Para
esta finalidade voc precisa preparar um meio de cultivo que alm dos diversos
nutriente precisa de um rigoroso controle de pH.
Um dos vegetais a serem cultivados cresce apenas em valores de pH entre 5 e
6. Voc, como nico bioqumico do grupo, precisa fazer 1 L de uma soluo
tampo 0,1 M a ser usada no cultivo desse vegetal. Infelizmente o pHmetro do
laboratrio est com defeitos. No armrio, as solues disponveis so:
- 2 M cido actico, pKa = 4,5
- 2 M cido fosfrico, pKa1 = 2,13 pKa2 = 7,21 pKa3 = 12,32
- 2 M HCl
- 2 M NaOH
- H2O destilada
Dado: Equao de Henderson-Hasselbalch
Para saber a quantidade de cido e de sua base conjugada necessria para preparar 1L
do tampo 0.1 M de pH 5.5 a utiliza-se a equao de Henderson-Hasselbach:
5,5 = 4,5 + log [A-]/[HA] 1= log [A-]/[HA] [A-]/[HA]=10
Se considerarmos [HA] como sendo x, temos que [A-]=10x.
Como o [A-] obtido neste caso a partir da adio de base forte, a quantidade total de
cido actico necessrio para prepara o tampo 0.1M.
Para obter a base conjugada na concentrao desejada mistura-se quantidade
equivalentes de base forte. Portanto ser necessrio adicionar NaOH na concentrao
final de 0.091 M.
Para saber o volume necessrio de cada reagente utiliza-se a equao: MiVi=MfVf
cido actico: 2MxVi=0.1Mx1L Vi=0.05 L (50 mL)
NaOH: 2Mx Vi=0.091Mx1L Vi=0.0455L (45,5 mL)
Misturar os reagentes nos volumes indicados e completar o volume para 1L.
C)
pH Regio de tamponamento
5,5 pK + 1
4,5 pK
3,5 pK -1
D) No, pois a faixa de tamponamento do tampo cido actico est entre 3,5-5,5. Este
tampo no possui efeito tamponante acima de 5,5.
-7
y = 9,978x10 x + 0,0033372
-1/KM = -3344,5
-4
KM = 2,98 10 M
Ou
-7
y = 9,978 x 10 x + 0,0033372
1 K 1 + 1
= M
V0 Vmax [S] Vmax
KM -7
= 9,978 x 10
Vmax
1 = 0,0033372
Vmax
1
= Vmax
0,003337
Vmax = 299 M/tempo
KM -7
= 9,978 x 10
299 M/tempo
-7
KM = 9,978 x 10 x 299
-4
KM = 2,98 x 10 M
-4
O valor de KM para a enzima a presente no plasma foi de 2,98 x 10 M. Portanto, a
isoenzima presente no plasma, a E1A, de fgado, caracterizando um dano heptico do
indivduo.
(b) Explique como a alterao observada nos nveis dos cidos graxos
insaturados relativa aos nveis dos cidos graxos saturados, em diferentes
temperaturas de crescimento, apoia a hiptese da fluidez da membrana.
18:0
18:19
A insaturao na conformao cis faz com que a cadeia sofra um dobramento
diminuindo assim as interaes moleculares entre cadeias de hidrocarbonetos.
- repressor: uma protena com alta afinidade por sequencias especficas de DNA da
regio operadora, s quais o repressor se liga e impede a transcrio das sequencias
codificadoras na ausncia de lactose
b) o operon lac funciona, basicamente, para impedir que as enzimas utilizadas para a
metabolizao de lactose sejam sintetizadas na ausncia deste substrato, ou na presena
de altas concentraes de glicose, o substrato energtico preferencial. Isto representa
uma importante "economia energtica" para a clula, uma vez que protenas s sero
sintetizadas quando suas atividades catalticas forem necessrias ao metabolismo da
clula. Na ausncia de lactose, o repressor i est ligado sequencia operadora, e a
transcrio dos genes estruturais (lacZ, lacY e lacA) inibida; quando a concentrao
intracelular de lactose aumenta, lactose se liga ao repressor causando uma mudana
conformacional na protena, que se desliga da regio operadora. Em resposta a isso, a
transcrio dos genes estruturais ativada e as protenas responsveis pelo metabolismo
de lactose so sintetizadas.
Uma vez que a DNA ligase ativa em bactrias crescidas a 25C, nessa condio
encontraramos o genoma bacteriano intacto e uniformemente marcado radioativamente,
uma vez que 3H-timidina foi incorporada nas duas fitas nascentes durante a replicao, e
todos os fragmentos de Okazaki resultantes da replicao da fita lagging foram ligados
no cromossomo bacteriano intacto. Desta forma, em um gel de agarose deveramos
observar apenas um tamanho de fragmento, correspondente ao tamanho do cromossomo
bacteriano intacto.
Por outro lado, em clulas crescidas a 37C, a DNA ligase esta inativa. Desta forma, a
fita leading replicada quase que normalmente, enquanto que a replicao da fita
lagging resulta em muitos fragmentos de baixo peso molecular (cerca de 1 kb em E.
coli) uma vez que os fragmentos de Okazaki no so ligados aps a remoo dos
iniciadores de RNA. Desta forma, em um gel de agarose, obteramos uma banda
prxima ao tamanho do cromossomo bacteriano intacto, resultado da replicao da fita
leading, e muitos fragmentos menores resultantes dos fragmentos de Okazaki no-
ligados. importante ressaltar que as bactrias morreriam se mantidas na temperatura
no permissiva por muito tempo, devido sua inabilidade de replicar seu DNA
corretamente.