LAPORAN

ANALISIS RHODAMIN B PADA SAOS

SECARA KUANTITAF DAN KUALITATIF (KLT)

Oleh
Wiwit Puji Lestari 121810301052
Lubabah Putri D. 121810301061
Winda Intan N. 121810301062
Octavianti Nuryani 121810301067
Yulia agustin 121810301073

LABORATURIUM KIMIA ANALISIS

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAAN ALAM
UNIVERSITAS JEMBER
2015
 BAB 1. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Makanan merupakan suatu hal yang sangat penting dalam kehidupan manusia, oleh karena
itu makanan yang kita makan bukan hanya harus memenuhi gizi dan mempunyai bentuk yang
menarik, akan tetapi juga harus aman dalam arti tidak mengandung mikroorganisme dan bahan
bahan kimia yang dapat menyebabkan keracunan penyakit. Perusahaan makanan dan minuman
kemasan di Indonesia saat ini berkembang dengan sangat pesat. Ditemukan makanan dan
minuman kemasan yang diproduksi hanya mementingkan aspek selera konsumen tanpa
memperdulikan aspek kesehatan (Yuliarti, 2007).
Saos adalah bahan pelengkap makanan yang terbuat dari tomat. Industri pembuatan saos
biasanya juga menggunakan pepaya, maizena, bawang putih, gula pasir, cuka makanan, sodium
benzoat dan pewarna makanan sebagai tambahannya. Namun beberapa penelitian terakhir
mengungkap beberapa industri soas menggunakan pewarna tekstil untuk bahan pewarnanya.
Mereka menggunakan ekstra cabai leoserin capsikum, ampas tapioka, ekstra bawang putih, bibit
cairan tomato, sakarin, garam, pewarna sunset, pewarna jenis poncau, dan potassium fosfat. Hal
ini jelas berbahaya jika dikonsumsi dan dapat menimbulkan penyakit seperti kanker, pencernaan
terhambat, sakit tenggorokan, pengerasan usus dan diare.
Zat warna menurut Witt (1876:70) merupakan gabungan zat organik tidak jenuh, kromofor
dan ausokrom. Zat organik tidak jenuh adalah molekul zat warna yang berbentuk senyawa
aromatik yang terdiri dari hidrokarbon aromatik, fenol dan senyawa yang mengandung nitrogen.
Kromofor adalah pembawa warna sedangkan aukrosom adalah pengikat antara warna dengan
serat.
Peningkatan mutu sumber daya manusia dan teknnologii saat ini menjadikan zat warna
kian berkembang degan pesat. Keterbatasan zat warna alam membuat industri tekstil
menggunakan zat warna buatan (sintetik) sebagai pewarna bahan tekstil karena zat warna sintetik
lebih banyak memiliki warna , tahan luntur dan mudah cara pemakaiannya ketimbang zat warna
alami yang kian sulit diperoleh.
Zat pewarna pada makanan digolongkan menjadi dua kategori yaitu zat warna alami dan
zat warna sintetik. Zat warna alami merupakan zat warna yang berasal dari tanaman atau buah-
buahan. Zat warna alami cenderung menghasilkan karakteristik warna yang lebih pudar dan
kurang stabil bila dibandingkan zat warna sintetik.
Pemerintah Indonesia melalui Peraturan Menteri Kesehata (Permenkes)
No.239/MenKes/Per/V/85 menetapkan 30 zat pewarna berbahaya. Rhodamin B termasuk salah
satu zat pewarna berbahaya dan dilarang digunakan pada produk pangan. Rhodamin B
merupakan zat warna sintetik yang umum digunakan sebagai pewarna tekstil. Menurut Peraturan
Pemerintah RI No. 28 Tahun 2004, Rhodamin B merupakan zat warna tambahan yang dilarang
penggunaannya dalam produk-produk pangan.
Rhodamin B dapat menyebabkan iritasi saluran pernafasan, iritasi kulit, iritasi pada mata,
iritasi pada saluran pencernaan, keracunan, dan gangguan hati akan tetapi sampai sekarang masih
banyak produsen yang menggunakan Rhodamin B dalam produk makanan dan minuman yang
dihasilkannya. Rhodamin B ditemukan dalam berbagai produk seperti: kerupuk.
Zat warna Rhodamin B walaupun telah dilarang penggunaanya ternyata masih ada
produsen yang sengaja menambahkan zat warna Rhodamin B untuk produk kerupuk sebagai
pewarna merah dengan alasan warnanya sangat bagus, mudah didapat, dan murah harganya.
Sebagian besar produk tersebut tidak mencantumkan kode, label, merek, jenis atau data lainnya.
Para pedagang kerupuk menggunakan pewarna untuk memperbaiki warna merah makanan yang
berkurang (menjadi pudar) akibat penambahan bahan lain. Rhodamin B dapat terakumulasi pada
tubuh manusia dan bersifat karsinogenik yang dalam jangka panjang menyebabkan penyakit-
penyakit seperti kanker dan tumor pada organ tubuh manusia. Ciri-ciri makanan yang
menggunakan pewarna rhodamin B, seperti:
Warnanya mencolok
Cerah mengilap
Warnanya tidak homogen (ada yang menggumpal)
Ada sedikit rasa pahit
Berbagai peraturan pemerintah ditetapkan selain untuk melindungi konsumen sekaligus juga
merupakan informasi / petunjuk bagi pengusaha kecil industri akan adanya bahan-bahan
tambahan kimia yang berbahaya bagi kesehatan manusia (Suprapti, 2005:10).
Berdasarkan uraian di atas, maka perlu adanya penelitian mengenai keamanan pangan
jajanan di sekitar Kampus Tegalboto Universita Jember dari segi Rhodamin B.
1.2 Rumusan Masalah
Adapun rumusan masalah pada penelitian ini adalah
1. Apakan pelengkap makanan seperti saos cilok di sekitar Kampus Tegalboto Universitas
Jember mengandung zat pewarna sintetis Rhodamin B?
2. Berapa kadar Rhodamin B dalam sampel saos?

1.3 Batasan Masalah

Adapun batasan masalah pada penelitian ini adalah
1. Sampel penelitian diambil secara acak yaitu saos cilok yang dijual beberapa pedagang di
sekitar kampus
2. Sampel diuji untuk mengetahui kandungan Rhodamin B secara kualitatif dan kuantitatif

1.4 Tujuan Penelitian

Berdasarkan permasalahan yang dikemukakan diatas maka tujuan dari penelitian ini adalah
untuk mengidentifikasi bahan kimia zat pewarna Rhodamin B yang terdapat didalam pelengkap
makanan seperti saos.

1.5 Manfaat Penelitian

Memberikan informasi pada mahasiswadan instansi terkait tentang adanya zat warna
berbahaya yang masih digunakan sebagai zat pewarna makanan yaitu Rhodamin B pada
pelengkap makanan seperti saos.

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Jajanan
Makanan merupakan salah satu kebutuhan dasar manusia yang terpenting dan juga
merupakan faktor yang sangat esensial bagi pertumbuhan dan perkembangan manusia. Tetapi
betapapun menariknya penampilan, lezat rasanya dan tinggi nilai gizinya, apabila tidak aman
dikonsumsi, maka makanan tersebut tidak ada nilainya sama sekali (Winarno dan Rahayu, 1994).
Makanan jajanan yang dijual oleh pedagang kaki lima menurut FAO didefinisikan sebagai
makanan dan minuman yang dipersiapkan dan dijual oleh pedagang kaki lima di jalanan dan di
tempat-tempat keramaian umum lain yang langsung dimakan dan dikonsumsi tanpa persiapan
atau pengolahan lebih lanjut (Judarwanto, 2007). Makanan jajanan (street food) sudah menjadi
bagian yang tidak terpisahkan dari kehidupan masyarakat, baik dari perkotaan maupun pedesaan.
Keunggulan dari makanan jajanan adalah murah dan mudah didapat, serta cita rasanya yang
cocok dengan selera kebanyakan masyarakat. Meskipun makanan jajanan memiliki keunggulan-
keunggulan tersebut, ternyata makanan jajanan juga beresiko terhadap kesehatan karena
penanganannya sering tidak higienis, yang memungkinkan makanan jajanan terkontaminasi oleh
mikroba beracun maupun penggunaan bahan tambahan pangan (BTP) yang tidak diizinkan.

2.2 Bahan Pewarna Makanan

Warna dari suatu produk makanan ataupun minuman merupakan salah satu ciri yang
sangat penting. Warna merupakan kriteria dasar untuk menentukan kualitas makanan, antara lain
warna juga dapat memberi petunjuk mengenai perubahan kimia dalam makanan, seperti
pencoklatan (deMan, 1997).
Bahan pewarna makanan kadang-kadang ditambahkan dalam makanan untuk membantu
mengenali identitas atau karakteristik dari suatu makanan; untuk mempertegas warna alami dari
makanan; untuk mengkoreksi variasi alami dalam warna; untuk menjaga keseragaman warna
dari batch ke batch, di mana variasi tersebut biasa terjadi pada intensitas warna; dan
memperbaiki penampilan makanan yang mengalami perubahan warna alaminya selama proses
pengolahan maupun penyimpanan (Nollet, 2004). Adapun bahan pewarna yang diijinkan di
Indonesia dapat dilihat di Tabel 1.
Zat pewarna makanan sering kali menimbulkan masalah kesehatan, terutama dalam
penyalahgunaan pemakaiannya. Betapa tidak, zat warna untuk tekstil dan kulit terkadang dipakai
untuk mewarnai makanan (Donatus, 1990).
 Zat pewarna dibagi menjadi dua kelompok yaitu certified color dan uncertified color.
Perbedaan antara certified dan uncertified color adalah certified color merupakan zat pewarna
sintetik yang terdiri dari dye dan lake, sedangkan uncertified color adalah zat pewarna yang
berasal dari bahan alami (Winarno, 2002).

2.2.1 Uncertified color additive ( zat pewarna tambahan alami)

Zat pewarna yang termasuk dalam uncertified color ini adalah zat pewarna alami (ekstrak
pigmen dari tumbuh-tumbuhan) dan zat pewarna mineral, walaupun ada juga beberapa zat
pewarna seperti -karoten dan kantaxantin yang telah dapat dibuat secara sintetik. Untuk
penggunaannya bebas sesuai prosedur sertifikasi dan termasuk daftar yang tetap. Satu-satunya
zat pewarna uncertified yang penggunaannya masih bersifat sementara adalah Carbon Black
(Winarno, 2002).

2.2.3 Certified color (zat pewarna sintetik)

Seiring dengan berkembangnya ilmu pengetahuan, zat warna hasil rekayasa teknologipun
kian berkembang. Oleh karena itu berbagai zat warna sintetik diciptakan untuk berbagai jenis
keperluan misalnya untuk tekstil, kulit, peralatan rumah tangga dan sebagainya (Djalil, dkk,
2005).
Tabel 1. Zat Pewarna bagi Makanan dan Minuman yang Diijinkan di
Indonesia (Winarno, 2002)
Warna Nama Nomor indeks
nama
I. Zat warna alam
Merah Alkanat 75520
Merah Cochineal red ( karmin ) 75470
Kuning Annato 75120
Kuning Karoten 75130
Kuning Kurkumin 75300
Kuning Safron 75100
Hijau Klorofil 75810
Biru Ultramarin 77007
Coklat Karamel -
Hitam Carbon black 77266
Hitam Besi oksida 77499
Putih Titanium dioksida 77891
 II. Zat warna sintetik
Merah Carmoisine 14720
Merah Amaranth 16185
Merah Erythrosium 45430
Oranye Sunsetyellow FCF 15985
Kuning Tartrazine 19140
Kuning Quineline yellow 47005
Hijau Fast green FCF 42053
Biru Brilliant blue FCF 42090
Biru Indigocarmine 42090
Ungu 42640
( indigotine )
Violet GB

Ada dua macam yang tergolong certified color yaitu dye dan lake. Keduanya adalah zat
pewarna buatan. Zat pewarna yang termasuk golongan dye telah melalui prosedur sertifikasi dan
spesifikasi yang telah ditetapkan oleh FDA. Sedangkan zat pewarna lake yang hanya terdiri dari
satu warna dasar, tidak merupakan warna campuran juga harus mendapat sertifikat (Winarno,
2002).
1) Dye
Dye adalah zat pewarna yang umumnya bersifat larut dalam air dan larutannya dapat
mewarnai. Pelarut yang dapat digunakan selain air adalah propilenglikol, gliserin, atau alkohol.
Dye dapat juga diberikan dalam bentuk kering apabila proses pengolahan produk tersebut
ternyata menggunakan air. Dye terdapat dalam bentuk bubuk, butiran, pasta, maupun cairan yang
penggunaannya tergantung dari kondisi bahan, kondisi proses, dan zat pewarnanya sendiri
(Winarno, 2002).
2) Lake
Zat pewarna ini merupakan gabungan dari zat warna (dye) dengan radikal basa (Al atau
Ca) yang dilapisi dengan hidrat alumina atau Al(OH)3. Lapisan alumina atau Al(OH)3 ini tidak
larut dalam air, sehingga lake ini tidak larut pada hampir semua pelarut. Sesuai dengan sifatnya
yang tidak larut dalam air, zat pewarna ini digunakan untuk produk-produk yang tidak boleh
terkena air. Lake sering kali lebih baik digunakan untuk produk-produk yang mengandung lemak
dan minyak daripada dye, karena FD & C Dye tidak larut dalam lemak. (Winarno, 2002).

2.3 Rhodamin B
 Rhodamin B adalah pewarna sintetis yang digunakan pada industri tekstil dan kertas.
Rhodamin B berbentuk serbuk kristal merah keunguan dan dalam larutan akan berwarna merah
terang berpendar. Zat ini sangat berbahaya jika terhirup, mengenai kulit, mengenai mata dan
tertelan. Dampak yang terjadi dapat berupa iritasi pada saluran pernafasan, iritasi pada kulit,
iritasi pada mata, iritasi pada saluran pencernaan dan bahaya kanker hati. Apabila tertelan dapat
menimbulkan iritasi pada saluran pencernaan dan air seni akan berwarna merah atau merah
muda. Rhodamin B bersifat karsinogenik sehingga dalam penggunaan jangka panjang dapat
menyebabkan kanker. Uji toksisitas Rhodamin B telah dilakukan terhadap mencit dan tikus
dengan injeksi subkutan dan secara oral. Rhodamin B dapat menyebabkan karsinogenik ketika
diinjeksi subkutan yaitu timbul sarcoma lokal, sedangkan secara UV-VIS didapatkan LD5089,5
mg/Kg yang ditandai dengan gejala adanya pembesaran hati, ginjal dan limfa serta diikuti
perubahan anatomi berupa pembesaran organ pada tikus tersebut. (Index, 2006).

Struktur rhodamin B dapat ditunjukkan pada gambar 1. (Marmion, 1984).

Gambar 1. Struktur rhodamin B

2.4 Kromatografi Lapis Tipis

Kromatografi lapis tipis ialah metode pemisahan fisikokimia. Lapisan yang memisahkan,
yang terdiri dari bahan yang berbutir-butir (fase diam), ditempatkan pada penyangga berupa plat
gelas, logam, atau lapisan yang cocok. Campuran yang dipisah, berupa larutan, ditotolkan berupa
bercak atau pita (awal). Setelah plat atau lapisan ditaruh di dalam bejana tertutup rapat yang
berisi larutan pengembang yang cocok (fase gerak), pemisahan terjadi selama perambatan kapiler
(pengembangan) (Stahl, 1985).
 Kromatografi lapis tipis (KLT) telah banyak digunakan pada analisis pewarna sintetik.
KLT merupakan metode pemisahan yang lebih mudah, lebih cepat, dan memberikan resolusi
yang lebih baik dibandingkan kromatografi kertas. KLT tidak sebaik HPLC untuk pemisahan dan
identifikasi, tetapi metode ini relatif sederhana dan dapat digunakan untuk memisahkan
campuran yang kompleks. Meskipun demikian KLT tidak mahal dan dapat digunakan secara
mudah di industri makanan (Nollet, 2004). KLT pada hakekatnya melibatkan dua fase: sifat fase
diam atau sifat lapisan, dan sifat fase gerak atau campuran larutan pengembang (Gritter, 1991).

2.4.1 Fase diam (larutan penjerap/ adsorben)

Semua prosedur kromatografi, kondisi optimum untuk suatu pemisahan merupakan hasil
kecocokan antara fase diam dan fase gerak. Pada KLT, fase diam harus mudah didapat (Sudjadi,
1986). Dua sifat yang penting dari kolom yaitu besar partikel dan homogenitas, karena adhesi
terhadap penyokong sangat tergantung pada kedua sifat tersebut. Besar partikel yang biasa
digunakan adalah 1-25 mikron (Sastrohamidjojo, 1991).
Kolom yang umum digunakan yaitu silika gel, aluminium oksida, kieselgur, selulosa dan
turunannya, poliamida dan lain-lain (Stahl, 1985). Silika gel merupakan fase diam yang paling
sering digunakan untuk KLT (Sudjadi, 1986). Zat ini digunakan sebagai adsorben universal
untuk kr

2.4.2 Fase gerak (pelarut pengembang)

Fase gerak ialah medium angkut dan terdiri atas satu atau beberapa pelarut. Ia bergerak di
dalam fase diam, yaitu suatu lapisan berpori, karena ada gaya kapiler. Yang digunakan hanyalah
pelarut bertingkat mutu analitik dan bila diperlukan, sistem pelarut multikomponen ini harus
berupa campuran sesederhana mungkin yang terdiri atas maksimal tiga komponen (Stahl, 1985).
Pada proses serapan, yang terjadi jika menggunakan silika gel, alumina dan fase diam
lainnya, pemilihan pelarut mengikuti aturan kromatografi kolom serapan (Sudjadi, 1986).
Memang agak sukar untuk menemukan sistem pelarut yang cocok untuk pengembangan.
Pemilihan sistem pelarut yang dipakai didasarkan atas prinsip like dissolves like, tetapi akan
lebih cepat dengan mengambil pengalamanan para peneliti, yaitu dengan dasar pustaka yang
sudah ada (Adnan, 1997).
2.5 Spektrometri
Analisis spektrometri adalah salah satu metode analisis dalam ilmu kimia yang
didasarkan pada identifikasi dan kuantifikasi spesies analit berdasarkan sifat optisnya. Dalam
metode ini spektrum radiasi elektromagnetik dimanfaatkan sebagai entitas perantara untuk
analisis kualitatif dan kuantitatif ketika berinteraksi dengan spesies analit yang dapat melalui
proses absorpsi, emisi, fluoresensi atau proses lainnya (Siswoyo, 2007). Dalam metode
spektrometri, larutan sampel menyerap radiasi elektromagnetik dari sumber yang tepat, dan
jumlah yang diserap terkait dengan konsentrasi analit dalam larutan. Transisi elektronik yang
terjadi di daerah tampak dan ultraviolet dari spektrum adalah karena penyerapan radiasi oleh
jenis tertentu dari kelompok, obligasi, dan kelompok fungsional dalam molekul. Panjang
gelombang penyerapan dan intensitas tergantung pada jenis. Panjang gelombang serapan adalah
ukuran dari energi yang dibutuhkan untuk transisi. Intensitasnya tergantung pada probabilitas
transisi yang terjadi ketika sistem elektronik dan radiasi berinteraksi dan pada polaritas keadaan
tereksitasi ( Christian, 1994).

2.6 Spektrfotometri UV-Vis

Spektrofotometri sinar tampak adalah salah satu teknik analisis spektroskopik yang
memakai sumber radiasi elektromagnetik sinar tampak dengan menggunakan instrument
spektrofotometer (Mulja dan Suharman, 1995). Spektrofotometer UV-Vis adalah sejenis
peralatan yang digunakan untuk mengukur serapan molekul organik atau anorganik yang
diberikan sumber cahaya dengan rentang panjang gelombang di daerah UV-Vis (180-770 nm)
(Siswoyo, 2007).
Semua molekul dapat menyerap radiasi dalam daerah UV-Vis karena mereka
mengandung electron, baik sekutu maupun menyendiri, yang dapat dieksitasikan ke tingkst
energi yang lebih tinggi (Underwood, 1999). Adsorbsi cahaya oleh suatu molekul merupakan
bentuk interaksi antara gelombang cahaya (foton) dan atom/molekul. Energi cahaya diserap oleh
ataom/molekul dan digunakan oleh elektron di dalam atom/molekul tersebut untuk bertransisi ke
tingkat energi elektronik yang lebih tinggi. Proses absorbsi cahaya UV-Vis berkaitan dengan
promosi elektron dari suatu orbital molekul dengan tingkat energi elektronik tertentu ke orbital
molekul lain dengan tingkat nergi elektronik yang lebih tinggi (Siswoyo, 2007).
 BAB 3. METODOLOGI PENELITIAN

3.1 Alat dan Bahan

3.1.1 Alat
- Spektro Visible
- Naraca
- Penangas air
- Erlenmeyer 250 mL
- Gelas Kimia 250 mL
- Hot plate
- Gelas Kimia 50 mL
- Gelas Ukur 10 mL
- Gelas ukur 50 mL
- Corong Pisah
- Chamber
- Plat Silika Gel
- Pengaduk Kaca
- Pipet tetes
- Oven
- Corong gelas

3.1.2 Bahan
- Benang wol
- NaOH 10%; 0,5%;
- Asam Asetat 10%
 - HCl 0,1N
- Etanol
- Akuades
- Amonia 2% dalam etanol 70%
- Amonia 10% dalam etanol 70%
- Amonia
- Dietil eter
- Kertas saring (kertas whatman no.42)
- n-butanol
- etil asetat
- Rhodamin B 1000 ppm

3.2 Prosedur Kerja

3.2.1 Sampling
Tahap pengambilan dan penyiapan sampel. Sampel diambil di tiga tempat berbeda di
sekitar universitas jember yaitu kantin FMIPA universitas jember, took di Jl. Kalimantan 1, dan
took di Jl. Jawa 7, diambil 1 jajanan yang diperkirakan mengandung rhodamin B.

3.2.2 Ekstraksi Sampel dan Pemurnian Sampel

Tahap ekstraksi dan pemurnian yang dilakukan dengan menggunakan dua metode yaitu :
Prosedur 1, Prosedur ini berdasarkan penelitian dari Utami dan Suhendi tahun 2009 yang
mengambil acuan dari Djalil dkk tahun 2005.
a. Sebanyak 10 gram sampel (yang diperkirakan mengandung rhodamin B) dimasukkan
kedalam erlenmeyar kemudian direndam dalam 20 mL larutan ammonia 2% (yang dilarutkan
dalam etanol 70% selama semalaman.
b. Larutan disaring filtratnya dengan menggunakan kertas saring whatman no.42.
c. Larutan dipindahkan kedalam gelas kimia kemudian dipanaskan diatas hot plate.
d. Residu dari penguapan dilarutkan dalam 10 mL air yang mengandung asam (larutan asam
dibuat dengan mencampurkan 10 mL air dan 5 mL asam asetat 10%).
e. Benang wol dengan panjang 15 cm dimasukkan kedalam larutan asam dan didihkan hingga
10 menit, pewarna akan mewarnai benang wol, kemudian benang diangkat.
f. Benang wol dicuci dengan air.
g. Kemudian benang dimasukkan kedalam larutan basa yaitu 10 mL amonia 10% (yang
dilarutkan dalam etanol 70%) dan didihkan.
h. Benang wol akan melepaskan pewarna, pewarna akan masuk kedalam larutan basa.
i. Larutan basa yang didapat selanjutnya akan digunakan sebagai cuplikanan sampel pada
analisis kromatografi lapis tipis.
Prosedur 2, prosedur ini berdasarkan penelitian Putri tahun 2009.
a. Sebanyak 5 gram sampel (yang diperkirakan mengandung rhodamin B) ditimbang kemudian
sampel dimasukkan kedalam erlenmeyer 250 mL.
b. Ditambahkan 100 ml larutan amonia 2% dalam etanol 70% dan didiamkan semalam.
c. Larutan disaring dengan menggunakan kertas saring Whatman No.42 kedalam erlenmeyer.
d. Larutan dipindahkan kedalam gelas kimia kemudian diuapkan diatas Hot Plate selama 4 jam
pada suhu 65oC.
e. Sampel yang telah menjadi pekat selama proses penguapan kemudian dilarutkan dengan 30
mL aquades dan diaduk.
f. Larutan dipisahkan dengan cara dimasukkan kedalam corong pisah, kemudian ditambahkan 6
mL larutan NaOH 10% dan dikocok.
g. Larutan diekstraksi dengan 30 mL dietil eter lalu dikocok dan didiamkan sampai membentuk
dua lapisan yaitu lapisan eter jernih (atas) dan lapisan air berwarna merah (bawah).
h. Lapisan air dibuang dengan menggunakan corong pisah sampai mendapat ekstrak eter.
i. Ekstrak eter dicuci dengan larutan NaOH 0,5% sebanyak 5 mL dengan cara dikocok dan
didiamkan.
j. Larutan akan membentuk dua lapisan yaitu lapisan eter jernih (atas) dan lapisan air berwarna
kecoklatan (bawah).
k. Lapisan air dibuang hingga hanya terdapat ekstrak eter, kemudian diekstraksi tiga kali, tiap
kali dengan 10 mL asam klorida (HCl) 0,1 N hingga lapisan eter tak berwarna lagi.
l. Lapisan eter dibuang dan ekstrak asam klorida (HCl) ditampung dalam labu takar 50 mL dan
ditambahkan asam klorida (HCl) 0,1 N sampai tanda tera.

3.2.3 Pembuatan Larutan Baku

Tahap pembuatan larutan baku untuk pembuatan linieritas kurva kalibrasi. Larutan baku
rhodamin B dibuat dengan konsentrasi 1000mg/L. Dari larutan baku ini dibuat larutan baku
antara dengan kadar 20; 40; 80; 120 g/ml. Selanjutnya dibuat dua seri larutan baku kerja yaitu
yang pertama dengan konsentrasi masing-masing 0,4; 0,8; 1,6; 2,4 g/ml dan kedua dengan
konsentrasi masing-masing 0,008; 0,016; 0,032; 0,048 g/ml. Sebagai pelarut digunakan larutan
HCl 0,1 N (Putri, 2009).

3.2.4 Identifikasi sampel dengan KLT

Tahap identifikasi sampel. Identifikasi sampel menggunakan Kromatografi Lapis Tipis.
Sampel ditotolkan pada plat KLT dengan menggunakan pipa kapiler pada jarak 1,5 cm dari
bagian bawah plat, jarak antara noda adalah 2 cm. kemudian dibiarkan beberapa saat hingga
mengering. Plat KLT yang telah mengandung cuplikan dimasukkan kedalam chamber yang lebih
terdahulu telah dijenuhkan dengan fase gerak berupa n-butanol : etil asetat : amonia (10:4:5)
(Putri, 2009). Dibiarkan hingga lempeng terelusi sempurna, kemudian plat KLT diangkat dan
dikeringkan. Diamati warna secara visual dan dibawah sinar UV, jika secara visual noda
berwarna merah jambu dan dibawah sinar UV 254 nm dan 366 nm berfluoresensi kuning atau
orange , hal ini menunjukkan adanya rhodamin B (Ditjen POM, 2001; Djalil dkk dalam Utami
dan Suhendi, 2009 ; Putri, 2009).

3.2.5 Identifikasi Penentuan Kadar Rhodamin B dengan Spektrofotometri visible

Tahap penetuan kadar zat warna rhodamin B. Penetapan kadar rhodamin B dilakukan
dengan spektrofotometri cahaya tampak pada panjang gelombang 400-800 nm. Sedangkan untuk
menghitung kadar rhodamin B dalam sampel dihitung dengan menggunakan kurva kalibrasi
dengan persamaan regresi : y = ax b.

10 g sampel

dimasukkan dalam erlenmeyer 250 mL.direndam dalam 20 mL larutan ammonia 2%

3.3 Skema Kerja
dalam etanol 70% dan didiamkan semalaman.
3.3.1 Ekstraksi dan Pemurnian Sampel
Prosedur 1
disaring filtratnya menggunakan kertas saring whatman no. 42.

dipindahkan filtrat dalam gelas kimia, dipanaskan diatas Hot Plate.

dilarutakan residu dari penguapan dalam 10 mL air mengandung asam (larutan asam
dibuat dengan mencampurkan 10 mL air dan 5 mL asam asetat 10%).

dimasukkan benang wol dengan panjang 15 cm. Dimasukkan dalam larutan asam dan
dididihkan hingga 10 menit (pewarna akan menempel pada benaang wol). Diangkat
benang.

dicuci benang dengan air.

dimasukkan benang dalam larutan basa yaitu 10 mL ammonia 10% yang dilarutkan
dalam etanol 70% dan didihkan (benang wol akan melepas warna, warna masuk
dalam larutan basa).
Hasil
ditotolkan larutan basa pada silica gel (sebagai suplikan sampel pada analisis
 kromatogarfi lapis tipis.

5 g sampel

dimasukkan dalam erlenmeyer 250 mL.

ditambahkan 100 mL larutan ammonia 2% dalam etanol 70% dan didiamkan

semalam.

disaring menggunakan kertas saring whatman no. 42 dalam erlenmeyer.

dipindahkan
Prosedur 2 filtrat dalam gelas kimia.

diuapkan diatas Hot plate selama 4 jam pada T 65oC (sampel menjadi pekat selama
proses penguapan).

dilarutakan dalam 30 mL akuades dan diaduk.

dipisahkan larutan dengan corong pisah.

ditambahkan 6 mL larutan NaOH 10% dan dikocok.

diekstraksi dengan 30 mL dietileter lalu dikocok. Didiamkan sampai membentuk 2

lapisan (lapisan eter jernih (diatas), lapisan air berwarna merah (dibawah)).

dibuang lapisan air dengan menggunakan corong pisah sampai mendapat ekstrak eter.

dicuci ekstrak eter dengan NaOH 0,5% sebanyak 5 mL dengan cara di kocok dan
didiamkan (larutan membentuk 2 lapisan yaitu eter jernih (diatas) dan air berwarna
coklat (bawah)).

Hasil dibuang lapisan air hingga sisa ekstrak eter.

 diekstrak 3 kali dengan 10 mL HCl 0,1 N hingga lapisan eter tak berwarna lagi.

dibuang lapisan eter. Ditampung ekstrak HCl dalam labu takar 50 mL dan
ditambahkan HCl 0,1 N sampai tanda tera.

3.3.2 Pembuatan Larutan Standart

Larutan rhodamin B 1000 mg/L

dibuat larutan baku dengan kadar 20; 40; 80; 120 g/mL dari larutan baku.

dibuat 2 seri larutan baku kerja yaitu larutan baku 0,4; 0,8; 1,6; 2,4 g/mL dan kedua
dengan 0,008; 0,016; 0,032; 0,048 g/mL mrnggunakan pelarut HCl 0,1 N.
3.3.3 Identifikasi Sampel dengan KLT
Hasil
Sampel

ditotolkan pada KLT dengan pipa kapiler pada jarak 1,5 cm dari bagian bawah plat,
jarak antara noda adalah 2 cm.

dibiarkan beberapa saat hingga mongering.

dimasukkan KLT dalam chamber yang lebih dahulu dijenuhkan dengan fase gerak
berupa n-butanol:etil asetat: ammonia (10:4:5).

dibiarkan sampai terelusi sempurna.

diangkat plat KLT dan dikeringkan.

diamati secara visual dan dibawah sinar UV (secara visual noda merah jambu dan
Hasildibawah UV 254 nm dan 366 nm berfluoresensi kuning/orange, hal ini menunjukkan
adanya rhodamin B).
3.3.4 Penetapan Kadar Rhodamin B dengan Spektrofotometri Visible

Sampel

ditetapkan kadar rhodamin B dengan spektrofotometri visible dengan panjang

gelombang 400-800 nm.

dihitung kadar rhodamin B dalam sampel dengan kurva kalibrasi menggunakan

persamaan regresi: y= ax b
Hasil

BAB 4. HASIL DAN DISKUSI

4.1 Hasil Diskusi

4.1.1 Uji Kualitatif dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis
Sampel Warna Rf
Rhodamin Pink 0,167

4.1.2 Uji Kuantitatif dengan Metode Spektrofotometer Visible

Berikut adalah data yang didapat dari uji kuantitatif dengan metode spektrofotometer visible
pada panjang gelombang 555 nm :
a. Pembuatan Kurva Standar
Panjang gelombang (nm) Konsentrasi (ppm) Absorbansi
0.01 0.018
0.05 0.023
555
0.1 0.028
0.2 0.047
b. Pengukuran Sampel
Panjang Gelombang Konsentrasi
Ekstrak Sampel Absorbansi
(nm)
Fase HCl 0.008 -
555
Fase Diklorometana 0.021 0.039 ppm

4.2 Pembahasan Hasil

Praktikum yang dilakukan kali ini bertujuan untuk menganalisis Rhodamin B yang diduga
terkandung dalam sampel saos yang banyak beredar dipasaran. Analisis yang dilakukan dalam
percobaan kali ini yaitu analisis kualitatif dengan metode kromatografi lapis tipis dan analisis
kuantitatif dengan menggunakan metode spektrofotometri UV-Visible. Sampel saos yang
digunakan adalah saos tomat bungkusan yang banyak beredar di pasaran dengan harga yang
relatif murah. Analisis Rhodamin B dalam saos tomat ini dilakukan karena rhodamin B dalam
makanan terutama saos perlu diawasi keberadaanya sebab rhodamin B merupakan pewarna
sintesis yang biasa digunakan pada industry tekstil bukan industry makanan sehingga
penggunaan rhodamin B dalam suatu sediaan dilarang karena dapat menimbulkan dampak yang
tidak diharapkan bagi kesehatan seperti gangguan ginjal, hati dan kanker.
 Rhodamin B adalah salah satu zat pewarna sintetis yang biasa digunakan pada industri
tekstil dan kertas. Zat ini ditetapkan sebagai zat yang dilarang penggunaannya pada makanan.
Hal tersebut telah dicantumkan oleh Menteri Kesehatan (Permenkes) pada aturan
No.239/Menkes/Per/V/85, namun walaupun sudah dilarang, penggunaan Rhodamine B dalam
makanan masih banyak terdapat di lapangan bahkan dijual bebas dipasaran. Hal tersebut telah
membuktikan bahwa masih banyak permintaan dan penggunaan Rhodamin B di masyarakat
terutama sebagai bahan pewarna makanan. Rhodamin B yang dikonsumsi dalam jumlah cukup
besar dan berulang-ulang akan menyebabkan iritasi pada saluran penapasan, iritasi pada kulit,
iritasi pada mata, iritasi pada pencernaan, keracunan, gangguan fungsi hati dan kanker hati. Oleh
karena itu, untuk mengetahui apakah Rhodamin B ini masih banyak beredar dipasaran terutama
pada saos yang syarat dengan adanya Rhodamin B, peneliti menguji saos yang beredar dipasaran
dengan menggunakan dua metode analisis.
Analisis pertama yang dilakukan adalah analisis kualitatif. Analisis kualitatif yang dilakukan
ini berfungsi untuk mengidentifikasi keberadaan rhodamin B dalam sampel saos. Metode yang
digunakan dalam analisis secara kualitatif adalah metode Kromatografi Lapis Tipis yang
merupakan salah satu teknik pemisahan senyawa dengan prinsip adsorpsi dan koefisien partisi.
KLT dilakukan karena pengujian menggunakan metode ini mudah dilakukan dan murah. Prinsip
kromatografi lapis tipis yaitu perbedaan kepolaran like dissolve like dimana pelarut yang
bersifat polar akan berikatan dengan senyawa yang bersifat polar juga dan sebaliknya, semakin
dekat kepolaran antara senyawa dengan eluent maka senyawa akan semakin terbawa oleh fase
gerak tersebut.
Tahap pertama yang dilakukan adalah preparasi larutan sampel. Preparasi sampel dilakukan
untuk memperoleh larutan rhodamin B dalam sampel sehingga bisa dianalisis dengan KLT
dimana sampel yang diuji harus berbentuk larutan. Preparasi sampel dilakukan dengan cara
menambahkan sampel saos yang akan diuji dengan larutan 2% amonia dalam 70% etanol dengan
perbandingan 1:2 selama 1 malam. Hal ini bertujuan agar rhodamin B dalam sampel dapat larut
semua. Larutan 2% amonia dalam 70% etanol dipilih dalam percobaan kali ini sebab ammonia
merupakan pengikat sekaligus pelarut rhodamin B sehingga rhodamin B akan terambil sempurna
dalam sampel yang akan dianalisis. Larutan yang dihasilkan kemudian dipekatkan dengan cara
pemanasan. Larutan hasil pemanasan tersebut kemudian ditambah dengan larutan asam (10 mL
akuades dan 5 mL asam asetat 5%) dengan tujuan untuk menstabilkan rhodamin B agar tidak
berubah dari bentuk terionisasi menjadi bentuk netral.
Langkah selanjutnya yaitu memasukkan benang wol berukuran 15 cm dalam larutan
kemudian didihkan selama 10 menit. Penggunaan benang wol dalam percobaan kali ini berfungsi
untuk mengekstraksi rhodamin B dalam sampel yang telah menerima perlakuan, dengan bantuan
asam asetat yang sebelumnya telah ditambahkan terlebih dahulu, sehingga dihasilkan warna
benang wol yang berubah dari putih menjadi merah terang. Selain itu fungsi digunakannya
benang wol adalah sebagai absorben warna saus sedangkan asam asetat glasial berfungsi sebagai
pemberi suasana asam dimana pada suasana ini rhodamin B akan tertarik oleh asam dan
selanjutnya akan terabsorbsi oleh benang wol.Hal ini menandakan bahwa rhodamin B dalam
larutan telah terikat pada benang wol. Namun, karena sampel uji KLT harus berupa larutan maka
rhodamin dalam sampel perlu dilarutkan dengan menggunakan pelarutnya yaitu larutan 10%
amonia dalam 70% etanol.
Hasil yang didapat berupa larutan berwarna orange yang mengidentifikasi bahwa dalam
sampel saos terdapat rhodamin B. Selanjutnya dilakukan penyiapan fasa diam dan fasa gerak dari
sistem kromatografi lapis tipis ini. Fasa diam yang digunakan adalah plat alumunium. Plat tipis
aluminium berfungsi sebagai fasa diam yang merupakan tempat berjalannya adsorbens sehingga
proses migrasi analit oleh solventnya dapat berjalan, sedangkan fase gerak yang digunakan
dalam percobaan kali ini adalah campuran 2-butanol: etil asetat: amonia (10: 4: 5) dengan total
volume eluent yaitu 19 mL. Eluen yang digunakan pada percobaan kali ini bersifat polar,
dikarenakan etil asetat dan ammonia yang bersifat polar dan 2-butanol yang bersifat semipolar.
Pada etil asetat, adanya gugus karboksil menyebabkan sifatnya semakin polar namun dengan
semakin panjangnya rantai karbon menyebabkan sifat polarnya semakin lemah sehingga
menyebabkan etil asetat bersifat polar. Lalu pada 2-butanol, adanya gugus hidroksil membuat zat
ini bersifat semi polar sedangkan pada ammonia, adanya gugus amino akan membuat ammonia
bersifat polar. Penggunaan eluen yang bersifat polar ini berkaitan dengan sifat kebanyakan zat
warna yang bersifat polar termasuk Rhodamin B, juga kemudahannya untuk dapat larut dalam
alcohol dan amonia. Oleh karenanya digunakan eluen yang bersifat polar ini agar dapat
mengelusi Rhodamin B dengan baik sebab Rhodamin B juga bersifat polar. Apabila digunakan
eluen yang bersifat non polar seperti kloroform, maka Rhodamin B tidak akan terelusi. Selain
itu, Eluent tersebut dipilih karena sifatnya lebih polar dari fase diamnya sehingga sampel yang
polar tidak terikat kuat pada fase diamnya.
Eluent dipilih dengan kombinasi demikian karena dapat menghasilkan spot yang bagus,
pemisahannya baik, dengan waktu pemisahannya juga yang tidak terlalu lama. Hal ini
dikarenakan eluennya bersifat polar dan mudah menguap. Penggunaan eluent ini disesuaikan
dengan sifar polar Rhodamin B karena memiliki gugus karboksil dengan pasangan elektron
bebas dan gugus amina pada struktur molekulnya. Gugus karboksil dan amina ini akan
membentuk ikatan hidrogen intermolekular dengan pelarut polar sehingga mudah larut dalam
pelarut polar. Oleh karena itu, digunakan campuran eluen polar agar dapat mengeluasi Rhodamin
B dengan baik.
Absorben yang digunakan dalam metode KLT yaitu berupa silica gel (SiO 2) yang tidak
mengikat air sehingga noda yang tercipta lebih dapat focus dan tajam. Fase diam ini bersifat
polar. Kepolaran ditentukan saat aktivasi plat (yaitu menggunakan pelarut yang bersifat
semipolar yakni etil asetat). Sebelum mempartisi sampel, awalnya eluen terlebih dahulu
dijenuhkan dengan tujuan untuk memastikan partikel fasa gerak terdistribusi merata pada seluruh
bagian chamber sehingga proses pergerakan spot di atas fasa diam oleh fasa gerak berlangsung
optimal, dengan kata lain penjenuhan digunakan untuk mengotimalkan naiknya eluent dan untuk
menghindari hasil tailing pada pelat KLT selain itu penjenuhan yang dilakukan berfungsi untuk
memudahkan saat eluasi sampel. Selama proses penjenuhan, dilakukan persiapan fase diam
yakni plat aluminium yang digunakan berukuran 9,5 x 2,5 cm. Plat tersebut diberi batas atas dan
bawah masing-masing 0,5 dan 1 cm. Fungsinya sebagai penanda jarak tempuh eluent. Batas
bawah plat dibuat 1 cm agar tidak terendam oleh eluent. Jarak penotolan disesuaikan dengan
lebar plat yang tersedia. Jarak penotolan tidak boleh terlalu berdekatan untuk menghindari
bergabungnya spot masing-masing larutan dan tidak boleh terlalu pekat untuk menghindari
adanya tailing saat spot naik bersama fasa gerak. Penotolan dilakukan pada 3 titik, dimana 2 titik
untuk ekstrak sampel dan 1 titik untuk larutan standar rhodamin 100 ppm. Larutan standar disini
digunakan sebagai pembanding dan untuk mengetahui apakah terdapat ekstrak Rhodamin B
dalam sampel yang dianalisi melalui spot yang terdistribusi. Penotolan larutan baku dan sampel
menggunakan pipa kapiler dengan tujuannya yaitu supaya penotolan kecil karena dalam KLT,
penotolan yang baik diusahakan sekecil mungkin untuk menghindari pelebaran spot dan tidak
menurunkan resolusi. Pelebaran spot dapat mengganggu nilai Rf karena memungkinkan
terjadinya himpitan puncak. Penotolan menggunakan bantuan hair dryer untuk mempercepat
proses pengeringan.
Langkah selanjutnya, plat dimasukkan dengan hati-hati ke dalam chamber tertutup yang
berisi fasa gerak (eluent) dengan posisi fasa gerak berada di bawah garis pada plat. Metode KLT
yang digunakan dalam percobaan kali ini yaitu menggunakan metode ascending (naik). Fase
gerak dibiarkan naik sampai hampir mendekati batas atas plat. Eluent dapat naik walaupun
melawan gravitasi karena adanya afinitas. Pada proses naiknya fase gerak, komponen-komponen
yang berbeda dalam campuran akan berjalan melewati fasa diam yang telah dijenuhkan sesuai
dengan kepolarannya. Setelah mencapai batas atas, plat KLT diangkat dan dibiarkan kering
diudara. Hal ini dilakukan berfungsi untuk menguapkan sisa pelarut yang masih terdapat pada
plat untuk menjamin penguapan telah sempurna dan agar spot jelas terlihat.
Hasil KLT tidak perlu diamati di bawah sinar UV karena spot telah terlihat dengan jelas.
Hasil yang didapat dari percobaan yang dilakukan kalini ini yaitu berupa 2 spot berfluoresensi
yang masing masingnya berwarna merah muda dan orange dengan jarak tempuh spot yang
berdekatan. Namun, spot yang dianalisis adalah spot yang mirip dengan spot larutan standar
Rhodamin b yakni merah muda terang. Berdasarkan hasil pengukuran, diperoleh jarak spot
dengan batas bawah yaitu 1.15 cm sedangkan jarak tempuh pelarut yaitu 7 cm. Rf yang didapat
dari hasil pengamatan yaitu 0.164 sedangkan untuk Rf standar didapatkan sebesar 0.87. Nilai Rf
yang diperoleh ini menyatakan ukuran daya pisah suatu zat dengan kromatografi planar (KLT),
dimana jika nilai Rf-nya besar berarti daya pisah zat yang dilakukan solvent (eluenya)
maksimum sedangkan jika nilai Rf-nya kecil berarti daya pisah zat yang dilakukan solvent
(eluenya) minimum. Rf yang optimum yaitu berada pada rentang 0.5 0.8. Hasil yang
didapatkan tersebut menunjukkan bahwa Rhodamin B dalam ssampel tidak dapat terpisah secara
sempurna. Pemisahan KLT, dapat dipengaruhi beberapa faktor-faktor seperti struktur kimia dari
senyawa yang dipisahkan, sifat dari penyerap dan derajat aktifitasnya, tebal dan kerataan zat
penyerap, kemurnian pelarut, derajat kejenuhan, teknik percobaan, jumlah cuplikan, temperatur,
dan kesetimbangan.
Analisis kedua yang dilakukan dalam percobaan kali ini yaitu analisis kuantitatif rhodamin
B dengan tujuan untuk mengetahui kadar rhodamin b dalam sampel saos karena berdasakan uji
kualitatif, sampel mengandung rhodamin B. Analisis kuantitatif dilakukan dengan menggunakan
spektrofotometri UV-Vis. Metode spektrofotometri ini mempunyai prinsip yaitu hukum Lambert-
Beer dimana hukum Lambert-Beer ini menyatakan bahwa konsentrasi suatu zat berbanding lurus
dengan jumlah cahaya yang diabsorbsi, atau berbanding terbalik dengan logaritma cahaya yang
ditransmisikan. Berdasarkan pengukuran spektrofotometri dapat dihitung konsentrasi sampel
yang dianalisis. Alasan menggunakan metode analisis spektrofotometri UV-Vis adalah karena
senyawa rhodamin B memiliki gugus kromofor yaitu gugus dalam senyawa organik yang mampu
menyerap sinar ultraviolet dan sinar tampak seperti gugus karboksil, senyawa aromatik dan juga
memiliki gugus auksokrom yaitu gugus yang memiliki pasangan elektron bebas seperti NR 2. Hal
pertama yang dilakukan adalah pembuatan larutan baku. Larutan baku, dibuat pada konsentrasi
1000 ppm dengan pelarut air dan menghasilkan larutan baku 1000 ppm yang berwarna pink
pekat. Larutan baku tersebut kemudian diencerkan pada konsentrasi 0.01; 0.01; 0.1; dan 0.2 ppm
agar dapat diukur dengan spektrofotometer Uv-Vis sebab sampel yang terlalu pekat
kemungkinan tidak akan terbaca sehingga perlu pengenceran. Variasi pengenceran (konsentrasi)
digunakan untuk membuat kurva standar.
Selanjutnya di buat larutan sampel dengan cara mengekstrak rhdamin B pada sampel saos.
Rhodamin B pada saos 5 g diekstrak dengan cara melarutkan sampel dengan larutan 2% amonia
dalam 70 % sebanyak 100 mL. Waktu pelarutan sama dengan analisa kualitatif yaitu 1 malam.
Rhodamin B yang telah terekstrak kemudian dipanaskan dengan tujuan pemekatan dan
menguapkan pelarut. Selajutnya ditambahkan 10% NaOH. Hal ini bertujuan untuk mengubah
kepolaran dari rhodamin B dengan melepas gugus Cl- pada senyawa sehingga struktur garam
rhodamin dapat dipertahankan saat proses ekstraksi berlangsung. Kemudian ditambahkan air
sebagai fase polarnya.
Ekstraksi dilakukan dengan larutan diklorometana. Prinsip ekstrasi ini ialah like disolve
like. Diklorometana disini berifat non polar sehingga dapat mengikat garam rhodamin B yang
bersifat non polar. Air ditambahkan sebagai fase polarnya dan menghasilkan 2 fase karena
perbedaan kepolaran, dimana fase atas berupa air dengan warna merah terang, dan fase bawah
merupakan fase organik yang mengandung rhodamin B. Fase organik berada di fase bawah
karena memiliki massa jenis yang lebih tinggi dibandingkan dengan air. Fase yang diambil
adalah fase bawah. Larutan yang didapat diekstrak dengan HCl 0,1 N. HCl disini akan
mengembalikan rhodamin B pada fase polarnya sehingga terlepas dari fase diklorometana. HCl
dapat mengembalikan kepolaran rhodamin B karena adanya gugus Cl-, sehingga rhodamin B
kembali pada struktur aslinya yang bersifat polar. Rhodamin B akan terikut pada fase asamnya.
Fase asam berada pada fase atas karena memiliki massa jenis yang lebih rendah dibandingkan
dengan diklorometana yakni 1,19 g/mL banding 1,32 g/mL. Seharusnya fase asam berwarna
merah, yang menunjukkan positif adanya rhodamin B. Namun, larutan yang diperoleh tidak
berwarna. Seharusnya rhodamin B merupakan larutan berwarna karena menurut literatur yang
ada panjang gelombang serapannya rhodamin B berada pada daerah visibel bukan daerah
ultraviolet. Hal ini juga terlihat dari hasil scanning larutan standar yang menunjukkan panjang
gelombang maksimum pada 555 nm (daerah visible). Panjang gelombang maksimum yang
diperoleh pada scznning sudah sesuai dengan literatur yang menyatakan bahwa panjang
gelombang maksimum rhodamin B berada pada daerah 547 nm. Larutan yang tidak berwarna
sebenarnya dapat dijadikan indikator bahwa larutan tersebut tidak mengandung rhodamin B.
Namun, pengukuran absorbansi tetap dilakukan pada ekstrak sampel karena pada uji kualitatif
sampel positif mengandung rhodamin B. Kurva standar rhodamin B dibuat pada panjang
gelombang 555 nm. Kurva standar yang dihasilkan adalah sebagai berikut:

Ekstrak sampel tidak berwarna yang diperoleh absorbansinya tetap diukur pada panjang
gelombang maksimum rhodamin B pada daerah visibel yaitu 555 nm. Nilai absorbansi yang
diperoleh sebesar 0.021. Berdasarkan nilai absorbansi yang diperoleh dapat diketahui bahwa
konsentrasi sampel sebesar 0.039 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa terdapat rhodamin B dalam
sampel yang kuantitasnya sangat kecil.
 BAB 5. PENUTUP

5.1 Kesimpulan
Berdasarkan percobaan yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa :
1. Saos tomat yang banyak beredar dipasaran positif mengandung zat pewarna Rhodamin B
yang seharusnya digunakan dalam industry tekstil
2. Kadar rhodamin B dalam saos tomat yang beredar dipasaran berkisar antara 0.039 mg/L

5.2 Saran
Saran yang diberikan pada percobaan kali ini yaitu agar lebih mempehitungkan kembali
perbandingan eluen yang digunakan serta lebih memperhatikan keselamatan kerja ketika bekerja
dengan zat kimia berbahaya.
 DAFTAR PUSTAKA

Adnan, M. (1997). Teknik Kromatografi Untuk Analisis Bahan Makanan. Yogyakarta : Penerbit
Andi.
Christian, Gary D. 1994. Analytical Chemistry, edisi kelima. New York : John Wiley and Sons
Inc.
Deman, J.M. 1997. Kimia Makanan. Bandung : Penerbit ITB.
Djalil, A.D., Hartanti, D., Rahayu, W.S., Prihatin, R., Hidayah, N. 2005. Identfikasi Zat Warna
Kuning Metanil (Metanil Yellow) dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) pada
Berbagai Komposisi Larutan Pengembang, Jurnal Farmasi. Purwokerto : Fakultas
Farmasi UMP.
Donatus, I.A. 1990. Toksikologi Pangan, PAU Pangan dan Gizi. Yogyakarta: UGM.
Gritter, R.J., J.M. Bobbit, and A.E. Schwarting. 1991. Pengantar Kromatografi, Edisi 2,
terjemahan Kasasih Padmawinata. Bandung : ITB.
Index, Merck. 2006. Chemistry Constant Companion, Now with a New Additon. USA : Merck &
CO.
Judarwanto, W. 2007. Perilaku Makan Anak Sekolah [Serial Online] http://www.ludruk.com
(diakses pada April 2015).
Marmion, Daniel. 1984. Colorts For Food Drug and Cosmetika. United States of Amerik : Jhon
Willy and Sons Inc.
Mulja, M. dan Suharman. 1995. Analisis Instrumental. Surabaya : Airlangga University Press.
Nollet, 2004. Analisa Rhodamin B dan Metanil Yellow dalam Minuman Jajanan Anak SD di
Kecamatan Laweyan Kotamadya Surakarta Metode Kromatografi Lapis Tipis, Skripsi.
Surakarta : Universitas Muhamadiyah Surakarta.
Sastrohamidjojo, H. 1991. Spektrosfotokopi, edisi kedua. Yogyakarta: Penerbit Liberty.
Siswoyo, Dwi. 2007. Ilmu Pendidikan. Yogyakarta: UNY Press
Stahl, E., 1985, Analisis Obat Secara kromatografi dan Mikroskopi, diterjemahkan oleh Kosasih
Padmawinata dan Iwang Soediro. Bandung : ITB.
Sudjadi. 1986. Metode Pemisahan. Yogyakarta : Kanisius.
Underwood, A.L. 1999. Analisis Kimia Kuantitatif, Edisi 6. Jakarta : Erlangga.
Winarno, F.G. dan Rahayu, T.S. 1994. Bahan Makanan Tambahan untuk Makanan dan
Kontaminan. Jakarta : Pustaka Sinar Harapan.
Winarno, F.G., 2002. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta : Gramedia Pustaka Utama.

Lampiran Perhitungan
1. Perhitungan Pembuatan Larutan
a. Etanol 70% dalam air e. 10% NH3 dalam 70% Etanol

f. 10% asam asetat

b. NaOH 10%
g. HCl 0.1 N
Massa HCl = 37 mL x 1.19 g/mL
M = m/(Mr x V)
M = 44.03 gram /(36.45g/mol x
0.1L)
c. NaOH 0.5% M = 12.08 mol/L

d. 2% NH3 dalam 70% Etanol h. Rhodamin 20 ppm dari 1000 ppm

2. Scanning Spektrofotometer Visible pada konsentrasi 0.2 ppm

Panjang Panjang Panjang
gelombang Absorbansi gelombang Absorbansi gelombang Absorbansi
(nm) (nm) (nm)
400 0.009 480 0.010 520 0.020
500 0.013 500 0.013 530 0.021
600 0.005 520 0.020 540 0.031
700 0.005 540 0.033 550 0.044
800 0.001 560 0.039 560 0.040
580 0.010 570 0.023

545 0.038 550 0.043 555 0.044

560 0.039 565 0.031
a. Pembuatan Kurva Standar
Panjang gelombang (nm) Konsentrasi (ppm) Absorbansi
0.01 0.018
0.05 0.023
555
0.1 0.028
0.2 0.047

a. Pengukuran Sampel
Panjang Gelombang Konsentrasi % dalam
Ekstrak Sampel Absorbansi
(nm) Sampel
Fase HCl 0.008 - -
555
Fase Diklorometana 0.021 0.039 ppm

3. Perhitungan Rf
Diketahui: - Jarak tempuh = 7 cm
- Jarak standar = 6,1 cm
- Jarak sampel = 1,2 cm dan 1,1 cm
- Rata2 jarak sampel = 1,15 cm
a. Rf standar
Rf = 6,1 cm / 7 cm = 0,87
b. Rf sampel
Rf = 1.15 cm / 7 cm = 0,164