PRCTICA 1

ANLISIS CUALITATIVO DE CARBOHIDRATOS

OBJETIVO GENERAL

Conocer y practicar un grupo de pruebas clsicas de identificacin cuantitativa de carbohidratos. Las pruebas de Antrona, Barfoed, Bial,
Difenilamina, Fermentabilidad, Lugol, Molisch, Seliwanoff y Somogyi-Nelson; se aplicarn a una batera de carbohidratos, que incluye,
almidn, 2-desoxirribosa, fructosa, galactosa, glucgeno, glucosa, lactosa, ribosa, sacarosa y xilosa.

Objetivos conductuales

Durante la sesin prctica el estudiante deber:

Practicar cada una de las pruebas cualitativas en carbohidratos representativos, tales como, aldopentosas, aldohexosas, cetohexosas,
disacridos no reductores y reductores y polisacridos.
Observar y registrar los resultados de aplicar cada prueba a cada uno de los carbohidratos escogidos; poniendo atencin a manifestaciones
tales como cambios de color, precipitaciones, emisin de gases y otros y los tiempos e intensidad con que se dan dichas manifestaciones.
Posteriormente la sesin prctica el estudiante deber ser capaz de:
Describir el resultado de cada prueba para cada carbohidrato ensayado.
Explicar con ecuaciones lo sucedido en cada prueba positiva.

MARCO TERICO

Existen diversas reacciones que pueden sufrir los azcares y que permiten su identificacin, interconversin y modificacin a derivados.
Estas son muy variadas y no es el objetivo de esta prctica el discutirlos todos.
Por lo tanto, se discutir las reacciones que van a ser ensayadas en el laboratorio.

Reacciones con cidos

Los monosacridos se deshidratan en presencia de cido fuertes, sin o con calentamiento, produciendo furfural o sus derivados.
La ribosa produce furfural.

CHO
H H 3 H2O
HCOH
HO C C OH
H+
HCOH
H2C HC CHO CHO
HCOH OH
OH O
CH2OH furfural

D-ribosa

Las hexosas se deshidratan en presencia de cido fuertes, sin o con calentamiento, produciendo hidroximetilfurfural.

C O
H H
3 H2O
HCOH
H+ HOCCOH
HOCH

HCH
CCHO
HOH2C CHO
HCOH
HOH2C OH O
OH
HCOH Hidroximetilfurfural
CH2OH

Dglucosa

 H2O

H2SO4 conc

El furfural o sus derivados, como el hidroximetilfurfural derivado de las hexosas, reaccionan con diferentes fenoles para dar productos
coloreados de condensacin que permiten identificar los diferentes grupos de sacridos.
A continuacin, discutiremos algunas de esas pruebas.
La Prueba de Molisch [Foulger, 1931; Keusch, 2003] es una prueba cualitativa general para carbohidratos que da positiva cuando hay
presencia de cualquier mono y oligosacrido y compuestos ms complejos que los contienen.
En esta prueba, primero se mezcla la disolucin acuosa conteniendo el azcar con una solucin etanlica conteniendo -naftol.
Luego, se agrega cido sulfrico concentrado de manera que no se mezcle, sino que se formen dos fases.
Dada la alta concentracin de cido que hay en la interfase, la reaccin de hidrlisis y deshidratacin se ve favorecida. Sin embargo,
cuando se tienen concentraciones altas de azcares puede haber carbonizacin en la interfase.
En realidad, se pueden presentar tres procesos qumicos:
hidrlisis de los oligosacridos menores y otros biocompuestos con glicsidos hidrolizables a sus monosacridos por accin
del cido sulfrico concentrado;
deshidratacin de los monosacridos en presencia de cido sulfrico concentrado para formar furfural o hidroximetilfurfural;
y
reaccin de condensacin del furfural o de hidroximetilfurfural (producidos por la deshidratacin del monosacrido) con
naftol para dar un producto rojo violceo.
Se ha encontrado que se puede llevar a cabo una reaccin similar si se mezclan 0,5 mL de la solucin de azcar con 5,0 mL de cido
sulfrico al 75%; se agregan a la mezcla 3 gotas de naftol al 3% en etanol al 95% y, una vez mezclados, se calienta la mezcla a
80C. [Foulger, 1931]
Normalmente, la reaccin se representa como una condensacin doble en la que se produce un colorante de furfuril-dinaftil-metano,
con condensacin en el carbono 4 del -naftol. [Mendez, 2003]

2
 OH
2 H2SO4

HO3S SO3H
OH
2 HOH3C OH
furfuril-dinaftil-metano disulfonado

naftol

Sin embargo, hay autores que sugieren que la condensacin ocurre en el carbono cinco y hay una sulfonacin doble de uno de los
naftoles. [Waters, 1949].

3
 O

H2SO4

+ R C
H

antrona 10-furfur
La Prueba de Antrona, que consiste en mezclar la solucin o suspensin (en caso de azcares insolubles) del azcar con una solucin
de antrona en cido sulfrico [Ashwell, 1957]. Normalmente se postula que el colorante formado con hexosas es una 10-
[hidroximetil]furfurilidenantrona, en el caso de hexosas, que presenta un color verde-azulado. Sin embargo, se han encontrado
productos donde tres antronas se unen al anillo [Momose, 1957].

La Prueba de Bial utiliza una solucin de orcinol en cido clorhdrico concentrado y en presencia de iones frricos como cataltico y
aunque se considera positiva con un color verde-azulado caracterstico; algunos azcares dan otros colores, como caf rojizo. [Pham,
2011].
La Prueba de Seliwanoff es otra que sirve para el estudio de carbohidratos. Esta se basa en que, en el medio dado por el reactivo y a
la temperatura de ensayo, las cetosas se deshidratan, para formar el derivado del furfural que reacciona con el resorcinol, ms rpido
que las aldosas [Quesada, 2007].
Otra reaccin que ocurre en medio cido es la de la Prueba de Difenilamina para desoxiazcares y que es usada para el anlisis de
ADN (cido desoxirribonucleico) [Stumpf, 1947].
En esta, la 2-desoxirribosa se deshidrata para formar el 2,5 dioxopentanol.

Entonces dos 2,5 dioxopentanoles reaccionan para formar el cido -hidroxilevulnico.

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Finalmente, el cido -hidroxilevulnico reacciona con cuatro difenilaminas para dar el complejo coloreado [Baboo, 2016].

Oxidacin y Reduccin de Monosacridos

Los monosacridos pueden oxidarse a diferentes derivados. La oxidacin suave de las aldosas, por ejemplo, usando bromo en agua,
produce los cidos aldnicos y la oxidacin posterior, ms fuerte, usando cido ntrico, lleva a los cidos aldricos.
La Prueba de Barfoed usa acetato cprico en cido actico y lleva la mezcla a ebullicin. El azcar se oxida al cido a la vez que se
H
CO2H CO2H
C O
HCOH HCOH
HCOH
Br2 HOCH HNO3 HOCH
HOCH
H2O HCOH HCOH
HCOH
HCOH HCOH
HCOH
CH2OH CO2H
CH2OH
cido Dglucnico cido Dglucrico
Dglucosa

reduce el cobre II a cobre I, que precipita como xido rojizo.
RCHO + 2Cu+2 + 2H2O RCOOH + Cu2O + 4H+
Mientras que la sacarosa no reacciona, pues los carbonos anomricos estn formando el enlace glicosdico, los monosacridos
reductores (como glucosa, galactosa, ribosa y xilosa) dan el precipitado rojo ladrillo luego de 5 a 7 minutos de ebullicin y los
disacridos reductores (como la lactosa y la maltosa) dan el precipitado luego de hervir por 7 a 10 minutos [Harper, 1963].
Otra reaccin de oxidacin-reduccin usada es la Prueba de Somogyi-Nelson [Nelson, 1944; Somogyi, 1945; Somogyi, 1952]. En
dicha prueba, primero se hace reaccionar el Reactivo de Somogyi, que contiene iones Cu+2, con el azcar para formar el precipitado
rojo ladrillo de xido cuproso. Luego, el xido cuproso se hace reaccionar con el Reactivo de Nelson, que contiene arsenomolibdato,
para formar el xido de molibdeno o azul de molibdeno [Fermentec, 2012].

Reaccin con Yodo:

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La solucin acidificada de ciertos polisacridos que se trata con una solucin de yodo y yoduro de potasio dar una coloracin azul o
rojiza, dependiendo del polisacrido. Este color se produce por la inclusin del triyoduro en la estructura helicoidal del polisacrido

[Ophardt, 2003].
Finalmente, se har una Prueba de Fermentabilidad de los diferentes azcares con levadura de cerveza (o levadura para pan) la cual
es una prueba clsica que permite diferenciar entre los azcares por el tiempo en que se inicia la fermentacin y la facilidad con que
son fermentados (grado de produccin de CO2) [Harper,1963].

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MATERIALES Y REACTIVOS

Lista de Materiales
NOTA: Los EQUIPOS son de dos personas y los GRUPOS se estimaron con 8 equipos (16 personas).

MATERIALES POR EQUIPO POR GRUPO

Agitador tipo Vortex. 1 8
Bao pequeo para colocar beaker de 150 ml en agua con hielo 1 8
Bao mediano capaz de contener la gradilla para tubos de ensayo 1 8
Beaker de vidrio de 150 mL de capacidad 1 8
Bolas de vidrio para tapar los tubos de 16100 mm 20 160
Calentador elctrico de plato cermico o de metal 1 8
Gotero resistente a cidos concentrados 1 8
Gradilla para tubos de ensayo de 16100 mm capa de acomodar 15 tubos o ms 1 8
Pipeta Pasteur con punta larga y doblada 1 8
Tubos de ensayo de vidrio de 650 mm 12 96
Tubos de ensayo de vidrio de 16100 mm 20 160
Pipeta Pasteur con punta larga 1 8

Lista de Reactivos

MATERIAL POR EQUIPO POR GRUPO

cido sulfrico concentrado 20 mL 200 mL
Reactivo de Antrona 30 mL 300 mL
Reactivo de Barfoed 20 mL 200 mL
Reactivo de Bial 20 mL 200 mL
Reactivo de Difenilamina 20 mL 200 mL
Reactivo de Lugol 20 mL 200 mL
Reactivo de Molisch 2 mL 20 mL
Reactivo de Nelson 10 mL 100 mL
Reactivo de Seliwanoff 20 mL 100 mL
Reactivo de Somogy 10 mL 80 mL i
Solucin Amortiguadora 0.1M en Fosfatos pH 6.4-6.8 40 mL 400 mL
Solucin de Almidn 10 mg/mL 15 mL 125 mL
Solucin de 2-Desoxirribosa 10 mg/mL 15 mL 125 mL
Solucin de Fructosa 10 mg/mL 15 mL 125 mL
Solucin de Galactosa 10 mg/mL 15 mL 125 mL
Solucin de Glucgeno 10 mg/mL 15 mL 125 mL
Solucin de Glucosa 10 mg/mL 15 mL 125 mL
Solucin de Lactosa 10 mg/mL 15 mL 125 mL
Solucin de Ribosa 10 mg/mL 15 mL 125 mL
Solucin de Sacarosa 10 mg/mL 15 mL 125 mL
Solucin de Xilosa 10 mg/mL 15 mL 125 mL
Levadura seca de pan 8g 100 g

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Preparacin de los Reactivos
NOTA: La preparacin de los reactivos puede no seguir precisamente la de los documentos citados. En muchos
casos, se ha modificado el mtodo de preparacin con base en la experiencia previa.
cido sulfrico concentrado
PELIGRO: El cido sulfrico concentrado (H2SO4 95-97%) es corrosivo a los metales (Categora 1), altamente corrosivo a la
piel y a los ojos (categora 1A) causando quemaduras severas.

Reactivo de Antrona [Ashwell, 1957]

NOTA: Los mejores resultados se obtienen con el reactivo recin preparado y mantenido en un bao de agua con hielo. Sin
embargo, el reactivo se puede mantener de 7 a 8 das si se conserva entre 0 y 4C.
PELIGRO: El Reactivo de Antrona, por su alto contenido de cido sulfrico, es corrosivo a los metales (Categora 1), altamente
corrosivo a la piel y a los ojos (categora 1A) causando quemaduras severas.
En un beaker de 150 mL, coloque 100 mL de cido sulfrico concentrado.
PELIGRO: El cido sulfrico concentrado (H2SO4 95-97%) es corrosivo a los metales (Categora 1), altamente corrosivo a la
piel y a los ojos (categora 1A) causando quemaduras severas.
Agregue, lentamente, y con constante agitacin con varilla de vidrio, 200 mg de antrona; y se mantiene la agitacin
hasta disolverlos totalmente.
NOTA: La antrona [9(10H)-antracenona C14H10O) no est clasificada como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Coloque en un frasco de vidrio oscuro con gotero.
ALMACENAMIENTO: Si se prepar fresco para usar el mismo da, coloque el beaker con el reactivo en un bao de agua con
hielo (0C-4C). Si se va a usar en los prximos 7 a 8 das mantngase refrigerado a 0-4C.

Reactivo de Barfoed [Gate, 2011]

PELIGRO: El Reactivo de Barfoed presenta toxicidad oral aguda (categora 4), provoca irritacin cutnea (categora 2),
irritacin y lesin ocular grave (categora 2). Adems, es peligroso para los organismos acuticos, con efectos duraderos
(categora 2).
Disuelva 6.6 g de acetato de cobre monohidrato y 1.8 mL de cido actico glacial en 100 mL de agua destilada.
PELIGRO: El acetato de cobre monohidrato [Cu(CH 3COO)2H2O] es nocivo en caso de ingestin (toxicidad aguda categora 4),
provoca lesiones oculares graves (categora 1) y es muy txico para los organismos acuticos, con efectos nocivos duraderos
(categora 1).
PELIGRO: El cido actico glacial (CH3COOH 100%) es un liquido inflamable y genera vapores inflamables (categora 3),
corrosivo para metales (categora 1), provoca corrosin cutnea y lesiones oculares graves (categora 1A) e irritacin en las
vas respiratorias (categora 3). Sus vapores provocan tambin irritacin respiratoria. Su ingestin puede provocar
quemaduras graves.
PRECAUCIN: Se debe trabajar en la capilla por los vapores que libera el reactivo.
ENVASADO: Se debe guardar en frasco de vidrio con gotero.
ALMACENAMIENTO: Se puede almacenar a temperatura de laboratorio (15C-25C).

Reactivo de Bial [Gate, 2011]

PELIGRO: Por su alto contenido de cido clorhdrico concentrado (HCl concentrado el Reactivo de Bial es corrosivo para
metales (categora 1) y provoca irritacin cutnea (categora 2), irritacin ocular grave (categora 2) e irritacin en las vas
respiratorias (categora 3). Adems, en caso de ingestin, adems de provocar quemaduras (por el cido concentrado) pude
ser nocivo (por el orcinol).
Disuelva 0.3 g de orcinol en 90.0 mL de HCl concentrado.
PELIGRO: El orcinol (C7H8O2) es nocivo en caso de ingestin (toxicidad aguda categora 4), provoca irritacin cutnea
(categora 2), irritacin ocular (categora 2) e irritacin en las vas respiratorias (categora 3).
PELIGRO: El cido clohdrico (HCl) concentrado puede ser corrosivo para metales (categora 1) y provoca irritacin y lesiones
graves cutneas (categora 1B), irritacin y lesiones graves oculares (categora 1B) e irritacin en las vas respiratorias
(categora 3).
PRECAUCIN: Se debe trabajar en la capilla por los vapores de HCl que libera el reactivo.
Disuelva 3.0 g de cloruro de hierro hexahidrato (FeCl3 6H2O) en 10.0 mL de HCl 0.1 M.
PELIGRO: El cloruro de hierro hexahidratado (FeCl 3 6H2O) es nocivo en caso de ingestin (toxicidad aguda categora 4),
provoca irritacin cutnea (categora 2), irritacin ocular (categora 2) y provoca lesiones oculares graves (categora 1).
ATENCIN: El cido clohdrico (HCl) 0.1M no est clasificado como sustancia peligrosa. Sin embargo, puede provocar ligera
irritacin cutnea y ocular.
Aada 0.1 mL de una solucin de 300 mg/mL de FeCl3 (en HCl 0.1 M) a la disolucin de orcinol en HCl concentrado y
mezcle.
Complete el volumen a 100 mL con HCl concentrado.
ENVASADO: Se debe guardar en frasco oscuro con gotero pues el reactivo es sensible a la luz.
ALMACENAMIENTO: Se puede almacenar a temperatura de laboratorio (15C-25C).

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Reactivo de Difenilamina [Gate, 2011]
PELIGRO: El Reactivo de Difenilamina , por su alto contenido de cido actico glacial, es un liquido inflamable y genera
vapores inflamables (categora 3), corrosivo para metales (categora 1), provoca corrosin cutnea y lesiones oculares graves
(categora 1A) e irritacin en las vas respiratorias (categora 3). Sus vapores provocan tambin irritacin respiratoria. Su
ingestin, contacto drmico y ocular, adems de quemaduras, presentan toxicidad aguda por su contenido de difenilamina.
Disuelva 1.0 g de difenilamina en 100 mL de cido actico glacial.
PELIGRO: La difenilamina (C12H11N) presenta toxicidad aguda por ingestin (categora 2) as como por inhalacin, contacto
cutneo y ocular (categora 3). Puede provocar daos en rion e hgado por exposicin repetida. Tambin presenta toxicidad
aguda (categora1) para organismos acuticos con efecto nocivo prolongado.
PELIGRO: El cido actico glacial (CH3CO2H 100%) es un liquido inflamable y genera vapores inflamables (categora 3),
corrosivo para metales (categora 1), provoca corrosin cutnea y lesiones oculares graves (categora 1A) e irritacin en las
vas respiratorias (categora 3). Sus vapores provocan tambin irritacin respiratoria. Su ingestin puede provocar
quemaduras graves.
Seguidamente, agregue 2.5 mL de cido sulfrico concentrado y mezcle bien.
PELIGRO: El cido sulfrico concentrado (H2SO4 95-97%) es corrosivo a los metales (Categora 1), altamente corrosivo a la
piel y a los ojos (categora 1A) causando quemaduras severas.
PRECAUCIN: Se debe trabajar en la capilla por los vapores que libera el cido actico glacial.
ENVASADO: Se debe guardar en frasco oscura con gotero pues el reactivo es sensible a la luz.
NOTA: Se puede almacenar a temperatura ambiente.

Reactivo de Lugol [Gate, 2011]

NOTA: El Reactivo de Lugol no est clasificado como una sustancia o mezcla peligrosa.
Disuelva 2.0 g de yoduro de potasio (KI) en 40 mL de agua destilada.
PELIGRO: El yoduro de potasio (KI) no est clasificado como una sustancia peligrosa.
A esta disolucin, agregue 0.25 g de cristales de yodo (I2) agitando hasta disolverlos.
Una vez disueltos los cristales de yodo, afore a 100 mL de agua destilada y mezcle bien.
PELIGRO: El yodo (I2) es nocivo si se inhala (toxicida aguda categora 4) o se absorbe por la piel (toxicida aguda categora 4).
Tambin provoca irritacin ocular grave (categora 2) e irritacin cutnea (categora 2). Puede irritar y ser txico a las vas
respiratorias; (toxicidad especfica categora 3). Su ingestin repetida o prolongada puede provocar daos a la glndula
tiroides (toxicidad especfica categora 1). Es muy txico a organismos acuticos (toxicidad acutica aguda (categora 1).
PRECAUCIN: Se debe trabajar en la capilla por los vapores que libera.
ENVASADO: Se debe guardar en frasco oscura con gotero, preferiblemente de vidrio, pues el reactivo es sensible a la luz.
ALMACENAMIENTO: Se puede almacenar a temperatura de laboratorio (15C a 25C).

Reactivo de Molisch [Gate, 2011]

PELIGRO: El reactivo de Molisch es un corrosivo (categora 1) al contacto con los ojos; inflamable (categora 2) y es irritante
(categora 2) al contacto con la piel.
Disuelva 0.5 g de naftol en 10 mL de etanol al 95%.
PELIGRO: El naftol (C10H8O) es nocivo en caso de ingestin con (toxicidad aguda categora 4), txico en contacto con la piel
(toxicidad aguda categora 3), provoca irritacin cutnea (categora 2), provoca lesiones oculares graves (categora 1) y puede
irritar las vas respiratorias (categora 3).
PELIGRO: El etanol (C2H5OH) al 95% liquido inflamable (categora 2), provoca irritacin ocular grave (categora 2), provoca
irritacin de la piel y vas respiratoris y puede ser daino si se ingiere.
ENVASADO: Se debe guardar en frasco oscura con gotero pues el reactivo es sensible a la luz.
ALMACENAMIENTO: Se puede almacenar a temperatura de laboratorio (15C a 25C).

Reactivo de Nelson [Nelson, 1944]

PELIGRO: El Reactivo de Nelson contiene arseniato dibsico de sodio el cual es una sustancia mortal por inhalacin (toxicidad
aguda categora 2), nociva por ingestin (toxicidad aguda categora 4), que puede provocar cncer (carcinogenicidad categora
4) y es muy toxica para los organismos acuticos (toxicidad acutica aguda categora 1), provocando efectos ambientales
acuticos negativos a largo plazo.
Disuelva 5.33 g de heptamolibdato de amonio tetrahidrato [(NH4) 6Mo7O24.4H2O] en 4.4 mL de cido sulfrico
concentrado.
NOTA: El heptamolibdato de amonio tetrahidrato [(NH4)6Mo7O24.4H2O] no est clasificado como una sustancia peligrosa.
PELIGRO: El cido sulfrico concentrado (H2SO4 95-97%) es corrosivo a los metales (Categora 1), altamente corrosivo a la
piel y a los ojos (categora 1A) causando quemaduras severas.
Agregue la mezcla lentamente, y con agitacin, a 96 mL de agua destilada.
Finalmente, aada 0.6 g de arseniato de sodio heptahidrato y mezcle hasta disolucin completa,
PELIGRO: El arseniato dibsico de sodio heptahidrato (Na2HAsO4.7H2O) es una sustancia mortal por inhalacin (toxicidad
aguda categora 2), nociva por ingestin (toxicidad aguda categora 4), que puede provocar cncer (carcinogenicidad categora
4) y es muy toxica para los organismos acuticos (toxicidad acutica aguda categora 1), provocando efectos ambientales
acuticos negativos a largo plazo.

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 PRECAUCIN: Se debe trabajar en la capilla debido a su alta toxicidad por inhalacin.
ENVASADO: Se debe guardar en frasco oscura con gotero pues el reactivo es sensible a la luz.
ALMACENAMIENTO: Se puede almacenar a temperatura de laboratorio (15C a 25C).

Reactivo de Seliwanoff [Gate, 2011]

PELIGRO: El Reactivo de Selliwanoffl puede ser corrosivo para metales (categora 1); provoca corrosin e irritacin cutnea
(categora 1A), irritacin y lesin ocular grave (categora 1) e irritacin en las vas respiratorias (categora 3). Adems, en caso
de ingestin, adems de provocar quemaduras (por el cido concentrado) pude ser nocivo (categora 4).
Disuelva 0.05 g de resorcinol en 100.0 mL de HCl 3M.
PELIGRO: El resorcinol (C6H6O2) es nocivo en caso de ingestin (toxicidad aguda categora 4), provoca irritacin cutnea
(categora 2), irritacin ocular (categora 2) e irritacin en las vas respiratorias (categora 3).
ATENCIN: El cido clohdrico (HCl) 3M puede ser corrosivo para metales (categora 1) y provoca irritacin cutnea (categora
2), irritacin ocular grave (categora 2) e irritacin en las vas respiratorias (categora 3).
ENVASADO: Se debe guardar en frasco oscura con gotero pues el reactivo es sensible a la luz.
ALMACENAMIENTO: Se puede almacenar a temperatura de laboratorio (15C a 25C).

Reactivo de Somogyi [Somogyi, 1945]

PELIGRO: El Reactivo de Somogyi, por su contenido de sulfato de cobre pentahidrato (CuSO 45H2O), puede ser nocivo en
caso de ingestin (el sulfato de cobre presenta toxicidad aguda oral, categora 4); provocar irritacin cutnea (categora 2) e
irritacin ocular grave (categora 2). Adems, es txico para los organismos acuticos (el sulfato de cobre presenta toxicidad
acutica aguda, categora 1 y toxicidad acutica crnica, categora 1) con efectos nocivos duraderos.
Disuelva 2.8 g de Na2HPO4 en 80.0 mL de agua destilada.
PELIGRO: El fosfato de disodio e hidrgeno anhidro (Na2HPO4) no est clasificado como una sustancia peligrosa.
A esta solucin, agregue 4.0 g de tartrato de sodio y potasio tetrahidrato y mezcle bien.
PELIGRO: El tartrato de sodio y potasio tetrahidrato (C4H4KNaO64H2O) no est clasificado como una sustancia peligrosa.
A la mezcla anterior, aada 0.8 g de CuSO45H2O y agite hasta disolver completamente.
PELIGRO: El sulfato de cobre pentahidrato (CuSO 45H2O) es nocivo en caso de ingestin (toxicidad aguda oral, categora 4);
provoca irritacin cutnea (categora 2) e irritacin ocular grave (categora 2). Adems, es muy txico para los organismos
acuticos (toxicidad acutica aguda, categora 1 y toxicidad acutica crnica, categora 1) con efectos nocivos duraderos.
Seguidamente, agregue 18.0 g de Na2SO4 anhidro y mezcle bien.
PELIGRO: El sulfato de sodio anhidro (Na2SO4) no est clasificado como una sustancia peligrosa.
Finalmente, complete a volumen a 100 mL con agua destilada.
ENVASADO: Se debe guardar en frasco oscura con gotero pues el reactivo es sensible a la luz.
ALMACENAMIENTO: Se puede almacenar a temperatura de laboratorio (15C a 25C).

Solucin Amortiguadora 0.1M en Fosfatos pH 6.4-6.8

NOTA: La Solucin Amortiguadora 0.1M en fosfatos pH 6.4-.8 no est clasificada como una sustancia peligrosa y tampoco
contiene ingredientes peligrosos una vez preparada.

Disuelva 10.23 g de KH2PO4 en 750 mL de agua y agregue 1.0 g de NaOH, poco a poco y con agitacin.
PREVENCIN: El fosfato de dihidrgeno y potasio (KH2PO4) no est clasificado como una sustancia peligrosa. Se deben
tener las precauciones regulares para la manipulacin de cualquier sustancia, en especial, no respirar el polvo pues puede
irritar.
PELIGRO: El hidrxido de sodio (NaOH) es corrosivo para los metales (categora 1) y provoca quemaduras graves en la piel y
lesiones oculares graves (categora 1A). Su ingestin puede resultar en quemaduras graves internas.

Una vez disueltos los componentes, afore a 1000 mL.

ENVASADO: Se guarda en una botella plstica blanca.
ALMACENAMIENTO: Se debe almacenar en refrigeracin (~4C).
Solucin de Almidn 10 mg/mL
Disuelva 10.0 g de almidn en 500 mL de agua destilada caliente y afore a 1000 mL con agua destilada.
NOTA: El almidn no est clasificado como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Se guarda botella plstica transparente, con gotero.
ALMACENAMIENTO: Por una semana o menos, se puede guardar en refrigeracin; entre 0 y 4C. Si va a guardarse por
mucho tiempo, congelar.
Solucin de 2-Desoxirribosa 10 mg/mL
Disuelva 10.0 g de 2-desoxirribosa en 500 mL de agua destilada y afore a 1000 mL con agua destilada.
NOTA: La 2-deoxirribosa no est clasificada como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Se guarda botella plstica transparente, con gotero.
ALMACENAMIENTO: Por una semana o menos, se puede guardar en refrigeracin; entre 0 y 4C. Si va a guardarse por
mucho tiempo, congelar.
Solucin de Fructosa 10 mg/mL
10
Disuelva 10.0 g de fructosa en 500 mL de agua destilada y afore a 1000 mL con agua destilada.
NOTA: La D-fructosa no est clasificada como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Se guarda botella plstica transparente, con gotero.
ALMACENAMIENTO: Por una semana o menos, se puede guardar en refrigeracin; entre 0 y 4C. Si va a guardarse por
mucho tiempo, congelar.
Solucin de Galactosa 10 mg/mL
Disuelva 10.0 g de galactosa en 500 mL de agua destilada y afore a 1000 mL con agua destilada.
NOTA: La galactosa no est clasificada como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Se guarda botella plstica transparente, con gotero.
ALMACENAMIENTO: Por una semana o menos, se puede guardar en refrigeracin; entre 0 y 4C. Si va a guardarse por
mucho tiempo, congelar.
Solucin de Glucgeno 10 mg/mL
Disuelva 10.0 g de glucgeno en 500 mL de agua destilada caliente y afore a 1000 mL con agua destilada.
NOTA: El glucgeno no est clasificado como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Se guarda botella plstica transparente, con gotero.
ALMACENAMIENTO: Por una semana o menos, se puede guardar en refrigeracin; entre 0 y 4C. Si va a guardarse por
mucho tiempo, congelar.
Solucin de Glucosa 10 mg/mL
Disuelva 10.0 g de glucosa en 500 mL de agua destilada y afore a 1000 mL con agua destilada.
NOTA: La glucosa no est clasificada como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Se guarda botella plstica transparente, con gotero.
ALMACENAMIENTO: Por una semana o menos, se puede guardar en refrigeracin; entre 0 y 4C. Si va a guardarse por
mucho tiempo, congelar.
Solucin de Lactosa 10 mg/mL
Disuelva 10.0 g de lactosa en 500 mL de agua destilada y afore a 1000 mL con agua destilada.
NOTA: La lactosa no est clasificada como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Se guarda botella plstica transparente, con gotero.
ALMACENAMIENTO: Por una semana o menos, se puede guardar en refrigeracin; entre 0 y 4C. Si va a guardarse por
mucho tiempo, congelar.
Solucin de Ribosa 10 mg/mL
Disuelva 10.0 g de ribosa en 500 mL de agua destilada y afore a 1000 mL con agua destilada.
NOTA: La ribosa no est clasificada como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Se guarda botella plstica transparente, con gotero.
ALMACENAMIENTO: Por una semana o menos, se puede guardar en refrigeracin; entre 0 y 4C. Si va a guardarse por
mucho tiempo, congelar.
Solucin de Sacarosa 10 mg/mL
Disuelva 10.0 g de sacarosa en 500 mL de agua destilada y afore a 1000 mL con agua destilada.
NOTA: La sacarosa no est clasificada como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Se guarda botella plstica transparente, con gotero.
ALMACENAMIENTO: Por una semana o menos, se puede guardar en refrigeracin; entre 0 y 4C. Si va a guardarse por
mucho tiempo, congelar.
Solucin de Xilosa 10 mg/mL
Disuelva 10.0 g de xilosa en 500 mL de agua destilada y afore a 1000 mL con agua destilada.
NOTA: La xilosa no est clasificada como una sustancia peligrosa.
ENVASADO: Se guarda botella plstica transparente, con gotero.
ALMACENAMIENTO: Por una semana o menos, se puede guardar en refrigeracin; entre 0 y 4C. Si va a guardarse por
mucho tiempo, congelar.

Suspensin de Levadura al 20% en agua [Harper, 1963]

NOTA: La Suspensin de Levadura no est clasificada como una sustancia o mezcla peligrosa.
NOTA: Esta suspensin debe prepararse fresca, inmediatamente antes de usarla.
Suspenda 20 g de levadura para pan en 100 mL de agua destilada.
NOTA: La levadura seca no est clasificada como una sustancia peligrosa.

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PROCEDIMIENTO1

NOTA: Cada una de las pruebas se debe realizar a todas las soluciones de carbohidratos preparadas, a saber:
almidn, 2-desoxirribosa, fructosa, galactosa, glucgeno, glucosa, lactosa, ribosa, sacarosa y xilosa.

Preparacin de Diluciones de los Azcares:

Las soluciones de los azcares a analizar que se tendrn a disposicin de los estudiantes son de 10 mg/mL y se usarn
directamente para las pruebas de Antrona, Barfoed, Fermentabilidad, Lugol y Seliwanoff.
Para las pruebas de Bial, Molisch y Somogyi-Nelson es ms que suficiente preparar, por grupo de laboratorio (8
equipos), 25 mL de las soluciones de 1 mg/mL de cada azcar.
Para la prueba de Difenilamina es ms que suficiente preparar, por grupo de laboratorio (8 equipos), 25 mL de las
soluciones de 0.1 mg/mL de cada azcar.
Estas dos diluciones deben prepararse previo a iniciar la prctica.
En cada grupo de laboratorio, el profesor asignar a los equipos de trabajo la preparacin de las diluciones anteriores.
Primero se pueden preparar los 25 mL de cada una de las soluciones de 1 mg/mL de cada azcar por dilucin 1/10 de
las soluciones de 10 mg/mL. Estas no tienen que ser exactas por lo que se pueden preparar en probetas.
Luego se pueden preparar los 25 mL de cada una de las soluciones de 0.1 mg/mL de cada azcar por dilucin 1/10 de
las soluciones de 1.0 mg/mL. Estas tampoco tienen que ser exactas por lo que se pueden preparar en probetas.
Prueba de la Antrona [Ashwell, 1957]
NOTA: Los mejores resultados se obtienen con el reactivo recin preparado; sin embargo, el reactivo se puede mantener de 7
a 8 das si se conserva entre 0 y 4C. Ya sea recin preparado o previamente preparado, el reactivo debe mantenerse todo el
tiempo en un bao de agua con hielo (0-4C).
En un tubo de ensayo de 16100 mm, coloque 2 gotas (0.1 mL) de analito (conteniendo 10 mg/mL) y coloque el tubo en
un bao de agua con hielo.
Entonces, agregue, lentamente y por la pared del tubo ligeramente inclinado (no es necesario que est a 45) y con
constante agitacin, 30 gotas (1.5 mL) del Reactivo de Antrona recin preparado que se haba enfriado en el mismo
bao de agua con hielo.
PELIGRO: El Reactivo de Antrona, por su alto contenido de cido sulfrico, es corrosivo a los metales (Categora 1), altamente
corrosivo a la piel y a los ojos (categora 1A) causando quemaduras severas.
PRECAUCIN: Siempre se agrega el cido al agua.
CUIDADO: No se debe usar aspiracin bucal o pipeteadores mecnicos en pipetas corrientes con cidos concentrados. Si no
se dispone de pipetas Pasteur se puede usar una pera para pipetear.
Tape la boca del tubo con una bola de vidrio y colquelo en una gradilla en un bao de agua hirviendo por 10 minutos.
Observe la coloracin de la mezcla y anote los resultados.
Prueba del Barfoed [Gate, 2011]
En un tubo de ensayo de 16100 mm, coloque 20 gotas (1.0 mL) del Reactivo de Barfoed, agregue 10 gotas (0.5 mL)
del analito (conteniendo 10 mg/mL del azcar) y agite bien la mezcla.
PELIGRO: El Reactivo de Barfoed presenta toxicidad oral aguda (categora 4), provoca irritacin cutnea (categora 2),
irritacin y lesin ocular grave (categora 2). Adems, es peligroso para los organismos acuticos, con efectos duraderos
(categora 2).
NOTA: Tanto en esta prueba como en todas las siguientes, cuando se indica agite bien, se recomienda el uso del agitador
Vortex a bajas revoluciones. Se debe tener mucho cuidado de no agitar con tanta fuerza que provoque el salpicado o derrame
del contenido del tubo.
Tape la boca del tubo de ensayo con una bola de vidrio y colquelo en una gradilla, colocada en un bao de agua
hirviendo.
Observe la mezcla durante 15 minutos anotando cualquier cambio en la misma y el tiempo en que aparece el cambio.
Prueba de Bial [Gate, 2011]
En un tubo de ensayo de 16100 mm coloque 2 gotas (0.1 mL) de analito (conteniendo 1 mg/mL de carbohidrato) y
agregue 1,0 mL del Reactivo de Bial.
PELIGRO: Por su alto contenido de HCl concentrado el Reactivo de Bial es corrosivo para metales (categora 1) y provoca
irritacin cutnea (categora 2), irritacin ocular grave (categora 2) e irritacin en las vas respiratorias (categora 3). Adems,
en caso de ingestin, adems de provocar quemaduras (por el cido concentrado) pude ser nocivo (por el orcinol).
PRECAUCIN: Se debe trabajar en la capilla por los vapores de HCl que libera el reactivo.
Tape la boca del tubo con una bola de vidrio y colquelo en un bao de agua hirviendo, por 2 minutos.
Observe la coloracin de la mezcla y anote los resultados.

1 Los procedimientos ac descritos pueden presentar modificaciones con respecto a los citados.
Estas modificaciones se han hecho con base en la experiencia acumulada en los cursos previos.
12
Prueba de Difenilamina [Gate, 2011]
En un tubo de ensayo de 16100 mm coloque 20 gotas (1,0 mL) de Reactivo de Difenilamina y agregue 12 gotas (0,6
mL) de analito (conteniendo 0.1 mg/mL del carbohidrato).
PELIGRO: El Reactivo de Difenilamina , por su alto contenido de cido actico glacial, es un liquido inflamable y genera
vapores inflamables (categora 3), corrosivo para metales (categora 1), provoca corrosin cutnea y lesiones oculares graves
(categora 1A) e irritacin en las vas respiratorias (categora 3). Sus vapores provocan tambin irritacin respiratoria. Su
ingestin, contacto drmico y ocular, adems de quemaduras, presentan toxicidad aguda por su contenido de difenilamina.
Tape el tubo con una bola de vidrio y colquelo en bao de agua hirviendo por 10 minutos.
Observe la coloracin de la mezcla y anote los resultados.
Prueba de Fermentabilidad [Harper, 1963]
En un tubo de ensayo de 16100 mm coloque 40 gotas (2.0 mL) de analito (conteniendo 10 mg/mL del carbohidrato) y
agregue 2.0 mL de Suspensin de Levadura al 20% en agua, recin preparada.
NOTA: La Suspensin de Levadura no est clasificada como una sustancia o mezcla peligrosa.
Seguidamente, agregue a la mezcla anterior, 40 gotas (2.0 mL gotas) de solucin amortiguadora 0.1 M de fosfatos de
pH 6,4-6,8.
NOTA: La Solucin Amortiguadora 0.1M en fosfatos pH 6.4-.8 no est clasificada como una sustancia peligrosa y tampoco
contiene ingredientes peligrosos una vez preparada.
Coloque un tubo de 650 mm invertido en la mezcla y remueva el aire con una pipeta Pasteur con la punta doblada.
Deje en reposo por una hora.
Observe la mezcla y anote los resultados.
Prueba del Lugol [Gate, 2011]
En un tubo de ensayo de 16100 mm coloque 20 gotas (1.0 mL) de analito (conteniendo 10 mg/mL de carbohidrato)
agregue, gota a gota y con agitacin contnua, 20 gotas (1.0 mL) del Reactivo de Lugol.
NOTA: El Reactivo de Lugol no est clasificado como una sustancia o mezcla peligrosa.
Observe la coloracin de la mezcla y anote los resultados.
Prueba del Molisch [Gate, 2011]
En un tubo de ensayo de 13100 mm coloque 20 gotas (1.0 mL) de analito (conteniendo 1 mg/mL de carbohidrato) y 2
gotas (0.1 mL) del Reactivo de Molisch y nezcle bien.
PELIGRO: El reactivo de Molisch es un corrosivo (categora 1) al contacto con los ojos; inflamable (categora 2) y es irritante
(categora 2) al contacto con la piel.
A continuacin, tome, con una pipeta Pasteur, una alcuota de cerca de 20 gotas (1,0 mL) de cido sulfrico
concentrado.
PELIGRO: El cido sulfrico es corrosivo a los metales (Categora 1), altamente corrosivo a la piel y a los ojos (categora 1A)
causando quemaduras severas.
PRECAUCIN: Siempre se agrega el cido al agua.
CUIDADO: No se debe usar aspiracin bucal o pipeteadores mecnicos en pipetas corrientes con cidos concentrados. Si no
se dispone de pipetas Pasteur se puede usar una pera para pipetear.
Entonces, incline el tubo a 45, apoye la punta de una pipeta Pasteur con el cido en la pared, por encima del borde
superior del lquido dentro del tubo y dispense el cido, lentamente, dejndolo fluir por la pared del tubo, de manera que
se formen dos capas y no se disturbe la separacin de capas.
Observe la interfase formada por el cido sulfrico concentrado y la mezcla del analito ms el Reactivo de Molisch y
anote los resultados.
Prueba de Seliwanoff [Gate, 2011]
En un tubo de ensayo de 16100 mm coloque 2 gotas (0.1 mL) de analito (conteniendo 10 mg/mL de carbohidrato) y
agregue 20 gotas (1.0 mL) del Reactivo de Seliwanoff.
PELIGRO: Por su alto contenido de cido clorhdrico 3M, el Reactivo de Selliwanoffl puede ser corrosivo para metales
(categora 1) y provoca irritacin cutnea (categora 2), irritacin ocular grave (categora 2) e irritacin en las vas respiratorias
(categora 3). Adems, en caso de ingestin, adems de provocar quemaduras (por el cido concentrado) pude ser nocivo
(por el resorcinol).
Tape el tubo con una bola de vidrio y colquelo en bao de agua hirviendo por 10 minutos.
Observe los cambios en la coloracin de la mezcla con el tiempo y anote los resultados.
Prueba de Somogyi Nelson [Somogyi, 1952]
En un tubo de ensayo de 16100 mm coloque 2 gotas (0.1 mL) de analito (conteniendo 1 mg/mL del azcar), aada 10
gotas (0.5 mL) de Reactivo de Somogyi; tape el tubo con una bola de vidrio y colquelo en una gradilla colocada en un
bao de agua hirviendo por 10 minutos.
PELIGRO: El Reactivo de Somogyi, por su contenido de sulfato de cobre pentahidrato (CuSO 45H2O), puede ser nocivo en
caso de ingestin (el sulfato de cobre presenta toxicidad aguda oral, categora 4); provocar irritacin cutnea (categora 2) e

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 irritacin ocular grave (categora 2). Adems, es txico para los organismos acuticos (el sulfato de cobre presenta toxicidad
acutica aguda, categora 1 y toxicidad acutica crnica, categora 1) con efectos nocivos duraderos.
A los 10 minutos, retire el tubo del bao de agua hirviendo, deje enfriar a temperatura ambiente y agregue 10 gotas (0.5
mL) de Reactivo de Nelson y mezcle bien.
PELIGRO: El Reactivo de Nelson contiene arseniato dibsico de sodio el cual es una sustancia mortal por inhalacin (toxicidad
aguda categora 2), nociva por ingestin (toxicidad aguda categora 4), que puede provocar cncer (carcinogenicidad categora
4) y es muy toxica para los organismos acuticos (toxicidad acutica aguda categora 1), provocando efectos ambientales
acuticos negativos a largo plazo.
Observe la coloracin de la mezcla y anote los resultados.

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