Anda di halaman 1dari 3

A Prosedur Kerja

1 Pembuatan Fase Gerak

6,9 Na2HPO4 Tambahkan H- Ad dengan


dilarutkan dalam aqua
3PO4 hingga
aqua bidestilata pH mencapai bidestilata
steril 2,5 steril sampai

Buat eluen dengan mencampurkan 950 Dapar


ml daparLarutan
2 Pembuatan posfat pH 2,5Baku
Induk dan 50 ml
Pembanding disaring
Akrilamida
aasetonitril
Pembuatan sehingga
Larutanperbandingannya dengan filter
Induk Baku Pertama (1000 ppm)
95:5 eluen

Timbang 50 Masukkan
mg kedalam labu
akrilamida ukur 50 ml

Tambahkan sedikit
Setelah larut
pelarut
tambahkan pelarut
(asetonitril:dapar
sampai tanda batas
fosfat)

b Pembuatan Larutan Induk Baku Kedua (100 ppm)

Dipipet 5 ml Masukkan
larutan induk kedalam labu
baku pertama ukur 50 ml

Setelah larut Tambahkan sedikit


tambahkan pelarut pelarut
sampai tanda batas (asetonitril:dapar
3 Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
fosfat)
Penentuan panjang gelombang maksimum
dilakukan pada panjang gelombang 200 nm
400 nm menggunakan pelarut dapar fosfat :
asetonitril (95 : 5)
4 Penentuan Kondisi Optimum KCKT

Kondisi percobaan dipilih


pada kolom ZORBAX Volume sampel
Eclipse XDB-C18 (3x150 yang disuntikan 20
mm ; 3,5 m), laju alir l
0,5 ml/menit, suhu 25oC

Persyaratan kesesuaian Penentuan kondisi optimum


sistem kromatografi, yaitu mengacu pada beberapa
waktu retensi (5 menit < tR < parameter kualitas pemisahan,
10 menit), faktor kapasitas (1 yaitu waktu pemisahan (tR),
< K, < 10) da jumlah plat faktor kapasitas (K,) dan
teoritik (N > 10.000) efisiensi kolom (n)

5 Pembuatan Kurva Kalibrasi

Larutan baku eksternal Disuntikan sebanyak


dibuat dengan 20 l ke dalam kolom
konsentrasi 1 ppm; 2 pada kondisi yang
ppm; 3 ppm; 4 ppm; 5 telat ditentukan
ppm; 6 ppm

Dibuat kurva antara


konsentrasi (sumbu
X) terhadap luas
puncak (sumbu y)

1. Penetapan Kurva Akrilamid

Sebelum melakukan akrilamid dengan Menyalakan HPLC,


HPLC dilakukan terlebih dahulu kemudian setting laju
mencari panjang20gelombang
Injek standar l denganakrilamid alir, eluen
Melakukan yang cocok
baseline tiap 10
standar
menggunakandengan menggunakan
suntikan khusus dan sampai
menit, menyetting
nilaipanjang
noicenya
spektrofotometer
(syringe
Setelah filter). UV-Vis.
didapatPenginjekan
hasil gelombangnya
minimal 50, jika lebih dari 50
tidak boleh
kromatogram, ada udara
HPLC tidak akan sesuai pada hasilnya.
didalamnya.
dibersihkan olehSampel
methanolyang
: Baseline berfungsi untuk
ditarik oleh kolom
air dengan laju alirhanya 2 l
yang menghilangkan noice
(dilakukan triplo).
lebih besar. (pengganggu/pengotor)
Buat regresi antara AUC
dengan konsentrasi.