Primera Clase

Licda. Miriam C de Gete

Jefa de Hematologia
Laboratorio Clinico del HDN
 ETAPA Pre-ANALTICA

Condiciones del Paciente

Tipo y Toma de Muestra

Condiciones del Paciente

NO NECESITA ESTAR ESTRICTAMENTE EN

AYUNAS (se sugiere al menos 2 h).
NO HABER REALIZADO ACTIVIDAD FSICA
INTENSA
PERMANECER PREFERENTEMENTE
SENTADO DURANTE LA EXTRACCION
DATOS A TENER EN CUENTA
EDAD
DX. PRESUNTIVO
SEXO
REFERENTE A LA MUESTRA
TIPO DE MUESTRA
-VENOSA

-CAPILAR

-ARTERIAL??
 PUNCION VENOSA
VENTAJAS
-Tcnica rpida y segura
-Permite obtener volmenes
adecuados para las dems
determinaciones.
-Permite repetir el anlisis en
caso de dudas.
-Reduce los posibles errores
de la puncin capilar.
DESVENTAJAS
-Resultados errneos por hemo-
concentracin (torniquete pro-
longado)
-Hematomas y dolor (extraccin
dificultosa)
-No se recomienda en neonatos
o pacientes quemados.
-Paciente Oncolgicos
 PUNCION CAPILAR
VENTAJAS
-Resulta sencillo para neonatos y
nios
-Se puede realizar ms de una
vez en pacientes especiales (que-
mados, oncolgicos, etc)
-til en pacientes con patologas
Hemorrgicas.
DESVENTAJAS
-Recuentos errneos por hemo-
concentracin o hemodilucin
-Dificultad para obtener flujo
continuo.
-Recuentos de Pq disminuidos,
coagulacin.
-Errores por contaminacin
-Paciente Oncolgicos
rea correcta para Puncin
Capilar

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 Puncin Venosa

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Consideraciones en la PV
Seleccionar el Material
Posicin de la Toma
Seleccin del sitio de puncin
Palpe la vena,las mas usadas estn localizadas en el rea
antecubital(cubital, ceflica,baslica)
Descontamine el rea
Coloque el torniquete- Posicin - Tiempo
Realice la extraccin
Eliminacin de los Punzocortantes

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 Los riesgos relacionados con la
puncin venosa son leves:
1. Sangrado excesivo
2. Desmayo o sensacin de mareo
3. Hematoma (acumulacin de sangre debajo de la piel)
4. Infeccin (un riesgo leve en cualquier momento que
se presente ruptura de la piel)
5. Punciones mltiples para localizar las venas

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 ANTICOAGULANTES :
Existen diferentes tipos de ellos en polvo o lquidos.
Los tres anticoagulantes habitualmente usados son :
EDTA (ETILEN-DIAMINO-TETRA-ACETICO) : Es el
preferido para los recuentos celulares y los estudios
morfolgicos.
EDTA K2 - EDTA K3
HEPARINA : Se utiliza tanto en estudios de rutina como
especializados. Su presentacin puede incluir heparina con
concentraciones de sodio o litio. En general la heparina con
litio es utilizada para estudios de qumica y la heparina sdica
se utiliza para estudios de linfocitos.
CITRATO DE SODIO : Generalmente en concentraciones al 3.2 -
3.8% y se utiliza principalmente en estudios de
coagulacin..
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Tubos y Microtubos que usamos en
Hematologa - EDTA

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 Citrato de Sodio
3.2 3.8 %

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Obtenida la muestra
HOMOGENEIZAR !!!!! LENTA Y REPETIDAS
VECES

ANTES DE PROCESAR : HOMOGENEIZAR

LENTA Y REPETIDAS VECES!!!
 Determinar la Calidad de la Muestra

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 TINCIN DE WRIGHT
Es un mtodo de tincin basado en el empleo de los
colorantes tipo Romanowsky y la modificacin de
Leishman (Indicada para parsitos del paludismo);

PREPARACIN
PRINCIPIO
CONTROL DE CALIDAD
 MTODO DE PREPARACIN DEL TINTE
WRIGHT
3 gr de Wright en polvo
Disolver en 1000 cc de methanol absoluto bajo en acetona
Mezclar
Filtrar y guardar en envase de vidrio mbar bien tapado
Evitar el contacto con acetona o cidos en general.

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Principio de la Tincin de Wright
Es un mtodo de tincin basado en el empleo de los
colorantes tipo Romanowsky y la modificacin de
Leishman (Indicada para parsitos del paludismo);
El methanol absoluto bajo en acetona acta como
fijador para que las protenas celulares
Agua destilada, o una solucin tamponada, con el objeto
de ajustar el pH, y hacer que se lleve a cabo la
ionizacin, dando lugar a la tincin de los componentes
celulares.

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 CONTROL DE CALIDAD

La composicin de los derivados de azul de metileno es

variable en cada lote de tinte Wright
Esto hace que sea necesario ajustar los tiempos para fijar y
teir,
Por lo que se debe establecer un Control de Calidad cada vez
que se prepare el tinte.
PROCEDIMIENTO PARA LA TINCIN:

Tinte Wrigt 2 mi
 Agregar H2O Destilada y Soplar 3 mi Se forma una capa
Metlica, lavar con H2O dest. .. Secar

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EJEMPLOS DE MALA TINCIN Y CONFECCION DE FROTIS

Presencia de grasa en el portaobjeto

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Presencia de artefacto morfolgico
 Presencia de precipitado de Tinte Wright
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 FASE ANALITICA
EVALUACIN DE LA TINCIN Y DE LA DISTRIBUCIN DE LAS
CELULAS EN EL FROTIS:
Revise la calidad de la tincin para los leucocitos, eritrocitos y
plaquetas, para los cuales debemos distinguir los siguientes
aspectos morfolgicos:
1. Forma, dimensiones y contorno de las clulas sanguneas
2. Ncleo celular y restos de cromatina (color
prpura).
3. Citoplasma de los linfocitos - ligte azul)
4. Citoplasma de los Neutrfilo (color Rosado)
5. Citoplasma de los monocitos (color gris)

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 6.- Granulaciones de los Polimorfonucleares:
Eosinfilo: color naranja.
Basfilo: color azul oscuro.
Neutrfilo: color pardo o purpura

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 El extendido sanguneo est
constituido por tres zonas bien
definidas que son:
zona gruesa o cuerpo
zona media o zona ideal
zona delgada o cola.

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PROCEDIMIENTO PARA LA LECTURA DEL FROTIS DE
SANGRE PERIFERICA

1. Coloque el frotis al microscopio y enfoque con el objetivo de

10x.
2. Hacer Diferencial y evaluacin de las tres serie en 100 x

No debe existir mas de 10 clulas de diferencia.

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La lectura del frotis se debe
realizar de las siguientes formas:
PARTES DE UN MICROSCOPIO PTICO

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 Sistema ptico
Oculares: un componente de aumento adicional al aumento de los
objetivos.
objetivos: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen
de sta.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre
la preparacin.
DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el
condensador.
FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

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 Sistema mecnico
SOPORTE: Mantiene la parte ptica. Tiene dos partes:
el pie o base y el brazo.
PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin, con
una apertura para que la luz pase a traves de ella.
CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares.
Puede ser monocular, binocular, ..
REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos.
Permite, al girar, cambiar los objetivos.
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que
aproxima el enfoque y micromtrico que consigue el
enfoque correcto.

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 objetivos
10 x, 40x y 100 x
Cada objetivo tiene 3 nmeros escritos sobre el.
Nmero de aumento: se refiere a lo grande que puede aparecer el
campo visual y cunto puede ser observado.
Nmero de apertura NA poder de resolucin y habilidad del
objetivo para recolectar la luz y distinguir objetos en estrecha
proximidad uno de otro.
Numero de Longitud: distancia del ocular hasta el
objetivo

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MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO
PTICO
Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de
empleo y bajar la platina completamente.
Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las
pinzas metlicas.
Comenzar la observacin con el objetivo de 10 aumentos
(10x).

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 Para pasar al siguiente objetivo.

La imagen debera estar ya casi enfocada y suele ser

suficiente con mover un poco el micromtrico para
lograr el enfoque fino.
Si al cambiar de objetivo se perdi por completo la
imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo
anterior y repetir la operacin desde el paso 3.
El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la
preparacin y por ello es fcil que ocurran dos tipos de
percances: incrustarlo en la preparacin si se descuidan
las precauciones anteriores y mancharlo con aceite de
inmersin, si se observa una preparacin que ya se
enfoc con el objetivo de inmersin.

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Empleo del objetivo de inmersin:
Bajar totalmente la platina.
Subir totalmente el condensador para ver claramente el crculo
de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde
habr que echar el aceite.
Girar el revlver hacia el objetivo de inmersin dejndolo a
medio camino entre ste y el de x40.
Colocar una gota mnima de aceite de inmersin sobre el
crculo de luz.
Terminar de girar suavemente el revlver hasta la posicin del
objetivo de inmersin.
Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente
hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se
nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.

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 Enfocar cuidadosamente con el micromtrico. La distancia de
trabajo entre el objetivo de inmersin y la preparacin es
mnima, aun menor que con el de 40x.
Una vez se haya puesto aceite de inmersin sobre la
preparacin, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x . Por
tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y
repetir la operacin desde el paso 3.

Una vez finalizada la observacin de la preparacin se baja la

platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el
revlver.
En este momento ya se puede retirar la preparacin de la
platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersin en
posicin de observacin.
Limpiar el objetivo de inmersin con cuidado empleando un
papel especial para ptica. Comprobar tambin que el objetivo
40x est perfectamente limpio.
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MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de
menor aumento en posicin de observacin .
Cuando no se est utilizando el microscopio, hay que
mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien
y daen las lentes.
Nunca debe tocar los lentes con las manos.
Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de
filtro o, mejor, con un papel de ptica.
No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se
est utilizando el microscopio.
Despus de utilizar el objetivo de inmersin, hay que
limpiar el aceite que queda en el objetivo con pauelos
especiales para ptica.

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 Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay
que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o
con xilol.
No abusar de este tipo de limpieza, si se aplican estos
disolventes en exceso se pueden daar las lentes y su sujecin.
No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio
El cambio de objetivo se hace girando el revlver y
dirigiendo siempre la Mirada a la preparacin para
prevenir el roce de la lente con la muestra.
Mantener seca y limpia la platina del microscopio.
Es conveniente limpiar y revisar siempre los
microscopios al finalizar la sesin prctica .
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 Laboratorio 1
Practica de confeccin de FSP
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Profesora. Miriam C. de Gete
 Confeccin y Tincin de Frotis
Realizar 2 diferenciales de pacientes con
leucocitos Normales
Contar Leucocitos
Contar Plaquetas
 Leucocito Objetivo 10 x
Contar de 3 a 5 campos en el rea ideal
Dividir entre 5 - Constante
Multiplicar x 200
Ejemplo: conto 500 leucocitos
Leucocitos = 500 x 200
5
 Con el Objetivo de 100X
Contar de 5 a 10 campos en el rea ideal.
Sacar un valor promedio
Y Multiplicar por 20,000
Una plaqueta en FSP equivale a 20,000
Ejemplo: conto 100 plaquetas : 10 = 10
Multiplico 10 x 20,000= 200,000 mm3
 ROJOS
 A) Granulocitos o Polimorfonucleares:
- Neutrfilos : con granulaciones de color
salmn, ncleo 2 a 5 lbulos
- Eosinfilos : con granulaciones
abundantes teidas en naranja, con ncleo
bilobulado.
- Basfilos: con granulaciones violetas que
eclipsan al ncleo bilobulado o en trebol.

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Hematologia Clnica
 Los Neutrfilo son importantes para la
defensa del organismo de bacterias
Lbulos - Cromatina Citoplasma -
Grnulos

Profesora Miriam C. de Gete -

Hematologia Clnica
 Eosinfilos: Lbulos Cromatina - Citoplasma
Tienen actividad fagoctica
Papel muy importante en las parasitosis con sus
grnulos degradan las larvas para que puedan
ser ingeridas por los Neutrfilo y los
macrfagos.
El Eosinfilo modula y regula las reacciones
alrgicas.

Profesora Miriam C. de Gete -

Hematologia Clnica
 Basfilo: Lbulos _ Cromatina - Citoplasma
Poseen grnulos de heparina e histamina;
sustancias que son mediadores qumicos que
modulan la inflamacin.
Tienen funcin en los estados alrgicos en la
hipersensibilidad retardada.

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Hematologia Clnica
 - Linfocitos : con un solo ncleo que ocupa
casi toda la clula de manera que solo se
observa un pequeo anillo de citoplasma.
- Monocitos : son los de mayor tamao y poco
frecuentes, ncleo bilobulado y excntrico,
son los ms mviles y su funcin principal es
la fagocitosis. (densa)

Profesora Miriam C. de Gete -

Hematologia Clnica
 El linfocito bajo ciertos estmulos qumicos
endgenos puede dividirse y crear muchas
clulas hijas para defender al cuerpo liberando
anticuerpos

Profesora Miriam C. de Gete -

Hematologia Clnica
 Los Monocitos son clulas fagocticas con gran
capacidad bactericida. Ante estmulos de
sustancias qumicas siguen a los neutrfilos en
la reaccin inflamatoria.

Profesora Miriam C. de Gete - Hematologia

Clnica
 Porque se llaman ?
Neutrfilos porque no se tien con colorantes
cidos ni bsicos, por lo que su citoplasma se
observa rosa suave
se colorean con tintes neutros o casi no
adquieren el colorante
Basfilo: a cualquier clula que se tie
fcilmente con colorantes BSICOS
Eosinfilo ;muestran una importante
coloracin rojiza (Eosinofilia).

Profesora Miriam C. de Gete -

Hematologia Clnica
 Son fragmentos de citoplasma celular de 2 a
3 um de dimetro.
Son irregulares, lanceoladas, sin ncleo ni
otros organelos. ,
Viven de 7 a 10 das.
Se relaciona con los procesos de coagulacin
sangunea.
En el hemograma se cuantifica el nmero de
plaquetas y el volumen plaquetario medio
(VPM).
El VPM proporciona informacin sobre el
tamao de las plaquetas.
 De 150.000 a 400.000/mm3
Despus de los eritrocitos son los
elementos celulares ms abundantes de la
sangre
Desde hace ya bastante se consideran
formadas en le mdula sea, pero al
parecer el bazo "participa" en su
liberacin.

Profesora Miriam C. de Guete

Patologia Clinica
 Puede desencadenarse por 3 mecanismos:
1. Disminucin de la produccin de plaquetas
o produccin de plaquetas anmalas.
2. Acumulacin excesiva de plaquetas en el
bazo
3. Disminucin de la supervivencia de las
plaquetas
????
 La residencia a gran altitud puede
aumentar los niveles de plaquetas.
El ejercicio muy intenso puede aumentar el
nmero de plaquetas.
Radioterapia

Profesora: Miriam C. de Gete

Fisiopatologa
 Puede definirse como un recuento
plaquetario por encima de las 450.000
plaquetas/microL.
Generalmente asintomtico sobre todo
cuando es secundaria a una reaccin.
Predispone a una trombosis en algunos
pacientes.
 El primer paso al valorar este dato de
laboratorio es diferenciar entre una
Trombocitosis Reactiva y Autnoma
La Trombocitosis reactiva: es mucho ms
frecuente y sus causas son varias: infecciones,
postesplenectoma, malignidad, trauma,
inflamatoria, prdidas sanguneas,
trombocitosis idioptica.
Trombocitosis autnoma: Los pacientes con
leucemia mieloide crnica, metaplasia
mieloide, Policitemia vera, sndrome
mielodisplsico o leucemia mieloide aguda
pueden presentarse ocasionalmente con
Trombocitosis como rasgo importante.
As todos los pacientes en los que no se ha
podido identificar un fenmeno reactivo
requieren un examen de mdula sea.
Trombocitosis Esencial: ???

Profesora: Miriam C. de Gete

Fisiopatologa
 Mide qu tan rpido detienen el sangrado los
vasos sanguneos pequeos en la piel.
Sirve para evaluar la integridad de
los vasos, plaquetas y la formacin del coagulo.
El sangrado normalmente se detiene entre 1 y 9
minutos.
Mtodo de Ivy
Incisin mide 10 mm de largo y 1 mm de
profundidad, en la piel del antebrazo o el lbulo
auricular.
Se considera normal un tiempo de sangra de
alrededor de 3 a 11 minutos.
Posee baja sensibilidad y especificidad
 En el mtodo de Duke, se pincha al paciente
con una aguja especial o lanceta,
preferentemente en el lbulo auricular o la
yema de los dedos .
La puncin es de 3-4 mm de profundidad.
El paciente limpia la sangre con un papel de
filtro cada 30 segundos.
El test termina cuando cesa la hemorragia.
El tiempo usual es de entre 2 y 5 minutos.
 El tiempo de sangra ms prolongado de lo
normal puede deberse a:
Anomalas vasculares
Defectos de Agregacin Plaquetaria
Trombocitopenia (bajo conteo de plaquetas)
Tambin se afecta en algunas enfermedades
en donde hay problemas con las plaquetas.
En la clnica, no se utiliza como examen de
diagnstico, pero s como una buena
herramienta de orientacin diagnstica.
Solo evala la hemostasia primaria.

Profesora Miriam C. de Gete -
Hematologia Clnica
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Hematologia Clnica
Profesora Miriam C. de Gete -
Hematologia Clnica
1. Enfermedad de Von Willebrand
2. Enfermedad de Glanznmann
3. Sindrome de Bernard Solier
4. Trombocitemia Esencial
 Tincin de Frotis
Realizar 2 diferenciales de pacientes con
leucocitos Normales
Contar Leucocitos
Contar Plaquetas


Profesora MIriam C. de Gete -

Lab. de Hematologa