La supervivencia de Ascaris suum y galli ascaridia huevos en el estircol lquido a diferentes

concentraciones de amonaco y temperaturas

Abstracto
Los huevos de Ascaris suum de cerdos son muy resistentes y se utilicen como un indicador
conservador de la inactivacin de patgenos durante el almacenamiento de lodos. Los huevos
de Ascaridia galli , el scaris aves de corral, tambin son conocidos por ser muy resistente,
pero la idoneidad como un indicador de la inactivacin de patgenos nunca ha sido
probada. Pig suspensin tiene que ser almacenado durante varios meses para inactivar
patgenos, pero el tratamiento qumico de suspensin puede reducir este tiempo. La idoneidad
de A. galli como un indicador de saneamiento suspensin se prob mediante la comparacin
de la supervivencia de los huevos de A.suum y A. galli en el purn. Adems, el efecto del
tratamiento con urea en la inactivacin de los huevos de scaris en relacin con el tiempo de
almacenamiento tambin fue probado. Bolsas de nylon con 10.000 huevos de cualquiera de las
especies se colocaron en frascos de plstico de 200 ml que contenan ya sea tratada con urea
(2%) o purines no tratados durante un mximo de 120 das a 20 C, 6 das a 30 C, 36 horas a
40 C o 2 horas a 50 C. En todas las temperaturas en ambos tipos de lodos, A. galli huevos
fueron inactivados a un ritmo mucho ms rpido ( P <0,05) en comparacin
con A. suumhuevos. Para cada aumento C 10 en la temperatura de 20 C, T 50 (tiempo
necesario para inactivar 50% de los huevos) para ambos tipos de huevos se redujo
notablemente.En todas las temperaturas, la viabilidad de los huevos de ambas especies fue
significativamente mayor ( P <0,05) en suspensin sin tratar en comparacin con el lodo
tratado con urea excepto A. galli huevos a 20 C donde se detect ninguna diferencia
significativa. En suspensin sin tratar, los niveles de pH (6,33 a 9,08) y amoniaco (0,01 a 1,74
mM) fueron (inferior P <0,0001) en comparacin con la de la urea tratados con suspensin
(pH: 8,33 a 9,28 y el amonaco 1-13 mM). El estudio demostr que A. gallihuevos son ms
sensibles a las condiciones desfavorables en comparacin con A. suumhuevos. El uso
de A. galli huevos como indicador de higiene pueden por tanto ser adecuado para evaluar la
inactivacin de patgenos que son ms sensibles que A. gallihuevos. La adicin de urea puede
reducir notablemente el tiempo de almacenamiento de suspensin necesaria para
inactivar A. suum y A. galli huevos.

Palabras clave
Slurry ;
viabilidad ;
Ascaris suum huevos ;
Ascaridia galli huevos ;
la temperatura;
Amonaco

1. Introduccin
Los huevos de helmintos (nematodos) ascridos son conocidos por ser muy resistente y puede
soportar condiciones ambientales muy desfavorables ( Barrett, 1976 y Wharton, 1983 ). El
cerdo scaris Ascaris suum es ubicuo y los huevos pueden ser fcilmente procesada y
enumer en el laboratorio. La viabilidad de estos huevos es, por tanto, a menudo se utiliza
como un indicador para evaluar si el estircol y los residuos humanos han sido suficientemente
saneado en condiciones mesfilas ( Holmqvist y Stenstrm, 2001 ). A temperaturas> 50
C, A. suum huevos mueren rpidamente ( Burden y Ginnivan de 1978 y Barnard et al., 1987 )
y pueden no ser adecuados para su uso como indicadores de la higiene en comparacin con
otros indicadores como los bacterifagos.Los huevos de la scaris pollo, Ascaridia galli tambin
se considera que son muy resistentes a las condiciones adversas. La infeccin es no
zoonticas y los huevos son fciles de obtener. A. galli podra por lo tanto ser de uso en reas
donde A. suum huevos no estn disponibles. Aunque A. galli los huevos se han utilizado en un
estudio de saneamiento ( Tonner-Klank et al., 2007 ), su idoneidad como un indicador de la
higiene no se ha investigado a fondo.
Intensivos resultados de la produccin de cerdos en grandes cantidades de purines y estircol
slido que son comnmente utilizados como fertilizantes del suelo despus de un periodo de
almacenamiento. El estircol puede contener una amplia variedad de patgenos incluyendo los
de potencial zoontica ( Bradford et al., 2013 ). La aplicacin de lechada almacenado y el
estircol slido para cultivos agrcolas y hortcolas, por tanto, puede conducir a la
contaminacin de los productos, as como las fuentes de agua a travs de la escorrenta
superficial ( Mawdsley et al., 1995 ). El consumo humano de productos contaminados, por
ejemplo, bayas, lechuga y otros cultivos de consumo crudo, posteriormente puede dar lugar a
la enfermedad ( Hanning y col., 2009 ). Del mismo modo, estircol de aves tambin puede
contener agentes patgenos como virus, bacterias y parsitos ( Terzich et al., 2000 ) y necesita
ser tratada antes de ser utilizado como fertilizante.
En promedio, la capacidad de almacenamiento de tanques de almacenamiento de purines en
Europa es suficiente para 6 meses ( Menzi, 2002 ) que indican el tiempo mximo de
almacenamiento. Durante el almacenamiento de los desechos agrcolas los patgenos pueden
ser inactivados por exposicin a condiciones desfavorables, por ejemplo temperaturas altas
debido a los procesos de compostaje ( Grewal et al., 2006 ).Tiempo de inactivacin durante el
almacenamiento tambin depende de factores como el pH, la aireacin, el amonaco, los iones
de carbonato y cidos grasos voltiles (VFA) las concentraciones, el contenido de materia seca
y tipo de patgeno, y diferentes estudios han informado de diferentes tiempos de
almacenamiento ( Ghiglietti et al., 1997 , Gantzer et al., 2001 , Brewster et al., 2003 , Nordin et
al., 2009 y Katakam et al., 2013 ) para la inactivacin de A. suum huevos.
La produccin de cerdos y la aplicacin asociada de los purines en los campos pueden causar
una fuga de nitrgeno y la eutrofizacin de las masas de agua receptoras. Por consiguiente, la
Comisin Europea (Directiva 96/61 / CE) recomienda que las mejores prcticas disponibles (por
ejemplo, las dietas bajas en protenas, diseo de vivienda) deben ser utilizados para reducir
este tipo de contaminacin ambiental. Se ha intentado reducir las emisiones de amonaco a
partir de la suspensin mediante la modificacin de composicin de la dieta, por ejemplo,
mediante la adicin de hidratos de carbono fermentables ( Canh et al., 1998a y Canh et al.,
1998b ). Sin embargo, los niveles de amonaco suspensin con reducidas puede requerir
mayor tiempo de almacenamiento para asegurar la eficacia de la inactivacin de patgenos y
esto puede ser indeseable por razones econmicas y logsticas. Reduccin ms rpida de
patgenos en los lodos, purines o las heces y el saneamiento de este modo ms eficiente se
puede conseguir a temperaturas ms altas, el pH o concentraciones de amonaco ( Eriksen et
al., 1996 ,Pecson et al., 2007 , Nordin et al., 2009 y Bolton et al., 2013 ), y el conocimiento
sobre cmo manipular estos parmetros pueden ayudar a reducir el tiempo de almacenamiento
efectivo.
La principal fuente de amonaco en suspensin es rpida degradacin de urea a los iones de
amonio y carbonato de ureasa secretadas por las bacterias fecales ( Mobley y Hausinger,
1989 ). Una fuente menor de amoniaco es lenta degradacin de las protenas no digeridas en la
suspensin durante el almacenamiento ( Zeeman, 1991 ). En la fase acuosa, de amonio
(NH 4 + ) y amonaco (NH 3 ) estn en un equilibrio que est influenciada por la temperatura y el
pH. Aunque las altas temperaturas desplazar el equilibrio hacia NH 3 , pH tiene una influencia
mucho ms fuerte en el equilibrio; a pH por debajo de 7 el nitrgeno amoniacal total (TAN) es
principalmente en NH 4 + forma y por encima de 11 es en su mayora en NH 3 forma ( Philippe et
al., 2011 ). Aunque el mecanismo exacto de accin no se conoce, amonaco (en NH 3 forma) se
ha demostrado que tiene efecto txico en muchos microbios ( Ghiglietti et al., 1997 , Pecson et
al., 2007 y Bolton et al., 2013 ).
El objetivo del presente estudio fue comparar la supervivencia de los huevos de scaris ( A.
suum y A. galli ) en el purn de cerdo en diferentes niveles de amonaco y temperaturas e
investigar cmo la supervivencia de huevo puede reducirse mediante la adicin de urea.

2. Materiales y mtodos
2.1. Diseo experimental
A. suum y A. galli huevos se incubaron por triplicado en agua (control), tratado con urea o purn
de cerdo no tratada a 20 C, 30 C, 40 C y 50 C en condiciones de laboratorio.Las
muestras almacenadas a 20 C, 30 C y 40 C se mantuvieron en incubadoras, mientras que
los almacenados a 50 C permanecieron en un bao de agua. pH, amonaco acuoso (NH 3
(aq) ), el desarrollo de huevo scaris y la viabilidad se monitorizaron a intervalos de tiempo
regulares dependiendo de la temperatura de incubacin y tiempo de inactivacin se esperaba
( Tabla 1 ).
Tabla 1.
 Diseo experimental.
Tiempo de almacenamiento
unidades de
Temperatura tiempo de
( C) almacenamiento Slurry con urea Slurry sin urea
20 das 30,60,75,90,105,120,150 30,60,75,90,105,120,135,150
30 das 1,2,3,4,5,6 2,4,6,12,18, 24
40 horas 2,4,6,8,10,12,36 2,6,12,18,24,30,36
50 minutos 20,40,60,80,100,120 20,40,60,80,100,120
opciones de la tabla

2.2. huevos de scaris

Las heces se recogieron de los grandes intestinos de cerdos en una casa danesa masacre y
las heces de pollo fresco se recogieron del suelo en una granja avcola
dans.Tanto A. suum huevos y A. galli huevos fueron aisladas de las heces por tamizado
secuencial y lavado a travs de una serie de tamices con mallas 500 m, 212 m, y 90 micras
seguido de recogida sobre un tamiz de 36 micras. Los huevos fueron aislados del material
retenido en la 36 micras de tamao de malla de tamiz por flotacin tal como se describe
por Larsen y Roepstorff (1999) . Bolsas de nylon (tamao de 2,5 x 2,5 cm 2 ) con un tamao de
malla de 20 micras (Sefar AG, Heiden, Suiza) se prepararon cada uno conteniendo 10.000
potable no embrionados A. suum o A. galli huevos y se sellaron con una pistola de pegamento.

2.3. purines
Purn de cerdo fresca se recogi de una granja de cerdos orgnica, donde los cerdos fueron
alimentados con cereales (cebada, principalmente), y se transporta al laboratorio dentro de 4
horas y se almacen a 5 C durante 5 das antes de configurar el experimento. Antes del
comienzo del experimento, la suspensin se mezcl a fondo durante 2 min y se dividi en dos
porciones. Se aadi urea (urea de calidad tcnica, Applichem GmbH) a una de las partes para
asegurar una concentracin final de urea de 2% w / w. Aproximadamente 150 g de la
suspensin con o sin urea se transfiri a botellas de 200 ml de plstico. Dos bolsas de nylon
que contenan A. suum o A. galli huevos se sumergieron en la suspensin de cada botella. La
botella se cerr slo parcialmente con una tapa, que permite algo de ventilacin cuando la
botella sera ms estallar debido a la generacin de gases de la suspensin durante el
almacenamiento.

2.4. desarrollo de los huevos y la viabilidad

En cada toma de muestras, las dos bolsas de nylon se recuperaron de una botella dada y
enjuagarse a fondo con agua del grifo. Cada bolsa se tira suavemente aparte y los huevos por
lavado en tubos separados y se lav tres veces con 0,1 MH 2 SO 4 tampn mediante
centrifugacin a 253 x g durante 7 minutos y desechar el sobrenadante.Despus del lavado
final, el sobrenadante se desech y H 2 SO 4 se aadi a un volumen total de 5 ml. Los huevos
fueron entonces embrionados a 22 C durante seis semanas (Oksanen et al., 1990 ). Los
huevos fueron aireados cada semana mediante la apertura de los prpados durante 2-3
min. Un mnimo de 100 huevos se examinaron microscpicamente antes y despus de
embrionacin para determinar la etapa de desarrollo de los huevos. Despus de embrionacin,
los huevos contienen una larva completamente desarrollada se considera vlida mientras que
todas las otras etapas de desarrollo se consideraron no viables. Viabilidad inicial de los huevos
se midi por huevos embrionados de 10 bolsas de nylon para cada especie en H 2 SO 4 tampn
(pH 1) durante 6 semanas a 22 C al comienzo del experimento.
2.5. Las mediciones de pH y amonaco acuoso (NH 3 (ac) )
El pH se midi en todas las muestras en suspensin despus de la mezcla con agua
desionizada en una relacin de 1: 5 (w: w) ( Jrgensen y Jensen, 2009 ). Muestras de purines
inicialmente se haban almacenado a -20 C. Nitrgeno amoniacal total (TAN) fue luego
extrado a partir de 5 g de la suspensin de descongelado y se homogeneizaron en suspensin
en 1 M de KCl a un volumen total de 100 ml y se someti a fin de extremo a agitacin durante
45 min. Los extractos se filtraron a travs de papel de filtro (Advantec TM N 5A, Advantec
MFS, Inc., Dublin, CA, EE.UU.) y, una vez ms congelado a 20 C. TAN se midi despus en
los extractos descongelados por un sistema de anlisis de inyeccin de flujo (Divisin de
Instrumentos Lachat, Milwaukee, WI, EE.UU.). NH 3 (aq) Las concentraciones se calcularon
utilizando la constante (p TAN, pH y disociacin K valores de A) tal como se describe
por Armstrong et al. (1978) .

2.6. anlisis estadstico

Para cada temperatura, el efecto del tipo de suspensin (+/- urea), el tiempo y su interaccin en
el pH y NH 3 (aq) concentracin se analiz usando un modelo lineal con el tipo de suspensin
como una variable categrica y el tiempo como una variable continua (Proc GLM, SAS 9.2,
SAS Institute, Inc, Cary, NC). El porcentaje de huevos viables en los controles de lodo y de
agua almacenada a cada temperatura se compararon mediante el ajuste de la siguiente
ecuacin de Boltzmann funcin sigmoidal utilizando GraphPad Prism versin 5.0 (GraphPad
Software, San Diego, CA, EE.UU.). Se seleccion este modelo ya que se ha fijado la parte
superior y las constantes de fondo y una pendiente variable y el tiempo necesario para inactivar
50% de los huevos ( T 50 ) se puede calcular para comparar las curvas de viabilidad de huevos.

donde Y t = porcentaje de huevos viables de tiempo t , un = porcentaje de viabilidad inicial

(arriba constante), b = cero por ciento de viabilidad (constante inferior), T 50 = tiempo
necesario para la reduccin en un 50% de viabilidad y t = tiempo.
Dos estimaciones de T 50 se consideraron significativamente diferentes ( P <0,05) si sus
respectivos intervalos de confianza del 95% no se superponan. Este es un enfoque prudente,
ya que (ms pequeo) se solapa de los intervalos de confianza se pueden encontrar incluso si
dos estimaciones son significativamente diferentes ( Knezevic, 2008).

3. resultados
3.1. pH y amonaco acuoso (NH 3 (aq) )
El pH de la suspensin sin tratar fue menor en comparacin con la de la suspensin tratada
con urea a todas las temperaturas ( P <0,0001) ( Fig. 1 ). El pH de ambos tipos suspensin a
20 C y 30 C fue ligeramente menor que a 40 C y 50 C. El pH de los purines no tratados
se almacen a 20 C, 30 C y 40 C aument de forma constante con el tiempo de
almacenamiento ( P <0,001), mientras que a 50 C, no cambia con el tiempo. pH de la
suspensin tratada con urea no mostr ningn cambio significativo en el tiempo en cualquiera
de las temperaturas.

Higo. 1.
valores de pH Los cambios en la media ( SD) durante el almacenamiento de urea-
tratada y purn de cerdo no tratada a 20 C (A), 30 C (B), 40 C (C) y 50 C
(D). Todas las mediciones fueron medios de tres repeticiones. Tenga en cuenta que los
ejes horizontales tienen escalas diferentes.
Figura opciones
El NH iniciales 3 (aq) concentraciones en la suspensin tratada con urea fueron ms altas a
temperaturas ms altas (de 5,8 mM a 13 mM), y los niveles disminuyeron en grados variables
con el tiempo a 30-50 C ( P = 0,03), pero permanecieron bastante estable a 20 C ( Fig.
2 ). En lodo sin tratar, el NH 3 (ac) la concentracin se mantuvo muy baja (por debajo de 0,1 mM)
durante todo el perodo de estudio a 30-50 C y aumenta ligeramente con el tiempo a 20 C
( P = 0,03). El NH 3 (aq) concentracin en suspensin sin tratar de este modo se mantuvo mucho
ms bajo que en la suspensin tratada con urea a todas las temperaturas.

Higo. 2.
Los cambios en la media ( SD) de amonaco acuoso (NH 3 (aq) ) concentraciones
durante el almacenamiento de la suspensin tratada con urea y el cerdo no tratada a
20 C (A), 30 C (B), 40 C (C) y 50 DISCOS COMPACTOS). Todas las mediciones
fueron medios de tres repeticiones. Tenga en cuenta que los ejes horizontales tienen
escalas diferentes.
Figura opciones

3.2. desarrollo de los huevos y la viabilidad

Ninguno de los A. suum y A. galli huevos mostraron ningn signo de desarrollo durante la
incubacin en el lodo con independencia del tipo y temperatura. Ninguno de los huevos de
control desarrollado en agua a 40 C y 50 C, mientras que los huevos de control se
mantuvieron a 30 C mostraron diferentes etapas de desarrollo en das se observaron 1 a 6.
huevos de control totalmente desarrollados a 20 C despus de 30 das.
Los cambios temporales en la viabilidad de A. suum y A. galli huevos a las diferentes
temperaturas se muestran en la Fig. 3 . La media de la viabilidad inicial
de A. suum y A.galli huevos se estim en 98% y 91%, respectivamente. A todas las
temperaturas, la viabilidad de ambas especies de huevo fue significativamente mayor
( P <0,05) en comparacin con lodo sin tratar lodo tratado con urea a excepcin
de A. galli huevos se almacenaron a 20 C para el que no se detect ninguna diferencia
significativa. A 40 C, no hubo disminucin en la viabilidad de A. suum huevos en suspensin
sin tratar dentro del perodo de estudio de 36 h y por lo tanto T 50 no se pudieron calcular
( Tabla 2 ). La viabilidad de A. suum huevos de control se mantuvieron a 20 C, 30 C y 40 C
se mantuvo constantemente alta durante todo el perodo de estudio, mientras que los
almacenados a 50 C mostraron disminucin de la viabilidad despus de 60 min. La viabilidad
de A. galli huevos de control se mantuvieron a 20 C y 30 C tambin fue elevado y constante
durante todo el perodo de estudio, pero A. galli huevos se mantuvieron a 40 C y 50 C
mostraron disminucin de la viabilidad antes o a una velocidad similar a las de suspensin sin
tratar ( Fig. 3 ).
Higo. 3.
La media de viabilidad de Ascaris suum y Ascaridia galli huevos en purn de cerdo con
y sin urea y en los controles de agua almacenadas a 20 C (A y B), 30 C (C y D), 40
C (E y F) y 50 C (G y H), respectivamente. Todas las mediciones fueron medios de
tres repeticiones. Tenga en cuenta que los ejes horizontales tienen escalas diferentes.
Figura opciones
Tabla 2.
Estimado T 50 en das con un 95% intervalos de confianza superior del menor y Ascaris
suum yascaridia galli huevos a diferentes temperaturas de purn de cerdo con y sin
urea.
Urea sin urea

Temperatura ( C) A. suum A. galli A. suum A. galli

20 42,3 (40.0- 14,1 (9,5-18,7) 242,6 (167.6- 24,8 (16.7-
44.5) 317.6) 32.9)
30 21,8 (17.2- 1,22 (0,86 a 41,6 (29.4-53.8) 3,81 (3,61 a
26.4) 1,58) 4,01)
40 0,83 (0,67 a 0,047 (0.028- - 0,42 (0,32-
0,99) 0.066) 0,51)
50 0,06 (0,05- 0,009 (0.007- 0,08 (0,07 a 0,039 (0,03-
0,06) 0.010) 0,08) 0,04)
opciones de la tabla
En lodo tratado con urea se mantiene a 20 C, la inactivacin total de A. suum y A. gallilos
huevos se produjeron despus de 90 das y 105 das, respectivamente. En este momento 95%
y 6% de A. suum y A. galli huevos estaban todava viable en suspensin sin tratar ( Fig. 3 ). A
30 C, despus de das 6, la viabilidad de A. suum y A. galli huevos en suspensin tratado con
urea era 76% y 5%, respectivamente, mientras que fue de 91% y 19%
para A. suum y A. galli huevos en suspensin sin tratar. A 40 C, despus de 36 h, todos
los A. suum y A. galli huevos estaban muertos mientras que el 96% de A.suum huevos y 6%
de A. galli huevos estaban todava viable en suspensin sin tratar. A 50 C, 1% y 0%
de A. suum y A. galli huevos eran viables, respectivamente, despus de 120 min, un tiempo en
que 43% y 1% de A. suum y A. galli huevos, respectivamente, eran viables en suspensin sin
tratar ( Fig. 3 ).
En general, en el presente estudio, el aumento de NH 3 (aq) las concentraciones se asociaron
con una menor viabilidad de los huevos. Para ambos tipos de huevos y en ambos tipos de
lodos, el estimado T 50 se redujo drsticamente como la temperatura aument de 20 C a 50
C. Las estimaciones de T 50 fueron inferiores en suspensin tratado con urea comparado con el
de suspensin sin tratar con la excepcin de A. gallihuevos a 20 C. Las estimaciones
de T 50 para A. suum fueron ms altos en comparacin con la de A. galli huevos ( Tabla 2 ).

4. Discusin
El presente estudio se compar la supervivencia de A. galli huevos con los de A. suumcon el
objetivo de evaluar si el primero se podra utilizar como una alternativa a A. suumcomo
indicador de la higiene conservador para la suspensin. Los resultados revelaron
que A. galli huevos son menos adecuados como indicadores de la calidad higinica de los
purines tratados a medida que moran antes que A. suum huevos.
La diferencia en los tiempos de inactivacin entre dos especies podra ser debido a las
diferencias estructurales de las cscaras de huevo. El A. suum shell contiene cuatro capas, a
saber, una capa exterior protenica (uterina-derivado), una capa vitelina, una capa quitinosa y
una capa ms interna altamente impermeable de lpidos (capa ascaroside) ( Wharton,
1983 ). El A. galli shell contiene slo tres capas, a saber, una capa proteincea exterior, una
capa quitinosa media y una capa lipoide interior ( Ackert, 1931 y Christenson et al., 1942 ). La
presencia de una capa adicional puede hacer A. suumhuevos ms tolerantes al calor y
resistentes a otras condiciones desfavorables (por ejemplo, alta NH 3 (aq) niveles) en
comparacin con A. galli huevos. Sin embargo, queda por investigarse ms exactamente cmo
esto tan bien como las otras capas protege contra el estrs ambiental.
La supervivencia de los indicadores microbianos especficos generalmente se utiliza para
estimar la eficacia de un mtodo de tratamiento para inactivar agentes patgenos en
suspensin, lodo de aguas residuales o de otros tipos de residuos orgnicos. Los huevos de
helmintos son bien conocidos por su alta resistencia a la tensin ambiental, por ejemplo,
pueden sobrevivir durante aos en el suelo agrcola ( Kransnonos, 1978 ).Varios estudios han
evaluado diferentes especies virales, bacterianas y parasitarias como indicadores de higiene
( Placha et al., 2001 , Ottoson et al., 2008 , Botner y Belsham de 2012 y Katakam et al., 2013 )
dependiendo del propsito del estudio. Para considerar un organismo como un buen indicador
de la higiene, el aislamiento y mtodos de cuantificacin debe ser simple, fiable, definitiva,
rentable y el indicador deben mostrar mayores tasas de supervivencia en comparacin con
otros patgenos ( Bhm et al., 1999 ). Bacteriana, por ejemplo, Escherichia coli y enterococos,
y fagos, por ejemplo, E.coli fago, se utilizan como indicadores de patgenos bacterianos y
virales, respectivamente, pero estos indicadores muestran un decrecimiento mucho ms rpido
que los parsitos, en particular los parsitos helmintos. Los enterococos puede, bajo ciertas
condiciones, incluso mostrar rebrote ( Christensen et al., 2002 ). Por lo tanto, los huevos de
helmintos son excelentes indicadores de higiene como su lento decrecimiento asegura que
tanto los patgenos bacterianos y virales son totalmente inactivada.
El pH inicial (6.46) de la suspensin utilizada en el presente estudio fue relativamente baja en
comparacin con la mayora de los estudios previos que citan valores de pH de los purines
frescos de 6.31 a 8,65 ( Kirchmann y Witter, 1992 , Canh et al., 1998a , Sutton y col ., 1999 , Le
et al., 2009 y Katakam et al., 2013 ). El valor pH de la suspensin fresca puede depender de
los ingredientes del alimento, y las dietas de alto contenido en protenas generalmente como
resultado mayores niveles de pH y amonaco ( Canh et al., 1998a y Le et al., 2007 ), mientras
que las dietas altas en hidratos de carbono fermentables resultan en altos niveles de cidos
grasos voltiles (AGV), reduciendo as el pH ( Paul y Beauchamp, 1989 y Canh et al.,
1998b ). En el presente estudio, suspensin se obtiene a partir de una granja donde los cerdos
se alimentan principalmente de cereales (alrededor del 70%) que podra haber dado lugar a
bajos niveles de pH. En el presente estudio, la adicin de urea a la suspensin fresca elev el
pH en 2 unidades, que pueden haber sido debido a la conversin enzimtica de la urea aadida
en amonio (NH 4 + ) por la ureasa secretadas por las bacterias fecales presentes en la
suspensin ( Muck y Steenhuis, 1981 ).
Variacin de los niveles de pH es probablemente un factor principal detrs de las diferencias
observadas en NH 3 (aq) niveles entre los dos tipos de lodos como a pH por debajo de 7, TAN
ser principalmente en NH 4 + forma mientras que por encima de pH 7, el aumento de pH
aumenta dramticamente la conversin de NH 4 + NH 3 ( Philippe et al., 2011 ). El aumento de
NH 3 (aq) niveles con aumento de la temperatura de almacenamiento en suspensin tratado con
urea podra por lo tanto ser debido a un cambio mediado por la temperatura en el equilibrio
entre NH 4 + y NH 3 hacia NH 3 (Philippe et al., 2011 ). La disminucin en el nivel de NH 3 (aq) con
el tiempo a 30-50 C podra ser debido a la volatilizacin de NH 3 debido al cierre parcial de
botellas. El ligero aumento de NH 3 (aq) niveles en el tiempo en suspensin sin tratar a 20 C
podra ser debido a la lenta degradacin de nitrgeno orgnico durante el almacenamiento
(Zeeman, 1991 ).
Los presentes resultados confirman estudios anteriores que el aumento de temperatura y NH 3
(aq) concentracin puede aumentar la inactivacin de los huevos de helmintos (Pecson et al.,
2007 y Nordin et al., 2009 ). A 50 C, tanto A. galli y A. suum huevos se inactivaron a tasas
similares en suspensin sin tratar y el agua, pero a un ritmo ms lento en comparacin con el
lodo tratado con urea. Esto indica que la temperatura fue el principal factor que contribuye a la
mortalidad de huevos para los dos tratamientos anteriores, mientras que la adicin de urea
ayud a aumentar NH 3 (aq) las concentraciones y por lo tanto aumenta an ms la tasa de
mortalidad. El A. galli huevos en los controles de agua a 40 C y 50 C se inactivaron a un
ritmo ms rpido en comparacin con los huevos en suspensin sin tratar. Es posible que la
materia orgnica en la suspensin de los huevos protegida como se especula por Popat et
al . (2010) que estudi la inactivacin trmica de A. suum huevos a 51-55 C y concluyeron
que los detergentes aninicos y aminocidos en los lodos pueden proporcionar una proteccin
sustancial contra la inactivacin trmica A. suum huevos.
En 40 C y 30 C A. suum y A. galli huevos, respectivamente, la temperatura por s solo no
afect la supervivencia de los huevos en el agua. A cada temperatura, la mortalidad de huevos
aument con el aumento de almacenamiento, tanto en suspensin de urea-tratadas y no
tratadas. La permeabilidad de la cscara de huevo de otra Ascarissp. ( A. lumbricoides )
aumenta notablemente a temperaturas superiores a 44 C (Barrett, 1976 ) y el observado
inactivacin ms rpida de los huevos a 50 C podra ser debido a aumento de la
permeabilidad de los huevos a NH 3 (aq) . Inactivacin ms lenta a temperaturas ms bajas
puede ser debido al tiempo prolongado necesario para aumentar la permeabilidad de la
cscara de huevo de NH 3 (aq) en combinacin con menor desarrollo de amonaco a
temperaturas ms bajas. Varios otros estudios tambin han demostrado el efecto txico del
amoniaco (en NH 3 formulario) en muchos otros microbios ( Ghiglietti et al., 1997 , Pecson et
al., 2007 , Vinners de 2007 , Ottoson et al., 2008 , Nordin et al ., 2009 y Bolton et al., 2013 ) y
el mecanismo de inactivacin de los microbios por el amonaco podra ser debido a la
alteracin del potencial de membrana, el aumento de pH y / o la prdida de iones de potasio
(citoplsmica Kadam y Boone, 1996 y Bujoczek, 2001 ).
Aunque hubo un gran aumento de NH 3 (aq) niveles en suspensin tratado con urea, los niveles
eran aparentemente demasiado bajo para inactivar los huevos a 20 C. En ausencia de otros
factores que inhiben, a 20 C y a un pH 12, Pecson et al. (2007)observ un 99% de
inactivacin de A. suum huevos dentro de 87 das a alrededor de 58 mM NH 3 (ac) y dentro de 25
das a 294 mm. En el presente estudio, a 20 C, todos los huevos se inactivaron en 90 das,
aunque el NH 3 (aq) concentracin vari de 2 a 4 mM en suspensin tratado con urea. La
inactivacin de A. suum huevos incluso a niveles muy bajos, aparentemente de amoniaco en el
presente estudio indica que, adems de amoniaco, otros factores no medidos en el estudio
tambin pueden haber sido responsables. Puede ser que sean iones de carbonato o cidos
grasos voltiles (AGV) que tambin son conocidos para la inactivacin de patgenos. Diez-
Gonzlez et al .(2000) y Park y Diez-Gonzlez (2003) informaron el efecto de los iones de
carbonato en la inactivacin de patgenos transmitidos por los alimentos
como E. coli y Salmonella typhimurium en el estircol del ganado. Del mismo modo Kunte et
al., 2000 y Kunte et al., 2004 informaron el efecto de VFA inactivacin de algunas bacterias y
virus entricos.Poco se sabe sobre el efecto de los iones de carbonato y AGV en los huevos de
helmintos y se necesitan ms estudios.
El efecto de la adicin de urea podra tener implicaciones prcticas a temperaturas normales de
almacenamiento. A 20 C prolonga la supervivencia de A. suum se observ para la suspensin
sin tratar, pero la inactivacin en da se logr con urea-adicin. Los purines se almacenarn
durante un perodo determinado antes de que se extiende sobre los campos ( Burton y Turner,
2003 ). En Europa, los purines se almacenan generalmente por 6 meses ( Burton y Turner,
2003 ), pero varios estudios han informado de que A. suum huevos pueden sobrevivir en los
purines ms all de 6 meses (Gaasenbeek y Borgsteede de 1998 , Papajova et al.,
2005 y Katakam et al., 2013 ). Esto es confirmado por el presente estudio, que tambin
demostr que la adicin de urea puede alterar el equilibrio fsico-qumico en la suspensin de
manera que todos A. galli yA. suum huevos pueden ser inactivados en la medida mxima hasta
el da 60 y el da 90, respectivamente, cuando se almacena a 20 C.
En conclusin, el presente estudio ha demostrado que A. galli huevos son ms sensibles a las
condiciones desfavorables en comparacin con A. suum huevos, y por lo tanto su uso como
indicadores de higiene puede ser limitada para evaluar la inactivacin de otros patgenos
susceptibles. La adicin de 2% de urea puede reducir notablemente (por 17 a 76% de A.
suum huevos y 11-57% para A. galli huevos, dependiendo de la temperatura de
almacenamiento) el tiempo de almacenamiento de los purines necesaria para
inactivar A. suum y A. galli huevos.
La adicin de urea puede reducir notablemente el tiempo de almacenamiento de suspensin
necesaria para inactivar A. suum y A. galli huevos.

Expresiones de gratitud
La ayuda de Lars Jensen Stoumann, Lene Vigh, Ea Larsen, Sofie Nissen y Uffe Cristiano Braae
Se agradece. El Ph.D. comunin de Kiran Kumar Katakam fue financiado conjuntamente por la
Facultad de Ciencias de la Salud y medicina, Universidad de Copenhague y el Ph.D. Escuela
de Investigacin, RECETO . El proyecto (parsitos de la ganadera ecolgica: soluciones
innovadoras a los nuevos retos) es parte del programa Orgnica RDD, el cual es coordinado
por el Centro Internacional para la Investigacin en Organic Food Systems, ICROFS y
financiado por la Agencia Danesa AgriFish, Ministerio de Alimentacin, Agricultura y la pesca .