1. No laboratrio voc precisa realizar o cultivo de vegetais hidropnicos.

Para
esta finalidade voc precisa preparar um meio de cultivo que alm dos diversos
nutriente precisa de um rigoroso controle de pH.
Um dos vegetais a serem cultivados cresce apenas em valores de pH entre 5 e
6. Voc, como nico bioqumico do grupo, precisa fazer 1 L de uma soluo
tampo 0,1 M a ser usada no cultivo desse vegetal. Infelizmente o pHmetro do
laboratrio est com defeitos. No armrio, as solues disponveis so:
- 2 M cido actico, pKa = 4,5
- 2 M cido fosfrico, pKa1 = 2,13 pKa2 = 7,21 pKa3 = 12,32
- 2 M HCl
- 2 M NaOH
- H2O destilada
Dado: Equao de Henderson-Hasselbalch

A) Descreva como voc procederia para a confeco do tampo indicando

as solues utilizadas e as respectivas quantidades.
B) De que depende a eficincia de um tampo? Justifique.
C) Esquematize um grfico de pH em funo de equivalentes de OH-,
mostrando a(s) curva(s) de tamponamento para o tampo que voc
confeccionou.
D) Sua soluo poderia ser usada para tamponar o cultivo de outro vegetal
cuja faixa de pH timo esteja entre 6 e 7? Justifique.

A) Como a planta cresce apenas em pH entre 5 e 6. O ideal seria preparar um tampo

dentro desta faixa de pH, por exemplo, um tampo em pH 5,5.

Sabendo que a faixa de tamponamento de um tampo ocorre em pH=pKa1e

considerando-se os reagentes disponveis, o cido escolhido para o preparo do tampo
seria o cido actico (pKa=4,5). Com ele poderia se preparar um tampo de pH entre
3,5 a 5,5.

Para saber a quantidade de cido e de sua base conjugada necessria para preparar 1L
do tampo 0.1 M de pH 5.5 a utiliza-se a equao de Henderson-Hasselbach:
5,5 = 4,5 + log [A-]/[HA] 1= log [A-]/[HA] [A-]/[HA]=10
Se considerarmos [HA] como sendo x, temos que [A-]=10x.

O tampo a 0.1M de de cido actico/acetato contem no equilbrio: [HA]+[A-]=0.1M

Portanto, x+10x=0.1 M. Resolvendo a equao temos que x=[HA]=0.009 M e [A-
]=0.091 M no equilbrio.

Como o [A-] obtido neste caso a partir da adio de base forte, a quantidade total de
cido actico necessrio para prepara o tampo 0.1M.
Para obter a base conjugada na concentrao desejada mistura-se quantidade
equivalentes de base forte. Portanto ser necessrio adicionar NaOH na concentrao
final de 0.091 M.
Para saber o volume necessrio de cada reagente utiliza-se a equao: MiVi=MfVf
cido actico: 2MxVi=0.1Mx1L Vi=0.05 L (50 mL)
NaOH: 2Mx Vi=0.091Mx1L Vi=0.0455L (45,5 mL)
Misturar os reagentes nos volumes indicados e completar o volume para 1L.

B) A eficincia de uma soluo em um dado pH depende do pKa do cido fraco e da

concentrao do cido fraco e de sua base conjugada

C)
pH Regio de tamponamento

5,5 pK + 1
4,5 pK
3,5 pK -1

0,0 0,5 1,0

OH- (Equivalentes)

D) No, pois a faixa de tamponamento do tampo cido actico est entre 3,5-5,5. Este
tampo no possui efeito tamponante acima de 5,5.

2. Hemoglobina e a mioglobina so metalo-protenas globulares com grupos

prostticos (heme e ferro), capazes de interagir com o oxignio. A
mioglobina uma protena de cadeia nica (monomrica) enquanto a
hemoglobina multimrica, composta de duas cadeias alfas e duas cadeias
betas. No organismo, a mioglobina encontrada apenas no msculo,
enquanto a hemoglobina est presente nos eritrcitos.
a) Defina: 1) protenas globulares e fibrilares; 2) grupo prosttico; 3) metaloprotena.

b) Qual a importncia da presena de mltiplas cadeias polipeptdicas na

hemoglobina? Por que a diferena estrutural (nmero de cadeias) entre a
mioglobina e a hemoglobina afeta suas funes no organismo?
3. Durante danos considerveis no fgado, uma enzima (E1A) liberada na
corrente sangunea. Aps exerccios intensos, uma isoenzima do msculo
(E1B) liberada na corrente sangunea. E1A e E1B podem ser diferenciadas
porque possuem valores de KM diferentes. A enzima presente no msculo
tem maior afinidade pelo substrato e apresenta um valor de KM igual a 2 x
10-5 M. A anlise de cintica enzimtica obtida a partir de uma amostra de
soro de um paciente gerou os resultados apresentados no grfico abaixo.
Os dados esto apresentados em concentrao molar (M). A partir destes
dados identifique se o paciente est sofrendo de uma doena heptica ou
simplesmente tem se exercitado violentamente. Justifique sua resposta.

-7
y = 9,978x10 x + 0,0033372

-1/KM = -3344,5
-4
KM = 2,98 10 M

Ou
-7
y = 9,978 x 10 x + 0,0033372

1 K 1 + 1
= M
V0 Vmax [S] Vmax
 KM -7
= 9,978 x 10
Vmax
1 = 0,0033372
Vmax
1
= Vmax
0,003337
Vmax = 299 M/tempo

KM -7
= 9,978 x 10
299 M/tempo
-7
KM = 9,978 x 10 x 299
-4
KM = 2,98 x 10 M

-4
O valor de KM para a enzima a presente no plasma foi de 2,98 x 10 M. Portanto, a
isoenzima presente no plasma, a E1A, de fgado, caracterizando um dano heptico do
indivduo.

4. Uma hiptese central na pesquisa de membranas que os lipdeos da

membrana devem ser fludos (em oposio a "congelados") a fim de que a
membrana possa desempenhar suas funes. O apoio para esta hiptese
fornecido pela observao de que a composio de cido graxo das
membranas pode ser alterada pelas condies nas quais a bactria cresce. Por
exemplo, se a bactria est crescendo em temperatura menor que a normal, as
quantidades observadas de cidos graxos insaturados (relativas ao contedo
de cido graxo saturado) esto acima do normal. Contrariamente, se a bactria
est crescendo em temperatura acima da normal, as quantidades observadas
de cidos graxos insaturados nos lipdeos da membrana (relativas aos cidos
graxos saturados) esto abaixo do normal.

(a) Sugira razes para o fato de que o contedo lipdico na membrana

bacteriana deve ser fluido para que a membrana opere apropriadamente.

(b) Explique como a alterao observada nos nveis dos cidos graxos
insaturados relativa aos nveis dos cidos graxos saturados, em diferentes
temperaturas de crescimento, apoia a hiptese da fluidez da membrana.

C ) Desenhe a estrutura de um cido graxo saturado com 18 carbonos (C18:0,

cido esterico) e outro com 18 carbonos e uma insaturao (C18:19, cido
oleico). Por que a presena da insaturao faz com que a membrana seja mais
fluida?

(a) A membrana biolgica considerada uma barreira impermevel maioria dos

ons e molculas hidrossolveis, sendo que sua permeabilidade a uma determinada
molcula depende da existncia de transportadores (protenas) especficos. Assim, a
membrana necessita ser fluida para que ocorra o folding(dobramento) correto das
protenas de membrana. Alm disso, a fluidez de membrana importante para a
movimentao dos fosfolipdeos de membrana, caracterstica importante para a
permeabilidade seletiva de algumas pequenas molculas, sinalizao celular e tambm
para diviso celular.
(b) Os cidos graxos saturados possuem ponto de fuso maior que os cidos graxos
insaturados, isso se d por causa das interaes intermoleculares (Van der Walls) entre
as cadeias de cidos graxos saturados que favorecem a formao de uma estrutura mais
rgida. J nos cidos graxos insaturados, as duplas ligaes na conformao cis fazem
com que a cadeia do cido graxo adquira uma conformao dobrada (no linear). Esta
caracterstica faz com que as interaes moleculares entre as cadeias de hidrocarbonetos
de cidos graxos insaturadas seja menor, diminuindo o ponto de fuso e aumentando a
fluidez da menbrana. O aumento dos nveis de cidos graxos insaturados em
temperatura mais baixas demonstra que o metabolismo celular regulado de modo a
manter uma fluidez de membrana ideal para s atividades biolgicas da bactria. Do
mesmo modo em altas temperaturas ocorre um aumento nos nveis de cidos graxos
saturados a fim de garantir o grau de fluidez adequado.
(c)

18:0

18:19
A insaturao na conformao cis faz com que a cadeia sofra um dobramento
diminuindo assim as interaes moleculares entre cadeias de hidrocarbonetos.

5. Uma suspenso de mitocndrias foi dialisada e incubada em tampo

isosmtico com 100 mmols de acetil-CoA, 2 mmols de oxaloacetato, 5
mmols de NAD+, 30 mmols de GDP, 20 mmols de Pi e excesso de
dinitrofenol. Supondo que a mitocndria permevel a todos esses
compostos, quais compostos estaro presentes ao final da reao e em
quais quantidades? E o que aconteceria se o dinitrofenol fosse omitido neste
mesmo experimento? Justifique sua resposta. As reaes componentes do
Ciclo dos cidos Tricarboxlicos esto representadas abaixo.
6. Observe as curvas indicadas no grfico abaixo. Os parmetros referem-se
ao perodo subsequente a uma refeio (tempo zero). Os valores das
ordenadas so diferentes para cada curva. Analise as afirmativas abaixo,
indique se so verdadeiras ou falsas e JUSTIFIQUE suas respostas. Sero
consideradas apenas as afirmativas devidamente justificadas.

a) A curva I representa a concentrao de insulina plasmtica

b) A curva I representa a intensidade da gliconeognese
c) A curva II representa a atividade da gliclise no tecido adiposo
d) A curva III representa a utilizao de glicose exgena
e) A curva III representa a intensidade da sntese de protenas
f) A curva IV representa a degradao do glicognio heptico
g) A sntese de adenosina monofosfato cclido (AMP cclico) maior em C do que
em B
h) A razo gliclise/gliconeognese maior em B que em A
i) A atividade mxima do Ciclo de Krebs ocorre em C
a) FALSA. A Insulina liberada de forma intermitente (em picos), por isso a curva
I no uma representao da concentrao de insulina;
b) FALSA. A gliconeognese aumentar no decorrer do tempo em jejum, ser
gradualmente mais alta em B e C, por isso a curva I no pode ser uma representao da
intensidade da gliconeognese;
c) FALSA. A gliclise no tecido adiposo ocorrer de forma mais intensa nquando
houver disponibilidade de carboidrato para a sntese de lipdeos, ou seja, no perodo ps
prandial, por isso a curva II no representativa da gliclise no tecido adiposo;
d) VERDADEIRA. A elevao da curva III logo aps a refeio seguida de um
declnio representa a utilizao de glicose exgena (vinda da alimentao);
e) VERDADEIRA. A disponibilidade de aminocidos fornecidos pela refeio leva
a um aumento da sntese de protenas, a fim de repor o catabolismo gerado no jejum.
Com o passar do tempo a sntese de protenas torna-se menos favorecida;
f) FALSA. A degradao do glicognio heptico ter um pico em tempos mais
curtos que 12h de jejum;
g) VERDADEIRA. A adenosina monofosfato cclido (AMP cclico) um segundo
mensageiro sinalizado pelo glucagon e adrenalina e estar em maior concentrao em
perodos mais prolongado de jejum;
h) FALSA. A razo gliclise/gliconeognese ser maior quando houver maior
disponibilidade de carboidratos clula, que ser no momento ps-refeio, portanto,
ser menor em B que em A;
i) FALSA. Em situao de repouso, a atividade mxima e completa do Ciclo de
Krebs ocorrer aps a refeio, quando houver maior disponibilidade de substratos
vindo da alimentao. Estes substratos fornecero os eltrons destinados cadeia
respiratria e fosforilao oxidativa.

7. Abaixo voc encontra uma representao esquemtica do operon Lac de E.

coli. Com esse operon como exemplo:

a) defina promotor, operador e repressor

b) explique como a expresso dos genes lacZ, lacY e lacA controlada em

resposta a disponibilidade de carboidratos no meio.

c) a constante de dissociao para o complexo repressor:operador de

aproximadamente 0,1 pM. Explique por que essa constante to baixa
importante no funcionamento adequado do operon.
a)-promotor uma sequencia de DNA que se encontra montante da sequencia
codificadora de um gene, na qual a RNA polimerase se liga para dar inicio transcrio
da regio codificadora.

-operador uma sequencia de DNA encontrada em genomas bacterianos organizados

em "operons", ou conjuntos gnicos com regulao transcricional coordenada. Essa
regio geralmente localizada imediatamente aps a sequencia do promotor, e nela se
ligam protenas repressoras, que quando ligadas ao operador regulam a transcrio das
regies codificadoras pelo bloqueio da progresso da RNA polimerase.

- repressor: uma protena com alta afinidade por sequencias especficas de DNA da
regio operadora, s quais o repressor se liga e impede a transcrio das sequencias
codificadoras na ausncia de lactose

b) o operon lac funciona, basicamente, para impedir que as enzimas utilizadas para a
metabolizao de lactose sejam sintetizadas na ausncia deste substrato, ou na presena
de altas concentraes de glicose, o substrato energtico preferencial. Isto representa
uma importante "economia energtica" para a clula, uma vez que protenas s sero
sintetizadas quando suas atividades catalticas forem necessrias ao metabolismo da
clula. Na ausncia de lactose, o repressor i est ligado sequencia operadora, e a
transcrio dos genes estruturais (lacZ, lacY e lacA) inibida; quando a concentrao
intracelular de lactose aumenta, lactose se liga ao repressor causando uma mudana
conformacional na protena, que se desliga da regio operadora. Em resposta a isso, a
transcrio dos genes estruturais ativada e as protenas responsveis pelo metabolismo
de lactose so sintetizadas.

Alem disso, o operon lac tambm reprimido na presena de altas concentraes de

glicose, mesmo em presena de lactose. Nessa condio, a concentrao intracelular de
cAMP est bastante diminuda (uma vez que o balano energtico est deslocado no
sentido de fosforilao), fazendo com que a ativao da transcrio dos genes do operon
Lac via protena CAP (catabolite activator protein), que depende da ligao de cAMP,
esteja inibida.

c) a constante de dissociao do complexo repressor:operador deve ser baixa para

garantir a alta especificidade da ligao. Dessa forma, o repressor capaz de se ligar
eficientemente regio operadora, mesmo com um grande excesso de outras regies de
ligao (todo o resto do genoma bacteriano). Alem disso, essa alta afinidade garante que
o repressor no ir se dissociar da regio operadora na ausncia do seu ligante cannico,
neste caso a lactose. Em conjunto, esses dois fatores garante a especificidade das
respostas do repressor.

8. Estudos sobre o mecanismo de replicao do DNA avanaram muito com o

uso de mutantes bacterianos deletados de uma ou mais enzimas que se
acreditava estarem envolvidas no processo de replicao. No laboratrio A
gerou-se um mutante de DNA ligase sensvel a temperatura, permissivo a 25C
e no-permissivo a 37C. Bactrias mutantes foram crescidas a 25C e 37C
em presena de 3H-timidina por 2 hr (tempo de duplicao de E. coli de cerca
de 20 min), e aps a incubao o DNA foi isolado das duas condies,
separado em um gel de agarose e exposto a um filme radiogrfico. Que padro
de radioatividade voc esperaria encontrar em cada uma das condies?
Justifique sua resposta.

Uma vez que a DNA ligase ativa em bactrias crescidas a 25C, nessa condio
encontraramos o genoma bacteriano intacto e uniformemente marcado radioativamente,
uma vez que 3H-timidina foi incorporada nas duas fitas nascentes durante a replicao, e
todos os fragmentos de Okazaki resultantes da replicao da fita lagging foram ligados
no cromossomo bacteriano intacto. Desta forma, em um gel de agarose deveramos
observar apenas um tamanho de fragmento, correspondente ao tamanho do cromossomo
bacteriano intacto.

Por outro lado, em clulas crescidas a 37C, a DNA ligase esta inativa. Desta forma, a
fita leading replicada quase que normalmente, enquanto que a replicao da fita
lagging resulta em muitos fragmentos de baixo peso molecular (cerca de 1 kb em E.
coli) uma vez que os fragmentos de Okazaki no so ligados aps a remoo dos
iniciadores de RNA. Desta forma, em um gel de agarose, obteramos uma banda
prxima ao tamanho do cromossomo bacteriano intacto, resultado da replicao da fita
leading, e muitos fragmentos menores resultantes dos fragmentos de Okazaki no-
ligados. importante ressaltar que as bactrias morreriam se mantidas na temperatura
no permissiva por muito tempo, devido sua inabilidade de replicar seu DNA
corretamente.