BIOSINTESIS PROTEIN KAYA BIOMASSA DARI LIMBAH PERTANIAN DENGAN

ISOLASI Candida utilis PCSIR-1 BARU

Sebuah kultur ragi diisolasi dari sampel tanah organik busuk. Strain diidentifikasi dengan
pemeriksaan mikroskopis dan ditunjuk sebagai Candia utilis PCSIR-1. Biomassa protein kaya
Candida utilis dihasilkan dari limbah pertanian dengan menggunakan proses fermentasi
terendam goyang labu (shake flake). Kondisi kultur yang berbeda seperti efek dari sumber
nitrogen yang berbeda, masa inkubasi, pH media pertumbuhan, suhu inkubasi dan inokulum
ukuran dioptimalkan untuk meningkatkan hasil protein biomassa kaya. Maksimum hasil
biomassa (9,15 g / L) diperoleh setelah 96 jam inkubasi pada 30 oC dengan 5% dari ukuran
inokulum (v / v). Di antara sumber nitrogen yang berbeda, pepton terpilih sumber nitrogen cocok
untuk pertumbuhan optimal Candida utilis. Namun, 53% isi protein kasar diperkirakan dalam
biomassa sel kering Candida utilis yang menunjukkan pemanfaatan potensi dalam pakan ternak
sebagai sumber protein murah.

Orang-orang dari negara-negara dunia ketiga telah menderita masalah gizi buruk karena
tingkat yang mengkhawatirkan pertumbuhan penduduk. Kondisi ini telah mengembangkan
permintaan untuk alternatif dan sumber protein murah untuk meningkatkan kekurangan protein.
Protein yang diperoleh dari biomassa mikroba yang dikenal sebagai protein tunggal (SCP). Ini
adalah sumber protein yang murah digunakan sebagai pakan ternak untuk pertumbuhan yang
lebih baik dari hewan yang dapat memainkan peran penting untuk mengatasi kekurangan protein
(Ravindra dan Anupama 2000, Rajoka et al. 2004). Fermentasi terendam/submerged
fermentation digunakan untuk produksi protein sel tunggal karena dalam kultur terendam
ekspeksi produksi protein lebih tinggi dari produk yang diperoleh dalam kultur solid state,
menggunakan komposisi media kultur identik (Aguilar et al. 2002). Candida utilis telah banyak
digunakan untuk produksi protein sel tunggal dan berlaku sebagai saham pakan ternak (Bhalla
dan Joshi 1994, Rahmat et al. 1995, Joshi et al. 2000). Hal ini dapat mengkonsumsi beberapa
jenis substrat termasuk rice polish/cat padi, dedak gandum dan menghasilkan banyak produk
industri baik untuk manfaat manusia dan hewan (Christen et al 1993;. Kondo et al 1997;.
Pacheco et al 1997;.. Haddadin et al, 1999).
Tujuan dari penelitian ini adalah produksi asli biomassa Candida utilis dengan
menggunakan by product/limbah/hasil samping pertanian di bawah pengaruh parameter proses
yang berbeda seperti masa inkubasi, pH medium pertumbuhan, ukuran inokulum dan sumber
nitrogen.
Substrat
polish beras dihilangkan lemaknya diperoleh dari pasar lokal dan digunakan untuk budidaya
Ragi dalam proses fermentasi terendam. Hampir 50g polish beras lemaknya diendapkan dalam
1L air suling dan diautoklaf pada 121oC selama 20 menit. Setelah pendinginan pada suhu kamar,
ekstrak polish beras diperoleh setelah penyaringan dengan kain muslin. Ekstrak disimpan pada
suhu 4oC untuk pemanfaatan dalam percobaan berikutnya.
Isolasi dan skrining khamir
Sebuah sampel tanah diambil dari habitat lokal yang mengandung zat organik yang membusuk di
dalam tas polietilena. Sekitar 1 g sampel tanah itu larut dalam 100mL air suling steril dalam 250
ml labu berbentuk kerucut dan diaduk di 30oC selama 15 menit dalam water bath shaker (Eyela,
Jepang). Satu suspensi tanah mL kemudian dipindahkan ke 9 ml air suling steril dalam tabung uji
untuk membuat serial pengenceran hingga 10-4 mL. Satu mL masing-masing pengenceran
dituangkan ke dalam berbagai disterilkan piring petri dan kemudian menambahkan 20-25 mL
potato dextrose agar media (Oxoid) dalam bentuk cair (45 1oC) ke masing-masing piring petri
dalam kondisi mensterilkan. Setelah pencampuran yang tepat dan pendinginan pada suhu kamar,
piring petri kemudian diinkubasi pada 30oC selama 72 jam dan koloni dengan morfologi seperti
khamir diambil di miring dan kemudian diskrining pada potato dextrose piring agar petri
berdasarkan pertumbuhan yang cepat mereka.
Identifikasi Khamir
Kultur khamir terpilih diidentifikasi melalui prosedur pemeriksaan mikroskopis seperti yang
dijelaskan oleh Berry et al. (1987). Kultur diidentifikasi ditumbuhkan pada PDA miring di 30oC
selama 96 jam dan kemudian dipelihara pada medium agar dekstrosa kentang di 4C .
Optimasi parameter Kultur-n yang berbeda
Metodologi fermentasi
1. persiapan inokulum
Inokulum dibuat dengan mentransfer loop penuh kultur utilis Candida dari potato
dextrose agar (PDA) miring ke 50 ml steril potato dextrose broth (PDB) dalam 250 ml
labu Erlenmeyer. Kaldu diinokulasi diinkubasi pada 30 C suhu dengan kecepatan
pengadukan 120 rpm di air mandi pengocok (Eyela, Jepang) selama 96 jam. PH medium
inokulum disesuaikan sebesar 5,5 dengan 1N HCl / NaOH sebelum sterilisasi pada
121oC selama 15 menit dalam autoklaf.
2. Komposisi media tumbuh
Untuk mempersiapkan media pertumbuhan, 100 mL beras lemaknya ekstrak polish
diubah/diperbaiki dengan garam anorganik yaitu. K2HPO4 (0,25%), KCl (0,05%),
CaCl2. 2H2O (0,025%) dan MgSO4.7H2O (0,0025%) untuk memberikan ion logam
diperlukan untuk pertumbuhan utilis Candida. PH medium diatur pada 5,5 dengan 1NHCl
/ NaOH sebelum sterilisasi.
1. sumber nitrogen
Berbagai organik seperti pepton, Jagung minuman keras curam (CSL) Lab LAMCO
bubuk, ekstrak daging, ekstrak ragi dan urea yang bekerja di media pertumbuhan
untuk menyelidiki efek mereka pada biomassa dari Candida utilis PCSIR-1 lebih
kontrol (tanpa nitrogen organik eksternal sumber). Demikian pula, efek dari sumber
nitrogen anorganik yang berbeda NH4NO3, (NH4) 2SO4, NH4H2PO2, NH4Cl dan
NH4HCO3 juga dipelajari. Setiap sumber nitrogen (organik & anorganik) digunakan
sebagai konsentrasi 0,4% (w / v) di atas kontrol.
2. Pengaruh masa inkubasi
Pengaruh masa inkubasi yang berbeda dipelajari dengan menginkubasi media
pertumbuhan untuk jangka waktu yang berbeda (48, 72, 96, 120 dan 144 h).
 Biomassa sel diperkirakan setelah setiap durasi tertentu untuk mengamati masa
inkubasi cocok untuk pertumbuhan utilis Candida.
3. Pengaruh Nilai pH awal
nilai pH optimum untuk hasil maksimal biomassa ditentukan dengan menyesuaikan
pH awal medium pertumbuhan pada tingkat pH yang berbeda (4, 5, 6, 7 dan 8). PH
media pertumbuhan telah disesuaikan dengan 1NHCL / NaOH sebelum sterilisasi
pada 121 oC selama 15 menit. Semua percobaan ini dilakukan di tiga ulangan pada
sumber nitrogen pra-dioptimalkan dan masa inkubasi.
4. Pengaruh suhu budidaya
Pengaruh berbagai suhu inkubasi (20, 25, 30, 35 dan 40 oC) terhadap pertumbuhan
Candida utilis dipelajari dengan menginkubasi media pertumbuhan pada suhu
pertumbuhan yang berbeda. Biomassa sel diperkirakan pada setiap suhu.
5. Pengaruh ukuran inokulum
berbagai ukuran inokulum mulai dari 3% sampai 8% (v / v) dievaluasi pada kondisi
pra-dioptimalkan untuk hasil maksimal biomassa sel. Semua percobaan ini dilakukan
dalam rangkap tiga dengan mengubah parameter individu pada suatu waktu dan
menggabungkannya sebagai tingkat standar sebelum mengoptimalkan parameter
berikutnya.
Metode analitis
estimasi biomassa sel
Biomassa sel diperkirakan dengan mensentrifugasi Volume diketahui dari kaldu fermentasi pada
10.000 rpm selama 15 menit pada 10 C. Setelah sentrifugasi, biomassa sel dikumpulkan dalam
bentuk pelet dan dikeringkan pada 100oC dalam oven sampai berat konstan diperoleh.
estimasi protein
Isi total nitrogen dan protein diperkirakan dalam biomassa sel dikeringkan dengan metode
Kjeldhal seperti yang dijelaskan dalam (AOAC, 2005). Faktor 6,25 digunakan untuk
mengkonversi nitrogen ke dalam isi protein.
Hasil dan Diskusi
Hasil yang paling signifikan dari penelitian ini adalah optimasi berbagai kondisi budaya untuk
hasil maksimal biomassa sel Candida utilis PCSIR-1. Hal ini juga faktor yang optimasi yang
tepat dari kondisi budaya di tingkat skala laboratorium memainkan peran penting dalam
meningkatkan hasil serta pengurangan biaya produksi pada skala komersial dikenal. Beras
lemaknya ekstrak polish digunakan sebagai sumber karbon untuk pertumbuhan utilis Candida
1. Pengaruh sumber nitrogen
Efek dari sumber nitrogen yang berbeda (organik dan anorganik) dipelajari untuk menyelidiki
sumber nitrogen cocok untuk hasil maksimal biomassa sel. Diamati bahwa kedua sumber
nitrogen meningkatkan hasil biomassa sel di atas kontrol (tanpa sumber eksternal nitrogen).
Namun, biomassa sel maksimum (7.59g / L) diperoleh dengan pepton (sumber nitrogen organik)
 diikuti oleh lab LAMCO bubuk

Di antara berbagai sumber nitrogen anorganik, hasil maksimum (5.78g / L) diamati dengan
NH4Cl diikuti oleh NH4H2PO4 (Gambar 2).

Hasilnya juga didukung oleh Anupama dan Ravindra (2001) yang mengamati bahwa
penambahan nitrogen meningkatkan produksi organisme dan karenanya peningkatan biomassa
yang dipotong. Rajoka et al. (2004) juga menggunakan sumber nitrogen organik untuk produksi
protein sel tunggal dengan menggunakan Candida utilis. Semua temuan ini menunjukkan bahwa
media ditambah sesuai memberi hasil lebih dari biomassa daripada media un-ditambah.
Pengaruh masa inkubasi
Dalam rangka untuk menentukan waktu inkubasi optimum, media pertumbuhan diinokulasi
diinkubasi pada 30 oC untuk panjang waktu yang berbeda. hasil maksimum biomassa diperoleh
setelah 96 jam inkubasi (Gambar 3).
Ada setelah, penurunan produksi biomassa diamati yang mungkin disebabkan karena penurunan
bahan dalam media pertumbuhan seiring dengan waktu fermentasi. Lubna et al. (2004)
mengamati biomassa sel maksimum Aspergillus niger setelah 120 jam inkubasi sedangkan Khan
et al. (1992) menyelidiki hasil maksimum protein sel tunggal oleh Penicillium javanicum setelah
144 jam inkubasi. Ini sedikit variasi di antara semua temuan ini mungkin ada karena perbedaan
mikroorganisme serta komposisi media.
Pengaruh pH awal
Pengaruh pH awal medium pertumbuhan dipelajari untuk menemukan nilai pH yang cocok untuk
pertumbuhan maksimum Candida utilis PCSIR-1.
hasil tertinggi dari biomassa tercatat awal pH 6 dan peningkatan lebih lanjut dalam pH menurun
hasil biomassa sel (Gambar 4).
Semua temuan ini menunjukkan bahwa pertumbuhan Candida utilis yang ketat untuk mengubah
pH awal medium pertumbuhan. Anupama dan Ravindra (2001) menemukan bahwa hasil
maksimum biomassa dari Aspergillus niger diperoleh saat pH diatur pada 10.
Hasil kami didukung oleh Lubna et al (2004) yang mengamati hasil maksimum biomassa pada
pH 5 dari medium pertumbuhan.
Pengaruh suhu kultur
Suhu merupakan salah satu parameter penting yang harus kontrol dalam proses fermentasi untuk
meningkatkan pertumbuhan mikroba.
Pengaruh suhu inkubasi yang berbeda mulai dari 20oC ke 40oC dipelajari untuk menemukan
yang terbaik suhu fermentasi untuk pertumbuhan maksimum Candida utilis PCSIR-1
biomassa sel maksimum hasil (9,15 g / L) diamati pada 30oC dan perubahan lebih lanjut dalam
suhu ditemukan untuk mengurangi yield biomassa sel (Gambar 5). Hasil ini menunjukkan bahwa
perubahan suhu di luar nilai dioptimalkan tidak cocok untuk pertumbuhan utilis Candida. Hasil
ini benar-benar didukung oleh Oshoma dan Ikenebomeh (2005) yang diproduksi sel biomassa
dari dedak padi di 28 2 oC. Temuan serupa juga diamati oleh khan et al (1992) dan Lubna et al
(2004).
 Namun, Penurunan biomassa sel tercatat dengan ukuran inokulum yang lebih tinggi.
Dengan konsentrasi yang lebih tinggi dari inokulum, nutrisi dalam media pertumbuhan mungkin
dikonsumsi lebih cepat dan efek keseluruhan yang mengakibatkan pengurangan hasil biomassa
sel. berbagai ukuran inokulum yang digunakan untuk budidaya mikroba untuk menghasilkan
protein sel tunggal melalui proses fermentasi oleh beberapa penelitian (Tobajas dan Garcia-Calvo
1999, Villas-Boas et al, 2002). Diamati bahwa ukuran inokulum memiliki efek mendalam pada
pertumbuhan mikroorganisme selama proses fermentasi.
Isi protein kasar biomassa sel kering
Hampir 53% isinya protein kasar diperkirakan dalam biomassa sel kering dari Candida
utilis PCSIR-1 dengan metode Kjeldhal. Martin et al (1993) yang dihasilkan biomassa sel utilis
Candida dengan kandungan protein dari 520 g / Kg. Choi et al (2002) melaporkan 43% dan 46%
kandungan protein dalam biomassa sel Candida utilis KCCM11355 ditumbuhkan dalam medium
jus kubis (CJM) dan YM20 masing-masing. Namun, isi protein dalam biomassa sel kering dari
Candida utilis PCSIR-1 menunjukkan pemanfaatan potensi dalam pakan ternak sebagai
pengganti sumber protein tradisional lainnya.
Kesimpulan
Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa hasil yang lebih tinggi dari biomassa sel tunggal
Candida utilis diperoleh dari ekstrak polish beras lemaknya setelah suplementasi dengan sumber
nitrogen organik terutama pepton pada konsentrasi 0,4%. Namun, parameter proses lain seperti
masa inkubasi, pH awal, suhu inkubasi dan inokulum ukuran memiliki efek mendalam pada
pertumbuhan Candida uilis PCSIR-1. Isi protein biomassa sel kering (53%) menunjukkan bahwa
biomassa sel utlis Candida dihasilkan dari hasil samping pertanian dapat secara efektif digunakan
sebagai sumber lebih murah dari protein dalam pakan ternak.