.

Biorremediacin
La biorremediacin puede ser definida como el uso de organismos vivos,
componentes celulares y enzimas libres, con el fin de realizar una mineralizacin
(compuesto blanco CO2 + H2O), una transformacin parcial, la humificacin de
los residuos o de agentes contaminantes y una alteracin del estado redox de
metales.
Histricamente el compostaje fue una primitiva forma de biorremediacin en
donde los residuos por ej. derivados de la recoleccin domiciliaria (restos
orgnicos, inorgnicos, residuos industriales, etc.) son incluidos en containers
permitiendo que puedan ser biodegradados por microorganismos (Senior and
Balba, 1990).
Los factores que gobiernan la biorremediacin son complejos y pueden variar
enormemente dependiendo de la aplicacin. En muchos casos puede llegar a ser
difcil distinguir entre los factores biticos y abiticos que contribuyen con la
biorremediacin.
La biorremediacin es un fenmeno comn en la naturaleza cuando en un
ambiente o ecosistema se produce una alteracin del equilibrio como es el caso de
una gran tala de rboles, esto origina un aumento considerable de materia orgnica
en el suelo.
En este caso los factores fsicos y biticos tratan de reponer el dao, se produce
entonces un aumento de organismos saprfitos los cuales ocasionan una gran
mineralizacin de la materia cada, adems el resto de esa materia puede ser
reciclada o humificada
Cabe remarcar que cuanto ms diversidad biolgica exista en un ecosistema con
mayor eficiencia podr autodepurarse.
Las tcnicas de biorremediacin pueden ser clasificadas segn el tratamiento y a la
fase usada.
Se denomina biorremediacin in situ cuando el suelo contaminado se trata en el
lugar, el sitio permanece prcticamente inalterado durante el tratamiento y la
biorremediacin ex situ el suelo es retirado y trasladado hasta una unidad de
tratamiento.
El tratamiento es efectuado en fase slida si el suelo es tratado sobre un lecho
especialmente preparado y no hay lquido libre. Por el contrario se denomina fase
barro cuando se lleva en un reactor y se forma barro entre el suelo y agua (Ferrari,
1996).
En general existen dos estrategias para ayudar a un ecosistema a remediarse:
La primera es agregar nutrientes de forma de estimular las poblaciones naturales y
as aumentando su actividad y la segunda es introduciendo microorganismos
exgenos dentro del ecosistema como forma de remediacin.
En este ltimo caso con las nuevas tcnicas de la ingeniera gentica se pueden
emplear microorganismos genticamente modificados hacindolos ms eficientes
en la biorremediacin.
2. Biorremediacin de hidrocarburos
La descomposicin microbiana de hidrocarburos es de considerable importancia
econmica y ambiental por los perjuicios que ocasiona.
Una de las principales causas de contaminacin del ambiente son los derrames de
petrleo, tal como ocurri en marzo de 1989 cuando el superpetrolero Exxon
Valdez choc con varios icebergs en el estrecho del Prncipe Guillermo en Alaska,
derramando 11 millones de galones de petrleo en el agua ocasionando un impacto
ecolgico inimaginable cuyo gasto de limpieza se estim en (U$ 1500 millones).
Los hidrocarburos varan en su habilidad de ser degradados, los derrames de estos
en el agua tienden a formar laminas en la superficie en donde el viento y el oleaje
crean microscpicas emulsiones. Esto permite que los microorganismos
predominantemente bacterias (pseudomonas, corinebacterias y micobacterias),
algunas levaduras y hasta algas verdes tengan una mayor superficie de contacto con
la partcula, facilitando el acceso a la misma y permitiendo su degradacin.
Pero la biorremediacin en el agua se ve afectada por la disponibilidad de
nutrientes debido a que estos generalmente se encuentran en bajas
concentraciones, por lo que generalmente tras un derrame se adiciona fsforo y
nitrgeno como forma de estimular el crecimiento de los microorganismos que
potencialmente degradarn el hidrocarburo.
En el caso de que el derrame sea en el suelo el proceso es diferente, la oxidacin es
llevada a cabo por hongos y bacterias y el movimiento del hidrocarburo es ms
vertical, adems el proceso de humificacin tiende a atrapar el residuo hacindolo
ms persistente. En este caso el factor limitante no est en la disponibilidad de
nutrientes sino que la disponibilidad de oxigeno es baja, por lo que se debe aerear
el suelo o agregar perxido de hidrogeno (H2O2) para mejora el proceso.
En los derrames, la fraccin de hidrocarburo ms voltil es evaporada con facilidad
dejando a los componentes alifticos y aromticos para ser oxidado por diversos
grupos de microorganismos.
En experimentos llevados a cabo tras los derrames de petrleo se demuestra que el
nmero de bacterias oxidantes aumenta de 103 a 106 veces poco despus del mismo
y en condiciones favorables ms del 80 % de los componentes no voltiles son
oxidados entre 6 meses y un ao del derrame.
Algunas fracciones, como los hidrocarburos de cadena ramificada y los policclicos,
permanecen mucho ms tiempo en el ambiente principalmente si llegan a zonas
anaerobias ocasionando perjuicios a largo plazo.
3. Biorremediacin de Hidrocarburos Aromticos Polinucleares
Los hidrocarburos aromticos polinucleares (HAPs) constituyen un grupode
contaminantes considerado de estudio prioritario debido a sus propiedades
mutagnicas, txicas y cancergenas. En los ltimos aos la acumulacin de estos a
ido aumentado (Menzie et al., 1992).
Una gran variedad de estos compuestos orgnicos no voltiles pueden ser
encontrados en el petrleo contaminante de suelo en donde los niveles de estos
varan, pero generalmente altas concentraciones pueden ser encontradas en los
derrames de hidrocarburos.
El suelo tiene la capacidad de absorber estos compuestos y muchos son
volatilizados en la atmsfera, pero son los microorganismos los principales
degradadores de estos compuestos (Crawford et al., 1993).
Los HAPs consisten en 2 o ms anillos benznicos ya sea en forma simple o
mltiple formando cadenas o racimos y cuanto ms anillos tenga el compuesto ms
resistente ser a la actividad enzimtica, (ver tabla 1. donde se describen las
caractersticas fsicas de los HAPs). Lee and Ryan (Atlas, 1981) not que la
biodegradacin del naphtaleno (2 anillos) era ms de 1000 veces superior que la
del benzopireno (5 anillos), en general estructuras conteniendo 4 o ms anillos son
difciles de degradar.
Los estudios de degradacin de los HAPs comenzaron hace ms de 80 aos cuando
Sohgen and Stormer aislaron bacterias capaces de degradar compuestos
aromticos usndolos como fuente de carbono (Atlas, 1981).
En ambientes acuticos los principales gneros de bacterias y hongos hallados son
los siguientes, Pseudomonas, Achromobacter, Arthrobacter, Micrococcus,
Nocardia, Vibrio, Acinetobacter, Brevibacterium, Corynebacterium,
Flabobacterium, Candida, Rhodotorula y Sporobolomyces.
En investigaciones realizadas en el suelo mostraron que 11 gneros de hongos entre
los que se destaca Phanerochaetes chrysosporium que es considerado un
microorganismo prometedor debido a la produccin de lignasa con alto potencial
de degradar compuestos insolubles de alto peso molecular y 6 de bacterias fueron
los grupos dominantes en la degradacin de HAPs.
La degradacin bacteriana de estos compuestos normalmente envuelve la
formacin cis,dihydrodiol observado por la formacin de un dicido como el cido
cis,cis-mucnico mientras que en eucariotas como los hongos la oxidacin da la
formacin de trans,dihydrodiol, en ambos casos un diol es un intermediario
indispensable (Alexander, 1977).
Cerniglia y Heitkamp (1989) han sugerido los siguientes principios aplicados a la
degradacin de los HAPs.
1) Una gran variedad de bacterias, hongos y algas tienen la habilidad de
degradarlos.
2) La hidroxylacin de los HAPs envuelve la incorporacin de oxigeno molecular.
3) Los microorganismos procariotas metabolizan los HAPs con un ataque inicial de
una dioxigenasa para dar cis,dihydrodiol que adems es oxidado para formar
dihydroxidos.
4) HAPs con ms de 3 anillos de benzeno no sirven como sustrato para el
crecimiento bacteriano lo que hace que deba estar sujeto a una transformacin co-
metablica.
5) Muchos de los genes son codificados por plsmidos.
6) HAPs de bajos pesos moleculares como el naphtaleno son degradados
rpidamente mientras que aquellos de alto peso como el anthraceno o el
benzopyreno son ms resistentes.
7) La biodegradacin ocurre con mayor eficiencia en la interface sedimento/agua.
8) La adaptacin microbiana puede ocurrir por continuas exposiciones a los HAPs.
Ultimamente se han desarrollado tcnicas de compostaje como forma de
biorremediacin.
Dado que si los microorganismos son capaces de degradar compuestos txicos en la
naturaleza es de esperar que estos hagan lo mismo en un laboratorio bajo
condiciones optimas. Este tratamiento consiste en la formacin de un barro con el
material contaminado y agua.
Tabla 1) Parmetros fsicos de los 16 HAPs de mayor prioridad segn USEPA.
(PM=peso molecular, PF=punto fusin (C), PE=punto ebullicin (C),
S=solubilidad en agua a 25 C)

Nombre Sinnimo N de Formula PM PF PE S

anillos

Naftaleno 2 C10H8 128.17 80 218 31.7

Acenaftileno 3 C12H8 152.20 80- 280 -

83

Acenafteno 1,8-Etilennafteno 3 C12H10 154.21 93- 279 3.8

96

Fluoreno 2,3-Bencindeno 3 C13H10 166.22 115 293 1.685

Fenantreno 3 C14H10 178.23 100- 340 1.00

101

Antraceno 3 C14H10 178.23 216 340 0.0446

Fluoranteno Benzo(jk)fluoreno

1,2-Benzacenafteno 4 C16H10 202.26 107- 384 0.206

110

Pireno Benzo(def)fenantreno 4 C16H10 202.26 156 393- 0.123

404

Benzo(a) 1,2-Benzantraceno 4 C18H12 228.29 157- 438 0.0094

antraceno 155

Criseno 1,2-Benzofenantreno 4 C18H12 228.29 254 448 0.0018

Benzo(b)

fluoranteno 3,4 Benzofluoranteno

Benceno(e)

acefenantrileno 5 C20H12 252.32 163- - 0.0014

165
Benzo(k) 8,9 Benzofluoranteno

fluoranteno 11,12- 5 C20H12 252.32 217 480 -

Benzofluoranteno

Benzo(a)pireno Benzo(def)criseno 5 C20H12 252.32 179 495 0.0038

3,4-Benzopireno

Dibenzo(ah)

antraceno 1,2,5,6- 5 C22H14 278.35 266 524 0.0006

dibenzantraceno

Benzo(ghi) 1,12-Benzoperileno 6 C22H12 276.34 279- 510 0.0002

perileno 277

Indeno(1,2,3-
cd)

pireno o-fenilenpireno 6 C22H12 276.34 180- - -

177

El tratamiento se efecta en un biorreactor donde se realiza el proceso en forma

controlada, es decir se suministra nutrientes, se inocula con los microorganismos
deseados, se mantiene en aereacin continua, as como el mantenimiento del pH y
la temperatura.
En experimentos en la Universidad de Helsinski con compostaje de suelos
contaminados con clorofenol se observ una decontaminacin de los mismos.
La concentracin de clorofenol fue reducida de 212 mg Kg -1 a 30 mg Kg -1 durante 4
meses de compostaje ( Valo and Salkijona-Salonene, 1986), adems se observ que
el proceso de descomposicin se aceleraba si se inoculaba con Rhodococcus
chlorophenolicus.
El ambiente que se genera en el compostaje est caracterizado por elevadas
temperaturas (>50C), alta concentracin de nutrientes, suficiente oxigeno y un
pH neutro.
La Shell Research Ltd. deline diferentes factores que limitan la degradacin de
hidrocarburos en el suelo (Morgan and Watkinson, 1989). La optimizacin de esos
factores puede ser llevada a cabo por un a buen compostaje.
Williams and Keehan (1993) indicaron que los microorganismos que degradan
contaminantes no difieren significativamente entre el suelo y el compostaje. Sin
embargo la potencial transformacin vara por diferentes razones.
Primero, la elevada temperatura que se genera en el compostaje incrementa la
cintica enzimtica que envuelve el proceso. Segundo, la oportunidad para la
cooxidacin puede ser aumentada debido a la variedad de sustratos presentados.
Tercero, las modificaciones en el microambiente fsico y qumico del compostaje
pueden servir para aumentar la diversidad microbiolgica.
Finalmente, las altas temperaturas aumenta la solubilidad y la transferencia de
masa, esto hace que sea ms metabolizado por los microorganismos.
Las altas temperaturas son el factor ms determinante en el ambiente del
compostaje, esto se debe a que la presin de seleccin sobre las bacterias se ve
intensificada por el aumento de temperatura. Finstein, report que en compostajes
con temperaturas superiores a 61C .las especies bacterianas decaen drsticamente
(Racke and Frink, 1989). Bajas poblaciones a altas temperaturas en compostaje de
suelo con petrleo han sido demostradas por estudios en la Mankato State
University (Goetz, no publicado).
Tanto bacteria termfilas gram positivas como negativas son capaces de degradar
hidrocarburos tal como el gnero Thermomicrobium y muchos de los termfilos
estn obligados a metabolizar hidrocarburos.
Se ha descubierto una bacteria termfila Bacillus licheniformis HA1, el cual es muy
efectivo para iniciar el compostaje. Su rol sera de prevenir la cada del pH en
estadios tempranos del compostaje y permitira el desarrollo de otros termfilos
contribuyendo entonces con la descomposicin de la materia orgnica en fase
termfila del compostaje. (Kiyohiko et al., 1994)
4. Biorremediacin de compuestos xenobiticos
Se denomina compuesto xenobiticos (xeno, vocablo que significa extrao) a
aquellos compuestos sintetizados artificialmente por sntesis qumica con fines
industriales o agrcolas. Aunque estos compuestos pueden ser semejante a los
compuestos naturales muchos son desconocidos en la naturaleza. As, los
organismos capaces de metabolizarlos no podran existir en la naturaleza!.
Algunos de los xenobiticos ms conocidos son los plaguicidas entre los que se
incluyen herbicidas, insecticidas, nematicidas, funguicidas, etc..
Dentro de los plaguicidas se encuentran los cidos clorofenoxialquil carboxlicos,
ureas sustituidas, nitrofenoles, triacinas, fenilcarbamato, organoclorados,
organofosforados.
Algunas de estas sustancias pueden actuar como donadores de electrones o como
fuente de carbono para ciertos microorganismos.
Estos compuestos tienen diferencias en la persistencia en el ambiente (ver tabla 2)
pero esa persistencia es aproximada dado que depende de varios factores
ambientales como la temperatura, el pH, la aereacin y el contenido de sustancias
orgnicas del suelo. Algunos de los insecticidas clorados pueden persistir por ms
de 10 aos.
Hay que remarcar que en la degradacin de un plaguicida no solo intervienen los
microorganismos, sino que tambin puede sufrir volatilizacin, filtracin o
degradacin qumica.
Plaguicidas en el suelo
Cuando un plaguicida llega al suelo ste queda sometido a diversos factores que
van a afectar su persistencia. El lavado de los suelos, la degradacin biolgica y
qumica, la adsorcin por coloides, la volatilizacin y la absorcin por los cultivos
son algunos de stos factores.
El perodo en que un pesticida persiste en el suelo es de gran importancia ya que
refleja el tiempo en que la plaga estar sometida al control, afectando la polucin
del medio ambiente, su acumulacin en plantas, etc..
Tabla 2) Persistencia de herbicidas e insecticidas en los suelos

Sustancia Tiempo para la desaparicin del

75 al 100%

Insecticidas clorados

DDT 4 aos

Aldrn 3 aos

Clordano 5 aos

Heptacloro 2 aos

Lindano 3 aos

Insecticidas organofosforados

Diazinn 12 semanas

Malatin 1 semana

Paratin 1 semana

Herbicidas

2,4-D(cido 2,4-diclorofenoxiactico) 4 semanas

2,4,5T(cido2,4,5,triclorofenoxiactico) 20 semanas

Dalapn 8 semanas

Atrazina 40 semanas

Simazina 48 semanas
Propazina 1.5 aos

Degradacin microbiana
Durante muchos aos se crea que los mecanismos de degradacin de los
plaguicidas eran similares en animales y en microorganismos. Pero con el avance
de las investigaciones se apreciaron las diferencias, en animales se da una
conversin de stos compuestos de forma que puedan ser excretables, ste proceso
se da principalmente en el higado. En microorganismos su utilizacin es por el
contrario una forma de obtencin de energa o fuente de carbono.
Las vas metablicas son muy variadas, fermentaciones, respiraciones anaerbicas,
accin de exoenzimas y procesos quimiolittrofos pueden ser encontrados
(Matsumura, 1982).
Existen dos formas por la que la cual la microflora puede degradar el plaguicida.
I) La sustancia favorece el crecimiento microbiano y es empleada como fuente de
carbono, energa y raras veces como fuente de nitrgeno, azufre, etc..
El nmero de microorganismos aumenta y el aislamiento se realiza utilizando el
plaguicida como nica fuente de nutrientes. Luego de que el compuesto fue
degradado las poblaciones decrecen.
II) Por cometabolismo, el compuesto no acta directamente como fuente de
nutrientes sino que se debe emplear otras como la glucosa, que al disminuir en el
medio inducen las enzimas necesarias para la degradacin del plaguicida.
Las reacciones catablicas ocurren principalmente cuando las dosis de pesticidas
son altas y la estructura qumica permite su degradacin.
(Alexander, 1977) indica una serie de reacciones que pueden ser realizadas por
microorganismos hetertrofos sobre los plaguicidas:
Detoxificacin- Conversin de una molcula txica en otra no txica (Arthrobacter
spp).
Degradacin- Transformacin de una sustancia compleja en productos ms
simples ej. la mineralizacin que da como
resultado la aparicin de CO2, H2O, NH3, etc. (Pseudomonas spp)
Conjugacin- Formacin de compuestos por reacciones de adicin, en donde el
microorganismo combina el plaguicida con metabolitos celulares (adicin de
aminocidos, cidos orgnicos, etc.).
El estudio de la biodegradacin de los plaguicidas no es sencillo en el suelo, ya que
las concentraciones son muy bajas. Se deben emplear cromatografias de fase
gaseosa o lquida, espectrofotometra ultravioleta, para poder detectar trazas de
pesticidas o sus intermediarios de la degradacin.

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