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IDENTIFICACIN MORFOLGICA DE HONGOS

1. INTRODUCCIN

Los hongos constituyen un grupo diverso de organismos unicelulares o pluricelulares que


se alimentan mediante la absorcin directa de nutrientes. Los alimentos se disuelven
mediante enzimas que secretan los hongos; despus se absorben a travs de la fina
pared de la clula y se distribuyen por difusin simple en el protoplasma. Junto con las
bacterias, los hongos son los causantes de la putrefaccin y descomposicin de toda la
materia orgnica. Hay hongos en cualquier parte en que existan otras formas de vida.
Algunos son parsitos de organismos vivos y producen graves enfermedades en plantas
y animales. La disciplina cientfica que estudia los hongos se llama micologa.

Los hongos figuraban en las antiguas clasificaciones como una divisin del reino Plantas
(Plantae). Se pensaba que eran plantas carentes de tallos y de hojas que, en el trascurso
de su transformacin en organismos capaces de absorber su alimento, haban perdido la
clorofila, y con ello, su capacidad para realizar la fotosntesis. Sin embargo, en la
actualidad los cientficos los consideran un grupo completamente separado, que
evolucion a partir de flagelados sin pigmentos. Ambos grupos se incluyen dentro del
reino Protistas, o bien se coloca a los hongos como un reino aparte, debido a la
complejidad de su organizacin (ver clasificacin ms adelante). Hay unas cien mil
especies conocidas de hongos. Se cree que los grupos ms complejos derivan de los
tipos ms primitivos, los cuales tienen clulas flageladas en alguna etapa de su ciclo vital.
2. OBJETIVOS

2.1. OBJETIVO GENERAL

Identificar morfolgicamente los distintos hongos.

2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS

Identificar las estructuras de los mohos mediante un montaje en fresco con azul de
lactofenol.
Identificar las levaduras a travs de un frotis teido con Gram.
Observar las caractersticas microscpicas y microscpicas de mohos y levaduras .
3. MARCO TERICO

Los hongos constituyen un conjunto de seres vivos que incluye desde organismos
unicelulares a organismos pluricelulares macroscpicos. Estn formados por clulas
eucariotas con una pared rgida, y se caracterizan por ser inmviles, presentar nutricin
hetertrofa por absorcin y reproduccin asexual y sexual.

Los hongos no son animales, pero tampoco son plantas. Constituyen un reino de seres
vivos independiente, el reino Fungi (el reino de los hongos). A diferencia de los animales,
que se nutren por ingestin, y de las plantas que lo hacen por fotosntesis, los hongos
obtienen su alimento por absorcin. Su forma de reproduccin es por esporas, que
equivalen a las semillas de algunas plantas vasculares. Al germinar, las esporas forman el
aparato vegetativo o micelio, que est formado a su vez por filamentos llamados hifas, las
cuales estn constituidas por infinidad de clulas.

Los hongos unicelulares son microscpicos, poseen forma redondeada y se denominan


levaduras. La mayora de los hongos, sin embargo, son pluricelulares, estn formados por
clulas cilndricas alargadas, que se disponen linealmente para constituir largos
filamentos, a los que se denomina hifas. Las hifas al crecer llegan a formar micelios
visibles macroscpicamente como los mohos y las setas.

La mayora de los hongos poseen un papel importante en la naturaleza, en la que se


hallan ampliamente distribuidos, degradando y reclinando la materia orgnica muerta a
merced de sus numerosas potencialidades metablicas de tipo quimiohetertrofo. Los
hongos tambin tienen una gran importancia industrial y farmacolgica, ya que intervienen
en procesos como la fermentacin para la produccin de cidos y alcoholes y la sntesis
de antibiticos. Algunos pueden ser lesivos y algunas veces mortales ya que son capaces
de formar sustancias alucingenas, txicas y venenosas.

Morfologa. Los hongos forman un grupo de organismos heterogneos desde el punto de


vista morfolgico. Unos son unicelulares y estn constituidos por clulas aisladas, ovales,
de 3-10 m de dimetro denominadas levaduras. Otros son pluricelulares y estn
constituidos por clulas alargadas, cilndricas, de 3 a 12 m de dimetro , dispuestas
linealmente formando unas estructuras filamentosas denominadas hifas, que pueden
alcanzar varios centmetros de longitud. Las hifas crecen por elongacin de su extremo
distal, y de las porciones viejas emergen ramificaciones laterales.

La composicin qumica de la pared vara dependiendo de la especie, del tipo de


estructura (hifa envejecida, hifa apical en crecimiento, espora, etc.). Lo ms constante y
caracterstico de la pared es su estructura en capas, la presencia de quitina y el carcter
antignico de glucanos y mananos.

En algunos hongos filamentosos las hifas se entrecruzan ms o menos


desordenadamente formando, cuando alcanzan tamao macroscpico, matas d e aspecto
algodonoso de diversos colores que pueden verse enmoheciend o alimentos, paredes
hmedas y otros lugares de la naturaleza y se conocen coloquialmente por el nombre de
mohos. En otros hongos filamentosos las hifas se disponen con un cierto grado de
organizacin pero sin llegar nunca a formar una verdadera estructura tisular y pueden
alcanzar tamao macroscpico constituyendo las setas, algunas de las cuales son bien
conocidas por ser comestibles o venenosas.

Los hongos filamentosos se dividen en inferiores y superiores, por las caractersticas de


sus hifas. Los hongos inferiores poseen hifas anchas (5-10 m), sin o con escasas
tabicaciones por lo que contienen muchos ncleos para una misma unidad citoplasmtica.
Los superiores estn formados por hifas finas (0,5-5 m), compartimentadas po r septas
transversales, que constituyen la separacin entre las clulas, sin embargo, se ha
observado que estas septas intracelulares poseen poros, por lo que las clulas tienen
tambin una estructura cenoctica, ya que poseen los citoplasmas comunicados. Los
hongos inferiores forman mohos, en tanto que los superiores forman mohos y setas.

Algunos hongos, entre ellos varios patgenos para el hombre, son dimrficos;
presentndose como levadura en la forma parasitaria, en los tejidos, y como moh o en su
hbitat natural o el revs. La transicin levadura-moho o viceversa, est a influenciada por
mltiples factores, como la temperatura, el potencial redox, la tensin parcial de CO2, los
nutrientes, y otros, y pueden ser obtenidas in vitro en condiciones especiales de cultivo.

Algunos hongos microscpicos pueden causar diversas enfermedades denominadas


micosis; sin embargo, son escasas las especies adaptadas estrictamente al hombre y la
mayora de las que producen enfermedad tienen su reservorio natural en el medio
ambiente.

En general las clulas fngicas se observan bien por microscopa convencional, aunque
pueden requerir tinciones especiales para facilitar su visualizacin. Crecen fcilmente en
los medios de cultivo convecionales dando lugar a colonias visibles macroscopicamente,
con morfologa bien diferenciada segn estn formadas por levaduras u hongos
filamentosos.

La identificacin de las levaduras se efecta por el estudio de sus caractersticas


metablicas; pero la identificacin de los hongos filamentosos se basa en sus
caractersticas morfolgicas.

Visualizacin, cultivo e identificacin.

Examen microscpico. El examen microscpico de los hongos en las muestras clnicas


o de los cultivos se efecta previa tincin o directamente en fresco . Los hongos se
observan en nuestras clnicas teidas con la tincin de Gram com o grampositivos.
Tambin se visualizan bien contrastando las muestras con un a gota de azul de lactofenol
(azul de algodn). En productos fluidos en los que s e sospecha la existencia de levaduras
capsuladas, como el criptococo, puede depositarse en el porta una gota del material, y
aadir una gota de tinta china, lo que permite observar la levadura con la cpsula.
Muchas veces el examen microscpico de las micosis de los tejidos y rganos profundos
se hace por tcnicas histolgicas a partir de biopsias. La hematoxilina - eosina es til para
examinar las lesiones inflamatorias que, en ciertas ocasiones, orientan el diagnstico,
pero no permite la deteccin de elementos fngicos, que se tien mal por esta tcnica. La
tincin de PAS colorea intensamente la pare d polisacrida de los hongos y permite una
deteccin rpida de los elementos fngicos en los tejidos. Las tinciones argnticas
permiten igualmente reconocer los elementos fngicos ya que la pared se tie en negro.

En los tejidos de los hongos pueden observarse como levaduras aisladas, o como
filamentos ramificados infiltrantes.

Cultivo. Los hongos crecen bien en medios artificiales y tienen requerimientos nutritivos
simples, una fuente de carbono orgnico, generalmente en azcar, y de nitrgeno suelen
ser los elementos suficientes para obtener un buen crecimiento. Junto a ellos, un soporte
slido, el agar, permite a los hongos filamentosos el desarrollo del micelio areo, donde se
localizan las estructuras reproductoras y e l desarrollo de colonias en el caso de las
levaduras. El medio de cultivo ms utilizado para los hongos es el medio glucosado de
Sabouraud, que rene estas caractersticas y un pH de 56, que dificulta el crecimiento
bacteriano.

No es cierto que los hongos requieran necesariamente para su crecimiento ser cultivados
en el medio de Sabouraud, la mayor parte de medios de cultiv o utilizados en bacteriologa
permiten su desarrollo, pero su utilizacin est consagrada por la costumbre. De hecho, la
mayora de las descripciones de crecimiento y caractersticas morfolgicas de las colonias
fngicas se han hecho sobre el medio de Sabouraud.

La adicin al medio de antibiticos como el cloranfenicol o la gentamicina, que inhiben el


crecimiento de las bacterias contaminantes, o antifngicos especiales (como la actidiona o
cicloheiximida) que inhiben el crecimiento de muchos hongos no patgenos, transforman
al medio de Sabouraud en un medio ms selectivo.

Los medios de cultivo despus de sembrados, se incuban en aerobiosis y la temperatura


ptima suele ser 25-30C para los agentes de micosis superficiales y los oportunistas y de
35-37C para los que producen infecciones profundas.

Los hongos levaduriformes dan lugar en 24-48 horas a colonias de aspecto y morfologa
similar a las bacterianas. El desarrollo de las colonias de los hongos filamentosos es
mucho ms variable; algunos crecen muy lentamente, pero sus colonias son muy
caractersticas y en general se diferencian fcilmente de las levaduras.

Identificacin. Un hongo se identifica en primer lugar por la morfologa macroscpica de


la colonia, color, textura y velocidad de crecimiento. Para observar la estructura
microscpica puede tomarse un pequeo fragmento d e cultivo y montarlo entre cubre y
porta, en fresco o contrastado con un colorante para su posterior observacin, lo que
permitir confirmar la sospecha de hongo levaduriforme o filamentoso basada en la
morfologa colonial.

Los hongos filamentosos se identifican a nivel de gnero especie por la morfolog a del
micelio, pero sobre todo por las caractersticas microscpicas de sus esporas asexuadas
y los elementos que las originan. Para conseguir la produccin de esporas a veces se
requieren medios de cultivo especiales que facilitan l a esporulacin. Las estructuras
reproductoras asexuadas (conidioforos) son muy frgiles y para poder observarlas al
microscopio sin distorsionarlas o destruirlas se emplean tcnicas especiales
(microcultivo).

Los hongos no esporulados (micelio estril) son difcilmente identificables. Los hongos
levaduriformes se identifican mediante pruebas metablicas, de mod o semejante a las
bacterias.
4. PROCEDIMIENTO

4.1. MONTAJE EN FRESCO

Portaobjetos Azul de Lactofenol 1 gota

Muestra de Asas para


Micelio hongos

Mezclar

Observar 40X

4.2 IDENTIFICACION MACROSCPICA

Caja de Moho Caja de levadura

Descripcin
caracterstica

4.3. FROTIS TEIDO

Levadura
Muestra

Tincin de
Gram

Observar
100X
5. RESULTADOS

5.1. MONTAJE EN FRESCO


Al realizar el montaje en fresco con lactofenol de las diferentes muestras de hongos, se
observaron las siguientes caractersticas (Ver Anexo A):
- Muestra a: Se observaron la hifas septadas teidas de azul y algunas esporas color
caf, mientras que en otra parte de la muestra, no se observaba la presencia de
esporas.
- Muestra b: En este caso solo se apreciaron las esporas se color azul, las cuales se
observaban en forma de cadena.
- Muestra c: Se observaron hifas azules no septadas con algunos conidios azules y
esporas de color caf.
- Muestra d: En esta muestra, las esporas se observaron verde azulosas, las cuales
estaban dispersas por todo el campo.
- Muestra e: Se observaron hifas no septadas con esporas de color azul, y otros de
color gris muy pequeas. Tambin se observaron algunos esporangios, los cuales se
encontraban en el centro o en los extremos de las hifas.
-
5.2. IDENTIFICACION MACROSCPICA

De las diferentes cajas de petri observadas en el laboratorio (Ver Anexo A), se pudieron
identificar levaduras y los siguientes tipos de mohos:
a) Cladosporium ambiental: se presenta con una superficie gamuza de color
verde oscuro, interrumpida por pliegues irregulares. En alguna de las partes del
micelio se observaban colores un poco ms oscuro como gris amarronado. En
las cajas de petri observadas, este moho estaba acompaado de otro
totalmente blanco, que ocupaba el 40% del medio de cultivo.
b) Aspergillus niger: Se observa con unas superficies densamente punteadas de
color marrn grisceo oscuro a negro, y al reverso de la caja de petri se ve
negro totalmente. Este tipo de color que se observa en el micelio, debido a que
la pigmentacin es producida por los conidios superficiales cuando el micelio
se encuentra en estado vegetativo.
c) Microsporum gypseum: Se observa de un color blanco hueso, de forma
algodonosa y algunas partes de color crema, el cual abarca la mayora del
medio de cultivo.
d) Aspergillus nidulans: Se observa como una cepa albina, y en alguna de sus
partes se pudo apreciar, en algunas cajas, un pigmento claro. Poseen
superficie granulosa con pliegues radiados.
e) Scopulariopsis: Este moho se observa con una pigmentacin amarilla, de
textura granulosa y con pliegues radiados, pero estas pueden variar o ser
distintas para cada especie.
f) Aerobasidium pullulans: Se observa con una superficie plana, lisa, el cual es
muy similar al de una levadura. Se observaron de color negro y un poco
brillantes.
g) Scedosporium apiospermun: se observaba con una coloracin caf, la cual es
peculiar, debido a los conidios de pigmentacin oscuras.
h) Levaduras: en la mayora de las cajas de petri observadas, se presentaban
levaduras de color amarillo, otras de color crema, pero todas tenan las
caractersticas de se redondas y brillantes, no presentaban forma algodonosa,
ni espolvoreada como los mohos.

En las observaciones realizadas, cabe aclarar, que en las cajas de agar no slo
creci un tipo determinado de hongo o levadura, sino que cada una de estas
posea uno o varios de los hongos antes mencionados, y algunas estaban
contaminadas tanto de hongos como de levaduras. En los diferentes agares,
tambin se repiti la presencia del mismo tipo de moho como el Scopulariopsis, el
cual se present en tres de los agares seleccionados, mientras que otro tipo de
mohos como el Microsporum gypseum, se presentaban en mayor o menor
cantidad en unas cajas que en otras, las cuales posean tonos variados del mismo
color, y texturas mucho ms definidas. Es decir, se apreciaba mejor las
caractersticas propias de ese hongo en un tipo de muestra que en otra, pero
debido a la gran similitud que presentaban, se determin que se trataba del mismo
hongo, en otro perodo de su crecimiento.

En algunos medios, se presentaba con mayor precisin los micelios sumergidos


que en las otras muestras, pero la mayora de los micelios observados eran
micelios areos.

5.3. FROTIS TEIDO


Al teir una muestra de levadura, estas se observaron de color fucsia, las cuales eran
redondas y brillantes, mientras que se pudieron observar otras de color morado o Gram
positivas, que comenzaban su reproduccin asexual por gemacin, debido a que se
observaban un poco ms elongadas.
6. ANALISIS DE RESULTADOS

6.1. MONTAJE EN FRESCO


Segn los resultados obtenidos experimentalmente, se ha comprobado que las hifas de
los diferentes micelios pueden ser septadas o no septadas, lo cual se observa por la
presencia o no de divisiones en las hifas, adems se comprob que cada uno de estos
hongos puede poseer esporas, que se observan como pequeos puntos azules que
permiten la propagacin del micelio.

6.2. IDENTIFICACIN MACROSCPICA. De los diferentes tipos de hongos que


crecieron en el agar, se puede deducir, que estos seres abundan en el ambiente, y
sus esporas se encuentran en cualquier rincn del laboratorio, sin excluir las
levaduras, las cuales son abundantes. Las diferencias macroscpicas entre este
tipo de hongos permite identificarlos inmediatamente, ya que los mohos poseen
forma algodonosa, polvorosa, mientras que las levaduras son circulares, algo
brillantes y lisas. Con respecto a esto, se debe tener en cuenta que los trabajos
realizados en el laboratorio deben procurar una desinfeccin total del ambiente,
con utilizacin de mecheros entre otros, para que los trabajos queden libre de
esporas fngicas, o levaduras que pueden contaminar el estudio que se est
realizando, por lo tanto, la atmsfera del laboratorio, no est libre de hongos, ya
sean mohos o levaduras.

6.3. FROTIS TEIDO


Del frotis teido de una levadura realizado experimentalmente, se puede deducir que lo
observado no eran nicamente levaduras; debi a que estas son hongos que
generalmente se deben observar violetas, es decir, como Gram Positivos.
7. INVESTIGACIN

Explique el fundamento de la tcnica utilizada para el montaje.

Azul de lactofenol: El azul de lactofenol tie de color azul las estructuras hialinas de los
hongos, mejorando su visualizacin con microscopio incluso a baja resolucin.
Es pues muy til para estudiar las estructuras reproductivas de los hongos filamentosos
(conidiforos, conidios, etc.), lo que resulta fundamental a la hora de proceder a la
identificacin de las distintas especies.

Cuales son las principales macroscpicas entre mohos y levaduras.


Macroscopicamente, las levaduras se observan como colonias lisas de gran tamao
similares a las clulas que generalmente son de colores amarillos, blancos o cremosos,
mientras que los mohos presentan colonias algodonosas, aterciopeladas y pulvurentas,
estos ltimos pueden crecer dentro del sustrato para dar soporte, o puede crecer en
grandes cantidades sobre el sustrato.
8. CONCLUSIONES

Los mohos y levaduras poseen caractersticas macroscpicas muy diferentes, lo cual


permite clasificarlas a simple vista.

Los hongos son generalmente Gram positivos.

Los mohos poseen a nivel microscpico, hifas que pueden ser septadas o no
septadas.

Las levaduras a nivel microscpico se observan como estructuras brillantes y


refringentes.
BIBLIOGRAFA

BROCK, Tomas D. y MADIGAN, Michael T. Microbiologa, 6 Edicin. Ed. Prentice


May. Mxico D.F. (Mxico). 1991.

KONEMAN, Elmer y Cols. Diagnstico microbiolgico. Ed. Panamericana: Buenos


Aires (Argentina).

Http://uab-gtip.uab.es/Apuntsmicro/hongos.pdf
"Hongos," Enciclopedia Microsoft Encarta 2000. 1993-1999
Microsoft Corporation. Reservados todos los derechos.
ANEXO A.
RESULTADOS

MONTAJE EN FRESCO

Muestra a Muestra b Muestra c Muestra d Muestra e

IDENTIFICACIN MACROSCPICA

Muestra a Muestra b Muestra c Muestra d Muestra e

Muestra f Muestra g Muestra h


ANEXO B
RESULTADOS

FROTIS TEIDO