(1)Universidade Estadual Paulista (Unesp), Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias (FCAV), Dep. de Solos e Adubos, Via de Acesso
Prof. Paulo Donato Castellane s/n o, CEP 14884-900 Jaboticabal, SP. E-mail: mantovanijr@yahoo.com, mcpcruz@fcav.unesp.br,
evaristo@fcav.unesp.br (2)Unesp, FCAV, Dep. de Cincias Exatas. E-mail: jcbarbosa@fcav.unesp.br
Resumo O teor de nitrato um importante ndice da qualidade dos alimentos, mas existem problemas na sua
quantificao. O objetivo deste trabalho foi comparar procedimentos de quantificao de nitrato em tecido
vegetal. Em amostras de matria seca da parte area de trs cultivares de alface adubadas com cinco doses de
nitrognio, provenientes de experimento realizado em casa de vegetao, foi feita extrao de nitrato com gua
desionizada e quantificao, utilizando os procedimentos da coluna redutora contendo cdmio, da destilao, do
cido saliclico e da mistura redutora contendo zinco. Os procedimentos do cido saliclico e da mistura redutora
contendo zinco superestimam os teores de nitrato na matria seca de alface, pois so mais sujeitos presena de
interferentes e ao efeito da cor do extrato. Os procedimentos da coluna redutora contendo cdmio e o da
destilao so os mais adequados na quantificao de nitrato em tecido vegetal. Contudo, a simplicidade e o
menor custo da destilao em relao coluna redutora indicam que a destilao deve ser recomendada.
Termos para indexao: Lactuca sativa, anlise de plantas, nitrognio.
Abstract Nitrate content determination is important for food quality evaluation, but its determination is affected
by interferences. The objective of this work was to compare nitrate determination procedures for vegetable
tissues. In dry matter samples from three lettuce cultivars that received five levels of nitrogen in a greenhouse
experiment, nitrate was extracted with deionized water and its determination was made by the cadmium column
method, the distillation method, the salicylic acid method, and the method using the reductive mixture with zinc.
The salicylic acid method and that of reductive mixture with zinc overestimated the nitrate content in lettuce dry
matter, because they were influenced by the color of dry matter extracts and other interferences. The cadmium
column and the distillation methods are the best for nitrate determination in vegetable tissues, but the simplicity
and lower cost of distillation in relation to cadmium column method suggest that the first one must be recommended.
Index terms: Lactuca sativa, plant analysis, nitrogen.
reduzido a nitrito, o qual quantificado (Sah, 1994). condies do meio, e no completa, pois nem todo o
A determinao indireta do nitrato apresenta vantagens nitrato reduzido no tempo de reao utilizado e, assim,
em relao direta: maior sensibilidade, maior preciso h necessidade de fazer uma curva de calibrao para
e melhor seletividade, ou seja, menos sujeita interfe- cada lote de amostras, em cada dia de anlise.
rncia de outros ons (Sah, 1994). O procedimento proposto por Bremner & Keeney
Variaes significativas nos teores de nitrato em ex- (1965), em que o N-NO3- determinado por destilao
tratos de planta so obtidas ao se compararem tcnicas dos extratos em microdestilador Kjeldahl e subseqente
de quantificao do on em um mesmo extrato e, assim, titulao do destilado, foi proposto inicialmente para solo,
h necessidade de padronizao de procedimento mas tambm pode ser utilizado em tecido vegetal, e apre-
(Anderson & Case, 1999; Salomez & Hofman, 2002). senta vantagens em relao aos procedimentos
A quantificao de nitrato em extratos de plantas por colorimtricos, como ser livre de interferentes e no
colorimetria, em que o nitrato reduzido a nitrito, foi sofrer influncia da cor do extrato.
mais vantajosa do que a feita por eletrodo seletivo, por Estudos comparativos entre os procedimentos de
ser mais precisa, especialmente quando os teores de N quantificao de nitrato em plantas, apesar de servirem
na forma de nitrato (N-NO 3-) foram menores que de base para a definio do procedimento a ser usado,
80 mg kg-1, e menos sujeita ao de ons interferen- so escassos.
tes, tal como a causada por Cl- (Jackson, 1980; Taber & O objetivo deste trabalho foi comparar procedimen-
Killorn, 1993). tos de quantificao de nitrato em tecido vegetal.
Na maioria dos trabalhos realizados no Brasil (Ricci
et al., 1995; Castro & Ferraz Jnior, 1998; Zago et al., Material e Mtodos
1999; Ldo et al., 2000; Beninni et al., 2002), a A determinao de nitrato foi feita em amostras de
quantificao de nitrato em extratos de plantas foi feita matria seca da parte area de alface proveniente de
segundo Cataldo et al. (1975), e suas vantagens, segundo experimento realizado em casa de vegetao, no qual
os autores, so o maior rendimento, o menor custo e a se utilizou amostra da camada arvel (020 cm) de um
facilidade de execuo. Argissolo Vermelho-Amarelo distrfico, coletado em rea
Na determinao de nitrato em carnes e demais de pastagem, com a seguinte caracterizao qumica:
alimentos, o mtodo oficial estabelecido pelo Minis- P resina, 8 mg dm-3; MO, 37 g dm-3; pH em CaCl2
trio da Agricultura e Abastecimento (Brasil, 1999) 0,01 mol L-1, 4,8; K+, Ca2+, Mg2+, H+Al, SB e CTC, respec-
o que promove a reduo do nitrato a nitrito em tivamente, 2,1, 22, 10, 38, 34 e 72 mmolc dm-3; e V, 47%.
meio alcalino pela passagem do extrato em coluna Os tratamentos consistiram da combinao fatorial
contendo Cd esponjoso, com posterior quantificao de cinco doses de N e trs cultivares de alface, com
do N na forma de nitrito (N-NO2-) por colorimetria. quatro repeties, em delineamento em blocos ao acaso.
Esse procedimento foi proposto por Follett & Ratcliff Foram usadas 0, 141,5, 283, 566 e 1.132 mg/vaso de N
(1963), para anlise de nitrato e nitrito em carnes e (uria) e as cultivares Lucy Brown, Vernica e Elisa.
seus derivados, e simplificado por Lara et al. (1978). A matria seca da parte area das plantas foi moda
Ele utilizado pelo Instituto Adolfo Lutz, respons- e subamostras foram trituradas em almofariz para pas-
vel por emitir laudos sobre contaminao de alimen- sar em peneira de 0,355 mm (42 mesh) de abertura de
tos no Estado de So Paulo e apresenta como des- malha. A extrao do nitrato foi feita com gua
vantagens ser trabalhoso, necessitar do uso de vri- desionizada e os procedimentos empregados na sua
os reagentes e expor o analista a eventuais riscos de quantificao foram o da coluna redutora contendo Cd
sade pelo contato com o cdmio (Sah, 1994). (Follett & Ratcliff, 1963), o da destilao (Bremner &
Outro procedimento colorimtrico de determinao Keeney, 1965), o que utiliza o cido saliclico (Cataldo
indireta do nitrato o descrito em Ulrich (1948) e modi- et al., 1975) e o procedimento que emprega mistura re-
ficado conforme Moraes & Cantarella (2003). Nesse dutora contendo Zn (Ulrich, 1948), que est descrito
procedimento, a reduo do nitrato a nitrito feita por no protocolo analtico de Moraes & Cantarella (2003).
uma mistura redutora contendo Zn em p, BaSO4 e Em todas as determinaes de nitrato foram utiliza-
MnSO4 e apresenta como desvantagem a reduo pelo dos reagentes p.a. e foi feita uma prova em branco com
Zn, pois esta reao afetada pela temperatura e pelas gua desionizada a cada 10 amostras.
Procedimento da coluna redutora contendo Segundo Lara et al. (1978), a atividade do Cd espon-
cdmio (Follett & Ratcliff, 1963) joso decresce ao longo do tempo. Assim, no incio de
Para frascos de plstico com tampa de presso e ca- cada dia de anlise e aps a passagem de alquotas de 3
pacidade de 100 mL, foram transferidas amostras de amostras pela coluna, ela foi reativada pela passagem
0,5 g de matria seca e 50 mL de gua desionizada, que de 25 mL de HCl 0,1 mol L-1, 50 mL de gua desionizada
foram submetidas, por 1 hora, a perodos de agitao de e 25 mL de soluo-tampo pH 9,69,7 diluda a 1:9 (v/v)
5 min, seguidos de 15 min de repouso, em banho-maria com gua desionizada.
com temperatura em torno de 60C. Na clarificao dos
extratos, as suspenses foram transferidas para bales Procedimento da destilao (Bremner & Keeney,
1965)
volumtricos de 200 mL, aos quais se adicionaram 5 mL
de soluo de tetraborato de sdio (Na2B4O7.10H2O) A extrao de nitrato foi semelhante realizada no
50 g L-1; 5 mL de hexacianoferrato (II) de potssio procedimento anterior, tendo sido utilizados 0,2 g de
[K4Fe(CN)6.3H2O] 150 g L-1; e 5 mL de sulfato de zin- matria seca e 20 mL de gua desionizada. Aps a ex-
co (ZnSO4.7H2O) 300 g L-1. Aps a adio de cada trao, o material foi filtrado em papel-filtro qualitativo
soluo foi feita agitao do contedo, completando-se e foi feita a destilao dos extratos em microdestilador
o volume com gua desionizada e mantendo-se em re- Kjeldahl (Bremner & Keeney, 1965). Como uma adap-
pouso por 30 min. A seguir, o material foi filtrado em tao para tecido vegetal, empregaram-se 5 mL de ex-
papel-filtro qualitativo (extrato A). Alquotas de 20 mL trato e 0,4 g de liga de Devarda, para que todo o nitrato
do extrato A foram transferidas para bqueres, recebe- da amostra fosse convertido a amnio em uma nica
ram 5 mL de soluo-tampo pH 9,69,7 (mistura de destilao. A seguir, foi feita a quantificao de N na
HCl 0,24 mol L-1 e NH4OH 0,75 mol L-1) e 2 mL de forma de amnio do destilado por meio de titulao com
soluo de EDTA 50 g L-1. Logo aps, foram percoladas soluo padronizada de H2SO4 0,00263 mol L-1. Con-
em coluna contendo Cd esponjoso (Lara et al., 1978), a siderou-se que a concentrao de N-NO 2- presente
uma vazo inferior a 10 mL min-1 e recolhidas em ba- nas amostras era desprezvel e, assim, os resultados
les volumtricos de 100 mL. A lavagem da coluna foi de N-NO3-+N-NO2- foram convertidos e expressos
feita com vrias pores de gua desionizada, at com- como N-NO3-. A eficincia do procedimento, estimada
pletar o volume do balo (extrato B). Alquotas de 10 mL por meio da recuperao de N-NO3- em solues-pa-
dos extratos B foram transferidas para bales dro contendo 0, 25, 50, 100, 150, 200, 250 e 300 mg L-1 de
volumtricos de 50 mL, aos quais se adicionaram 5 mL N-NO3- foi, em mdia, de 104%.
de soluo de sulfanilamida (C6H8N2O2S) 5 g L-1 em
Procedimento do cido saliclico (Cataldo et al.,
HCl 6 mol L-1. Aps 3 min de repouso, adicionaram-se
1975)
3 mL de soluo de cloreto de alfa-naftiletilenodiamina
A extrao de nitrato foi semelhante empregada
(C12H16Cl2N2) 5 g L-1 e, ento, os volumes foram com-
no procedimento 1, utilizando-se 0,1 g de matria seca
pletados com gua desionizada. Depois de 15 min de
e 10 mL de gua desionizada. Aps a extrao, foi
repouso, foram feitas leituras da absorbncia a 540 nm
em espectrofotmetro Cecil CE 1011. Os valores obti- adicionado, por meio de medida calibrada, 0,5 g de
dos foram convertidos em teores de N-NO3- na matria carvo ativado por amostra para a obteno de ex-
seca da alface com auxlio de uma curva de calibrao tratos incolores. Aps agitao e repouso de 10 min,
preparada a partir de alquotas de soluo de NaNO2. o material foi filtrado em papel-filtro quantitativo de
Para tanto, foi considerado que o N-NO2- determinado filtragem lenta. Alquotas de 0,2 mL de extrato rece-
foi proveniente da reduo do nitrato por meio da beram 0,8 mL de soluo de cido saliclico
passagem dos extratos pela coluna e que os teores (HC7H5O3) 50 g L -1 em H 2SO4 concentrado e 19 mL
originais de N-NO2- na matria seca das plantas eram de NaOH 2 mol L-1 e em seguida foi feita leitura da
desprezveis. absorbncia a 410 nm. Os resultados foram conver-
A eficincia da coluna foi estimada a cada 15 tidos em teores de N-NO 3- na matria seca das plan-
amostras pela passagem de soluo-padro de tas, com o auxlio de uma curva de calibrao prepa-
NaNO3 10 mg L -1, e a taxa de recuperao de nitra- rada a partir de solues diludas de NaNO3, que re-
to foi, em mdia, de 96%. ceberam o mesmo tratamento dado s amostras.
Procedimento da mistura redutora contendo Zn para avaliao dos procedimentos para determina-
(Ulrich, 1948 modificado) o do on (Tabela 1).
A extrao do nitrato e o tratamento dos extratos com Com o procedimento de Cataldo et al. (1975), foram
carvo ativado foram realizados de forma idntica do obtidos teores de nitrato maiores do que com os demais.
procedimento anterior, tendo sido utilizados 0,3 g de ma- De acordo com a anlise estatstica, os valores encon-
tria seca e 30 mL de gua desionizada. Alquotas de trados para os teores de nitrato seguiram a seguinte se-
1 mL de extrato foram transferidas para tubos de en- qncia: cido saliclico (Cataldo et al., 1975) > mistura
saio, juntamente com 4 mL de gua desionizada e 10 mL redutora (Ulrich, 1948, modificado) > coluna redutora
de soluo de cido actico 1,75 mol L-1. Aps agita- (Follett & Ratcliff, 1963) = destilao (Bremner &
o, acrescentaram-se, por meio de medida calibrada, Keeney, 1965), sendo que os teores de NO3- obtidos
0,5 g de mistura redutora obtida pela moagem em com o uso dos procedimentos do cido saliclico e da
almofariz de 10,0 g de sulfato de brio (BaSO4), 0,1 g mistura redutora contendo Zn foram, em mdia, 241%
de Zn em p e 1,0 g de sulfato de mangans e 46% maiores, respectivamente, do que os encontra-
(MnSO4.H 2O). Em seguida, adicionou-se 1 mL do dos com o procedimento da coluna redutora.
reagente cromognico, preparado a partir de 0,125 g de
alfa-naftilamina (C10H9N) e 0,125 g de cido sulfanlico
(C6H7NO3S.H2O), dissolvidos em 50 mL de soluo de
cido actico 1,75 mol L-1. O material foi agitado Tabela 1. Teores de NO3- (g kg-1) na matria seca de alface,
vigorosamente, mantido em repouso por 10 min e filtra- obtidos por quatro procedimentos de quantificao. Mdias
do, utilizando-se funis de vidro de cerca de 5 cm de di- de quatro repeties.
metro e papel-filtro de filtrao lenta. A seguir, foi feita
Variveis(1) Coluna Destilao cido Mistura
leitura espectrofotomtrica da absorbncia a 540 nm, redutora saliclico redutora
em at 20 min aps a filtrao.
N 0C1 02,87 02,57 13,57 03,60
A cada dia de anlise, foi feita uma curva de N 1C1 06,63 06,11 18,06 07,32
calibrao a partir de alquotas de soluo de KNO3, as N 2C1 11,43 10,03 24,11 13,73
quais receberam tratamento idntico ao dado s amos- N 3C1 20,80 19,11 33,76 21,91
tras. Com o auxlio da curva de calibrao, os valores N 4C1 34,14 33,95 43,11 33,47
N 0C2 01,50 01,17 10,34 03,57
de absorbncia foram convertidos em teores de N-NO3- N 1C2 03,96 03,52 13,17 07,19
na matria seca das plantas. N 2C2 05,18 04,18 17,32 07,87
Os teores de N-NO3- na matria seca das plantas, N 3C2 12,00 10,99 24,99 13,60
obtidos em cada procedimento, foram convertidos em N 4C2 29,89 30,48 40,86 28,72
N 0C3 01,29 01,92 10,70 03,18
teores do on nitrato (NO3-). Na avaliao dos efeitos
N 1C3 02,33 02,15 13,12 04,63
das doses de N e de cultivares, os resultados foram sub- N 2C3 03,79 03,26 14,45 05,80
metidos anlise de varincia em esquema fatorial 5x3 N 3C3 10,59 10,68 24,21 12,69
e ao teste de Tukey, a 5% de probabilidade. N 4C3 21,47 21,37 37,11 26,70
Na comparao dos procedimentos de determinao de Mdias(2) 11,37C 10,77C 22,59A 12,93B
nitrato, foi feita anlise de varincia em parcelas subdi- Valores do teste F
vididas, sendo considerados 15 tratamentos principais Nitrognio (N) 248,81** 179,26** 88,88** 86,86**
(cinco doses de N e trs cultivares de alface) com qua- Cultivares (C) 55,98** 27,26** 13,27** 10,25**
NxC 6,08** 3,61** 0,69ns 1,23ns
tro repeties e quatro subtratamentos (procedimentos
DMS (N) 2,77 3,28 4,97 4,52
de quantificao de nitrato), e as mdias foram compa- DMS (C) 1,83 2,17 3,28 2,98
radas pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade. CV (%) 21 26 19 30
Procedimentos (P) 212,12**
P x variveis 0,76ns
Resultados e Discusso DMS para P 1,39ns
Em todos os procedimentos de quantificao foram (1)N
0, N1, N2, N3 e N4 correspondem, respectivamente, a 0, 141,5, 283,
detectados efeitos significativos das doses de N no teor 566 e 1.132 mg/vaso de N, como uria, e C1, C2 e C3, s cultivares Lucy
Brown, Vernica e Elisa. (2)Mdias seguidas de mesma letra no diferem
de nitrato e diferenas entre as cultivares de alface, o entre si, pelo teste de Tukey, a 5% de probabilidade. nsNo-significati-
que gerou uma faixa ampla de teores, conveniente vo. **Significativo a 1% de probabilidade.
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