Analisis kuantitatif dilakukan dengan menghasilkan fungsi kalibrasi dari C t diperoleh oleh real-

time PCR DNA dilarutkan dalam air serial (500-0,05 ng) terisolasi dari sampel sel bantalan SNPs.
Simultaneously, allele-specific target DNA (SNP) and DNA encoding the non polymorphic albumin
sequence are amplified. Secara bersamaan, alel DNA target yang spesifik (SNP) dan pengkodean
DNA polimorfik albumin non urutan yang diperkuat. The calibration functions are Fungsi-fungsi
kalibrasi

in which a is the slope of the curve and b is the intercept with the y -axis. di mana a adalah
kemiringan kurva dan b adalah intersep dengan sumbu-y.
The percentage of recipient or donor target cells, is calculated by the following formula: Persentase
sasaran penerima atau donor sel, dihitung dengan rumus berikut:

where di mana
y 1 is the C t sample, amplified by allele-specific SNP-PCR, y 1 adalah C t sampel, diperkuat oleh
alel-SNP spesifik-PCR,
y 2 is the C t sample, amplified by albumin PCR, b 1 is the intercept with the y -axis of allele-
specific SNP-PCR calibration curve, y 2 adalah C t sampel, diperkuat oleh albumin PCR, b 1 adalah
sumbu dengan sumbu y-alel-SNP-PCR spesifik kurva kalibrasi,
b 2 is the intercept with the y -axis of albumin PCR calibration curve, a 1 is the slope of the curve of
allele-specific SNP-PCR calibration curve, and b 2 adalah sumbu dengan sumbu y albumin kurva
kalibrasi PCR, sebuah 1 adalah kemiringan kurva alel-SNP-PCR spesifik kurva kalibrasi, dan
a 2 is the slope of the curve of albumin PCR calibration curve. a 2 adalah kemiringan kurva
kalibrasi PCR albumin kurva.
The slope of all calibration curves is 3.3 ( Kemiringan dari semua kurva kalibrasi adalah -3,3 (
0.2). 0,2). The detection limit for each individual sample is dependent on the C t of albumin PCR ( y
2 ) and the intercept with the y -axis of allele-specific SNP-PCR ( b 1 ) and the amount of template
DNA: the intercept with the y -axis of albumin PCR ( b 2 ). Table 1 shows the detection limits for
all SNP-PCR using a cut-off level at C t >35 cycles. Batas deteksi untuk setiap sampel tergantung
pada t C albumin PCR (y 2) dan sumbu dengan sumbu y-spesifik alel SNP-PCR (b 1) dan jumlah
DNA template: yang mencegat dengan sumbu y albumin PCR (b 2). Tabel 1 menunjukkan batas-
batas deteksi untuk semua SNP-PCR menggunakan tingkat cut-off di C t> 35 siklus.
Kami termasuk tingkat cut-off di c t 35 karena kami mengamati bahwa kurva kalibrasi tidak selalu
linier ketika jumlah yang sangat rendah DNA target yang diamplifikasi. This results in a sensitivity
of Hal ini menghasilkan sensitivitas 0.01% when the signal of SNP-positive DNA (100%)
reaches the threshold 0,01% ketika sinyal SNP-DNA positif (100%) mencapai ambang 23 cycles
and the background amplification of the negative allele reaches threshold after 35 cycles ( 23 siklus
dan amplifikasi latar belakang alel negatif mencapai ambang batas setelah 35 siklus ( C t =12). C t
= 12). This is reached by an input of about 500 ng DNA. Hal ini dicapai melalui masukan dari
sekitar 500 ng DNA. Roughly, Kasar, C t of three cycles represents a 10-fold quantitative
difference, fulfilling the condition that the slope of the calibration function closely fits 3.3. C t dari
tiga siklus mewakili 10 kali lipat perbedaan kuantitatif, memenuhi syarat bahwa kemiringan fungsi
kalibrasi cocok -3,3 erat. Therefore, using smaller amounts of input DNA, eg 50 ng, will decrease
the sensitivity to Oleh karena itu, dengan menggunakan input jumlah kecil DNA, misalnya 50 ng,
akan mengurangi kepekaan 0.1%. 0,1%. In contrast, higher amounts of input DNA will result in
higher sensitivity for all SNP-PCR that show low background amplification. Sebaliknya, jumlah
yang lebih tinggi masukan DNA akan menghasilkan sensitivitas yang lebih tinggi untuk semua
SNP-PCR yang menunjukkan latar belakang rendah amplifikasi.

http://www.nature.com/leu/journal/v17/n3/full/2402857a.html