Relatrio de Atividades Prticas

Marcadores Bioqumicos de Avaliao da Funo

Heptica

Data de entrega: /12/2016

ndice

Objetivos -------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 3

Introduo ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 3

Material e Mtodos ------------------------------------------------------------------------------------------------ 6

1. Determinao da Concentrao de Protenas Totais ------------------------------------------- 6

2. Determinao da Concentrao de Albumina ---------------------------------------------------- 7
3. Elaborao de Proteinograma ------------------------------------------------------------------------- 8

Discusso ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ 10

1. Determinao da Concentrao de Protenas Totais ------------------------------------------ 10

2. Determinao da Concentrao de Albumina --------------------------------------------------- 10
3. Elaborao de Proteinograma ----------------------------------------------------------------------- 10

Concluso ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- 11

Bibliografia --------------------------------------------------------------------------------------------------------- 11

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Objetivos
Este relatrio tem como objetivo principal a avaliao e discusso de marcadores
bioqumicos de avaliao da Funo Heptica discusso das atividades laboratoriais realizadas.

Introduo
O fgado o segundo maior rgo e a maior glndula corporal, encontra-se localizada
no hipocndrio direito, epigstrico e na pequena poro do hipocndrio esquerdo, por baixo do
diafragma. Este possui a capacidade de funcionar como glndula excrina e endcrina, tendo
tambm alta atividade metablica, visto ser um dos rgos de maior importncia no sistema
digestivo

O fgado tem ainda funes na regulao do volume sanguneo e no processamento

e/ou eliminao de elementos potencialmente prejudiciais, como por exemplo as gorduras,
bebidas alcolicas, entre outros apresentando tambm, para alm do seu armazenamento, a
capacidade de produo e degradao de glicose/glicognio. Ao mesmo tempo ocorre a
organizao de protenas e gorduras em estruturas qumicas que possam ser reutilizadas para o
metabolismo converso a glicose, com a produo de amnia (proveniente da degradao de
grupos aminas das protenas) com posterior excreo pelo rim na forma de ureia (sintetizada
atravs do ciclo da ureia). O fgado tambm o local de produo de albumina (protena de
extrema importncia pois funciona como transporte para protenas hidroflicas na corrente
sangunea) e fibrinognio (presente na cascata da coagulao como fator).

Sendo estas as funes mais importantes do fgado, tambm se deve de referenciar que
participa noutras funes, tais como:

Transformao do glicognio em glicose (gliconeognese), que enviada para o sangue

quando necessrio;
Sntese de protenas plasmticas;
Sntese do colesterol;
Sntese de aminocidos no essenciais (alanina, serina, glicina entre outros)
Produo de protenas essenciais (albumina, transferrina, fibrinognio entre outras)
Local de sntese de angiotensinognio (presente no sistema Renina-Angiotensina que
permite o controlo da contrao vascular e por consequncia o da presso sangunea);
Emulsificao de gorduras no processo digestivo, atravs da produo e secreo da
blis;
Armazenamento de vitaminas (A, B12, D, E e K) e minerais (ferro)
Eliminao de microrganismos e fragmentos de clulas lisadas atravs das clulas de
Kupffer (clulas com capacidade fagocitria)

Por ser um rgo to ativo e participativo em inmeros sistemas, qualquer anomalia ou

desregulao no seu normal funcionamento causa alteraes que podem desencadear
patologias e colocar em causa a sade e vida.

O desempenho deste rgo pode ser avaliado atravs de testes que permitam observar a
quantidade de enzimas hepticas e outros metabolitos de origem heptica como a ureia. Os
valores obtidos fornecem indicaes sobre o estado do fgado.

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Os testes realizados nas aulas prticas que permitem a avaliao da funo heptica foram:

Determinao da Concentrao de Glicose dado que anormalidades nos seus valores

podem estar relacionadas com doenas hepticas.
Determinao da Concentrao de Ureia na urina, por exemplo, dado que uma
substncia resultante do metabolismo dos aminocidos, sendo produzida no fgado e
excretada na urina. Ao fazer a sua medio, poderamos ter a informao do
funcionamento do rim neste aspeto e complementar com informaes dos outros
parmetros avaliados.
Determinao da Concentrao de Protenas Totais
Determinao da Concentrao de Albumina
Elaborao de Proteinograma
Determinao da Atividade da Alanina aminotransferase, visto ser libertada em altos
nveis quando ocorrem danos a nvel dos hepatcitos (teste ainda no realizado)

Sendo que os que apresentam maior relevncia e constam neste relatrio so:

1. Determinao da Concentrao de Protenas Totais

A determinao da concentrao de protenas totais permite obter a quantidade total de

protenas no sangue, relacionando o teor de albumina e globulinas (relao A/G). Esta relao,
em estado normal ligeiramente superior a um. Quando a relao muito baixa ou muito alta,
devem-se fazer outros testes para se determinar a causa e se proceder ao diagnstico.

Na determinao de protenas totais, o resultado tambm influenciado por outros fatores,

como a idade, o sexo, a populao e mtodo utilizado para o teste.

Se o nvel de protenas totais estiver alterado, devem-se fazer outros testes para identificar
a protena especfica que est baixa ou alta, antes que se possa estabelecer um diagnstico.

Nveis elevados de protenas Nveis baixos de protenas

totais totais
Causas provveis da Distrbios medulares Hemorragia
alterao dos valores (mieloma mltiplo ou
doena de Waldenstrom)

Inflamao/ infees (ex. Doena heptica

pelo vrus da hepatite B ou C
ou por HIV)
Casos graves de Subnutrio ou Sndrome de
desidratao m absoro

2. Determinao da Concentrao de Albumina

A albumina uma protena produzida unicamente pelo fgado, sendo o elemento principal
das protenas totais. Existem diferentes tipos de albuminas, sendo a mais comum a
seroalbumina, apresentando em mdia um tempo de semi-vida de 20 dias. A albumina a
protena principal do plasma tendo importantes funes como:

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 Manuteno da presso osmtica (transporte de ies).
Transporte de hormonas
Transporte de bilirrubina no conjugada.
Funo anti-oxidante
Controlo do pH (efeito tampo).

Nveis elevados de Albumina Nveis baixos de Albumina

Causas provveis da Desidratao Cirrose
alterao dos valores Sndrome Nefrtica
Subnutrio

Nota: Este teste sempre realizado ao mesmo tempo que o Teste de determinao das
Proteinas Totais.

3. Elaborao de Proteinograma

O protenograma ou eletroforese de protenas consiste na separao das protenas totais,

que aps sujeitas a um campo eltrico migram consoante as suas caratersticas (o pH, a
viscosidade, a constante dieltrica e a temperatura). A eletroforese utilizada mais comum a de
cinco bandas (albumina, 1, 2, e gamaglobulinas. Consoante as alteraes observadas
podem-se confirmar alteraes a nvel heptico ou renal ou casos de deficincia proteica.

1 2 Gamaglobulinas
(ex:antitripsina- (macroglobulina) (transferrina)
AAT)
Nveis Sndrome Anemia Gamopatias
aumentados nefrtica sideropnica monoclonais
podem
indicar Gravidez

Niveis Enfisema Doenas Inflamao

diminudos pulmonar; hemolticas
podem
indicar Cirrose

Nota: Todos os mtodos apresentados neste relatrio so mtodos no-enzimticos que

apesar de menos especficos apresentam alta importncia no diagnstico. Estes por serem
um mtodo de ponto final, apenas necessitam de uma medio de absorvncia (por norma).

A determinao da concentrao de Glicose srica e Urina podem ser testes utilizados na

avaliao da funo heptica, porm so mais relevantes na avaliao da funo renal.

Materiais e Mtodos
1. Determinao da Concentrao de Protenas Totais
Mtodo: Baseia-se na reao do biureto com as protenas totais a amostra. Estas formam um
complexo corado com os ies cobre (encontrados no biureto) em meio alcalino. A intensidade

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da cor proporcional concentrao de protenas. um mtodo colorimtrico em que apenas
feita uma leitura de absorvncia final.

Materiais:
Suporte

Tubos de plstico

Micropipetas com capacidade de medio de 20l e 1000l

Vrtex

Cuvetes

Espetrofotmetro com capacidade de ler a 546nm

Reagentes:
o 1-TOTAL PROTEIN (Branco Reagente)
o 2-PADRO (Soluo Padro)
o SORO CORMAY HN (Controlo 1)
o SORO CORMAY HP (Controlo 2)
o Amostra de soro

Procedimento:
o Ligar o espectrofotmetro e colocar no comprimento de onda pretendido (
546nm);
o Pipetar 1000l de Branco Reagente para cada um dos 5 tubos (Branco Reagente,
Padro, Controlo 1, Controlo 2 e Amostra) e fazer atingir a temperatura de
determinao (24C ou 37C);
o Adicionar 20l de Padro, Controlo 2, Controlo 3 e Amostra ao respetivo tubo;
o Vrtexar a amostra e incubar durante 5 minutos temperatura de
determinao;
o Calibrar o espectrofotmetro com o Branco Padro e ler as absorvncias e fazer
o registo das mesmas;
o Arrumar o material utilizado;

Resultados:

A Concentrao de Protenas Totais foi determinada pela seguinte frmula:

Abs (teste) / Abs (Padro) x [Padro]

A [Padro] era conhecida 8.0mg/dl

Padro Controlo 1 Controlo 2 Amostra

Absorvncia
0.492 0.174 0.298 0.393
(nm)
Concentrao
8.0 (valor 4.85 2.83
de Protenas 6.44
indicado) (5.75-7.03) (3.81-4.65)
(g/dl)

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2. Determinao da Concentrao de Albumina
Mtodo: O verde de bromocresol (BCG) forma com a albumina, em tampo succinato (meio
cido), um complexo corado. A absorvncia deste complexo proporcional concentrao de
albumina na amostra. A intensidade da cor do complexo formado medida a 630nm. um
mtodo colorimtrico em que apenas feita apenas uma leitura de absorvncia.

Materiais:
Suporte
Tubos de plstico
Micropipetas com capacidade de medio de 10l e 2000l
Vrtex
Cuvetes
Espectrofotmetro com capacidade de ler a 630nm
Reagentes:
1-ALBUMIN (Branco Reagente)

2-STANDARD (Amostra/Soluo Padro)

SORO CORMAY HN (Controlo 1)

SORO CORMAY HP (Controlo 2)

Procedimento:
Ligar o espectrofotmetro e colocar no comprimento de onda pretendido (
630nm);
Pipetar 2000l de Branco Reagente para cada um dos 5 tubos (Branco Reagente,
Padro, Controlo 1, Controlo 2 e Amostra) e fazer atingir a temperatura de
determinao (24C ou 37C);
Adicionar 20l de Padro, Controlo 1, Controlo 2 e Amostra aos respetivos
tubos;
Vrtexar e incubar durante 1 minuto;

Calibrar o espectrofotmetro com o Branco Padro e ler as absorvncias e fazer

o registo das mesmas;

Arrumar o material.

Resultados:

Padro Controlo 1 Controlo2 Amostra

Absorvncia 0.504 0.247 0.475 0.438
(nm)
Concentrao 4.38 4.13 2.15 3.81
de Albumina (3.75-4.59) (2.66-3.25)
(g/dl)
A Concentrao de Albumina foi determinada pela seguinte frmula:

Abs (teste) / Abs (Padro) x [Padro]

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Sendo que a [Padro] era conhecida sendo 4.38mg/dl

3. Proteinograma
Mtodo: Consiste na separao de protenas sricas que so colocadas num meio slido,
submerso num meio lquido e sujeitas a um campo eltrico. As protenas so separadas por
eletroforese e as propriedades do meio lquido como o pH, a fora inica, a viscosidade, a
constante dieltrica e a temperatura so a causa da migrao das protenas. A velocidade de
migrao das protenas neste mtodo diretamente proporcional sua carga e inversamente
ao seu peso molecular. Se o pH do meio for superior ao ponto isoeltrico da protena esta
adquire carga negativa, caso contrrio adquire carga positiva.

A eletroforese utilizada neste procedimento foi a clssica havendo no fim 5 bandas (albumina,
-1, -2, e gamaglobulinas).

Materiais:
Tira de acetato de celulose

Estufa

Micropipetas com capacidade de medio de 10/12L

Carto para amostras

Folhas de papel de filtro

Ponte

Aparelho de Eletroforese

Lmina de vidro

Densitmetro

Reagentes:
Soluo-tampo
Soluo Ponceau S
Amostra de soro
Procedimento
Molhar a tira de acetato de celulose em tampo por 2/3 minutos (de forma a
que esta fique com carga negativa).
Ligar a estufa a 150C
Distribuir 10/12L de soro amostra em cada clula do carto;
Retirar o excesso de tampo da tira;
Colocar a tira marcada na ponte;
Recolher as amostras no aplicador e transferi-las para a tira durante 10
segundos;
Realizar a eletroforese por 25 minutos/250 volts (colocamos a membrana de
celulose de forma a que as protenas se separem por ordem de carga eltrica);

Retirar a tira para a soluo de Ponceau S por 10 minutos;

Descorar por 3 banhos sucessivos, com agitao durante um total de 4 minutos;

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 Dispor a tira sobre lmina de vidro, cortar excesso e colocar na estufa a 150C
durante 3/5minutos at secar e diafanizar;

Ler no densitmetro para a obteno do eletroferograma.

Proceder sua anlise.

Resultados:

O proteinograma obtido apresenta 5 fraes bem destintas e de concentraes dentro dos

valores normais, exceto na frao correspondente albumina que se encontra ligeiramente
abaixo dos valores tabelados e s gamaglobulinas que se encontra acima do intervalo de valores
tabelados.

Discusso
1. Determinao da Concentrao de Protenas Totais
Tendo em conta os resultados obtidos verifica-se que nenhum dos Controlos foi validado, pelo
que, o mtodo utilizado no validado. Esta situao pode ter diversas origens, tais como:
incorreto armazenamento dos reagentes, erros na pipetagem do Branco Reagente ou dos
Controlos, entre outros. Contudo, se o mtodo fosse validado e o valor obtido fosse o mesmo -
6,44 g/dl - concluiramos que a concentrao de protenas totais no soro do paciente estava
abaixo do intervalo de valores de referncia (6,6-8,7 no caso de se tratar de um adulto). Apesar
de ser um valor ligeiramente baixo teramos que fazer testes complementares (determinao
da concentrao de albumina por exemplo) ou saber se o doente toma alguma medicao como
hormonas de crescimento ou anticoncecionais orais, entre outros j mencionados
anteriormente visto que estes afetam o resultado do teste. Os valores de protenas totais baixos
podem remeter-nos para doenas com hemorragias, doenas de origem renal ou heptica e
sndrome de m absoro ou situaes de nutrio insuficiente.

2. Determinao da Concentrao de Albumina

Na Determinao da concentrao de Albumina podemos verificar que apenas um dos Controlos
(Controlo 1) foi validado, sendo que no se pode no validar o mtodo utilizado. Os erros
cometidos podem ser semelhantes aos acima descritos ou ainda o incorreto tempo de
incubao. Porm, se os controlos tivessem sido validados e o valor obtido fosse o mesmo -
3,81g/dl - concluiramos que a concentrao de albumina no soro se encontrava dentro do
intervalo de valores de referncia para um adulto (3,5-5,2).

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3. Proteinograma
Relativamente concentrao de protenas totais (8.6g/dl), encontra-se ligeiramente acima dos
valores recomendados (6,0-8,0g/dl), sendo que para diagnostico se deveria realizar outros
testes complemantares, como os j mencionados anteriormente.

Relativamente ao proteinograma os valores obtidos estavam dentro dos valores normais para
trs das cinco fraes. Na frao relativa albumina, os valores encontravam-se ligeiramente
abaixo do intervalo de valores considerado normal para o adulto (51.54, sendo o intervalo de
53.0-68.0), sendo que a frao relativa s gamaglobulinas, os valores encontravam-se muito
acima do intervalo de valores considerado normal (27.27, sendo o intervalo de 10.5-19.5)

Estas alteraes podem estar implcitas em gamopatias monoclonais como mieloma mltiplo ou
Macroglobulinemia de Waldenstrm que so caracterizadas pelo aumento de gamaglobulinas
(por exemplo a PCR, IgA, IgG, IgM ou a protena C-reativa), sendo que por esta razo dever-se
realizar testes especficos.

Concluso
A elaborao deste relatrio sobre marcadores bioqumicos da funo heptica
possibilitou a conceito de marcador bioqumico e utilidade dos mesmos na avaliao do
sistema. Permitiu tambm observar o equilbrio que necessrio a nvel heptico para que o
organismo no sofra danos, quer nos outros sistemas que no seu conjunto. Podemos concluir
que estes parmetros apresentam alta relevncia na elaborao de um diagnstico.

Para que se possa chegar a este diagnstico necessrio repetir os procedimentos at

que estes sejam validados, mas sempre com o intuito de melhorar e corrigir os erros feitos
anteriormente para que se possam obter os resultados mais pertos dos reais e a probabilidade
de erro no diagnstico seja a menor possivel.

Para alm dos protocolos realizados para este relatrio, poderamos tambm fazer :

Determinao da Concentrao de Ureia na urina

Determinao da Concentrao de Glicose dado que anormalidades nos seus valores
podem estar relacionadas com doenas hepticas.
Determinao da Atividade da Alanina aminotransferase

Todos por razes j acima referidas.

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