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13/10/04
1. INTRODUCCIN
En el anlisis microbiolgico, se hace uso de estos conceptos para determinar que clases
de sustancias sintetizan las bacterias y que sustancias toman del medio para efectuar el
proceso metablico. Para ello, se hace uso de ciertas pruebas bioqumicas que se utilizan
para comprobar la presencia de metabolitos producidos por ciertas reacciones cuando el
microorganismo se encuentra en un medio determinado.
Estas pruebas son utilizadas para diferenciar entre los diversos grupos, gneros o
especies, principalmente entre los miembros de la familia Enterobacteriaceae. El KIA
contiene 1% de lactosa, y 0.1% de glucosa; y el TSI, al igual que el KIA, contiene lactosa y
glucosa con las mismas concentraciones, adems de sacarosa con una concentracin del
1%.
Esta fermentacin de carbohidratos tiene lugar tanto en aerobiosis (pico de flauta) como
en anaerobiosis (profundidad). La glucosa es catabolizada inicialmente por la va
metablica de Embden Meyerhot Purnas (EMP) a ATP y cido pirvico, que luego se
convierte en los diversos productos finales estables: cido lctico y/o otros cidos
orgnicos, aldehdos, alcoholes, CO2, H2 y alta energa.
PRUBA DE CITRATO
Esta prueba ayuda a determinar si un microorganismo es capaz de utilizar el citrato como
nica fuente de carbono para el metabolismo, utilizando como medio el Simmons Citrato.
La prueba del citrato sirve para la identificacin de la familia Enterobacteriaceae, de
microorganismos Gram() relacionados, de bacterias no fermentadoras y la diferenciacin
de los gneros. La energa puede ser proporcionada a algunas bacterias por la utilizacin
del citrato como nica fuente de carbono. En las bacterias, el desdoblamiento del citrato
involucra un sistema enzimtico sin la participacin de la coenzima A, la citratasa (citrato
oxalacetato liasa) o la citratodesmolasa. La degradacin inicial del citrato produce el
oxalacetato (sal de cido oxalactico) y acetato (sal de cido actico) que son los
intermediarios en el metabolismo del citrato.
Los productos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio. A un pH alto
(alcalino), se produce ms acetato y formato, y se disminuye la formacin de lactato y
CO2. A un pH por encima de 7.0 no existe produccin de lactato y los productos son CO 2,
cido frmico y cido actico. A un pH cido, los principales productos son
acetilmetilcarbinol (acetona) y lactato. A este primer paso metablico en la fermentacin
del citrato, tambin produce piruvato y su degradacin depende entonces del pH del
medio.
PRUEBA DE MOVILIDAD
Esta prueba ayuda a determinar si un microorganismo es mvil o inmvil. Las bacterias
son mviles por medio de flagelos, aparecen sobre todo en los bacilos, sin embargo, unas
pocas formas cocoides son mviles. Los medios de cultivo utilizados para la prueba de
movilidad son semislidos del cual existen dos tipos de medios. Uno que posee pH 7.3 a
base de extracto de carne, peptona, NaCl, agar y agua destilada; y otro a base de
triptosa, NaCl, agar y agua destilada con pH 7.2. Se pueden utilizar sales de tetrazolio en
el medio para movilidad. Sin embargo, este reactivo inhibe ciertos microorganismos. Al
utilizar sales de tetrazolio hay variantes en los resultados, entonces un resultado (+) o
mvil se ve por la produccin de una nube turbia rosa que difunde en todo el medio y un
resultado () inmvil se observa produccin de una lnea roja brillante confinada a la lnea
de siembra y el medio circundante permanece claro.
a) Los que producen cidos pero no 2,3 butanodiol, como E. coli (VP).
b) Los que producen 2,3 butanodiol como sus productos finales, como los grupos
Klebsiella Enterobacter (VP+).
TSI
Siembras S.Citrato LIA
Siembra
Observaciones Observaciones
Caldo
SIM Siembra RM - VP
Siembra
37C
37C Incubacin 48 96 h
Incubacin 24 48 h.
Agitacin
Agitacin
suave
Observaciones
4.5. PRUEBA DE ROJO DE METILO 4.6. PRUEBA DE CATALASA
Caldo Asa en
Inoculacin RM - VP Tomar dos punta
colonias
37C
Incubacin 48 96 h.
Portaobjetos No frotar
Plasma
0.5 ml Cultivo Caldo peptona
Humano Inoculacin Tripticase
37C
Incubacin 24 48 h.
Tubo de ensayo
Adicin del Kovacs
Girar Reactivo 5 gotas
suavemente
37C Agitacin
Incubacin 4 horas
Observaciones
Observaciones
4.9. PRUEBA DE NITRATO 4.10. PRUEBA GELATINASA
Caldo Medio
Inoculacin Nitrato Siembra Gelatina
37C 37C
Incubacin 24h. Incubacin 24 120 h
Asa en Urea de
Tomar una punta Siembra Chistensen
colonias
37C
Incubacin 24 144 h
Colocar en la
Papeleta
parte reactiva
Observaciones
Esperar 60 seg.
Observaciones
4.13. SIEMBRA EN MEDIOS SLIDOS
Siembra
Observaciones
5. RESULTADOS
Por otro lado, la Salmonella sp. que fue inoculada en medios de cultivo especiales,
resulto contaminada por el microorganismo Staphylococcus aureus, debido a que los
resultados eran poco congruentes para la Salmonella.
BIBLIOGRAFIA
http://www.monografias.com/trabajos15/microorganismos/microorganismos.shtml-
ANEXO A
RESULTADO DE PRUEBAS BIOQUIMICAS
Antes Despus
Antes Despus
Antes Despus
Antes Despus
ANEXO B
RESULTADO DE PRUEBAS BIOQUIMICAS
Antes Despus
Antes Despus
ANEXO D.
RESULTADOS DE SIEMBRAS EN MEDIO SLIDOS