Organizacin del ADN en el ncleo.

El ncleo tiene una estructura interna que organiza el material gentico y localiza
algunas funciones nucleares en sitios concretos, ej., la transcripcin de un gen se realiza
en el nuclolo. El ncleo contiene a los cromosomas, compuestos de cromatina
(protenas + ADN), que se condensa durante la mitosis para dar a resultado un
cromosoma. El nmero y el tamao de los cromosomas varan considerablemente de una
especie a otra. El ADN en se asocia a unas protenas histonas, que logan empaquetar el
ADN de tal manera de enrollar una hebra de 2 metros para que entre en el ncleo. Las
histonas tienen gran proporcin de AA bsicos, cargados positivamente que facilitan la
unin con la molcula de ADN cargada negativamente.

Existen 5 tipos importantes de histonas (H1, H2A, H2B, H3 y H4). La unidad bsica
estructural de la cromatina es el nucleosoma, un octmero de histona sujetado por una
H1 afuera y con 1.6 vueltas de ADN sobre s. Cada nucleosoma se separa por un
fragmento de alrededor unas 200 bases. Se denomina core del nucleosoma al ncleo
formado por octmeros de histonas. Este empaquetamiento, da como resultado una fibra
de cromatina de aproximadamente 10nm de dimetro, pero an se puede empaquetar
ms en fibras de 30nm.

La condensacin de la cromatina vara segn el ciclo de la clula. Durante la interfase (la

clula no se reproduce) se encuentran dos formas del este compuesto:

Heterocromatina, aparece muy condensada y es transcripcionalmente

inactiva, en sitios compactos. A su vez, puede ser constitutiva (secuencias
de ADN que nunca se transcriben, ej., satlites) o facultativa (se transcribe
en otras clulas pero no en la observada). Esto explica el proceso de la
diferenciacin celular. Se localiza en la periferia del ncleo. Un ejemplo de la
condensacin es en la inactivacin del cromosoma X, presente dos veces en
las hembras y una vez en el hombre. Este cromosoma posee muchos genes
que no se presentan en el Y. Debido a que las clulas de las hembras pese a
tener doble cromosoma X tienen las mismas funciones que la del hombre,
se investig y descubri que un cromosoma X en las hembras se inactiva
transformndose en heterocromatina. Constituye el 10% total de la
cromatina en interfase. Abunda en la mitosis, dado que los cromosomas se
condensan para poder pasar a las clulas hijas, se cruzan los lazos de 30nm
para dar una estructura mucho ms condensada. Esta cromatina no se
puede usar en la sntesis de ARNm, por lo que no hay transcripcin en la
mitosis. En metafase, los cromosomas se agrupan en la placa ecuatorial y
estn muy compactados, por lo que se los puede ver con microscopio ptico

Eucromatina, aparece descondensada, lo que favorece la transcripcin,

esta difusa por todo el ncleo. Sin embargo, tambin presenta la forma de
fibras de 30 nm.

Centrmero.

El centrmero es la constriccin primaria del cromosoma, que se encarga de asegurar la

correcta distribucin de los cromosomas duplicados a las clulas hijas. En la mitosis, los
cromosomas se duplican y consisten en dos cromtidas hermanas idnticas, unidas por
el centrmero, compuesto por secuencias altamente repetidas. Cuando se inicia la
mitosis, los microtbulos del huso mittico se unen al centrmero, se separan las
cromtidas y se dirigen a polos opuestos del huso.

A su vez, se le unen mltiples protenas formando una estructura llamada cinetocoro, las
fibras del huso se adhieren a ste y las cromtidas se desplazan por las fibras hasta
llegar al polo opuesto, cumpliendo una funcin estructural. En humanos, se repite una
secuencia de ADN satlite , consiste en 172 pares de bases repetidas en tndem a lo
largo de millones de bases. Por su gran tamao, a los centrmeros de los mamferos se le
unen unos 30 o 40 microtbulos, mientras que en la levadura se une uno solo.

Telmeros.

Es la constriccin secundaria ubicada en el extremo de cada cromtida. Tienen

secuencias generales en los eucariotas, con secuencias repetidas en tndem y residuos
de G, ej.: AGGGGT. Estas secuencias se extienden por unas cuantas kilo bases.
Representan un papel importante en la replicacin de los extremos de las molculas de
ADN.

Para algunos investigadores los telmeros son el plstico que envuelve la parte final de
los cordones de zapatos, que evita que se deshilachen, hasta que con el uso, lentamente
se van gastando. Estos protegen a los extremos de los cromosomas humanos del
proceso de envejecimiento, esto se traduce en la clula como un acortamiento lento de
las secuencias con los aos. La telomerasa cobra funcin primordial en mantener este
mecanismo, pues esta enzima ha sido catalogada como bsica para la vida, esta se
encarga de mantener a la clula joven. Una actividad alta de la telomerasa hace que la
longitud de los telmeros se mantenga y se retrase el deterioro celular. Los
descubridores de estas molculas han sido galardonados con el Nobel de Medicina 2009.

Correlacin estructura-funcin.

La estructura de la cromatina determina la expresin gnica. Incluso, los activadores y

represores de la actividad gentica regulan la transcripcin en eucariotas induciendo
cambios en la estructura de la cromatina. Los genes transcritos de forma activa se
encuentran en segmentos de cromatina descondensada (10nm). Pero no es suficiente un
gen en cromatina descondensada para que haya transcripcin, dado que el fuerte
enrollamiento alrededor del core es un obstculo, generando una inhibicin que se
supera por la acetilacin de las colas terminales de las histonas y por la unin de dos
protenas no histnicas (HMG-14 y HMG-17).

Por un lado, la acetilacin neutraliza la carga de la cola que interacciona con el ADN,
por lo que se reduce la fuerza del enrollamiento, el ADN se libera y se puede expresar. La
acetilacin se produce en residuos cargados positivamente, como lisina. Se han
estudiado muchos activadores transcripcionales y se lleg a que su funcin era la de
acetilar las histonas.

Por el otro, las protenas no histnicas HMG 14 y 17 (High Mobility Group) separan la
H1 del core para mantener una parte de la cromatina descondensada.
Por ltimo, la metilacin del ADN tambin sirve para controlar la transcripcin. Los
residuos de citosina se pueden metilar en el C5, se activa una protena llamada MeCp2 y
se inhibe la transcripcin. Su funcin en profundidad no se conoce, pero se cree que
consiste en un mecanismo importante de regulacin llamado imprinting, que regulan la
expresin.

Ciclo celular.

El ciclo de la divisin de la mayora de las clulas consiste en cuatros procesos:

crecimiento, replicacin del ADN, distribucin de los cromosomas duplicados a las clulas
hijas y divisin celular. Este ciclo, en eucariotas se regula a travs de las protenas
quinasas y en los eucariotas superiores, tambin se da por factores de crecimiento que
controlan la proliferacin celular. La progresin a cada etapa del ciclo se controla
mediante un sistema regulador conservado, que adecua el ciclo a las necesidades
momentneas de la clula.

Un ciclo eucariota tipo dura 24 horas (clulas humanas en cultivo). Visto al microscopio,
el ciclo se divide en dos etapas: Mitosis e interfase. La mitosis es la divisin del ncleo,
separacin de los cromosomas y divisin celular (citocinesis). Esta dura un 5% del ciclo,
el resto es ocupado por la interfase. El ADN se duplica solo en la interfase, en la fase S
(sntesis). Esto, origina dos etapas vacas (gap) entre la interfase y la mitosis, que se las
llama fase G. La fase G1 consiste en una clula metablicamente activa y en
crecimiento. La fase G2 consiste en una fase de continuo crecimiento y sntesis de
protenas, preparndose para la divisin.

Las levaduras en gemacin atraviesan las cuatro fases en 90 minutos, en clulas

embrionarias se produce un ciclo en el que solo ocurre la divisin y la fase S, con una
duracin de 30 minutos (no hay crecimiento). En los animales adultos, algunas clulas
cesan completamente su divisin (neuronas) y muchas otras se dividen ocasionalmente
(fibroblastos de la piel) en respuesta a una herida. Estas clulas salen de G1 para entrar
en G0, en el que permanecen metablicamente activas pero no proliferan a no ser que
haya necesidad.

La progresin de las clulas a travs del ciclo esta estrictamente regulado por seales
internas o externas (hormonas). Existen puntos de coordinacin, ejemplo, el punto
START se encuentra en la G1 y regula el pasaje a la S. Una vez que las clulas pasan por
el START, siguen el ciclo. Pero si no hay disponibilidad de nutrientes, la clula para su
ciclo en START y entran en un estado de reposo G0. Hay otros puntos de control que
aseguran que la clula pase de fase en fase a medida que cumpla con determinados
requisitos. Una clula en G1 no puede pasar a la mitosis porque no tendra duplicado su
ADN. Si el ADN no est replicado o est lesionado, detiene el ciclo celular para que sea
duplicado o reparado respectivamente. En mamferos, la detencin en estos puntos de
control esta mediada por la accin de una protena conocida como p53, la cual proviene
de un gen daado en canceres, la p53 pierde funcin y las clulas se replican sin
importar de la mutacin gentica. Otro punto importante est en la fase S, para
conseguir que el genoma se replique una sola vez y se produzca la divisin celular. Hay
mecanismos como las protenas MCM, que impiden que la clula en G2 vuelva a
sintetizar ADN.

Mitosis

Es la etapa del ciclo celular en el cual se produce la divisin de las cromtidas

hermanas generando dos clulas hijas con un contenido cromosmico idntico a la
clula parental. El ncleo se disgrega y se reorganiza luego de cada divisin. Pasemos a
describir las fases de este proceso:

Profase. Es la primera fase de la mitosis, los cromosomas (4c-2n) se condensan, no se

pueden transcribir y cesa el proceso de transcripcin. Esta condensacin es ideal para
que los cromosomas se desplacen por el huso mittico sin enredarse, se encuentran
formando bucles de 100 kb unidas por un andamio (scaffold) de protenas. Cada
cromosoma se compone de dos cromtidas o molcula de ADN unidad en una por el
centrmero (constriccin primaria constituida por secuencias altamente repetidas en
tndem), que a su vez se une a unas protenas que forman el cinetocoro. Los
centrosomas o centriolos se duplican en la interfase, migran a lados opuestos del
ncleo y forman el huso mittico. En la mayora de las clulas, la disgregacin de la
envuelta nuclear marca el fin de la profase.

Metafase. Los cromosomas se empiezan a mover a merced de los husos mitticos y en

esta fase se alinean en el centro o placa ecuatorial. Los movimientos consisten en la
adhesin de los husos al cinetocoro. En esta fase dado que estn condensados y
centrados, se pueden ver los cromosomas al microscopio ptico.

Anafase. Es la fase mittica ms corta, se distribuyen las cromtidas hermanas a cada

extremo del ncleo, a travs de los husos mitticos que se unen al cinetocoro y se
mueven hacia los centriolos.

Telofase. En la ltima fase de la mitosis se forman dos nuevos ncleos alrededor de

cada par de cromosomas separados en la divisin, reorganizndose la envuelta nuclear.
La membrana nuclear se forma por un conjunto de vesculas y protenas, que se unen
para formar una membrana. El ncleo resultante se puede expandir importando
protenas desde el citoplasma, y reaparecen los nuclolos a medidas que la clula
necesite transcribir ARN. En esta fase ocurre la citocinesis, en la que un anillo de
filamentos de actina y miosina II, perpendicular al huso mittico, se contrae y ayuda a
que se estrangulen las clulas, dividindolas en dos.

Meiosis

Todas las clulas somticas se dividen por mitosis, pero los gametos se dividen por
meiosis, un tipo de divisin celular que genera clulas hijas haploides y con material
gentico recombinado. Este proceso se realiza tras dos rondas de divisin consecutivas,
primero sucede la interfase (con duplicacin de ADN), luego la meiosis I y finalmente la
meiosis II. La primera fase de la meiosis difiere de la mitosis en que en la meiosis hay
recombinacin de los cromosomas (profase) y en el anafase se separan los cromosomas
(no as las cromtidas). Consideremos un paso a paso:

Profase I. En la primera profase, la clula tiene 46 cromosomas (2n) y cada uno

duplicado (4c). En esta etapa ocurre el proceso de crossing over, los cromtidas
homologas (unidas por los quiasmas) se recombinan y se generan dos cromosomas
diferentes a los parentales. Esta etapa se divide a su vez en 5 subetapas:

Leptoteno. Los cromosomas aparecen como filamentos largos y con

estructura de cuentas.

Cigoteno. Los cromosomas homlogos se aparean en lo que se llama

sinapsis, en general se da en dos zonas de los cromosomas homlogos.

Paquiteno. Las dos cromtidas hermanas de dos cromosomas

homlogos se juntan y forman una ttrada o bivalente, grupo de cuatro
cromtidas unidad por un complejo proteicos. Por ltimo, se produce el
crossing over.

Diploteno. Los cromosomas homlogos se repelan y quedan unidos los

trozos recombinantes por los quiasmas

Diacinesis. Contina la condensacin de la cromatina hasta que los

cromosomas aparecen gruesos.

Metafase I. Los cromosomas alcanzan su estado condensado y se alinean en la placa

ecuatorial.

Anafase I. Ac ocurre la segunda diferencia con la mitosis, en vez de separarse

cromtidas hermanas y originar dos clulas 2n, se separan los cromosomas y la clula
terminar siendo n.

Telofase I. Cuando cada cromosoma alcanza el polo, se forma la membrana nuclear y

dos clulas hijas haploides (n) con el ADN multiplicado (2c).

Segunda divisin meitica. Cada clula 2c y n entra en la profase II, donde se centran
en la placa ecuatorial en la metafase II, los microtbulos del huso mittico se unen al
cinetocoro de cada cromosoma, se separan las cromtidas en polos opuestos y terminan
dos clulas con la mitad de los cromosomas (n) y cantidad de ADN c.

Transcripcin del ADN.

El ADN sirve para expresar informacin dentro de la clula mediante la sntesis de ARNs
y protenas, expresando determinados genes del genoma. El primer paso en la
regulacin de un gen se da en la transcripcin del ADN a ARN, transformando el ARN
para transformar el transcripto funcional. En este proceso se transcribe continuamente
una sola hebra de ADN, formndose un dplex apareado ADN-ARN.

Transcripcin en procariotas. La enzima principal en la sntesis de ARN es la ARN

polimerasa, cataliza la polimerizacin de Novo (no necesita cebador) del ARN en
direccin 5-3. La ARN polimerasa de E.Coli es una enzima multimrica con subunidades
, , y . La subunidad se mantiene unida al resto de una forma relativamente dbil,
por lo que funciona reconociendo secuencias promotoras (seales de inicio de
transcripcin que promueven el proceso). En estas secuencias promotoras, existen
secuencias que estn relativamente conservadas en las posiciones -35 y -10 del sitio de
iniciacin de la transcripcin (+1).

Transcripcin en eucariotas. Este proceso es ms complejo en eucariotas dado que

existe ms de una ARN polimerasa y que sta enzima necesita de otras protenas para
actuar. Las clulas eucariotas tienen tres tipos de ARN polimerasa: la ARN polimerasa I
transcribe para dar ARNr, la ARN polimerasa II transcribe para dar ARNm y la ARN
polimerasa III produce ARNt. Se trata de una enzima compuesta por unas 8 a 14
subunidades, de las cuales 5 son comunes en todas las enzimas. La polimerasa ms
estudiada es la II, dado que transcribe para ARNm. En el primer estudio se descubri que
no se puede realizar la sntesis in vitro de ARN a partir de ADN y ARN polimerasa, dado
que la enzima necesita de protenas adicionales conocidos como factores de
transcripcin, implicados en la transcripcin de todos los promotores de la ARN Pol II, por
eso se escriben como TFII. El TFIID se une a la secuencia consenso TATAA, luego los TFIIE
y TFIIH actan como helicasas en el sitio de transcripcin y fosforilan a la ARN
polimerasa para que se mueva alrededor del ADN y as transcribirlo.

Las tres polimerasas requieren la misma protena de unin a la secuencia TATAA. La ARN
polimerasa I transcribe exclusivamente al ARNr, presente en repeticiones en tndem, con
un promotor de unas 150 pb reconocidas por factores de transcripcin que se unen de
forma cooperativa. La ARN polimerasa III transcribe el ARNt y algunos ARNs implicados
en el splicing y transporte de protenas. Estos genes tienen los promotores dentro de la
secuencia codificante.

Regulacin de la transcripcin. La forma primaria para el control de genes eucariotas

se da al inicio de la transcripcin, mediante protenas que se unen a secuencias
especficas y modulan la actividad de la ARN polimerasa. Muchos genes eucariotas se
controlan por secuencias localizadas a unas varias bases del sitio de inicio del promotor,
se los conoce como estimuladores o enhancers. Si bien estn a muchas bases, no
olvidemos que cada nucleosoma est separado por unas 150 pb, por lo que no estn tan
lejos en la clula. Estos enhancers actan ligndose a factores transcripcionales que
regulan a la ARN polimerasa, formando un bucle de ADN que enfrenta la regin del
enhancer con la que contiene a la polimerasa.

Tambin existen activadores de la transcripcin, protenas que se unen a las secuencias

reguladoras del ADN y estimulan la transcripcin. Constan de dos dominios, uno que se
une al ADN y otro que se une a los factores de transcripcin estimulndolos a que
acten. Cada tejido tiene sus activadores de la transcripcin, en diferentes formas. Por
ltimo, tenemos a los represores, que se unen a una secuencia e inhiben la transcripcin.
En algunos casos simplemente interfieren con la polimerasa y no le permiten avanzar por
una cuestin fsica, otros compiten con los activadores por unirse al complejo
transcripcional. La inhibicin de la transcripcin es otra herramienta que tiene la clula
para la especificidad celular.

Maduracin y renovacin del ARN.

La mayor parte del transcripto ha de ser modificado para convertirse en su forma

funcional. La excepcin es el ARNm bacterial que se utilizan mientras estn siendo
transcriptos. Los procesos de maduracin dependen segn el ARN en cuestin.

ARN ribosmico. El 80% del ARN en la clula es de este tipo, luego de que el
transcripto se corta por enzimas especficas, se metilan las secuencias codificantes del
gen, desconocindose la funcin de esta reaccin.
ARN transferencia. Una ribozima (enzima que tiene ARN en el sitio activo) se encarga
de cortar para eliminar los intrones, se le agrega la secuencia CCA en el extremo 3 y se
modifican las bases. Estos hechos son muy importantes: primero, la secuencia CCA se
mantiene en todos los ARNt y sirven para la unin de AA en la sntesis proteica. Otro
aspecto de la maduracin de este ARN es que se modifican las bases (el 10%),
produciendo nucletidos modificados.

ARN mensajero. El ARNm es el que requiere ms modificaciones para alcanzar el

estado de madurez, primero se modifican los extremos de la molcula, luego se cortan
los intrones y por ltimo se puede modificar el contenido de los exones.

El primer proceso sucede en el extremo 5 y se conoce como casquete o capping,

producido por la unin de un GTP por el extremo 5 de la ribosa al 5 del nucletido del
ARNm. As, se bloquea este extremo para futuras reacciones. Este proceso sucede a en
paralelo a la transcripcin, una vez que las primeras bases agregadas se separan de la
cadena de ADN, se va formando la caperuza.

La otra modificacin del extremo es la poliadenilacin del extremo 3, agregando una

cola poli-A. Todo comienza cuando una protena de unin al ADN reconoce una seal en
la secuencia codificante (AAUAAA) y as al terminar agrega una cola poli-A, proveniente
de ATP. Estas colas regulan la traduccin y estabilidad del ARNm.

Otro proceso que ocurre en la maduracin del ARNm es el corte y empalme o splicing,
que consiste en la eliminacin de intrones (secuencias de ADN no codificante,
componen el 90% de las secuencias). Los pre-ARNm tienen secuencias al finalizar y al
comenzar cada intrn (pegadas a los exones) y en un punto medio del intrn conocido
como punto de ramificacin. Los pre-ARNm cortan la secuencia cuando comienza el
primer exn, este extremo se une con el punto de ramificacin formando un lazo y por
ltimo se corta el extremo donde se termina el intrn, eliminndose y unindose los
exones. Este proceso sucede tantas veces como intrones existan. Este proceso ocurre en
unos complejos denominados espliceosomas, compuestos de protenas y ARNsn (de
pequeos tamaos), luego salen al citoplasma y llegan al ribosoma donde se traducen. Si
alguno de estos procesos fallan, el ARNm queda en el ncleo trancado. Los ARNsn son
los encargados de reconocer las secuencias consenso y cortar ah.

Existe lo que se llama corte y empalme alternativo, un proceso por el que se puede
generar transcriptos alternativos cortando en diferentes lugares de la secuencia, por
ejemplo, omitindose un exn y eliminarlo tal si fuese un intrn, resultando una
secuencia ms pequea que codificar para una protena distinta. Consiste en un
proceso que regula la expresin gnica con especificidad tisular y del desarrollo.

Bases Genticas del desarrollo.

Uno de los primeros tpicos a investigar de los genetistas fue para conocer si el ncleo,
citoplasma o el gameto entero era importante para la fecundacin. As, se llevaron varios
estudios que demostraron que se puede fertilizar un ovulo con el ncleo de un
espermatozoide, denominndose a este proceso transferencia nuclear somtica o
clonacin. Sin embargo, si a las clulas se le introduca el ncleo de una clula
determinada y diferenciada, se iba perdiendo la capacidad de desarrollo del cigoto. Esto
sugiri que los ncleos de algunas clulas diferenciadas pueden seguir siendo
totipotentes y que los ncleos de clulas desarrolladas tienen aun potencial de
desarrollo, pero ms limitada.

La primera clonacin de mamferos fue en 1997, donde Ian Wilmut clon una oveja a
partir de un ncleo de una clula somtica de esta especie (glndula mamaria). La unin
del oocito con la clula de glndula mamaria se realizo por medio de un pulso de
corriente, que desestabiliz las membranas nucleares y permiti la fusin celular. Los
embriones resultantes fueron transferidos al tero de una oveja embarazada, y de los
434 oocitos utilizados solo uno sobrevivi: Dolly. Esto sugiere que las clulas somticas
pueden ser totipotentes, aun en etapas adultas. La clonacin tambin se dio en vacas,
ratones, gatos, etc; pero muchos de los clones murieron a temprana edad por desarrollar
enfermedades debilitantes.

Otro asunto que desvel a los genetistas fue el de la expresin gentica diferencial, para
conocer porqu haba ms de 200 tipos celulares si todas tenan el mismo genoma. En
1960, se lleg a la conclusin que los genes no utilizados en las clulas son silenciados y
que nicamente un pequeo porcentaje del genoma se expresa en cada clula, siendo lo
que le da la especificidad (los genes no se crean ni se destruyen, se activan o silencian).

Tcnicas de la gentica contempornea.

La tecnologa y los nerds han llegado a la gentica, desarrollando varias tcnicas para
localizar ARN en una clula, determinar la funcin de los genes y/o alterar protenas
especificas. Estas se resumen a continuacin:

1. Tcnicas de localizacin den ARN o protenas.

a. Northern Blots y Microarrays. La tcnica de northern blot consiste en

extraer RNA de una clula, lo coloca en un gel de agarosa y aplica
corriente, haciendo una corrida electrofortica donde el segmento mas
pequeo migrar ms al polo positivo (ARN es negativo por la presencia
de fosfatos). Luego, se agrega una sonda con una secuencia especfica a
cada uno de los fragmentos separados. Esta sonda, produce radiacin
cuando se une a la secuencia buscada y esto puede ser detectado por
autorradiografia, demostrando la presencia/ausencia de un gen en
particular. La tcnica de microarrays combinan el northern blot y la PCR,
permitiendo analizar miles de genes al mismo tiempo.

b. Reaccin en Cadena de la Polimerasa PCR. Esta tcnica consiste en clonar

y amplificar genes en vitro a partir de unos pocos genes iniciales, gracias
a la accin de un microrganismo. Se aplica temperatura para
desnaturalizar el ADN (separar las hebras) y se acerca la ADN polimerasa
de una bacteria como Thermus Aquaticus que resiste temperatura. As,
obtendremos mltiples copias de un gen inicial.

c. Inmunodeteccin. Consiste en la deteccin de protenas principalmente,

luego del agregado de anticuerpos radiactivos, que reaccionan cuando se
 asocian a una protena especfica y esto se puede observar por
autorradiografa.

d. Hibridacin in situ. Esta tcnica nos permite determinar la presencia de

RNAm en distintas clulas, inyectando sondas en la misma. As, podemos
determinar si un gen es transcripto o no en determinado tipo celular, lo
que se observa cuando las clulas expresan material radiactivo.

1. Tcnicas de alteracin de la expresin gentica.

i.Transgnesis. Esta tcnica sirve para conocer la funcin de un gen.

Consiste en el agregado de un gen al genoma de un organismo y
observar el fenotipo resultante, observando directamente que cambios se
producen ante el agregado de un gen. En el laboratorio, se inyecta
tambin un gen que provoca resistencia a un antibitico, luego se baa la
solucin con dicho antibitico y solo sobreviven las clulas que contienen
el gen a estudiar. As, nos aseguramos que todas las clulas estudiadas
presentan la expresin del gen en cuestin.

ii.Knocks out o silenciamiento. Consiste en bloquear determinados genes o

crear organismos sin determinado gen, luego se observa el genotipo y se
deduce cual era la funcin del gen que se ha bloqueado

iii.Genes reporteros. Un gen reportero sirve para ver en que sector se

expresa un RNAm, inyectando marcadores que se unen a las protenas,
como sucede en el caso de la protena verde y la beta-galactosidasa.

1. Tcnicas de alteracin de protenas.

a) Bloqueo por ARN.

b) Interferencia.
 EXPRESION GENETICA DIFERENCIAL.

Se denomina expresin gentica diferencial a la capacidad de las clulas, que

conteniendo el mismo genoma, pueden expresar distintos genes para alcanzar una
determinacin y especificidad. Cada humano tiene unos genes en el ncleo, de los
cuales cada clula usa un pequeo grupo. Recordemos que los genes eucariticos se
encuentran asociados a las histonas, en una sustancia denominada cromatina. La unidad
bsica de este sistema es el nucleosoma, que comprende un octmero de histonas
envuelto por dos hebras de cromatina, compuestas por unos 140 pares de bases. La
histona H1 es quien proporciona la estabilidad a este complejo, encargada de compactar
el material gentico e impedir la transcripcin.

En las hebras de ADN encontramos secuencias que codifican protenas (exones) y

secuencias que no lo hacen (intrones), las cuales no se transcriben o se transcriben y se
escinden luego. Cada gen, contiene en su estructura distintos elementos:

Promotor. Es la secuencia donde se une la RNA pol para comenzar la

transcripcin. Son reconocidos por factores de transcripcin TGF que
posibilitan la unin de la ARN pol a la hebra de ADN. La capacidad de los
factores de transcripcin basales para unirse a la RNA pol es regulada por
protenas denominadas factores asociados a los factores de transcripcin.

Sitio de comienzo de la transcripcin. Es una secuencia especfica en el

extremo 5 del RNA donde comienza a transcribirse el gen.

Sitio de comienzo de la traduccin. Es una secuencia o codn ATG del

RNAm que indica la seal desde donde se debe comenzar a traducir el gen
a protenas. Suele ubicarse a unas 50 pares de bases del sitio de comienzo.
La secuencia que se sita entre el sitio de comienzo de la transcripcin y el
de la traduccin, no codifica AAs durante la traduccin.

Primer exn, seguido por un intrn y as sucesivamente.

Codn de terminacin de la traduccin. Es el codn TAA que indica el sitio

donde debe culminar la traduccin de ese RNAm a protenas, reconocido
por el ARNr.

Regin 3 UTR no traducible. Es la regin final del gen que no es

transcripta, pero tiene importancia porque incluye la secuencia AATAAA
reconocida para poner la cola poli-A, encargada de estabilizar al transcripto.

Potenciador o enhancer. Se trata de una secuencia de ADN que activa la

utilizacin de un promotor, controlando la eficiencia y el grado de
transcripcin. Pueden estar ene l mismo cromosoma pero a grandes
distancias. La forma de accin consiste en remodelar la cromatina para
exponer el promotor o facilitar la unin de la RNA pol al promotor,
reclutando factores de transcripcin y protenas asociadas. La mayora de
los genes requieren potenciadores y cada gen puede tener distintos
potenciadores en cada tipo celular.
La expresin gentica puede ser regulada a varios niveles:

1. Nivel transcripcional.

a. Promotores, factores de transcripcin y represores. Estos factores

consisten en protenas que tienen como resultado variar el
patrn de expresin de determinado gen, modificando la
afinidad de unin de la ARN pol al promotor.

b. Metilacin del ADN. La metilacin de las citosinas del promotor se

relacionan con la represin de un determinado gen, por
disminucin de la afinidad del promotor con la ARN pol.

c. Modificacin de la eucromatina. Al ADN cargado negativamente es

fuertemente atrado por las histonas cargadas positivamente y
se obtiene una cromatina compactada. La acetilacin de la
histona le quita esa carga positiva, disminuye la atraccin y el
ADN se separa de la cromatina, posibilitando la unin de la
ARNpol. En definitiva, la acetilacin de las histonas aumentan la
transcripcin de los genes relacionados a ellas por disminucin
de la compactacin de la cromatina. Existen represores de la
transcripcin que reclutan desacetilasas, retornando la carga
positiva de la histona y aumentando la compactacin de la
cromatina en este sector.

1. Nivel post-transcripcional. Luego de la transcripcin, el transcripto puede ser

modificado antes de enviar el RNAm al citoplasma para comenzar su traduccin a
protenas. El producto inmediato de la transcripcin es el ARNn (nuclear), que se
modifica y se convierte en ARNm (mas corto que el anterior). El ARNn tiene
diversos intrones que son escindidos de forma diferencial, donde un ARNn puede
originar diversos ARNm y diversas protenas.

i.Splicing alternativo. Es un medio para producir varias protenas a

partir de un mismo gen, mediante la escisin diferencial de los
exones-intrones de un gen. Es decisivo en este proceso el
reconocimiento de lo que es un exn y lo que es un intrn, dado
que lo que en una clula es un intrn en otra puede ser un exn
y codificar protenas. Este proceso es mediado por complejos
espliceosomas, constituidos por los RNA nucleares pequeos
RNAsn y protenas denominadas factores de empale, que varan
la capacidad para reconocer los sitios de comienzo y final de un
exn. Se ha visto ejemplos donde el splicing alternativo permite
crear mas de 100 protenas a partir de un mismo RNAm (e.

ii.Silenciamiento. Una vez que se crea el RNAm, ste debe migrar al

citosol por poros de la membrana nuclear y esto requiere la
presencia de transportadores. La no produccin de los
transportadores, hace que el transcripto no llegue al citosol y no
sea traducido a protenas.

1. Nivel traduccional.
 i.Estabilidad del RNAm. Una vez que el RNAm llega al citoplasma, no hay
garanta que sea traducido, ya que puede ser degradado por
exonucleasas o por su corta vida media. Cuanto mas persiste un
transcripto en el citosol, mayor ser la probabilidad de que sea traducido
a protenas. Para esto, se agrega un casquete de glcidos en su extremo
5 y una cola poli-A en su extremo 3, lo que aumenta la estabilidad del
mismo. En algunos ejemplos como la casena, los RNAm son estabilizados
selectivamente en momentos especficos. El RNAm de la casena tiene
una vida media de 1.1 hr normalmente, pero en la glndula mamaria
activa tiene una vida media de 28.5 hr, dado que se requiere esta
protena constantemente para la lactognesis.

1. Modificacin Post-traduccional. Sin embargo, las protenas traducidas hasta este

momento estn en su forma inactiva y deben ser modificadas para alcanzar su
forma activa, por lo que regulando esta modificacin tenemos otro punto de
regulacin de la expresin gentica diferencial. Algunas protenas recin
sintetizadas pueden ser inactivadas por bloqueo de las reacciones de
modificacin postraduccional.

MECANISMOS CELULARES DEL DESARROLLO.

En esta seccin se hablar de cmo influye el medio exterior en el desarrollo

embrionario, cmo el embrin llega a su diferenciacin y cmo se reordenan las clulas
en tejidos-rganos.

INTERACCION CELULA MEDIO EXTRACELULAR.

Las clulas de un embrin en desarrollo no estn aisladas de su ambiente, sino que

ciertas seales que provienen del medio extracelular son capaces de influir en el
desarrollo embrionario. A su vez, modificando las condiciones del medio tambin se
puede alterar parmetros del desarrollo. Un ejemplo de esto se vio en caimanes, donde
el sexo del embrin era determinado no solo por los cromosomas, sino por la
temperatura a la que se los expusiera. El ambiente de una clula embrionaria consiste
en los tejidos que lo rodean en el embrin.

TEORIAS DE LA DIFERENCIACION.

El desarrollo de un tipo celular especializado se denomina diferenciacin, consiste en

cambios fsico-qumicos y funcionales que estn precedidos por un proceso de
compromiso de la clula a cierto destino. Este compromiso se lo divide primero en
especificacin y determinacin. La especificacin es el primer estado donde la clula
est en camino a la diferenciacin y si la ponemos en una caja de Petri se especifica,
pero este proceso puede ser revertido. La determinacin es cuando ya est en camino a
la diferenciacin y ste estado no puede ser revertido. En suma, cuando la clula se
compromete a diferenciarse, primero se especifica el destino a seguir y luego se
determina.

Un descubrimiento importante al que se lleg en procura de comprender estos procesos

es el de las clulas madre. Las clulas madre son clulas con capacidad de dividirse
para originar ms clulas madres y clulas un tanto mas especializadas. Las clulas
madres pluripotentes (blastmeras) son capaces de generar un organismo entero,
originando ms clulas madres pluripotentes y clulas madres comprometidas. Las
clulas madres comprometidas pueden dar origen a ms clulas madres comprometidas
y a clulas ms especializadas de una poblacin especfica. Por ejemplo, el
hemangioblasto es una cmc que puede originar los tipos celulares de vasos sanguneos.
Se denominan clulas progenitoras o precursoras al tipo celular originado en esta
divisin, con la caracterstica de que ya no crean otra clula progenitora similar. En su
lugar, se divide para formar uno o pocos tipos celulares relacionados. Un ejemplo es la
clula mieloide, que puede generar todos los tipos de clulas sanguneas. En suma, las
clulas madres son importantes para mantener poblaciones celulares que sobreviven
periodos prolongados y deben ser renovadas, como sangre, pelo, mucosa intestinal, etc.
Se han descrito tres tipos bsicos de compromiso: autnomo, condicional y sincitial.

Especificacin autnoma. Este tipo de compromiso sucede cuando las clulas se

diferencian en funcin de seales intrnsecas, por lo que si las quitamos del embrin y
las ponemos en una caja de Petri, se van a diferenciar en el mismo tipo del que hubiesen
formado parte en el embrin. As, se considera al embrin como un mosaico de baldosas
independientes donde cada una se diferencia a lo que est predeterminada, sin importar
las condiciones del medio. Este tipo de especificacin sucede en moluscos, anlidos y
tunicados.

Especificacin condicional. En este tipo de compromiso, la interaccin celula-celula y

clula-entorno es quien determina la especificacin. Cada tipo de clula tiene
originalmente la capacidad potencial de ser muchos tipos celulares, pero las acciones del
entorno restringen el destino, de modo que si una blastmera es quietada del embrin
temprano, las clulas restantes suplen esta perdida y recuperan las clulas perdidas. La
blastmera aislada puede dar origen a una gran variedad de tipos celulares,
dependiendo de cmo integre la informacin recibida. Esta especificacin es vista en
muchos vertebrados y es la base en el desarrollo de gemelos, donde las clulas de
segmentacin de un embrin se separan en dos grupos y cada uno de stos produce el
desarrollo completo de un individuo
A su vez, el destino de la clula puede ser determinado por el gradiente de
concentracin de distintas molculas en el citoplasma de las clulas. Tales molculas se
llaman morfgenos, una molecula soluble que puede cambiar el destino de la clula y se
presenta en gradientes de concentracin citoplasmtico. Una molcula se considera
como morfgeno cunado se demuestra que las clulas responden directamente a sta y
que la concentracin influye en la diferenciacin.

Especificacin sincitial. En este tipo de compromiso el destino de una clula est

determinado por la interaccin entre distintos sectores de la misma. En los embriones
tempranos de estos animales, principalmente insectos, la citocinesis o separacin de las
membranas es incompleta y tenemos una clula donde los ncleos originados quedan en
el mismo citoplasma, denominado sincitio. Este citoplasma no es uniforme en toda su
extensin, sino que hay distinta composicin molecular dependiendo del sector en
cuestin

REORGANIZACION CELULAR.

Un cuerpo es ms que una coleccin de distintos tipos celulares distribuidos al azar,

durante el desarrollo se requiere una correcta organizacin de las clulas en tejidos y
rganos para producir estructuras funcionales. Es decir, de nada sirve tener conos o
bastones en el epitelio intestinal, cmo tambin es intil tener clulas de Sertoli en la
corteza prefrontal.

Muchos estudios han apuntado a investigar que es lo que dirige la reorganizacin de las
clulas para formar rganos y tejidos. Muchos de stos apuntan al rol protagnico de la
superficie celular, quien expresa diferentes tipos de protenas que contribuyen a darle
identidad a la celular. En 1964, Malcolm Steinberg propuso la hiptesis de adhesin
diferencial, un modelo que explica la reorganizacin celular en funcin de la forma
termodinmicamente ms estable. Es decir, si tenemos clulas A-B, donde las uniones
AA son ms intensas que las AB o las BB, entonces las clulas A van a estar todas en el
centro (donde maximizan el nmero de uniones posibles) y las B van a estar en situacin
perifrica.

Las cadherinas parecen ser las molculas responsables de esta adhesin diferencial,
son molculas de adhesin calcio dependientes (como su nombre lo indica). Las
cadherinas tienen un dominio extracelular y uno citoslico unido al citoesqueleto de
actina, haciendo posible cierto grado de movimiento. Hay varios tipos de cadherinas: la
cadherina E la encontramos en tejidos epiteliales, la cadherina P en clulas trofoblsticas
y la cadherina N en SNC del desarrollo.

Estas molculas ensamblan clulas juntas para unirse al mismo tipo de cadherina de otra
clula. As, dependiendo de la afinidad que muestran los distintos tipos de cadherinas, se
va a producir la reorganizacin de clulas en tejidos. Steinberg experiment en juntar
dos grupos de clulas que expresaban diferente cantidad de cadherinas, las mezclaron y
obtuvo que las que expresaban ms cadherinas tenan ms cohesin, encontrndolas en
el centro.

Durante el desarrollo, las cadherina funcionan en consonancia a otros sistemas de

adhesin, como colgeno, glucoprotenas o enzimas de membrana.

INTERACCION CELULAR.

Las clulas son estructuras que interaccionan entre ellas y el medio que las rodea
mediante distintas vas. Uno de los casos mejor estudiados es la interaccin del epitelio
con las clulas mesenquimticas subyacentes (mesnquima clulas dispersas). En el
pollo, la epidermis le indica a la dermis que se condense y sta le indica a la epidermis
que forme estructuras especializadas como pelos, plumas, etc.

Los factores de sealizacin pueden ser parcrinos o yuxtcrinos, dependiendo de su

origen. La sealizacin parcrina es aquella donde las molculas sealizadoras provienen
de clulas vecinas, mientras que los eventos yuxtcrinos consisten en la unin directa de
ambas clulas por sus protenas de membrana. En el caso de la sealizacin parcrina,
las molculas difusibles se denominan factores parcrinos, entre los que destacamos el
factor de crecimiento fibroblstico FGF con funciones ene l desarrollo, angiognesis,
formacin del mesodermo y extensin del axn. A su vez, las protenas de la familia
Hedgehog (erizo) son factores parcrinos responsables de la formacin del tubo neural
en erizos, diferenciacin regional del tubo digestivo en pollos y otras funciones. Los
receptores de membrana involucrados en este tipo de sealizacin son comunes a los ya
conocidos, con un dominio extracelular de unin al ligando y uno citoslico que
generalmente tiene capacidad cinasa, que termina con una cascada de fosforilacin que
activa/reprime a un factor de transcripcin.

La muerte celular programada o apoptosis es una etapa normal del desarrollo que se
alcanza por vas de sealizacin de este estilo. En un ser humano adulto, mueren unas
1.011 clulas por da y son remplazadas por otras. Se calcula que en un ao, la masa de
clulas que perdemos por apoptosis equivale a la de nuestro peso corporal. Es necesaria
para varios procesos, recorta estructuras innecesarias (mamas masculinas), controla el
nmero de clulas en tejidos especficos y esculpe rganos complejos (retina, corazn).
Algunas clulas como los eritrocitos estn destinadas a la apoptosis, mantenindose
vivas siempre y cuando exista un factor de crecimiento como la eritropoyetina. Esta
molecula sintetizada en el rin, acta a travs de la va JAK-STAT, activando el factor de
transcripcin stat 5. Los ratones con mutaciones en el gen de la caspasa3 o caspasa9
mueren cerca del nacimiento debido a un masivo crecimiento en el SN, nacen con
membranas interdigitales y otras estructuras; lo que sugiere el rol de la caspasa en la
induccin de la apoptosis.

En cuanto a la sealizacin yuxtacrina, las protenas de las clulas inductoras

interactan con protenas receptoras situadas en la membrana de la clula adyacente de
forma directa, sin difusin. Estas seales tambin pueden ser transmitidas directamente
por va citoplasmtica a travs de uniones gap. Las protenas Delta, Jagged o Serrate se
encuentran en membranas celulares y activan a las clulas vecinas que contienen la
protena Notch. As, Notch sufre un cambio conformacional donde su dominio
citoplasmtico es escindido por una proteasa y viaja al ncleo, donde acta como un
factor de transcripcin. Estos receptores son importantes ene l SN de vertebrados y de
Drosophila, por ejemplo, informndole a la clula si convertirse en neurona o clula glial.

La matriz extracelular tambin tiene un papel importante en el proceso de sealizacin.

En primer lugar, proporcionan un soporte que le permiten a las clulas realizar sus
funciones, sin modificar el contenido gentico. Est compuesta por colgeno,
proteoglucanos y glucoprotenas especializada como fibronectina y laminina. Estas
glucoprotenas posibilitan la organizacin de la matriz y de las clulas, adhieren a las
clulas y las estabilizan. Tambin, intervienen en los procesos de migracin celular,
proporcionando una va solida por donde las clulas pueden migrar. En un estudio le
inyectaron anticuerpos anti-fibronectina al pollo y result un embrin inviable con dos
corazones separados, dado que sus clulas no pudieron migrar y unirse. La capacidad
de una clula de unirse a estas glucoprotenas est mediada por las integrinas, donde la
interaccin glucoprotena-integrina puede activar la va RAS y traducirse en seales
intracelulares. Por ultimo, destacamos que estas vas funcionan todas en conjunto, lo
que le da la complejidad funcional a una clula.
 EPIGENTICA E IMPRINTING.

La idea que tenamos hace pocos aos de que somos lo que est escrito en nuestros
genes est cambiando a pasos agigantados La epigentica (del griego epi, en o sobre,
y -gentica) hace referencia a la regulacin heredable de la expresin gnica sin cambio
en la secuencia de nucletidos. El trmino fue acuado por C. H. Waddington en 1953
para referirse al estudio de las interacciones entre genes y ambiente que se producen en
los organismos. Una de las fuentes de mayores modificaciones de los genes es por el
factor ambiental y puede afectar a uno o varios genes con mltiples funciones. Por medio
de la regulacin epigentica se puede observar como es la adaptacin al medio
ambiente dada por la plasticidad del genoma el cual tiene como resultado la formacin
de distintos fenotipos dependientes del medio ambiente al que sea expuesto el
organismo. Estas modificaciones que se dan presentan un alto grado de estabilidad y al
ser heredables esto permite que se puedan mantener en un linaje celular por muchas
generaciones.

Un factor clave en este campo es la heredabilidad de la marcacin epigentica de una

generacin a otra lo cual permite aumentar el xito de las terapias gnicas. La
regulacin epigentica se hace por medios de cambios estructurales, como lo es la
adicin de metilos, pueden llevar a que se den alteraciones en los lugares de accin de
enzimas y como resultado se puede tener prdidas en la estabilidad de dichas regiones.
Estas regiones por lo tanto se vuelven ms sensibles a que en ellas se den variaciones
cromosmicas o que se llegue a transformar la clula por perdidas en el mecanismo de
control de crecimiento o por activacin de la apoptosis. Todo esto puede resultar en
cambios en el fenotipo y una alta posibilidad del desarrollo de enfermedades. El
conocimiento de estos fenmenos ha permitido que se den avances en terapias gnicas.
Se ha estado trabajando en revertir el silenciamiento de genes.

La impronta gentica o "imprinting" es un fenmeno gentico por el que ciertos

genes son expresados de un modo especfico que depende del sexo del progenitor y se
ha establecido su importancia en la generacin de enfermedades. Durante la
gametognesis se inicia la impronta genmica y por lo tanto esta es heredada durante la
fusin de los gametos. Durante la formacin del cigoto la impronta es reprogramada en
el nuevo individuo. El ejemplo ms claro de este mecanismo se da en la regulacin de la
dosis compensatoria del cromosoma X. Esta reprogramacin juega un papel importante
en la expresin de los genes de tejidos especficos que si llegan a ser modificados
pueden tener consecuencias en el desarrollo adecuado del organismo.

En los organismos diploides las clulas somticas tienen dos copias del genoma. Por lo
tanto, cada gen autosmico est representado por dos copias o alelos, cada una de ellas
heredada de un progenitor en la fertilizacin. En la gran mayora de los genes de los
autosomas, la expresin de ambos alelos sucede simultneamente. Sin embargo, una
pequea proporcin de los genes (<1%) est "impresa", es decir, que su expresin
depende de slo uno de los alelos. La expresin del alelo depende, por tanto, de su
origen parental. Un ejemplo de enfermedades genticas humanas relacionadas con la
impronta son el sndrome de Angelman y el sndrome de Prader-Willi, ambos ligados a la
misma regin del cromosoma 15.

Un gen impreso, es decir, cuando tiene uno de los dos alelos silenciado, es
funcionalmente haploide, lo que elimina la proteccin que confiere ser diploide contra
mutaciones recesivas, adems, su expresin puede ser desregulada epigenticamente.
Por tanto, estos genes representan locus susceptibles de ser alterados funcionalmente
tanto gentica como epigenticamente.

DESARROLLO DE DROSOPHILA MELANOGASTER.

Drosophila Melanogaster es la mosca de la fruta, un modelo ampliamente estudiado en

gentica por su fcil obtencin, veloz desarrollo y por no presentar conflictos ticos en su
manipulacin. En el desarrollo de esta mosca, existe una especificacin sincitial donde la
citocinesis no ocurre completamente y tras 8 divisiones mitticas (8 min c/u) obtenemos
unos 256 ncleos perifricos dentro de las mismas membranas. Esto hace que el
embrin se denomine blastodermo sincitial. La separacin completa ocurre a las 13
semanas, donde la membrana se pliega hacia dentro de los ncleos y se obtiene el
llamado blastodermo celular a las 4 horas luego de la fecundacin. En este modelo se ha
investigado como puede el embrin determinar la polaridad de sus partes, es decir,
como hace para saber que sector de s mismo va a originar la cabeza, cul la cola, cual
va a originar estructuras ventrales o dorsales. Drosophila como todo insecto tiene una
cabeza, tres segmentos que forman el trax y ocho que forman el abdomen, donde los
ejes anteroposterior y dorsoventral de ste organismo estn determinados desde el
estadio de blastodermo sincitial.

La polaridad de este organismo es determinado por morfgenos maternos sintetizados

en el ovario, cuyos ARNm difunden hacia el oocito y se traducen en distintos sectores de
ste. Estos mensajeros codifican protenas reguladoras de la transcripcin y de la
traduccin de los genes del cigoto. La polaridad anterior es determinada por Bicoid y
Hunchback, mientras que la polaridad posterior es por Nanos y Caudal. Se le llama
genes gap a los genes del cigoto que son regulados por estas protenas maternas, cuyo
nombre se obtuvo de ver que ciertas mutaciones en stos generan intervalos o huecos
en el patrn de segmentacin. Destacamos el hecho de que estos morfgenos provienen
del ovario (clulas nodrizas maternas), por lo que si inducimos un defecto en el gen
bicoid del embrin no va a pasar nada en el desarrollo (porque bicoid proviene de la
madre), pero ste insecto no va a poder reproducirse cuando sea grande. Diferentes
concentraciones de las protenas del gen gap causan la transcripcin de los genes pair-
rule (regla de los pares) que segmentan al embrin, activando los genes de polaridad de
segmento. A su vez, los genes gap, pair-rule y de polaridad de segmento interaccionan
con los genes hometicos para determinar el desarrollo de cada segmento.

POLARIDAD ANTERIO-POSTERIOR.

La polaridad de este sector es causada por los gradientes morfognicos de bicoid-

hunchback (polo anterior) y nanos-caudal (polo posterior). Los RNAm de bicoid (asociado
a dinena extremo negativo) estn localizados en la porcin anterior del oocito anclados
a los microtbulos de la regin, mientras que nanos (asociado a quinesina extremo
positivo) est unida igual pero al polo posterior. El lugar a donde se anclan estos
morfgenos depende de la protena motora a la que se asocie, si dinena o quinesina, ya
que ambas migran a extremos opuestos del microtbulo.
Los RNAm de hunchback y caudal estn distribuidos de manera uniforme en todo el
oocito gracias a los microtbulos. Sin embargo, bicoid inhibe la traduccin de caudal y
sta se sintetiza solo en el polo posterior. Del mismo modo, nanos inhibe la traduccin de
hunchback y sta se sintetiza solo ene l polo anterior. Bicoid tambin acta como un
potenciador en la transcripcin de hunchback.

En Drosophila, el fenotipo de las cras de mutantes de Bicoid no desarrolla segmentos

anteriores, contiene dos abdmenes y dos colas. Por lo tanto, de aqu se sugiere la
protena bicoid favorece el desarrollo de estructuras anteriores e inhibe el desarrollo de
estructuras posteriores. El mRNA de bicoid est poliadenilado hasta la fecundacin, lo
que aumenta notoriamente su estabilidad y tv 1/2. Las protenas exuperantia y swallow
(tragar) son las responsables de anclar a bicoid ene l polo anterior, uniendo bicoid a la
dinena. Cuando estas protenas estn ausentes, el gradiente de bicoid es mucho menos
pronunciado y el fenotipo es anormal, aunque menos severo que cuando se muta a
bicoid. Esto sugiere que no solo bicoid, sino su gradiente de concentracin es lo que
determina el desarrollo de estructuras anteriores (cabeza y trax). En suma: bicoid
reprime la formacin de estructuras posteriores inhibiendo la traduccin de caudal y
estimula la formacin de estructuras anteriores favoreciendo la traduccin de
hunchback. Hunchback es un factor de transcripcin que estimula la formacin de
estructuras anteriores.

De un modo similar, la polaridad posterior est determinada por la protena materna

nanos producida en las clulas nodrizas del ovario, su RNAm se transporta a la regin
posterior del oocito y aqu se asocia a protenas que lo retienen (ej. Oskar). Si nanos o
cualquiera de stas protenas se ausenta en la madre, no se forma el abdomen del
embrin. Nanos forma un gradiente de concentracin, concentrndose ms en el
extremo posterior. Acta estimulando la produccin de caudal e inhibiendo la de
hunchback, recordemos que estas dos protenas se encuentran difundidas de igual
manera pero se activan principalmente en los polos.

Genes de segmentacin.

Temprano en el desarrollo de Drosophila, el destino de una clula depende de las seales

ambientales y por los gradientes morfognicos. Luego, las clulas se determinan y su
destino depende de la clula misma, proceso mediado por los genes de segmentacin.
Los genes de segmentacin dividen al embrin temprano en una serie repetida de
primordios segmentarios a lo largo del eje anteroposterior y la mutacin de stos hace
que el embrin carezca de ciertos segmentos. Hay tres tipos de stos genes, donde los
genes gap son regulados por los genes de efecto materno y stos regulan a los genes
pair-rule:

Genes gap. La expresin dinmica de los genes gap se realiza en dominios

solapados, se encargan de dividir al embrin en regiones, codifican para
 factores de transcripcin y son regulados por los genes maternos. Las
protenas codificadas por los genes gap determinan la expresin de los
genes pair-rule o regla de los pares. En definitiva, dividen regiones y
despus regulan la segmentacin de cada regin. Entre los genes gap
tenemos a: hunchback, overlap, kruppel, knipps, giants y tailless.

Genes pair-rule. Estos genes son regulados por los genes gap y son
responsables de dividir al embrin en reas que son precursoras del plan
segmentario, mediante bandas verticales de ncleos. Una banda expresan
un gen pair-rule, la siguiente no, la siguiente si y as sucesivamente. El
resultado es una la aparicin de bandas que dividen al embrin en 15
subunidades, donde cada hilera tiene un gen pair-rule particular. Es el caso
de hairy, even-skipped, urnt, fushi tarazu, etc. Mutacin en un gen de regla
par genera un embrin con menos segmentos de los normales.

Genes de polaridad de segmento. Estos genes refuerzan la

segmentacin establecida en el embrin por los genes pair-rule y por
sealizacin establecen la polaridad de cada segmento. Es decir,
determinan el comienzo y el fin de cada segmento (parasegmento). Es el
caso de los genes wingless, engrailed y hedgehog.

Genes Selectores Hometicos (identidad de segmento).

Luego que se establecen los limites de cada segmento, se activan los genes selectores
hometicos para determinar la identidad funcional de cada segmento. Uno de estos es
el gen antennapedia, que especifica segmentos de la cabeza y primeros dos segmentos
torcicos. El complejo bitorax define el tercer segmento torcico y los segmentos
abdominales. Estos genes (tambin denominados hox) se encuentran en muchas
especies de la escapa evolutiva, tienen un dominio homeobox que reconocen secuencias
de ADN y sus mutaciones causan transformacin de la identidad/funcin de un
segmento. Por ejemplo, una mutacin de antennapedia puede hacer que en vez de dos
antenas en la cabeza, la mosca tenga dos patas.

POLARIDAD DORSOVENTRAL.

La polaridad dorsoventral se establece por el gradiente de la transcripcin de un factor

denominado dorsal (encargado de producir estructuras ventrales). El transcripto del
RNAm del gen dorsal es colocado en el oocito (se produce en las clulas nodrizas) y la
protena dorsal se traduce en toda la extensin del embrin. Sin embargo, dorsal unida a
los ncleos de la parte ventral del cuerpo y en el sector dorsal, la protena dorsal no
contacta con los ncleos. En el ncleo, se une a ciertos genes para regular su
transcripcin. Los genes que determinan la expresin de estructuras ventrales requieren
la presencia de dorsal en el ncleo, por lo que la ubicacin nuclear de dorsal se encarga
de ventralizar. Ntese que en la regin dorsal del cuerpo, dorsal no ingresa al ncleo y
por lo tanto se activan solos los genes dorsales. A su vez, los genes de estructuras
ventrales permanecen inactivos. Ntese la controversia de que la protena dorsal
estimula la produccin de estructuras ventrales.

(La verdad que la gentica est bien demenos, no se la deseo a nadie, es el curso mas
embolante que he tenido en estos tres aos de facultas).

DETERMINACION DEL SEXO.

La determinacin del sexo es un suceso importante en el desarrollo embrionario, ya que

le otorga al nuevo ser una condicin con consecuencias por el resto de su vida. Este
proceso no es universal en todos los seres vivos, sino que es determinado en las distintas
especies. En reptiles, depende de la temperatura de la que se incuba el huevo en
determinado periodo, donde bajas temperaturas producen diferenciacin hacia machos y
viceversa. Estos rangos de temperatura son angostos y el valor de temperatura bisagra
se da en alrededor de 28.5C. En insectos como Drosophila, depende de si la mosca
tiene 1 o 2 cromosomas X, ya que el cromosoma Y de estos insectos no determinan el
sexo.

En mamferos, el gameto masculino es quien determina el sexo de la cra. Las mujeres

son XX y producen gametos indefectiblemente X, siempre y cuando no existan defectos
en la disyuncin de los cromosomas originando oocitos XX. En cambio, los hombres son
XY y pueden producir espermatozoides X o Y, existiendo tambin anomalas en la
disyuncin. Por lo tanto, si el espermatozoide que fecunda al oocito es X, se producir un
cigoto XX que origina una mujer. Si el espermatozoide que fecunda al oocito es Y, se
producir un cigoto XY que originar un futuro hombre.

Desarrollo gonadal.
En mamferos, las clulas germinales primordiales migran hacia la cresta urogenital
donde se encuentran los primordios gonadales. De ah, forman una gnada
indiferenciada o bipotencial, que se va a diferenciar en ovarios o testculos
dependiendo de la presencia del gen SRY y asociados. La determinacin sexual primaria
es la determinacin de las gnadas donde el cromosoma Y es fundamental. Una persona
XXXXY, por mas que tenga 5 cromosomas X, va a ser hombre debido a la presencia del
cromosoma Y.

La gnada bipotencial aparece en la cuarta semana del desarrollo y se mantiene en

estado bipotencial hasta la sptima, encontrndola en el mesodermo intermedio. Se
caracteriza por el conducto de Mller y el de Wolff que tienen diferentes destinos. Si hay
estrgenos circundantes, el conducto de Mller se diferencia a trompas y tero; mientras
que el de Wolff degenera. Si hay hormona antimuleriana y testosterona, el conducto de
Mller degenera y el de Wolff se diferencia a gnadas masculinas. El conducto de Wolff
es quien conecta el testculo con el rin mesonfrico primitivo y necesitan testosterona
para proliferar, por lo que degenera en las mujeres. La diferenciacin de la cesta
urogenital en la gnada bipotencial depende de muchos genes, entre ellos, SF1
(steroidogenic factor) y WT1 (wilms tumor), ambos regulados por SRY.

El gen SRY (Sex-determining Regin of Y) es quien parece determinar el sexo del

individuo actuando sobre clulas somticas, afirmacin demostrada por varios estudios.
Se trata de un gen ubicado en el cromosoma corto del gen Y, casi en un extremo,
prximo a la zona de recombinacin cromosmica. Este hecho hace que a veces se
encuentre el gen SRY en el cromosoma X, donde se manifiestan los sndromes
correspondientes. Se trata de un gen expresado principalmente en el testculo que no
codifica protenas, sino ARNs funcionales que regulan la espermatognesis. La evidencia
mas clara por la que SRY continua siendo el factor determinante testicular viene de
ratones transgnicos a los que se le inyectaba este gen y desarrollaban machos. Sin
embargo, en algunas excepciones no se desarrollaban machos, por lo que SRY es
acompaado por otros factores para la determinacin del sexo. Este gen se expresa del
da 10 hasta el da 13 del desarrollo, por lo que se cree que es el inductor de una
cascada de eventos de diferenciacin.

El gen SOX9 se ha visto implicado en el desarrollo masculino, se trata de un gen

autosmico que induce la formacin testicular. Esto se apoya con que hembras XX con
una copia adicional de SOX9 desarrollan testculos. Se cree que SRY puede ser un
activador de SOX9, que lo activa y si no hay SRY, la gnada se desarrolla hacia ovario. El
gen SOX9 se encuentra en todos los vertebrados, por lo que se piensa que es el
determinante del sexo ms primitivo en la filogenia. El gen SF1 tambin se lo cree
importante en la determinacin del sexo masculino, traductor de una protena
posiblemente activada por SRY, involucrado en la activacin de FIM (factor inhibidor de
Mller).

El gen DAX1 es un gen del cromosoma X sensible a la dosis que inhibe a SRY. Sin
embargo, esta inhibicin es dependiente de la dosis y solo inhibe si se encuentra
aumentado, ejemplo, en mujeres XX. Por lo tanto, los hombres producen DAX1 en su
cromosoma X pero ste es insuficiente para inhibir a SRY y se produce diferenciacin
masculina. A su vez, el gen WNT4 es quien activa a DAX1 para que inhiba a SRY, por lo
que se encarga de la diferenciacin hacia las gnadas femeninas.

Por lo tanto, vemos que la determinacin sexual secundaria no es un evento simple que
depende solo del gen SRY, sino que esa es la teora mas aceptada hasta el momento.
Diferenciacin gonadal.
Una vez que se determina que gnada vamos a formar, se debe diferenciar adoptando
una identidad propia mediante la secrecin de productos de stas gnadas recin
formadas. La determinacin sexual secundaria es la diferenciacin del fenotipo
extragonadal con una fase embrionaria y otra en la pubertad. Como dijimos
anteriormente, esta determinacin es estimulada por las hormonas sexuales que se
producen en cada gnada: FIM (Sertoli) & testosterona (Leydig) en el hombre y
estrgenos en la mujer (teca).

En el hombre, el desarrollo gonadal depende tanto del FIM, la testosterona y la

dihidrotestosterona. El Factor inhibidor de Mller es secretado desde las clulas de
Sertoli y causa la apoptosis del conducto mulleriano, induciendo a clulas vecinas a que
secreten un factor parcrino que inducen este proceso. La testosterona es una
hormona masculinizante responsable de estimular la formacin ductal masculinas, es
decir, el epiddimo, vesculas seminales y conductos eferentes (diferenciacin del
conducto de Wolff). Se denomina estructuras ductales a las vas por la cual se depositan
los gametos en el reservorio donde deben actuar. La dihidrotestosterona es una
hormona derivada de la testosterona que se convierte a nivel perifrico y se la ha
vinculado a la diferenciacin de la uretra masculina, prstata, pene y escroto
(diferenciacin de genitales externos).

En mujeres, el estrgeno fetal es quien contina el desarrollo del conducto de Mller a

tero y trompas de Falopio. Estos estrgenos tambin cumplen una funcin en el
hombre, dado que regulan la absorcin de agua desde el conducto deferente, lo que
concentra el semen y favorece la fecundacin. Tanto hombres como mujeres con
deficiencias en la produccin de estrgenos, desarrollan esterilidad. De hecho, la
concentracin de estrgenos en la rete testis es mas elevada que la concentracin de
estrgenos en el plasma sanguneo femenino.

Anomalas cromosmicas ligadas al sexo.

Estas anomalas han sido la base para entender alguno de los procesos genticos
importantes en nuestra vida. El 10% de estas enfermedades estn ligadas al cromosoma
X, por lo que el hombre es el sexo ms sensible a sufrirlas dado que contiene un solo
cromosoma X. Por lo tanto, sea una enfermedad dominante o recesiva, el hombre
siempre la va a expresar porque contiene solo un cromosoma X y siempre va a expresar
nicamente el alelo enfermo. Sin embargo, las mujeres presentan un segundo
cromosoma X que las salva de presentar la enfermedad, siempre y cuando se trate de
una enfermedad recesiva y tengan un alelo con estructura normal en el otro cromosoma
X. Desarrollaremos aqu algunas anomalas y/o enfermedades que producen cambios en
la determinacin sexual del paciente.

Sndrome de Turner 45, XO. Pacientes femeninos pero con desarrollo

disminuido de estructuras gonadales, genitales externos, ausencia de
menstruacin, baja estatura y gnadas pequeas.

Sndrome de Klinefelter 47, XXY. Pacientes de fenotipo masculino pero

con signos de feminidad leve desarrollo mamario, de caderas, distribucin
ginoide del vello y poco pelo en barba-pecho.
 Diploida del X 47, XXX. Pacientes femeninos normales y frtiles. Las
mujeres normalmente inactivan uno de sus cromosomas X por parte del gen
XIST, principalmente en el blastocisto por el proceso de imprinting. Sin
embargo, el XIST paterno se expresa y silencia la mayor parte del
cromosoma X. Este trastorno se da por un error en el momento de la
disyuncin de los cromosomas en las gnadas, donde una gnada lleva
consigo el par completo de cromosomas. Hablando de frecuencia, suele
suceder ms en mujeres que en hombres.

Sndrome de Chapelle 46, XX. Estos pacientes con genotipo XX

presentan un fenotipo masculino porque el gen SRY cercano a la zona de
recombinacin con el cromosoma X, fue parte del fragmento recombinado y
ahora lo encontramos en el cromosoma X. Por tanto, estos pacientes
expresan el gen SRY en el cromosoma X derivado de su padre y presentan
fenotipo masculino.

Sndrome de Sawyer 46, XY. Pacientes con genotipo XY y fenotipo

masculino porque heredaron un cromosoma Y de su padre que no presenta
el gen SRY. Por lo tanto, estos pacientes desarrollan la gnada femenina.

Hiperplasia suprarrenal congnita. Se trata de un trastorno donde se

produce una enzima defectuosa que se encarga de producir estrgenos a
partir de andrgenos. Esta enfermedad produce virilidad en pacientes
femeninos dada la acumulacin de DHT. Sus genitales externos son
ambiguos, con un cltoris hiperdesarrollado tal si fuese un pene. Tambin,
produce otros sntomas no relacionados con la determinacin sexual.

Insensibilidad a andrgenos. Son pacientes con defectos en los

receptores de andrgenos en las clulas, por lo que presentan niveles
normales de andrgenos pero sus clulas no responden a ellos. Por lo tanto,
estos pacientes presentan un fenotipo femenino, similar al sndrome de
Klinefelter.
 ANOMALIAS CONGENITAS.

Los defectos al nacimiento comprenden toda alteracin orgnica o funcional en el

momento de nacer, notoria o latente, que impida la correcta adaptacin del individuo al
medio extrauterino en los aspectos biolgicos, psquicos y sociales, ocasionando la
muerte y/o incapacidad para crecer y desarrollarse en las mejores condiciones. La
palabra congnita procede del latn congenitus, que significa nacido con. Se estima que
mas de la mitad de las concepciones humanas no llegan satisfactoriamente a termino,
donde muchos de los embriones expresan sus anomalas en etapas tempranas y no
llegan ni a implantarse. El 5% de los RN tienen malformaciones conocidas, algunas leves
y otras graves. De todas estas, se estima que tan solo el 15% son hereditarias.

Los defectos que pueden aparecer al nacimiento se clasifican en tres categoras de a

acuerdo a la consecuencia de lo afectado:

Estructurales. Afectan la posicin fsica de un sector del cuerpo. Es el caso del pie
equinovaro causado por el oligoamnios. Dentro de las anomalas estructurales,
tenemos:

Malformacin cuando es un defecto morfolgico de un rgano por un

desarrollo anormal. La causa tiene una base gentica. Ej.:
gastroquisis (cierre incompleto de la pared abdominal (y
queilopalatosquisis (paladar hendido).
Deformacin cuando un sector del cuerpo tiene una posicin anormal
causada por fuerzas externas. No tiene base gentica, dado que se
da por factores externos. Un ejemplo es el pie equinovaro.
Disrupcin cuando hay un defecto morfolgico causado por fuerzas
externas. Se diferencia de la malformacin por la causa, en la
malformacin la causa es gentica. Por ejemplo, en los RN que el
cordn umbilical se enrolla en el brazo, stos tienen un desarrollo
anormal de la extremidad.
Displasia refiere cuando las clulas se organizan en forma incorrecta
dentro de un tejido (dishistogenesis), con causa gentica. Es el caso
de los pacientes con acondroplasia (enanismo).

Funcionales. Son defectos que condicionan el funcionamiento del organismo

Metablicos. Son defectos funcionales especficos sobre el metabolismo, que se
deben a la ausencia de determinada enzima, lo que interrumpe una va
metablica.

El 60% de los defectos congnitos son de causa desconocida, el resto pueden tener
causas hereditarias, genticas o por teratgenos. Se conocen muchos teratgenos
actualmente causantes de disrupciones, la mayora producen sus efectos en un periodo
de sensibilidad critico del desarrollo entre la 3ra y 8va semana, ya que aqu sucede la
organognesis.
El acido retinoico es un teratgeno bastante comn que en grandes cantidades puede
producir ausencia de orejas, mandbula, paladar hendido, anomala en el cayado artico
y en el SNC.
El alcohol es un teratgeno frecuente que produce el sndrome alcohlico fetal. Esto se
descubri en 1973 donde los RN presentaban cabeza pequea, labio superior delgado,
puente nasal bajo y desarrollo disminuido del SNC. En estos pacientes se ha observado
defectos en la migracin neuronal, apoptosis aumentada y esto puede llegar a retraso
mental.
Sumado a estos, los metales pesados como cinc, plomo y mercurio, o virus y bacterias
patgenas tambin pueden inducir defectos congnitos. Tambin, se sabe que la
exposicin de madres a radiaciones ionizantes aumenta la prevalencia de estos defectos.