. (Microbiologia
Oral, Burnet, Sherp, Schuster 4a edio).
MUCOSA NASAL
Staphylococcus epidermidis
Staphylococcus aureus
Streptococcus pneumoniae
Streptococcus do grupo viridans
Neisseria sp.
Haemophilus sp.
71
TRATO GNITO-URINRIO (TGU)
PRTICA
1o dia
Para coletar o material da pele do queixo, da testa, aba do nariz e fossa nasal. Usar
swab ou zaragatoa, atritando a rea em estudo (individualmente em cada rea). Em seguida
deslizar o swab em estrias na superfcie do meio de cultura, ocupando toda a rea da placa.
Mos
Com um pincel, dividir o fundo da placa em 4 partes. Marcar as partes com letras
para identificar a rea semeada:
S = sujo.
L = lavado.
E = escovado.
D = com degermante.
72
1. Com o dedo indicador (sem lavar) fazer estrias diretamente sobre o meio na parte
S.
2. Em seguida, lavar as mos com sabo normalmente. No enxugar. Com o
mesmo dedo fazer estrias na parte L.
3. Ensaboar as mos e escovar os dedos. Enxaguar. No enxugar e passar na
parte E.
4. A seguir passar um anti-sptico disponvel. Enxaguar. Fazer estrias sobre a parte
D.
Colocar as placas semeadas na estufa a 37oC.
Escovao Recolonizao
Degermante e gua
2o dia
73
5. Se houver crescimento de colnias com caractersticas de estafilococos, ou seja:
de 1 a 3 mm de dimetro, brancas ou amarelas, opacas, brilhantes, convexas
altas, circulares, bordas lisas e superfcie lisa, prosseguir com a caracterizao
utilizando as provas de Identificao Presuntiva dos estafilococos de interesse
clnico.
3o dia:
dia: Identificao Presuntiva de Estafilococos da Pele e Mucosa Nasal
1 PROVA: CATALASE
Fonte: Google
74
Esta prova diferencia os estafilococos de outros cocos Gram positivos, como os
estreptococos.
CATALASE + ESTAFILO
CATALASE ESTREPTO ou outro tipo de coco.
2 PROVA: PLASMOCOAGULASE
Fonte: Google
Resultados
3 PROVA: NOVOBIOCINA
um antibitico. Ele vai testar a sensibilidade dos ENPC para fazer a diferenciao
via halo de inibio. Semeia-se a colnia de ENPC em uma nova placa de gar sangue e
coloca-se um disco de novobiocina no centro. Incuba-se. Se houver um halo de inibio
(menor que 14mm), dizemos que a bactria sensvel novobiocina. Se no houver, ela
resistente. Atualmente so conhecidas outras espcies de ENPC que tambm so
resistentes novobiocina, mas no de interesse mdico to importante.
Resultados
76
Fonte: Google
RESUMO:
Catalase + estafilo Plasmocoagulase + Staphylococcus aureus
Plasmocoagulase ENPC Novobiocina S S. epidermidis
R S. saprophyticus
Catalase estrepto ou outro coco
77
Para diferenciar as trs principais espcies, pode se utilizar o seguinte esquema:
GAR SANGUE
Meio diferencial e no selietivo (muito enriquecido, uma vez que possui protenas e
outros substratos provenientes do sangue). A bactria que crescer pode apresentar
hemlise do sangue ou no. No caso de hemlise total, vai haver destruio dos glbulos
vermelhos aparecendo um halo claro ao redor das colnias.
Composio do ASA: gelose simples acrescida de 5 a 10% de sangue desfibrinado
de carneiro.
Extrato de carne 1g
Peptona 10 g
NaCl 75 g
Manitol 10 g
gar 15 g
Vermelho de fenol 0,025 g
gua 1000 mL
78
CAPTULO 10:
10: DIAGNSTICO LABORATORIAL ATRAVS
DO ISOLAMENTO E CARACTERIZAO DOS AGENTES
ETIOLGICOS DAS INFECES
Objetivos
79
Introduo
80
CORRELAES CLNICAS:
Exsudato: cor opaca, muitas protenas, muitos leuccitos, muita desidrogenase ltica (LDH,
uma enzima que converte o lactato em piruvato e vice versa, alm de ser uma enzima
gluconeognica). Uma caracterstica muito importante a presena de POUCA GLICOSE.
Uma vez que h presena de bactrias, a glicose estar diminuda. Ela o principal
carboidrato utilizado no metabolismo bacteriano, e uma das enzimas que participa desse
processo a LDH. Os leuccitos presentes esto promovendo uma resposta imunolgica
imediata frente aos microrganismos. O principal deles nesse caso o neutrfilo, que a
primeira linha de defesa do organismo e vem da fase de rolamento sobre o endotlio capilar,
como ser detalhado na disciplina de Patologia Mdica Molecular (BP337).
Para caracterizar um exsudato tem que haver mais de 3g/dL de protena, mais de 103
leuccitos/L, mais de 200UI de LDH e menos de 45mg/dL de glicose.
Quando h um lquido suspeito, vindo de uma cirurgia, de uma puno pleural, de cavidades
diversas, para caracterizar se o lquido um exsudato ou um transudato o exame que feito
no Brasil a CULTURA (nos mais diferentes meios slidos e lquidos), para pesquisar se h
presena de microrganismos. Os exames bioqumicos como glicose e LDH so utilizados
em secrees mais nobres, como o lquor (para caracterizar uma meningite, por exemplo).
Alm da microbiologia, os lquidos de cavidades devem ser encaminhados Anatomia
Patolgica para averiguar a presena de clulas neoplsicas por exame de citologia
onctica (o lquido pode ter se acumulado devido a uma metstase).
Coleta do material
81
Em localizao profunda esto a osteomielite, meningite, sinusite, promiosite,
infeces nas articulaes e outras colees fechadas de pus.
Nestes recorre-se puno aspirativa do exsudato purulento com seringa e agulha
estreis. O local da puno deve ser rigorosamente descontaminado com sabo cirrgico ou
outro anti-sptico adequado.
Nas endocardites e septicemia coleta-se o sangue para hemocultura.
Leses superficiais
Nas formas superficiais, tais como furnculo (ou outras piodermites: impetigo, ectima,
etc.) segue-se o seguinte esquema, observando rigorosa assepsia:
1) Descontaminar a superfcie do abscesso com o auxlio de uma gaze estril,
embebida em anti-sptico ou salina estril.
2) Secar com gaze estril.
3) Com um objeto perfurocortante (agulha, lanceta, etc., estreis) levantar a afastar
a pelcula ou crosta superficial.
82
4) Coletar o material purulento da profundidade da leso com swab (ou aspirar com
seringa) tendo o cuidado de no tocar as bordas da pele adjacente.
Observao: em caso de leses abertas, remover a secreo superficial com gaze
estril com salina, para eliminar os contaminantes.
Exame laboratorial
Bacterioscopia
Cultivo
Na nossa aula prtica o cultivo feito em dois meios e visando apenas as bactrias
aerbias e anaerbias facultativas.
1) gar-sangue.
2) Teague (EMB) ou MacConkey.
Onde vamos cercar as possibilidades de isolar estafilococo, estreptococo e qualquer
bacilo Gram negativo pouco exigente (Pseudomonas, enterobactrias) ou exigente como o
Haemophilus.
No gar-sangue: Vo crescer estafilococos, estreptococos e bacilos (exigentes e
no exigentes).
No Teague/MacConkey: Vo crescer bacilos Gram negativos (BGN) pouco
exigentes.
83
Procedimentos
Dia Meios de cultivo
1. Fazer Gram.
2. Fazer catalase.
1. Fazer Gram a) Se a catalase por positiva, repicar para
2. Repicar para gelose inclinada, tubo contendo plasma de coelho. Incubar
2o dia
em tubos separados as L+ e L- a 35oC 1oC.
3. Incubar a 35oC 1oC. b) Se a catalase for negativa, proceder a
identificao para estreptococos, segundo
o tipo de hemlise observada.
84
A Pseudomonas aeruginosa ubiquitria: cresce em solo, gua, vegetais e,
obviamente, em tecidos orgnicos. O homem alberga na pele, garganta (5% de pessoas
normais) e fezes. Ela to pouco exigente que cresce at em gua mineral.
uma bactria oportunista, podendo causar vrias doenas. So freqentes as
infeces em queimaduras e feridas cirrgicas. Faz uma leso em pele chamada de ectima
gangrenosa (de odor muito ftido). Aps procedimentos com cateteres urinrios, punes
lombares, cirurgias oculares, cardacas, etc. Pode causar infeces graves, especialmente e
em pessoas hospitalizadas, onde a mortalidade pode chegar a 50%. Imunocomprometidos
tambm so alvos preferenciais.
Entre os fatores de virulncia destaca-se a toxina A, que bloqueia a sntese protica
das clulas do hospedeiro ( semelhana da exotoxina do bacilo diftrico).
Nas infeces por Pseudomonas, o clnico sempre pede antibiograma, visto que ela
apresenta resistncia a muitos antibiticos, tais como: vrios -lactmicos, cloranfenicol e
tetraciclinas.
sensvel apenas polimixina, gentamicina, amicacina e algumas penicilinas semi-
sintticas (carbenicilina). Com exceo da polimixina, a bactria pode adquirir resistncia
aos antimicrobianos citados por mutao ou aquisio de plasmdios de resistncia.
CORRELAES CLNICAS:
As Pseudomonas utilizam os carboidratos por via oxidativa. Para verificar este tipo
de metabolismo usa-se meios de cultura especiais. Hugh e Leifson foram os primeiros a
idealizar um meio de cultivo que chamaram de Oxidao-Fermentao (O-F).
O meio de O-F de Hugh e Leifson contm 0,2% de peptona para 1% do carboidrato
testado, diferente da relao 2:1 dos meios usuais para fermentao.
A acidez produzida pelas bactrias oxidativas muito pequena e no deve ser
neutralizada pelos produtos de decomposio da peptona, razo da proporo 0,2% da
peptona para 1% do carboidrato.
A prova realizada em dois tubos para cada acar: um com leo mineral e outro
sem leo na superfcie.
Os bacilos oxidativos produzem cido somente no meio exposto ao ar.
Os bacilos fermentadores produzem cido em ambos os tubos.
Os bacilos no sacarolticos no produzem alterao em nenhum dos tubos.
Para maiores detalhes da identificao dos bacilos oxidativos consultar: Diagnstico Microbiolgico, de Konemann
e colaboradores.
86
Teague (EMB / HHT / TEA)
Composio:
gar simples 100 mL
Lactose 10 mL
Soluo de eosina 2% 2 mL
Soluo de azul de metileno 0,5% 2 mL
Seletivo: pelos corantes que inibem o crescimento da maior parte das bactrias
Gram positivas.
Os fermentadores de Lactose.
Colnias:
1) Cor vermelha opaca;
2) Cor vermelha com ponto central preto;
3) Secas com brilho metlico.
Observao: podem crescer colnias intermedirias destes tipos.
Os no fermentadores de Lactose.
Colnias:
Vermelhas claras transparentes.
87
Observao: embora existam muitos meios de cultura seletivos e diferenciais para
enterobactrias e mesmo havendo diferenas quanto capacidade de inibio de bactrias
indesejveis, os bacteriologistas do preferncia queles que lhes oferecem dados mais
visveis. Por exemplo, o brilho metlico das colnias no Teague, ajuda na identificao da
Escherichia coli, apesar de no lhe ser especfico.
OROFARINGE
Estreptococos, Haemophilus, Moraxella e Corynebacterium
Faringite Estreptocccica
Quase 70% das dores de garganta agudas so causadas por vrus. A dor devido
infeco demasiada da mucosa ou da prpria resposta inflamatria do organismo. Os
principais vrus que podem causar faringites so os adenovrus (tipos 3, 4, 7, 14 e 21),
rinovrus, coronavrus, influenza, parainfluenza, citomagalovrus (CMV), Esptain-Barr (EBV),
Herpes vrus tipo 1 e coxsackie A.
As infeces virais sero vistas mais adiante. Neste captulo, abordaremos as
faringoamigdalites (faringites e tonsilites so os termos mais apropriados pela nmina
anatmica atual) bacterianas.
A infeco mais freqente do trato respiratrio superior manifesta-se sob a forma de
faringite e tonsilite (amigdalite) causada por Streptococcus pyogenes (ESTREPTOCOCO
BETA HEMOLTICO DO GRUPO A DE LANCEFIELD) = angina estreptoccica (90%).
uma infeco que requer ateno especial, visto que, alm de disseminar-se a outros locais
podendo causar sinusite, otite, mastoidite e vias areas inferiores provocando
88
broncopneumonias, pneumonias e empiema (pus no espao pleural). Ainda podem ocorrer
seqelas graves ps-estreptoccicas como Febre Reumtica e Glomerulonefrite Aguda.
As caractersticas clnicas so semelhantes ao Haemophilus e Moraxella. Nas
tonsilas palatinas existem as criptas amigdalianas, que so invaginaes da mucosa,
aumentando a superfcie da tonsila, promovendo uma maior exposio de eptopos aos
ndulos linfticos confuentes que existem subjacentes mucosa. Nessas criptas no h
drenagem de ductos das glndulas salivares menores, portanto ali o acmulo de material
facilitado. Durante uma tonsilite, alm da presena de febre na maioria dos casos, acumula-
se exsudato purulento nessas regies, dando o aspecto de placas amarelo-esbranquiadas
sobre as tonsilas. Essas placas so facilmente removidas com swab e esse o material que
se utiliza para fazer semeadura em gar sangue.
89
CORRELAES CLNICAS:
90
metabolismo desorganizado, e quando esse material atinge o sangue pode gerar estragos
bem maiores.
CORRELAES CLNICAS:
Difteria Farngea
92
Identificao Presuntiva dos Estreptococos
Classificao
Ao isolar cocos Gram positivos da leso, deve-se fazer a prova da catalase (que
deve ser negativa) para o incio da caracterizao do estreptococo.
93
Prova de Optoquina
Prova de Bacitracina
94
Prova de Camp-Test (C-T)
Fonte: Google
Semear a bactria em caldo MTS (NaCl 6,5%). Incubar 24h a 35oC. a turvao do
meio e/ou a viragem do indicador de pH para amarelo indica positividade prova (tolerncia
do microrganismo alta concentrao de NaCl 6,5%).
95
Bile esculina + Estreptococos do grupo D
Bile esculina - Estreptococos do grupo Viridans
Pesquisa do estreptococo
Cuidados na Coleta
96
Coleta do material da garganta
Orientar o paciente a abrir a boca e falar um aaaa demorado que abre a garganta e
ergue a vula. Pressionar para imobilizar a lngua com um abaixador de lngua e com auxlio
de um swab (zaragatoa), deslizar em movimentos suaves na faringe posterior, tonsilas ou
fossa tonsilar, tocando os pontos de pus ou placas (alguns recomendam remov-las e
coletar material que estava por baixo delas).
Na falta destas leses, passar o swab nas partes hiperemiadas.
Exames
Bacterioscopia
Cultivo
1o dia
Stabs
97
Ainda com a ala, fazer cortes curtos e profundos, os stabs, num ngulo
aproximado de 40o para introduzir os estreptococos abaixo da superfcie do meio de cultura
e evidenciar a hemlise pela estreptolisina O que oxignio instvel. Nos cortes cria-se
atmosfera de relativa anaerobiose.
2o dia
98
3o dia
Microbiologia Trabulsi 2a edio. Pg. 115. Dr. Luiz Rachid Trabulsi, Prof. Titular
de Microbiologia da Escola Paulista de Medicina So Paulo.
de importncia fundamental que tanto o bacteriologista como o clnico
compreenda o pouco valor da identificao dos estreptococos, somente pela atividade
hemoltica. Est bem demonstrado que os estreptococos beta-hemolticos (alm do Grupo
A) podem ser isolados, com freqncia, da garganta, particularmente os dos grupos C, B e
G. Conforme sabido, as infeces por estes estreptococos no so seguidas de febre
reumtica e glomerulonefrite, no requerendo assim os cuidados teraputicos exigidos pelas
infeces provocadas pelo Streptococcus pyogenes.
Outro aspecto importante do diagnstico, refere-se ao fato de que 10 a 20% dos
indivduos normais podem albergar Streptococcus pyogenes na garganta. Por esta razo, o
isolamento de uma amostra de Streptococcus pyogenes de um paciente com faringite, poder
ser mera coincidncia. A responsabilidade do germe pelo processo infeccioso ter que ser
determinada tendo-se em conta as manifestaes clnicas do paciente e de maneira mais
segura, pela pesquisa de anticorpos sricos 2 a 3 semanas aps o incio da doena.
Observao: outros patgenos sero pesquisados, quando requisitado por mdico,
por exemplo: Neisseria gonorrhoeae, em faringites em pacientes que praticam sexo oral
sem preservativo, Haemophilus influenzae em laringites, etc.
Angina de Plaut-Vincent
Esta angina pode ser diagnosticada com segurana pelo exame bacterioscpico.
O exame bacterioscpico feito pelo mtodo de Gram ou Giemsa, revelando a
presena de bacilos fusiformes e espiroquetas (associao fusoespirilar) que so o
Fusobacterium nucleatum (fusiformes) e o Treponema vincentii, ambos Gram negativos.
Fusiforme: 4 a 8 m de comprimento.
Treponema: 10 a 20 m de comprimento.
O cultivo, se necessrio, feito em anaerobiose.
99
Difteria
Coleta do material
Bacterioscopia
100
O tratamento com antitoxina (soro antidiftrico) deve ser uma deciso clnica, to
logo se suspeite de difteria com base nos sintomas apresentados.
O diagnstico laboratorial completo ter valor retrospectivo na confirmao do
diagnstico clnico e como ponto de partida s medidas profilticas, a fim de evitar a
propagao da difteria aos familiares e comunidade (escola).
Cultivo
In vitro
Teste in vitro pode ser feito por imunodifuso radial = IDR (como recomendado pelo
prof. Dr. Luiz Carlos Duarte Formiga Diviso Nacional de Laboratrios de Sade Pblica e
utilizado no Lacen).
101
Tcnica
Tcnica
Numa placa com meio transparente colocar uma tira de papel de filtro impregnada
com soro antidiftrico. Semear o bacilo suspeito perpendicularmente ao papel. Se houver
produo de toxina, aps 48h desenvolve-se uma linha branca de precipitao na bissetriz
do ngulo entre a tira e semeadura.
In vivo
Meio de Stuart
utilizado para transportar amostras para culturas de cocos Gram positivos e bacilos
Gram negativos, mantendo as bactrias viveis por 24h (tempo de segurana) ou 48h, at
que sejam semeadas em meios especficos para crescimento.
O meio de Stuart pode ser lquido ou semi-slido.
Frmula do meio de Stuart (semi-slido)
Cloreto de sdio 3g
Cloreto de potssio 0,2 g
Fosfato dissdico 1,15 g
Fosfato monossdico 0,2 g
Tioglicolato de sdio 1g
Cloreto de clcio 1% aquoso 10 g
Cloreto de magnsio 10% aquoso 10 g
gar 4g
gua destilada 1L
uma soluo tampo, no contendo carboidratos, peptonas ou outras substncias
nutritivas de crescimento. O meio apenas preserva a viabilidade das bactrias durante o
transporte, sem multiplicao significativa dos microrganismos. O tioglicolato de sdio
funciona como agente redutor, para melhorar o isolamento dos anaerbios e a pequena
quantidade de gar fornece consistncia semi-slida, evitando oxigenao e o
extravasamento durante o transporte.
Meio de Hitchens-Pike
105
TRATO GNITO URINRIO (TGU)
Coleta de urina
106
UROCULTURA
Diagnstico bacteriolgico
1o dia
Mergulhar uma ala de platina na urina e semear por estriais superficiais em placa de
Teague e gar sangue.
Incubar a 37oC.
107
Contagem bacteriana (contagem de colnias) UFC
1. Esgotamento
2. Estriamento
(Inoculao primria)
2o dia
108
I M V C
Escherichia coli + + - -
Enterobacter - - + + mvel
Citrobacter + + - +
3o dia
109
110
Interpretao dos resultados das anlises de urina relacionados com sintomatologia
clnica
111
Legenda: Sintomatologia P = presena de disria e/ou freqncia urinria
A = ausncia de disria e/ou freqncia urinria
Leuccitos A = < 10/campo
P = 10/campo
MO = microrganismo
* = se houver crescimento de mais de uma espcie de MO, considerar a
predominante.
112
INTESTINAIS
Cultura de Fezes
1o dia
1) Semear uma alada de fezes ou swab anal, por estrias superficiais, em meio de
Teague ou SS.
2) Semear 3 a 4 aladas das fezes em um caldo de enriquecimento (caldo GN,
tetrationato ou selenito)
3) Incubar o Teague e SS (gar Salmonella-Shigella) a 35oC 1oC por 24 horas e
caldo de enriquecimento a 35oC 1oC, sendo que o perodo de incubao varia
de acordo com o caldo utilizado, sendo respectivamente:
113
GN 4 a 6 horas
Selenito 8 a 12 horas
Tetrationato 12 a 24 horas
O enriquecimento necessrio para recuperao e isolamento da Shigella e
Salmonella, pois quando estas bactrias esto presentes em pequena
quantidade podem ser prejudicadas pela competio com a microbiota intestinal.
4) Repicar do caldo de enriquecimento para uma placa de SS ou XLD (Xilose,
Lisina, Desoxicolato).
2o dia
EPM EPM
114
3o dia
Bolhas de ar gs positivo
6
115
Enteropatgenos
Tcnica
1. Sobre uma lmina colocar uma gota de soro polivalente O e 1 gota de suspenso
bacteriana a identificar.
2. Misturar com ala at ficar com aparncia homognea.
3. Com movimentos basculantes contnuos, promover maior contato entre o soro e
as bactrias. Caso haja especificidade, ocorre reao Ag-Ac que se manifesta
pelo fenmeno da aglutinao.
Em seguida repetir a mesma tcnica usando o soro polivalente H.
116
Observao: a identificao sorolgica de todas as salmonelas (mais de 2200
sorotipos) s pode ser feita em Laboratrios de Referncia. Os laboratrios clnicos dispem
apenas dos soros das salmonelas mais freqentemente isoladas.
Grupo Sorotipo Antgeno O Fase 1 Fase 2
A S. paratyphi A 1, 2, 12 a -
B S. paratyphi B 1, 4, 5, 12 b 1, 2
S. schwarzerngrund 1, 4, 12, 27 d 1, 7
S. salinatis 4, 12 d, e, h d, e, n, z15
S. saint-paul 1, 4, 5, 12 e, h 1, 2
S. reading 1, 4, 5, 12 e, h 1, 5
S. kaapstad 4, 12 e, h 1, 7
S. chester 1, 4, 5, 12 e, h e, n, x
S. derby 1, 4, 5, 12 f, g 1, 2
S. agona 1, 4, 12 f, g, s -
S. california 4, 12 g, m, t -
S. typhimurium 1, 4, 5, 12 i 1, 2
S. agama 4, 12 i 1, 6
S. bredeney 1, 4, 12, 27 l, v 1, 7
C1 S. oslo 6, 7 a 1, 5
S. paratyphi C 6, 7 (Vi) c 1, 5
S. cholerae-suis 6, 7 c 1, 5
S. birkenhead 6, 7 c 1, 6
S. livingstone 6, 7 d 1, w
S. norvich 6, 7 e, h 1, 6
S. montevideo 6, 7 g, m, p, s -
S. oranienburg 6, 7 m, t -
S. thompson 6, 7 k 1, 5
S. infantis 6, 7 r 1, 5
S. inganda 6, 7 z10 1, 5
S. tennessee 6, 7 z29 1, 5
S. decatur 6, 7 c 1, 5
C2 S. belem 6, 8 c e, n, x
S. muechen 6, 8 d 1, 2
S. newport 6, 8 e, h 1, 2
S. tokodari 6, 8 i 1, 5
S. bonariensis 6, 8 i e, n, x
S. lichtfield 6, 8 l, v 1, 2
C3 S. haardt 8 k 1, 5
S. kentucky 8, 20 l z6
C4 S. eimsbuettel 6, 7, 14 d 1, w
D S. sendai 1, 9, 12 a 1, 5
S. typhi 9, 12 (Vi) d -
S. enteritidis 1, 9, 12 g, m 1, 7
S. dublin 1, 9, 12 (Vi) g, p -
S. panama 1, 9, 12 l, v 1, 5
S. gallinarum 1, 9, 12 - -
E S. butantan 3, 10 b 1, 5
S. anatum 3, 10 e, h 1, 6
S. maleagridis 3, 10 e, h 1, w
S. nchanga 3, 10 l, w 1, 2
117
Shigella
Tcnica
Escherichia coli
118
EHEC - Hemorrgica. Produz uma toxina verotoxina (que idntica toxina Shigalike da
Shigella). Ela se fixa na mucosa do intestino grosso pelo processo de adeso aplainamento,
igual EPEC. A verotoxina atinge as clulas epiteliais e causa diarria. Duas conseqncias
so: a colite hemorrgica e a sndrome hemoltica urmica.
EAEC liga-se s clulas na cultura de tecido. Faz que nem tijolo empilhado. Atuam no
intestino delgado e fazem diarria persistente, principalmente em crianas. Tem muitas
fmbrias que foram transcritas a partir de genes plasmidianos. Produz toxinas termolbeis.
119
Urinria 1, 2, 4, 6, 7, 8, 9,
11, 22, 25, 62, 75 Membros da microbiota
Bacteremia 1, 2, 4, 6, 7, 8, 9,
11, 18, 22, 25, 76
Meio SS
120
Cloreto frrico;
gar simples.
PROCEDIMENTO
MEIO DE ASPECTO DAS COLNIAS
FINALIDADE DO MEIO DE
CULTURA SUSPEITAS
IDENTIFICAO
Isolamento de entero- Lactose negativa (transparente ou
bactrias. sem cor): suspeita de Salmonella
Inibe CGPs. spp., Shigella spp. e algumas E. coli Rugai e
MC
invasoras. sorotipagem
Crescem BGNs Lactose positiva (cor de rosa):
somente suspeita de E. coli
Isolamento de entero- Transparentes ou roxo claro: suspeita
EBM bactrias. de Salmonella spp.
Rugai e
TEA Inibe CGPs. Roxo escuro com brilho metlico:
sorotipagem
HHT Crescem BGNs suspeita de E. coli
somente
Seletivo para Azul ou verde azulado: suspeita de
Salmonella e Shigella. Salmonella spp. (com ou sem centro
Rugai e
HE Contm indicador da negro), Shigella spp.
sorotipagem
produo de H2S (cido Amarela: suspeita de E. coli
sulfdrico)
Seletivo para Incolor (com ou sem centro negro):
Salmonella spp. Pode suspeita de Salmonella spp.
inibir Shigella spp. Incolor: suspeita de Shigella spp.
Rugai e
SS Contm indicador da Colnias negras: suspeita de
sorotipagem
produo de H2S Salmonella spp.
Colnias cor de rosa: suspeita de E.
coli
Seletivo para Vermelha, rosa forte ou translcida
Salmonella spp. circundadas de vermelho: suspeita de Rugai e
VB
Salmonella spp. sorotipagem
Amarela: suspeita de Klebsiella spp.
Fonte: Opustil et al, 2002
121
EPM (Escola Paulista de Medicina)
Este meio trata-se de uma modificao do meio de Rugai e Arajo pela retirada da
sacarose e da prova do indol.
Neste tubo pode ser lido:
Desaminao do Ltriptofano.
Fermentao da glicose.
Produo de gs pela fermentao da glicose.
Produo de H2S.
Hidrlise da uria pela enzima urease.
Triptose 20g
Dextrose 1g
D-manitol 2g
Citrato de sdio 5g
Desoxicolato de Na 0,5g
Fosfato de potssio 4g
Fosfato monopotssico 1,5g
NaCl 5g
P/ 1000mL de H2O.
122
123
MEIO BARACCHINI
ASPECTO DIAGNSTICO
1. Base amarela, sem gs, com
Salmonella typhi
enegrecimento e com o pice vermelho.
2. Base amarela, com gs, com Salmonella arizona, Salmonella sp.
enegrecimento e com o pice vermelho. Citrobacter sp.
3. Base amarela, sem gs e pice vermelho. Shigella sp.
4. Base violeta, com ou sem enegrecimento
Proteus sp.
e com o pice violeta.
5. Base amarela, com gs, com ou sem Escherichia sp., Klebsiella sp.,
enegrecimento e com o pice amarelo. Enterobacter sp.
6. Base e pice vermelhos. Pseudomonas aeruginosa
7. Base amarela, sem gs, pice amarelo ou
Bactrias Gram Positivas
amarelo avermelhado.
124
Resultados
125
FEBRE TIFIDE E PARATIFIDE
Agente etiolgico:
Febre Tifide Salmonella typhi
Febre Paratifide Salmonella paratyphi A, Salmonella schottmuelleri (antiga
Salmonella paratyphi B) e Salmonella hirschfeldii.
CORRELAES CLNICAS:
Como quase sempre o paciente chega ao servio de sade logo na primeira semana, quase
sempre o exame a ser feito a hemocultura. No entanto, pode haver casos isolados e ser
a anamnese que nos guiar a qual exame dever ser feito. H quanto tempo o(a) senhor(a)
est com essa febre?
126
Incubao
Invaso
ativa e
Bacteremia
ACME
Observao: como nem sempre o paciente sabe especificar o incio da doena, alguns
clnicos recomendam realizar ambas as provas simultaneamente, independente do perodo
da infeco, para obter maior probabilidade diagnstica.
127
Quarta semana (fase de convalescena) = realiza-se a Coprocultura-Teste de
libertao. A coprocultura no tem por objetivo o diagnstico da doena e sim para confirmar
o estado de portador, em virtude da infeco crnica da vescula biliar em alguns pacientes.
O portador elimina a Salmonella atravs das fezes podendo propagar a doena. Para
comprovar que o paciente no alberga a Salmonella preciso fazer trs coproculturas de
trs evacuaes consecutivas. As trs devem ser negativas.
Muitos livros de microbiologia citam o caso de uma cozinheira americana que
trabalhou para oito famlias durante oito anos e foi a fonte de contaminao de sete
epidemias de Febre Tifide com mais de duzentos casos. Foi por isso chamada de Mary
Typhoid.
Hemocultura
Perodo da coleta
128
no pode ser previsto, aconselhada a coleta de duas amostras com uma hora de
diferena.
Normalmente recomenda-se colher 2 amostras em crianas, 3 em adultos que no
estejam em tratamento e 4 a 6 amostras, na vigncia do tratamento com antibiticos.
Nos casos de estado febril agudo em que haja a necessidade de terapia imediata,
realizam-se duas coletas, uma em cada brao.
Uso de antibiticos
Cultivo
Os frascos com o sangue devem ser incubados a 37oC e observados durante vrios
dias (para Listeria, at 30 dias). Devido ao pequeno nmero de microrganismos, o
129
crescimento lento. O crescimento percebido pela turvao do meio. Nesta ocasio, tirar
uma pequena poro da cultura e fazer:
Bacterioscopia pelo Gram.
Isolamento em placas para caracterizao.
O resultado de Gram enviado ao clnico para orientao preliminar. Por exemplo:
Hemocultura positiva para bacilos Gram negativos aps cinco dias de incubao.
Caracterizao bioqumica em andamento.
Um vez identificada a bactria, manda-se o resultado definitivo ao mdico.
Reao de Widal
130
TESTE DE SENSIBILIDADE AOS ANTIBITICOS (TSA)
Diluio
30 mcg/mL 15 mcg/mL 7,5 mcg/mL 3,75 mcg/mL 1,88 mcg/mL 0,94 mcg/mL
131
a uma teraputica aparentemente adequada ou ento que apresentam recidivas no curso do
tratamento.
Difuso
132
Cuidados com os discos de papel de filtro
1o dia
Semeadura em placa
Ligaes inertes
Discos impregnados
133
H economia de tempo e trabalho visto que se coloca o polidisco de uma s vez.
No exemplo acima o polidisco tem 13 antibiticos.
No caso dos discos individuais deve se respeitar o espaamento entre eles de 3
cm e 2 cm entre o disco e a borda da placa. No centro da placa colocar os
antibiticos com menor poder de difuso: polimixina, bacitracina e vancomicina.
Usar um antibitico de cada grupo. So recomendados meios de cultura
especiais para antibiticos pouco solveis em gua.
2) Aps colocar o disco, fazer uma presso leve com a pina para deix-lo aderido
superfcie do meio.
3) Inverter a placa e incubar a 37oC.
2o dia
134
Interpretao do Dimetro dos Halos de Inibio
Antimicrobiano Potncia do Dimetro do halo de inibio (mm)
disco Resistente Intermedirio Sensvel
Amicacina 30 mcg 14 15 16 17
Ampicilina
(...) Gram-negativos entricos 10 mcg 11 12 13 14
(...) Estafilococos 10 mcg 28 - 29
(...) Haemophilus sp. 10 mcg 19 - 30
(...) Enterococo 10 mcg 16 - 19
(...) Estreptococo (S. bovis) 10 mcg 21 22 29 30
(...) Listeria monocytogenes 10 mcg 19 - 20
Carbecilina 100 mcg
(...) Pseudomonas 13 14 16 17
(...) Gram-negativos entricos 17 18 22 23
Cefotaxima 30 mcg 14 15 22 23
Cefoxitina 30 mcg 14 15 17 18
Ceftazidima 30 mcg 14 15 17 18
Ceftriaxona 30 mcg 13 14 20 21
Cefalotina 30 mcg 14 15 17 18
Cloranfenicol 30 mcg 12 13 17 18
Clindamicina ou Lincomicina 2 mcg 14 15 20 21
Eritromicina 15 mcg 13 14 22 23
Fosfomicina 50 mcg 13 14 22 17
Gentamicina 10 mcg 12 13 14 15
Imipenem 10 mcg 13 14 15 16
Metilmicina 30 mcg 12 13 14 15
Oxacilina
(...) Estafilococos 1 mcg 10 11 12 13
(...) Pneumococos quando 1 mcg 19 - 20
sensveis penicilina G
Penicilina G
(...) Estafilococos 10 unidades 28 - 29
(...) N. gonorrhoae 10 unidades 19 - 20
(...) Enterococos (E. faecalis) 10 unidades 14 - 15
(...) L. monocytogenes 10 unidades 19 - 20
(...) S. bovis 10 unidades 19 20 27 28
Rifampicina 30 mcg 16 17 19 20
Tetraciclina 30 mcg 14 15 18 19
Tobramicina 10 mcg 12 13 14 15
Trimetoprim / sulfametoxazol 1,25/23,75 mcg 10 11 15 20
Vancomicina 30 mcg 9 10 11 28
Antimicrobianos especficos
para infeces urinrias
cido pipemdico 20 mcg 13 14 18 19
cido nalidixo 30 mcg 13 14 18 19
Nitrofurantona 300 mcg 14 15 16 17
Norfloxacina 10 mcg 12 13 16 17
Sulmamdicos 250 a 300 mcg 12 13 16 17
Drogas para Germes Urinrios
135
CAPTULO 11:
11: DOENAS SEXUALMENTE TRASMISSVEIS
136
Calymmatobacterium Granuloma inguinal ou donovanose
granulomatis
Campylobacter sp. Enterite e enterocolite
Chlamydia trachomatis Uretrite, epidimite, proctite e
linfogranuloma venreo (no sexo
masculino). Cervicite, endometrite,
salpingite, bartolinite, sndrome uretral,
proctite, peri-hepatite e linfogranuloma
venreo (no sexo feminino)
Bactrias Gardnerella vaginalis Vaginite
Hemophilus ducreyi Cancro mole ou cancride
Mycoplasma hominis Salpingite, febre ps-abortamento,
febre puerperal e pielonefrite
Neisseria gonorrhoeae Gonorria (uretrite e outras sndromes)
Salmonella sp. Salmonelose
Shigella sp. Shigelose
Treponema pallidum Sfilis
Ureaplasma urealyticum Uretrite, uretroprostatite e
corioamnionite
Fungo Candida albicans Vulvovaginite e balanopostite
Entamoeba histolytica Amebase intestinal
Protozorios Giardia lamblia Giardase
Trichomonas vaginalis Vulvovaginite e uretrite
Helmintos Enterobius vermicularis Enterobase
Phthirus pubis Ptirase ou pediculose pubiana
Artrpodes
Sarcoptes scabiei Escabiose
SFILIS
137
1. Sfilis Primria
2. Sfilis Secundria
138
ganglionar. Alm destas leses, pode haver envolvimento de rgos internos (nefrite,
hepatite, meningite, etc.).
Em pacientes no tratados, as leses e os sintomas desaparecem aps 1 a 3 meses.
3. Sfilis Latente
4. Sfilis Terciria
5. Sfilis congnita
139
Trade de Hutchinson
- queratite parenquimatosa com conseqente cegueira
- hipocusia (surdez) vestibular (labirntica)
- dentes ebtalhados semi lunarmente (o destista pode fazer o diagnstico)
Resumo:
Diagnstico Laboratorial
140
Coleta do material para bacterioscopia
1. Limpar a superfcie da leso com gaze embebida em soluo salina estril, para
remover os contaminantes.
2. Secar com gaze estril.
3. Fazer presso leve na base endurecida e coletar a serosidade que poreja da
leso, utilizando ala metlica, tubo capilar ou fazendo um imprint com a prpria
lmina.
A bacterioscopia pode ser feita por diversos mtodos:
Campo escuro
Tcnica
141
Tcnica de Fontana-Tribondeau
Imunofluorescncia Direta
Reaes Sorolgicas
142
FTA: Fluorescent Treponema Antibody.
FTA-ABS: Fluorescent Treponema Antibody Absorved Test
143
Tcnica
Treponema pallidum
GONORRIA
144
Transmisso a) Oftalmia neonatal
No-sexual b) Vulvovaginite em
crianas
a) Cistite
b) Pielite
Gonococo Homens (uretrite) c) Proctite
mucosas d) Orquite
e) Epididimite
Quadro clnico
145
Diagnstico laboratorial: Bacterioscopia e Cultura
Coleta do material
Em homens:
O melhor material a secreo uretral.
A coleta deve ser feita pela manh, antes da primeira mico:
1. Limpar a secreo externa com gaze estril embebida em salina.
2. Enxugar.
3. Introduzir um swab fino, 2 cm no canal uretral aps a fossa navicular e absorver a
secreo.
Observao: pode-se coletar outros materiais como: urina (1o jato miccional),
esperma e lquido prosttico.
Em mulheres:
Dar preferncia secreo do canal endocervical.
1. Aps introduzir o especulo, limpar com gaze estril a secreo da vagina e do
colo do tero.
2. Introduzir o swab no canal endocervical e absorver a secreo.
3. Retirar o swab com cuidado para no contaminar com bactrias da vagina.
146
Cultivo
Liberao de Laudo
147
URETRITES NO GONOCCICAS
148
Fonte: Netter, 2006 Fonte: Mims, 2005
H 3 fases:
VAGINOSE BACTERIANA
Esta doena, tambm conhecida como vaginite anaerbia, ainda no foi claramente
definida. A sintomatologia tpica queixa de mau odor, muitas vezes associado ao aumento
do fluido vaginal, freqentemente mais notado aps a menstruao ou coito.
s vezes a paciente pode se queixar de prurido vulvar ou erupo perivulvar. O pH
vaginal geralmente maior que 4,5. O principal agente etiolgico envolvido a Gardnerella
vaginalis. Uma das caractersticas marcantes da secreo de vaginose bacteriana
microscopia ptica a presena de clue cells (clulas epiteliais da vagina cobertas de
bactrias).
150
Exame laboratorial
Patogenicidade
CANDIDASE
A infeco por Candida albicans a infeco fngica mais comum na prtica genito-
urinria.
A candidase pode ser transmitida ou exacerbada pela relao sexual, mas a maioria
das infeces (particularmente em mulheres) resultam de auto-inoculao do reto.
Os sintomas podem ser causados por hipersensibilidade ou infeco. No primeiro
caso as manifestaes microbiolgicas so negativas.
Na prtica mdica a doena pode se manifestar com sintomas em apenas um dos
parceiros, mas essencial examinar e tratar o parceiro assintomtico para reduzir a chance
de reinfeco.
Mais detalhes: ver pginas 189 a 192.
Exame laboratorial
151
CAPTULO 12:
12: MICOBACTERIOSES
Micobactrias so assim classificadas por terem sua parede celular diferente das
demais bactrias. So bacilos retos ou um pouco curvados, imveis e dispostos na forma de
paliada ou de globias. Sua classificao de bacilo pela forma e micobactria pela
bioqumica da parede. O micolato o principal componente da parede celular, a qual
denominada de "cerosa" pelo Robbins. Esse nion quem d a esses microrganismos a
caracterstica de Bacilos lcool-cido Resistentes (BAAR). Ou seja, no se coram
facilmente pelo Gram, uma vez que eles retm os corantes quando tratados com lcool e
cido, tornandos-os fracamente positivos neste mtodo.
TUBERCULOSE (TB)
152
sade pblica, visto que cada tuberculoso pode disseminar o bacilo no convvio familiar e
social.
Apesar de se conhecer o agente causador, a maneira de transmisso e o tratamento
adequado, a tuberculose um problema preocupante.
A tuberculose humana causada tambm pelo Mycobacterium bovis e outras
espcies (ver tabela).
Transmisso: doena inflamatria infecciosa, de carter contagioso, que evolui por surtos,
sendo o acometimento pulmonar a maior causa de morbidade e mortalidade .
Contgio: aquisio de bacilos atravs do contato direto com os portadores da doena
(perdigotos), atravs do uso de utenslios contaminados (fmites), tambm atravs de
permanncia contnua e prolongada em meio ambiente contaminado. Aerossis
respiratrios so a principal forma de disseminao, pois ela uma bactria aerbia e tem
tropismo por alvolos. Desta forma, as pessoas cujo escarro possui BAARs visveis
microscopia so consideradas portadoras da micobactria.
Fatores predisponentes: doenas ou condies debilitantes. Essas pessoas so
enquadradas dentro de grupos de risco: marginalizados, txico-dependentes, idosos, HIV+,
transplantados, portadores de IRC, cncer, etilistas, diabticos, portadores de neoplasias,
grupos socialmente desfavorecidos, desnutridos e emigrantes. H a TB gastrointestinal
(Mycobacterium bovis), a aquisio do bacilo se faz pela ingesto de leite no-pasteurizado.
153
Fisiopatologia:
Macrfago alveolar
Dentro dos macrfagos, os BAAR tm dois destinos:
1) Serem mortos e eliminados.
2) Continuarem resistentes e fazerem lise dos macrfagos. Os macrfagos liberam
quimiocinas e fazem quimiotaxia de neutrfilos e moncitos circulantes (circulo vicioso).
154
H Reao de Hipersensibilidade tipo IV (Tardia) macrfagos cercam o bacilo e
formam o ganuloma (um tipo de inflamao crnica). A Imunologia Mdica (BP336)
explicar os mecanismos imunolgicos da hipersensibilidade e a Patologia Mdica
Molecular (BP337) mostra os mecanismos deste tipo de inflamao crnica.
155
O Granuloma
Uma rea central de necrose caseosa (ncleo semi-slido macio), circundada por
uma outra rea cheia de macrfagos, clulas epiteliides e clulas gigantes. Adjacente a
essa coroa existe uma bainha de linfcitos T e mais externamente uma deposio fibrosa,
com fibroblastos e formao de colgeno tipo I (est comeando a ser formada a trplice
hlice do pr-colgeno. Uma vez empacotado pelo complexo de Golgi, esse colgeno fica
mais denso e delimita os granulomas). Se a pessoa infectada for incapaz de produzir uma
resposta imunolgica adequada, o granuloma bem menos organizado e pode consistir
apenas em um agregado de macrfagos, sem arquitetura clssica das clulas gigantes. Ou
seja, a anatomia patolgica pode sugerir por si s um quadro de imunocomprometimento
(suspeitar de HIV e correlacionar sempre com a histria clnica do paciente).
Histologia do granuloma
156
Necrose caseosa: a rea central necrosada adquire um aspecto de queijo branco (do latim
caseum).
Necrose a morte celular forada, quando a clula atinge o ponto de no-retorno. Quando
uma clula no tem mais suprimento de O2, alimento, eletrlitos, substratos, etc. Isso ocorre
nas isquemias prolongas, por exemplo. Isquemia o bloqueio na conduo do sangue para
uma certa regio do corpo. Como no h suprimento sanguneo, tambm no haver mais
oxignio nem suprimento para as clulas.
Granulomas microscopia ptica (isso ser visto com detalhes na Anatomia Patolgica)
Fonte: Bogliolo, 2006 Fonte: Rubin, 2006
Complexo de Ghon
157
As clulas T sensibilizadas liberam linfocinas (linfocina uma citocina que recebe
esse nome porque veio do linfcito). Na verdade o prprio granuloma explica isso, uma vez
que o organismo no consegue dar conta de matar o BAAR.
Resumo:
Complexo de Ghon = granulomas no pulmo + linfonodos hilares e mediastnicos
comprometidos.
Complexo de Ghon
Formas clnicas:
Tuberculose Secundria:
Esse estgio quando h reativao da TB pulmonar primria ou uma nova infeco
em hospedeiro previamente sensibilizado por TB primria. Ocorre uma resposta imune
celular aps um intervalo latente e essa resposta provoca a formao de muitos granulomas
e necrose tissular extensa. Os segmentos apical e posterior dos lobos superiores so mais
comumente acometidos. Desenvolve-se uma leso mal definida, fibrtica e difusa, que exibe
reas focais de necrose caseosa. a TB cavitria. A parede da cavidade feita de uma
membrana interna delgada, cinza, que compreende ncleos necrticos moles, uma zona
mdia de tecido de granulao e uma borda colagenosa. A luz preenchida de material
caseoso contendo BAAR. A cavidade tuberculosa em geral comunica-se livremente com um
brnquio, e a liberao do material infeccioso para as vias areas serve para disseminar a
infeco no pulmo. a reativao da regio de granulomas.
Disseminao bronquial
Tuberculose Miliar:
A infeco localiza-se em disseminadas regies produzindo leses nodulares
amarelas (granulomas tuberculosos), pequenas e mltiplas em vrios rgos. O termo miliar
usado porque tem aparncia amarela (como milho). Pulmes, linfonodos, rins, supra-
renais, fgado, bao e medula ssea so locais comuns de leses miliares. Resulta da
disseminao hematognica dos BAAR, em geral de TB pulmonar secundria, mas muitas
vezes de TB pulmonar primria ou de outros locais. A leso progressiva pode atingir as
meninges e provocar meningite tuberculosa.
159
Disseminao hematognica e TB miliar
160
Revisando:
- Sibilos e Roncos
- Diminui murmrio vesicular
- Broncofonia (pelo derrame pleural)
- Sopro anfrico
- Hepatoesplenomegalia
- Hemoptise (presente em 50% dos casos)
Diagnstico Laboratorial
Diagnstico Laboratorial
Coleta do material
162
Tcnica
BACILOSCOPIA DO ESCARRO
Resultado Quantitativo
163
Segundo a OMS, temos os resultados da seguinte maneira:
Cultivo
164
O meio Bactec consegue promover crescimento do bacilo da tuberculose dentro de
15 dias e pode ser uma revoluo no cultivo desta espcie para diagnstico. Isso ser
discutido na disciplina clnica de Pneumologia.
CORRELAES CLNICAS:
165
HANSENASE (Mal de Hansen)
166
e tem maior predisposio a outras infeces bacterianas. H intensa resposta da
imunidade celular. H formao de granulomas na derme, por isso, tuberculide.
Hansenase lepromatosa (LL): Tem envolvimente extenso da pele. H perda parcial das
sobrancelhas (um sinal clnico importantssimo e muito sugestivo da hansenase, chama-se
MADAROSE), espessamento e dilatao das narinas, orelhas e bochechas, resultando na
aparncia tpica leonina. H destruio do septo nasal e a parede nasal fica rica em
bactrias. Nessa fase, a resposta imune celular fraca. No exame, os BAAR tornam-se
extracelulares e agrupam-se em globias.
Com o tempo, pode haver destruio intensa das estruturas faciais, nervos
perifricos, o que, pela conseqente falta de sensibilidade, leva a traumatismos repetitivos
em mos e ps, com conseqente infeco bacteriana secundria. SECREES
(PRINCIPALMENTE NASAIS) DE PACIECTES COM HANSENASE LEPROMATOSA SO
INFECTANTES (H GLOBIAS).
167
Diagnstico Laboratorial
Local da coleta:
a) 2 lbulos da orelha;
b) 2 cotovelos.
1. Fazer assepsia do local com lcool iodado. Fazer isquemia com auxlio de pina
ou dedos para evitar o fluxo de sangue.
2. Com o bisturi, fazer cortes na pele, de aproximadamente de 5 mm de
comprimento e 2 mm de profundidade e recolher a serosidade (linfa) sobre uma
lmina nova. A linfa ser coletada dos quatro locais uma ao lado da outra sobre a
mesma lmina.
3. Identificar os esfregaos e a lmina.
4. Secar os esfregaos ao ar.
5. Fixar na chama.
LD LE CD CE
Fernando Bortolozzi
169
CAPTULO 13: LEPTOSPIROSE
AGENTES ETIOLGICOS
170
Classificao Molecular:
18 espcies genmicas
10 com sorovares patognicos
06 com sorovares saprfitas
02 com patognicos e saprfitas
Classificao Sorolgica:
24 sorogrupos patognicos
03 sorogrupos saprfitas
(+ de 260 sorovares)
171
Estas bactrias necessitam de condies e meios especiais (meio Fletcher) para que
haja crescimento, podendo ser necessrias vrias semanas para que a cultura se torne
positiva (o perodo de multiplicao de aproximadamente 12 horas).
As espiroquetas morrem com exposio ao ressecamento, ao calor ou a detergentes
e desinfetantes, mas permanecem viveis por vrias semanas na gua alcalina e no solo
mido. Os meios de cultura utilizados so os meios de Fletcher.
EPIDEMIOLOGIA
172
A Leptospira um ser euribionte, encontrado em todos os estados do Brasil, assim
como na sia, Amrica Central, no restante da Amrica do Sul e nos EUA.
Em 2006 no Brasil houve 4308 casos reportados (272 no Paran), dos quais 401
foram a bito (taxa de mortalidade de 0,093).
TRANSMISSO
importante lembrar que cada sorovar tem ser mamfero hospedeiro prprio, ou
seja, o homem um hospedeiro acidental. Exemplos so os sorovares
icterohaemorrhagiae/copenhageni de ratos, grippotyphosa de ratazanas, hardjo de bovinos,
canicola de ces, pomona de porcos, etc.
Os humanos so infectados pela ingesto ou exposio gua ou alimentos
contaminados. As bactrias, auxiliadas por sua motilidade, penetram atravs de abrases
da pele ou mucosas ntegras, de modo que a infeco pode ser adquirida quando o
indivduo nada, trabalha ou brinca em gua contaminada. Portanto, mineradores,
fazendeiros, etc., apresentam risco elevado de contaminao (isso tambm explica o porqu
da maior prevalncia do sexo masculino, 87% do total de casos). Ou seja, ela pode,
inclusive, ser considerada uma doena ocupacional, uma vez que a contaminao est
ligada ao trabalho do paciente. Certos grupos ocupacionais correm risco particularmente
elevado; nesses grupos esto includos veterinrios, agricultores, trabalhadores com gua
de esgoto, empregados de abatedouros e trabalhadores da indstria pesqueira. Esses
indivduos podem adquirir leptospirose por exposio direta ou contato com gua e solo
contaminados.
A contaminao pode suceder o contato direto com urina, sangue ou tecidos de um
animal infectado, ou aps a exposio a um ambiente contaminado. A Leptospira
excretada na urina humana, mas a transmisso interpessoal rara. No entanto, a bactria
sobrevive por meses em gua doce, sendo esta um importante veculo de transmisso.
As epidemias de leptospirose podem resultar da exposio prolongada a guas de
enchentes contaminadas pela urina de animais, principalmente em grandes centros urbanos
onde h esgoto a cu aberto, grande nmero de bueiros e outros habitats de roedores.
No globo, a regio em que mais ocorre leptospirose entre os trpicos, prximo ao
Equador. O clima e as precrias condies de higiene favorecem a sobrevida do patgeno.
Em muitos pases em desenvolvimento, a leptospirose ainda representa um problema
173
subestimado. Dados confiveis da morbidade e da mortalidade da leptospirose comearam
gradualmente a aparecer.
A leptospirose tambm foi reconhecida em cidades do interior semi-abandonadas,
onde a populao de ratos est se expandindo.
Alm disso, pessoas que praticam natao em rios, canoagem, windsurf, esqui
aqutico, etc. Microgotculas de gua que contenham a bactria podem ser ingeridas ou a
bactria entrar por escoriaes da pele.
A leptospirose tambm pode ser enquadrada entre as "doenas do viajante",
principalmente quando o destino so os pases tropicais. A maioria dos casos ocorre
durante o vero e outono nos pases ocidentais e durante a estao chuvosa nos trpicos.
Em resumo, a leptospirose uma patologia intimamente associada a condies
scio-econmicas, de imensa importncia em sade pblica, pois est associada com
higiene, maus hbitos de vida, etc.
FATORES DE PATOGENICIDADE
174
FISIOPATOLOGIA
175
pela bactria, por facilitarem sua adeso com a pele e mucosas, ou dos neutrfilos com o
endotlio.
O papel da resposta imune do hospedeiro durante a infeco ainda obscuro. Alm
de ser responsvel pela imunidade, essa resposta est envolvida na formao da uvete e
talvez das leses pulmonares. A resposta humoral , sem dvidas, uma grande vil nesse
quadro patolgico. No entanto, grandes bacteremias podem ocorrem mesmo quando haja
um grande ttulo de anticorpos circulantes.
A reao imunolgica acaba por ocasionar uma reao de hipersensibilidade tipo III,
gerando complexos imunes. Esses complexos so responsveis pela leso endotelial e
consequentemente pela hemorragia. A vasculite responsvel pelas manifestaes mais
importantes da doena. Os rgos alvos preferenciais da leptospirose so os rins, o fgado e
os pulmes.
SINTOMATOLOGIA
176
meningite assptica nessa fase, principalmente em crianas. Embora no mais que 15% dos
pacientes exibam sinais e sintomas de meningite, muitos exibem pleocitose no LCR, o qual
desaparece aps duas semanas. Irite, iridociclite e coriorretinite so complicaes tardias
que podem ocorrer e persistir por vrios anos. Em alguns casos, podem ser perceptveis j
na terceira semana da doena.
A Sndrome de Weil a forma mais grave da leptospirose, sendo caracterizada por
ictercia, disfuno renal, ditese hemorrgica e taxa de letalidade de 5 a 15%. O incio da
doena semelhante ao da leptospirose de grau leve, no entanto, aps 4 a 9 dias, a
ictercia surge junto vasculite a disfuno renal. A pele fica com uma tonalidade laranja e
nesse estgio geralmente ocorre necrose heptica com hepatomegalia perceptvel
palpao profunda do hipocndrio esquerdo. No rim, a hipovolemia e a diminuio da
perfuso renal contribuem para o desenvolvimento de necrose tubular aguda, com oligria
ou anria. s vezes a dilise se faz necessria.
Com freqncia ocorre comprometimento pulmonar, com achados clnicos j
relatados anteriormente. Observam-se manifestaes hemorrgicas na sndrome de Weil:
epistaxe, petquias, prpuras e equimoses.
Durante a leptospirose grave, descreveram-se rabdomilise, hemlise (pela
lipoprotena LipL32), miocardite, pericardite, insuficincia cardaca congestiva, choque
cardiognico, sndrome da agstia respiratria do adulto, pancreatite necrosante e falncia
de mltiplos rgos.
TRATAMENTO
177
CAPTULO 14:
14: OS FUNGOS E AS MICOSES
CARACTERSTICAS GERAIS
MODOS DE VIDA
Saprbios: obtem seus alimentos decompondo organismos mortos. Vivem sobre a matria
orgnica.
Mutualistas: sem grande importncia mdica. So os liquens (cianobactria + fungo) e
micorrizas (fungo + raiz de fanergama).
Predadores: capturam pequenos animais.
Parasitas: obtm alimentos de organismos vivos.
Ex: Candida albicans, Trycophyton sp.
1. BOLORES
- Macroscopicamente aspecto pulvurulento, cotonoso (de cotton, algodo em ingls),
plumoso. ASPECTO SECO
Exemplos: Penicillium sp., Aspergillus sp.
178
Fonte: Koneman, 2001
179
Fonte: Mims, 2005
180
H dois tipos de miclio: o vegetativo (hifas que adentram nos tecidos ou substrato
em busca de alimento) e o reprodutivo, em que as hifas tm a funo de propagao e do
origem aos esporos. O reprodutivo chama-se de corpo de frutificao e geralmente so os
que ficam pra fora da pele nas leses cutneas.
A reproduo pode ser assexuada, por brotamento, como nas formas unicelulares
(Candida albicans e Paracocciodioides brasiliensis quando se apresenta como levedura) ou
por fragmentao do miclio nas pluricelulares (Aspergillus sp.). A reproduo sexuada
envolve a unio de hifas gamticas com a formao do zigoto.
O principal meio de reproduo a formao de ESPOROS. Podem ser mveis
(zosporos) ou imveis (aplansporos) que so transportados pelo vento (fungos do ar). As
estruturas que produzem os esporos so denominadas esporngios.
181
CLASSIFICAO DOS FUNGOS
O Claviceps purpurea infecta plantaes de cereais e pode ser responsvel por casos
ocasionais de envenenamento em seres humanos que consumiram aquele cereal. Essa
espcie tambm produz outros alcalides como a ergometrina, que utilizada para
evitar hemorragia ps-parto; a metisergida, que trata a sndrome carcinide; e a
bromocriptina, que utilizada no Parkinson e em distrbios endcrinos.
FUNGOS E MEDICINA
Os fungos patognicos podem ser classificados com base nas suas formas de
crescimento ou no tipo de infeco que causam.
184
reaes de hipersensibilidade tipo I (anafilaxia), vistas na disciplina Imunologia Mdica
(BP336).
Exemplos de anafilaxia por fungos: renite alrgica, asma brnquica, alveolite, etc.
Tipos de Micoses
185
Dermatfitos: Pertencem principalmente a trs gneros.
GNEROS ESPCIES
T. rubrum
Trichophyton
T. mentagrophytes
M. canis
Microsporum
M. gypseum
Epidermophyton E. floccosum
Candida em pele
186
As leses mais freqentes so em unhas e espaos interdigitais das mos. A leso
que se encontra ao redor do leito ungueal (paroniquia) tambm comum. A paronquia
uma tumefao anormal ao redor das unhas que pode ser causada por diversos agentes,
como o Staphylococcus aureus. Isso ser visto na disciplina de Propedutica Mdica II.
187
b) Cromoblastomicose (cromomicose): Crescimento de ndulos verrucosos que
aparecem nos locais de inoculao. Com o tempo assume o aspecto de couve flor. Os
pontos enegrecidos so os locais certos para a coleta do material para exame.
O agente etiolgico predominante no Brasil a Fonsecaea pedrosoi. Mas h outras
espcies que podem provocar a cromoblastomicose: Phialophora verrucosa, Rhinocladiella
aquaspersa, Fonsecaea compacta e Cladosporidium carrionii. Esses microrganismos
habitam o solo e coletivamente so denomindos fungos dematiceos, com parede celular
melaninizada.
uma doena comum em trabalhadores rurais, principalmente nas reas
descobertas do corpo.
O tratamento consiste na cauterizao e na remoo cirrgica das leses inicias. J
na doena avanada, torna-se necessrio o uso de quimioterpicos.
Existem outras micoses subcutneas, porm de incidncia muito baixa, entre elas a
Feo-Hifomicose, o Micetoma Eumictico, a Zigomicose, a Lobomicose e a Rinosporidiose.
Aspectos Clnicos:
Aspecto radiogrfico do pulmo em asa de borboleta
Presena de vesculas no sulco gengival (muitas vezes o diagnstico feito pelo
cirurgio-dentista e o paciente chega ao mdico por encaminhamento)
O 1 rgo de acometimento o pulmo; o 2 rgo a mucosa bucal. Muitas vezes
leses na boca aparecem antes (at dois anos) das manifestaes pulmonares.
a nica micose pulmonar que atinge o imunocompetente
Na prtica clnica a paracoccidioidomicose chamada de PCM
188
Alm do pulmo, pode fazer leso osteoltica, disseminar-se para o SNC, rgos genitais,
TGI. s vezes o cirurgio encontra ao fazer uma laparotomia.
A infeco pode resultar tanto da inoculao de estruturas do fungo consideradas
infectantes, como a reativao de algum foco pr-existente.
O nmero de homens afetados desproporcional ao nmero de mulheres (9:1). Esta
diferena foi atribuda a fatores de alto risco, doena subjacente, desnutrio e diferenas
hormonais.
Pneumonia por Paracoccidioides brasiliensis muito difcil de tratar. O tratamento
consiste no uso prolongado de Itraconazol, algumas vezes associado a Sulfametoxazol e
Trimetropim (Bactrim).
Candida sp.
189
A candidose pode ser encontrada em uma variedade de pacientes
imunocomprometidos, pessoas com uso de prteses odontolgicas mal adaptadas,
portadores de diabetes mellitus, em tratamento com antibiticos de largo espectro, usurios
crnicos de glicocorticides, xerostomia (hipoproduo de saliva) entre outros. A
manifestao mais freqente se d por meio de placas esbranquiadas (forma
pseudomembranosa) de fcil destaque com o auxlio de um algodo, principalmente em
dorso de lngua e palato duro. H tambm a forma eritematosa, que se manifesta por meio
de leses hiperemiadas. O tratamento pode ser feito com o uso tpico de nistatina,
anfotericina e derivados imidazlicos. Se o paciente for imunocomprometido e/ou a infeco
j tiver adquirido carter mais invasivo, deve se apelar para o uso de antifngicos
sistmicos.
* Causas comuns xerostomia: pacientes que fazem quimioterapia (que destri grndulas
salivares colateralmente) e usurios de antidepressivos como inibidores da recaptao de
serotonina (5-HT). Esses pacientes so fortes candidatos a possuiem candidose.
A candidase vaginal uma das doenas que mais comumente acometem mulheres
jovens, principalmente em pases de clima tropical como o Brasil. Esta patologia pode,
inclusive, ser enquadrada dentro do grupo das DSTs, uma vez que o contato sexual uma
das formas mais comuns de contgio. O homem tem a Candida albicans na microbiota
normal peniana, portanto uma atividade sexual sem preservativo faria com que a mulher
190
entrasse em contato direto com a levedura. Se ela estiver em uma queda imunolgica pode
desenvolver a doena, bem como cultiv-la, fazendo sexo repetidamente com o mesmo
parceiro (portador). Salienta-se tambm que as pessoas que fazem sexo oral sem proteo
esto sujeitas a contrarem candidose por entrarem em contato com a microbiota normal do
pnis. imprescindvel que o tratamento seja feito com o casal, ambos devem prosseguir
com a terapia at a erradicao das leveduras.
Outra fonte de contgio so os fmites contaminados (toalhas, roupas ntimas,
acessrios diversos, etc.). O compartilhamento deste tipo de material pode acarretar um
intercmbio de espcies de Candida sp., ou mesmo de diferentes cepas de Candida
albicans, geralndo infeces com mecanismos mais resistentes.
191
A candidase disseminada provavelmente adiquirida via TGI, mas tambm pode se
originar de infeces relacionadas a cateteres intravasculares. Pacientes com linfomas e
leucemia correm maior risco. A disseminao hematolgica alcana quase todos os rgos.
Infeces nos olhos (endoftalmia) e da pele (leses mucocutneas nodulares) so
importantes porque fornecem evidncias para o diagnstico, sem as quais os sintomas
inespecficos de febre e choque sptico dificultam o diagnstico precoce. Pacientes
imunocomprometidos, por vezes, recebem terapia antifngica emprica se apresentam febre
e falham em responder aos agentes antibacterianos de largo espectro.
CORRELAES CLNICAS:
193
Fonte: Mims, 2005
c) Aspergilose
O Aspergillus sp. ubiquitrio no meio ambiente e faz parte da microbiota normal do
organismo humano. Seus esporos so regularmente inalados sem conseqncias danosas.
um gnero que contm vrias espcies, das quais a que merece maior destaque o
Aspergillus fumigatus, que pode provocar diversas manifestaes patolgicas, tais como:
- Aspergilose broncopulmonar alrgica, que, como seu nome sugere, uma resposta
alrgica presena do antgeno. Aspergillus nos pulmes podem desencadear um processo
de hipersensibilidade tipo I e culminar em asma brnquica. O mecanismo da asma ser
abordado em seminrios da disciplina de Imunologia Mdica (BP336).
- Aspergiloma em pacientes com cavidades pulmonares preexistentes (ex: seqela de TB)
ou distrbios pulmonares crnicos. O fungo coloniza a cavidade e cresce para produzir uma
massa de hifas em forma esfrica, a qual denominada aspergiloma. Esses fungos no
invadem os tecidos pulmonares, porm o tamanho do aspergiloma pode desencadear
dificuldade respiratria.
- Doena disseminada no paciente imunocomprometido quando o fungo invade a partir dos
pulmes.
A aspergilose invasiva geralmente fatal no imunocomprometido, pois os pacientes
so neutropnicos (com poucos neutrfilos circulantes). As hifas deste fungo, quando
crescem, destroem alvolos e septos alveolares. O crescimento das hifas em ngulo de
45, o que acaba por destruir a arquitetura pulmonar.
195
d) Pneumocistose
O Pneumocystis jiroveci (antigamente chamado de Pneumocystis carinii) um fungo
atpico, comumente encontrado em seres humanos normais e roedores. A infeco
transmitida por meio de gotculas respiratrias (aerossis). A doena ocorre em indivduos
debilitados e imunodeficientes. Antes do advento da terapia antiretroviral altamente ativa, a
terapia HAART (que ser discutida nos seminrios de Imunologia Mdica), uma alta
proporo dos pacientes com AIDS desenvolvia pneumonia por pneumocistos, podendo ser
fatal. Apenas causa doena sintomtica em pessoas com a imunidade celular deficiente.
O Pneumocystis sp. ocorre em uma forma trfica, com at 5 m de dimetro, na
forma de esporocistos e reservatrios de esporos. Os esporos so liberados quando estes
reservatrios se rompem. A doena est associada a uma pneumonite instesticial, com
infiltrao de plasmcitos. J foram relatadas infeces em locais diferentes que no o
pulmo.
CORRELAES CLNICAS:
Para pensar: O tratamento das hepatites virais, como a hepatite B feito com altas doses
de IFN (interferon). Na sua prtica clnica, chega a voc, mdico, um paciente portador de
HBV com um quadro de esteatose avanada. Porm, ele portador de artrite reumatide
(uma das doenas auto-imunes que tratada com glicocorticides). Com base no
mecanismo de ao descrito acima e aprofundado nas aulas de Imunologia Mdica, voc
prescreveria o uso prolongado de IFN para este paciente? Por qu?
Drogas Antifngicas
2) Nistatina
Mecanismo de ao: impede a ligao ao ergosterol da MP fngica.
197
3) Flucitosina
Mecanismo de ao: inibio da sntese de cidos nuclicos, porm sua toxicidade
seletiva. Pode ser utilizada no tratamento da candidase sistmica.
Efeitos colaterais: depresso da medula ssea, anemias e discrasias sangneas.
5) Novas drogas triazlicas: voriconazol e posaconazol (um dos antifngicos mais fortes
que existem). So muito caros. Terapia para 5 dias: R$3.000,00 (em 2007).
CORRELAES CLNICAS:
Efeito colateral dos antifngicos: quase todos eles deixam resduos metablicos na
cavidade bucal, fazendo com que o paciente sinta um gosto amargo de metal durante o
tratamento (o que s vezes dificulta a adeso ao mesmo).
O que o trocisco?
198
CAPTULO 15: HERPES-VRUS
O CMV tambm pode ser transmitido pelo sangue, urina, smen e secrees cervicais. o
maior herpes vrus humano e s tem um sorotipo. O nome refere-se a incluses
intranucleares que so respostas caractersticas desse patgeno.
ANTICORPOS HETEROFLOS
200
Linfcitos atpicos do EBV Fonte: Robbins, 2005 Fonte: Mims, 2005
201
Fonte: Robbins, 2005 Fonte: Robbins, 2005
Resultado =
Fonte: Bogliolo, 2006 Fonte: Mims, 2005
202
Carcinoma Naso-Faringeal: O DNA do EBV detectvel nas clulas tumorais, e um co-
carcingeno, possivelmente de nitrosaminas ingeridas com peixes em conserva. Fatores
genticos do hospedeiro que controlam o HLA (human leucocyte antigen) e a resposta
imune podem ser fatores de suceptibilidade.
HHV-2 faz carcinoma genital e HHV-8 faz Sarcoma de Kaposi.
CORRELAES CLNICAS:
esquerda, a MEMBRANA nas tonsilas palatinas ocasionada pelo EBV; direita, as placas
proporcionadas pelo j conhecido de vocs, Streptococcus pyogenes (Estreptococo beta
hemoltico do grupo A de Lancefield), entre outros agentes. Vo prescrever antibiticos para
qual dos dois quadros mesmo?
203
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS PARA ATUALIZAO
DO MATERIAL EM 2008
204
6 LARPENT, J.P.; LARPENT G. 1975. Microbiologia Plstica, Edgar Blucher.
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do Brasil.
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