UNIVERSIDAD DE SONORA.

Divisin de Ciencias Biolgicas y de la Salud.

Departamento de Ciencias Qumico-Biolgicas.

LABORATORIO DE INTEGRACIN BSICO

(Microbiologa)
Martes 7:00 am9:00 am

PRCTICA N 11

Pruebas de diferenciacin bioqumica

Equipo #8

Hermosillo, Sonora 8
noviembre de 2016
 MATERIALES Y MTODOS.
Material:
- Cepa Salmonella sp
- Cepa Klebsiella sp
- Cepa E. Coli
- Cepa Proteus sp

Mtodo (procedimiento):
Se realizaron pruebas bioqumicas a cuatro gneros de bacterias,
Salmonella sp, Klebsiella sp. E. Coli y Proteus sp con la finalidad de
diferenciarlas y determinar la especie.
En nuestro caso, trabajamos con el gnero Proteus sp. Los dems
resultados incluidos fueron colaboracin de algunos compaeros.

RESULTADOS Y DISCUSIN.
A continuacin se muestran los resultados obtenidos de las
pruebas bioqumicas realizadas a Proteus sp:
Prueba bioqumica (+) o (-)

Citrato - No utiliza al citrato como nica

fuente de carbono.
VP + Present el color rosado-violceo
caracterstico de prueba positiva.
Productor de acetona.
RM - Al agregar el Rojo de metilo, se
form un halo color rojo el cual
desapareci al instante, sea de
ser prueba negativa.
No produce altas
concentraciones de cido.
MIO Ornitina: (+) Cambio de tonalidad del fondo.
Movilidad: (+)
Indol: (-) Amarillo.
Tom un color vino
Produjo cido sulfhdrico
TSI K/A, G, H2S Productor de gas, debido a las
burbujas que se formaron en el
interior del tubo.
 SIM Movilidad: (+)
Indol: (-)
Ac.
Sulfhdrico:
(+)
Agar urea + Color rosa fucsia
Posee la enzima ureasa
Caldo urea - Debido a la falta de inculo.

En este caso se tuvieron dudas pues, exista la posibilidad de ser Proteus

mirabilis o Proteus morganii, esto pudo aclararse gracias a la prueba de
TSI, en la cual la diferencia radic en la produccin del cido sulfhdrico,
ya que Proteus mirabilis produce cido sulfhdrico mientras que la
especie morganii no.

Resultados de las pruebas bioqumicas en Salmonella sp:

Prueba bioqumica (+) o (-)

Citrato + Cambio de color de verde a azul.

VP - No produce acetona.
RM + Halo de color rojo que persisti.
MIO Ornitina: (+)
Movilidad: (+)
Indol: (-)
TSI K/A, G, H2S Fermentacin de glucosa.

SIM Movilidad: (+)

Indol: (-)
Ac.
Sulfhdrico: (-)
Agar urea - No posee enzima ureasa.

Caldo urea -

Con ayuda de estas caractersticas pudimos suponer que la especie es

Entrica.

CONCLUSIN.
Tomando como base los resultados obtenidos en las pruebas bioqumicas
de diferenciacin, podemos deducir que en el caso del gnero
Salmonella sp, se trat de la especie Entrica, subesp. Enterica (I). En lo
que respecta a Proteus sp, la especie mirabilis.
Falta el gnero de las otras dos.

Las pruebas bioqumicas son de gran importancia ya que nos ayudan en

el reconocimiento bacteriano. Las pruebas permiten la identificacin de
especies de bacterias, ya que permite poner en manifiesto una o ms
caractersticas fisiolgicas de un microorganismo. Las pruebas
bioqumicas tienen en comn el reconocimiento de algunas
caractersticas: permiten reconocer el metabolismo bacteriano, la
produccin de enzimas por parte de la bacteria y la metabolizacin de
carbohidratos.

CUESTIONARIO.
1. Investigar el fundamento bioqumico de cada una de las pruebas
realizadas.
Citrato:
Determina si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como nica
fuente de carbono para el metabolismo y crecimiento, provocando
alcalinidad. El medio incluye citrato de sodio, un anin como nica
fuente de carbono y fosfato de amonio como nica fuente de nitrgeno.
Normalmente el metabolismo del citrato comprende una condensacin
de acetilo con la coenzima A y oxalacetato para entrar en el ciclo de
Krebs. El desdoblamiento del citrato comprende un sistema enzimtico
sin la intervencin de la coenzima A. Esta enzima se denomina citritasa
o citrato desmolasa.
Rojo de Metilo:
Comprobar la capacidad de un organismo de producir y mantener
estables los productos terminales cidos de la fermentacin de la
glucosa y vencer la capacidad amortiguadora del sistema. Es una prueba
cualitativa de la produccin de cido (determinacin de pH). Las
bacterias que principalmente siguen la va de fermentacin de cidos
mixtos a menudo producen suficiente cido para mantener un pH menor
de 4.4.
La prueba de rojo de metilo se basa en el empleo de un indicador de pH
para determinar la concentracin de iones hidrgeno presentes cuando
un organismo fermenta glucosa. Las bacterias RM positivas producen
cidos estables manteniendo una alta concentracin de iones hidrgeno
hasta alcanzar cierta concentracin y entonces cesa toda actividad.
La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubacin
suficiente como para permitir que se produzca la diferencia en el
metabolismo de la glucosa. Los organismos en estudio se incubarn por
lo menos 2 das, lo que permite que todos los organismos con baja
proporcin gaseosa muestren su lmite en la concentracin de iones
hidrgeno.

Voges-Proskauer:
Determina la capacidad de algunos organismos de producir un producto
final neutro, la acetona a partir de la fermentacin de glucosa.
La reaccin de VP se basa en la deteccin de acetona como producto
final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. sta es
metabolizada en cido pirvico, intermediario clave en la gluclisis. A
partir del cido pirvico, una bacteria puede seguir muchas vas. La
produccin de acetona (precursor de la produccin de 2,3- butanediol)
que es uno de los ciclos para la degradacin de la glucosa en las
bacterias. La formacin de acetona y butilenglicol es una va alternativa
del metabolismo del cido pirvico. Las bacterias que utilizan esta va
producen solo pequeas cantidades de cidos mixtos que son
insuficientes para disminuir el pH del medio de rojo de metilo, lo
bastante como para producir un cambio de color. Por este motivo
muchas de las especies de Enterobacterias son VP positivas, con pocas
excepciones son RM negativas y viceversa.
El primer reactivo agregado a una alcuota incubada es el catalizador
alfa-naftol porque ste acta como intensificador del color, lo que
aumenta la sensibilidad de la reaccin sin prdida de su especificidad. El
segundo reactivo es el KOH que cuando se agrega al medio de VP
contribuye a la absorcin de CO2. No debe excederse de un volumen
exacto. El KOH reaccionar con la peptona dando un color rosado salmn
y con el agregado posterior de alfanaftol no habr alteracin del color.

Caldo urea:
La hidrlisis de la urea por la enzima ureasa libera dos molculas de
amoniaco que alcaliniza el medio, entonces se vira el indicador de pH,
en el caso del rojo de fenol una prueba positiva es color bugambilia.
 SIM:

MIO:

TSI:

Agar urea:

2. Investigar cmo se realizan las pruebas del Rojo de Metilo y del

Vogues-Proskauer.
Estas dos pruebas permiten la diferenciacin dentro de las
enterobacterias del grupo coli y aergenas. Para realizar esta prueba se
utiliza en medio Rojo de Metilo y Voges-Proskauer, preparndose dos
tubos del mismo medio. Para la diferenciacin entre ambos tubos, se
prepara un tubo con 3 ml de medio y otro con solo 1.5 ml del mismo,
usndose ste ltimo para la determinacin de la prueba de Voges-
Proskauer.
En el caso del Rojo de metilo se inocula la bacteria en estudio y se
incuba a 35-37C durante al menos 48 hrs. Se aaden 3-5 gotas del
reactivo y se observa el cambio en la coloracin. Se considera positiva si
vira al rojo y negativa si permanece amarillo.
Para Voges-Proskauer se unocula la bacteria en estudio y se incuba a 35-
37C durante al menos 24 hrs. Se aaden 12 gotas del reactivo A de
Voges-Proskauer (Alfa-naftanol 5% en etanol absoluto) adquiere un
aspecto lechoso y 4 gotas del reactivo B de Voges-Proskauer (KOH 40%)
desaparece el aspecto lechoso, se agita constantemente el tubo
destapado durante 15 min. Si la prueba es positiva aparece un color
rosado ms o menos intenso. Si la prueba resulta negativa, no adquiere
coloracin.

3. Por qu Klebsiella y Proteus siendo ureasa (+) ambos, Klebsiella

slo es positivo en uno de los medios de cultivo utilizados?

Falta
 Bibliografa
Bailn, Luca., Cruz Roberto., Cervantes, Armando (2003). Atlas de
Pruebas Bioqumicas para Identificar Bacterias. Recuperado el da
04 de noviembre de 2016, de Universidad Nacional Autnoma de
Mxico. Sitio web:
https://www.academia.edu/4858992/Atlas_de_pruebas_bioquimicas
_para_identificar_bacterias