TESIS
PRESENTA
Zacatecas, Zac.
UNIVERSIDAD AUTNOMA DE ZACATECAS
Francisco Garca Salinas
TESIS
LICENCIADO EN BIOLOGA
PRESENTA
Zacatecas, Zac.
AGRADECIMIENTOS
1
LISTA DE CUADROS
LISTA DE GRFICAS
2
RESUMEN
pencas de nopal y fruto (tuna); los cuales constituyen una materia prima de alta
con las siguientes condiciones de extraccin; pH: 2.0, temperatura: 80C y tiempo de
rendimiento mximo de pectina obtenido en nopal cardn fue de 6.25 % mientras que
en tuna el mayor rendimiento fue en la pectina tuna amarilla (cascara) 26.62%, con
3
ABSTRACT
The aim of the study was the extraction and characterization of pectin from cactus
leaves and fruit (prickly pear); which are a raw material of high availability and high
domestic production in the state of Zacatecas market. The pectin content was
determined by acid hydrolysis method, the following extraction conditions; pH: 2.0,
maximum yield of pectin obtained in cactus was 6.25% while the highest yield prickly
pear was yellow pear pectin (shell) 26.62%, with an average content of methoxyl
anhydrouronic acid and 1.9% and 0.9% respectively. IR spectrometry with Fourier
Key words: Cactus, Prickly pear, pectin, acid hydrolysis, anhydrouronic acid.
4
I. INTRODUCCION
En Mxico, el nopal y la tuna han representado un elemento de gran importancia
por su consumo como alimento y el uso como materia prima para la elaboracin
de medicamentos, cosmticos y otros productos (Prez, 1998). El uso mltiple de
los nopales, debido a su contenido u obtencin a partir de ellos de vitaminas,
minerales, antioxidantes, fibra alimentaria, hidrocoloides y colorantes naturales
(Senz, 2004), aceite comestible de la semilla y productos de la fermentacin
(Corrales y Flores, 2000). Adems, en la industria alimentaria tradicional, los
frutos son utilizados para preparar jugos, jaleas y mermeladas. Es posible
sealar que, en parte, una de las propiedades del nopal la que lo ubica entre los
alimentos catalogados como funcionales por su riqueza en polisacridos
estructurales (fibra alimentaria) (lvarez y Pea, 2009), al igual que el fruto,
donde se ha reportado que la cscara de tuna de pectinas (Majdoub et al., 2001;
Habibi et al., 2004).
1
ridas y semiridas de nuestro pas. Esto beneficiara el cultivo de nopal tunero y
dicho cultivo podra convertirse en un excelente soporte econmico para las
reas marginadas.
2
II. ANTECEDENTES
escudo nacional.
Figura 1.El nopal tunero en Mxico.
3
restante 20.8% tiene climas ridos (>300 mm). Por esta razn, las condiciones
climticas son un factor que impiden el desarrollo de otros cultivos,
convirtindose el nopal en una de las alternativas econmicas ms viables para
sus habitantes (CONAZA, 1996).
4
II.3. Produccin de nopal tunero en Mxico
5
Zacatecas y San Luis Potos, cosechndose principalmente la tuna Cardona
(Opuntia streptacantha).
El nopal tunero tiene un solo periodo de cosecha al ao, que se inicia a finales de
junio y termina en septiembre-octubre, lo cual coincide con el periodo posterior a
la poca de lluvias. El nopal empieza su produccin a partir del 3er al 4er ao y
sta alcanza su mximo rendimiento entre el 7mo y 10mo ao de su ciclo
vegetativo, hasta alcanzar su nivel de produccin (CONAZA, 1996). En el cuadro
3 se muestran los perodos de cosecha del nopal tunero en distintas regiones del
pas.
6
principales variedades cultivadas en el estado de Zacatecas son: O. ficus indica,
O. amyclaea, O. megacantha, O. leucotricha y O. streptacantha.
7
Guanajuato, Quertaro, etc.
8
La cscara ocupa una porcin importante en la constitucin de la tuna, algunos
autores han realizado estudios de microscopa electrnica de barrido en
muestras de cscara deshidratada y sus observaciones revelaron que las clulas
de la piel del fruto estaban constituidas principalmente de clulas del colnquima
y parnquima (clulas que dan grosor y sostn), tejidos usualmente ricos en
polisacridos tipo pectina (Habibi et al., 2004a). Estas observaciones y otros
estudios realizados a finales de los aos 90s (Forni et al., 1994) han dado pauta
a sugerir que la cscara de este fruto pudiera ser fuente de pectinas con
potencial uso en la industria agroalimentaria.
De acuerdo a los resultados obtenidos por Habibi et al.(2004) y Madjoub et al.
(2001), los polisacridos extrados de la cscara de frutos de Opuntia pudieran
ser catalogados como pectinas debido a su contenido de cido galacturnico y
stos tendran un potencial de aplicacin como aditivos viscosificantes y/o
gelificantes en la industria agroalimentaria.
El Cuadro 6 muestra algunos de los resultados de composicin qumica y
propiedades fisicoqumicas de muclagos y pectinas extradas del nopal. Se
puede observar que igual que en el caso de los polisacridos de la cscara de
tuna, los muclagos del nopal presentan grandes cantidades de azcares
neutros. Los estudios fisicoqumicos de pectinas y/o muclagos del nopal tienen
mayor avance que los concernientes a los obtenidos de la cscara de tuna. Sin
embargo, los bajos rendimientos de extraccin del nopal han causado cierta
desilusin.
Cuadro 6. Contenido de azucares en pectinas y muclagos de Opuntia ficus
indica (datos reportados en % p/p).
Pectina Extracto Muclago Muclago
gelificante de liofilizad precipitado en
de nopala mucilago o de propanol/acet
de nopala nopalb ona de nopalc
cidos 56.3 11.0 19.4 6.4
urnicos
Ramnosa 0.5 1.75 6.9 7.0
Arabinosa 5.6 17.93 33.1 44.0
Galactosa 6.5 20.99 20.3 20.4
Glucosa 0 0 1 0
Xilosa 0.9 3.06 18.7 22.1
9
Rendimien 0.6 0.07 - -
to (%p/p)
aDato tomado de Goycoolea y Crdenas
(2003)
bDato tomado de Majdoub et al. (2001)
cDato tomado de Medina-torres et al.
(2000)
10
consumo del fruto como de las pencas tiernas, conocidas popularmente como
nopalitos.
II.7. Pectina
11
Figura 2. Estructura qumica de las pectinas (Nordby et al., 2003).
Por definicin, las pectinas son cidos pectnicos con diferentes grados de
esterificacin y neutralizacin, que pueden contener de 200 a 1000 unidades de
cido galacturnico (Valdez-Martnez, 2006). El trmino pectina es algo
engaoso, ya que difcilmente implica una sola molcula. Pectina describe a una
familia de oligosacridos y polisacridos que aunque tienen caractersticas
12
comunes sus estructuras son extremadamente diversas. Sin embargo, todas las
pectinas son ricas en cido galacturnico. La Organizacin de las Naciones
Unidas para la agricultura y la alimentacin (FAO, por sus siglas en ingls) y la
normatividad de los Estados Unidos de Amrica, estipulan que la pectina debe
contener por lo menos 65% de cido galacturnico (Willats et al., 2006).
13
Figura 3. Representacin esquemtica de la estructura de pectinas (Willats et
al., 2006).
Independientemente de la estructura secundaria de las pectinas, el cido
galacturnico presente tanto en la cadena de homogalacturano como de
ramnogalacturano puede estar metil-esterificado y/o acetilado; y ambos, el grado
de esterificacin (GE) y de acetilacin (GA), tienen un fuerte impacto sobre las
propiedades funcionales de las pectinas. Tradicionalmente las pectinas se
clasifican como de alto ester o bajo ester con grados de esterificacin >50% y
<50%, respectivamente (Willats et al., 2006).
14
pH (Willats et al., 2006). Por otra parte, se ha sugerido que la rigidez de las
molculas de pectina est en funcin directa del grado de esterificacin y de la
concentracin de azcar en solucin; y que esta rigidez tiene un papel importante
en la gelificacin de pectinas de alto grado de esterificacin (Rolin y de Vries;
1990).
En las pectinas de bajo grado de esterificacin, las zonas de unin se forman por
el entrecruzamiento de cadenas mediante puentes de calcio con los grupos
carboxilo libres (Willats et al., 2006). El modelo de la caja de huevo,
originalmente desarrollado para describir la gelificacin de alginato de calcio, se
ha popularizado para describir tambin la gelificacin de las pectinas de bajo
grado de esterificacin. En este modelo (Figura 3) pares de dobles hlices de
cadenas de pectina se mantienen unidas por iones de calcio entre dos grupos
carboxlic os opuestos simulando el empacamiento de huevos (iones calcio) en su
caja (Rolin y de Vries, 1990).
16
esterificacin para pectinas AE estn en el intervalo de 60-75, mientras que las
pectinas BE usualmente tienen valores de 20 a 40.
17
efectos hipoglucmicos y de disminucin de colesterol (Stintzing y Carle, 2005),
adems de que las pectinas juegan un papel importante en la nutricin como
componentes de una dieta diaria rica en fibra soluble e insoluble. Se ha
reportado que las pectinas tambin pueden atenuar diarreas, pueden funcionar
como desintoxicantes, como reguladores y protectores del tracto gastrointestinal,
como estimulantes del sistema inmunolgico y como agentes anti-ulcerosos y
anti-nefrticos (Schols y Voragen, 2002).
18
Cuadro 7. Gelificacin de pectinas de alto y bajo grado de esterificacin (Rolin y
de Vries 1990).
Pectina de alto grado de esterificacin Pectina de bajo grado de
esterificacin
Condiciones Baja actividad de agua provista por los slidos Presencia de iones
generales solubles (o soluciones en agua): pH<3.5 metlicos, por ejemplo
calcio
Otras El gel no es termo-reversible, existe un tiempo El gel es termo-reversible.
caractersticas de transicin entre las condiciones de inicio Gelificacin inmediata
fenolgicas hasta la gelificacin completa. cuando las condiciones
para esta estn presentes.
Mecanismo Interacciones hidrofobicas y puentes de Puentes de calcio entre
hidrogeno. cadenas.
Efectos de la estructura molecular de la pectina
GE (%) Conforme se incrementa el grado de Conforme disminuye el
esterificacin, se incrementa la velocidad y la grado de esterificacin, las
temperatura de gelificacion. pectinas requieren de
menos calcio para gelificar
y la temperatura de
gelificacin es mayor.
DA(%) Las pectinas de alto grado de esterificacin Las pectinas de bajo grado
amidadas gelifican ms lentamente y a menor de esterificacin amidadas
temperatura que las correspondientes no requieren de menor
amidadas. cantidad de calcio que
aquellas no amidadas,
adems tienen un
desempeo ms
reproducible y un intervalo
ms amplio de uso con
calcio.
Efecto de las condiciones del sistema
Solidos solubles Lmite inferior = 55% de solidos solubles Existe una correlacin
Nivel tpico de uso= 65% de solidos solubles positiva entre el porcentaje
Existe una correlacin positiva entre el de los slidos solubles y la
porcentaje de los slidos solubles y la temperatura de gelificacin
temperatura de gelificacin o fuerza de gel. o fuerza de gel.
Concentracin de No se requieren. La fuerza de gel puede ser Si es requerida. Existe una
iones calcio positivamente afectada (debido a la pre- correlacin positiva entre
gelificacin), o negativamente afectada si la la concentracin de calcio
pectina es sensible al calcio. y la temperatura de
gelificacin o la fuerza de
gel.
pH Lmite superior= 3.5 Nivel tpico= 3 a 4.5
pH tpico= 3.1 Hay una correlacin
Existe una correlacin inversa entre el pH y la inversa entre el pH y la
fuerza de gel o la temperatura de gelificacion. fuerza de gel o la
temperatura de
gelificacin.
19
II.7.4. Aplicaciones de las pectinas
21
III. JUSTIFICACIN
22
IV. HIPTESIS
23
V. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
OBJETIVOS ESPECFICOS
24
VI. MATERIALES Y MTODOS
licuado
seleccin de la lavado, cortado materia prima-
materia prima acido citrico,
y pesado
30%,
proporcion 2:1
2do fitrado,
separacion etiquetado y
(bifasica) de la separacin, refrigerado, de
pectina del
pectina las pectinas.
alcohol
25
Acadmica de Biologa. Al hacer la seleccin de las pencas de nopal y la tuna se
desecharon los productos oxidados, picados, cortados y en mal estado para as
evitar la alteracin de la calidad del producto.
Figura 7. Tuna Amarrilla (A), tuna Cristalina (B) y tuna Cardona (C).
26
6.2. Proceso de extraccin de la pectina
Este proceso permiti separar sustancias qumicas de los tejidos por medio de
hidrolisis acida, Para cada una de las variedades de tuna se realizaron dos
extracciones; una corresponde al fruto completo y otra se realiz nicamente con
la cascara. Se utiliz cido ctrico al 30% a una proporcin 2:1, con respecto a la
cantidad de muestra. Las muestras fueron trituradas, para obtener una mezcla
homognea. Se determin el pH de la mezcla. Despus se colocaron las
soluciones nopal-cido ctrico, tuna-cido ctrico y tuna (cascara)-cido ctrico, en
un vaso de precipitado, que se puso a bao mara (figura 8), por 60 minutos,
agitando constantemente a una temperatura de 80.
27
Figura 8. Proceso de extraccin de pectina en tuna amarilla.
28
6.2.3. Separacin y recuperacin de la pectina
peso de la pectina
Rendimiento= x 100
% peso de la materia prima
29
6.3.3 Determinacin del porcentaje de acidez
Para la determinacin del porcentaje de acidez de las muestras se pesaron 10g
de muestra y se disolvieron en 25 ml de agua destilada, se titularon con
Hidrxido de Sodio al 0.1 N (se agregaron 2 gotas de fenolftalena como
indicador), hasta que la muestra tom una coloracin ligeramente rosa. Los
resultados se expresaron como gramos de cido ctrico.
( V ) ( N )( Peq)
%Acidez x 100
( M ) (1000)
M= Gramos de muestra.
(CmCms)
humedad= x 100
m
Dnde:
Cm = Masa de la cpsula con la muestra hmeda (g)
Cms = Masa de la cpsula con la muestra seca (g)
m= Masa de la muestra (g)
30
Figura 10. Muestras de pectinas en el desecador para la determinacin de
extracto seco.
(CcC)
ceniza= x 100
m
Dnde:
Cc = Masa del crisol con cenizas (g)
C= Masa del crisol seco (g)
m= Masa de la muestra (g)
31
Figura 11. Crisoles sometidos a calcinacin.
32
1M con agitacin; agregar 25 mL de CaCL 2 1M, calentano hasta ebullicin. Luego
se filtr y lavo el slido con agua caliente (Gierselmer, 1997). Se llev a secar a
70C por tres horas tomando el peso despus de enfriar para calcular el % de
pectato de calcio obtenido.
(V Vo)( NHCl)(meq)
N=
Mm
Donde:
N= Nitrgeno total (g nitrgeno/g muestra)
33
V= Volumen de HCl gastados en el problema (mL)
V0 = Volumen de HCl gastados en el blanco (mL)
NHCl = Normalidad del HCl (miliequivalentes/mL)
meq= Peso equivalente del nitrgeno (g/miliequivalentes) 0.014
Mm = Masa de la muestra (g)
34
meq B= miliequivalentes de NaOH 0.25N
35
VII. RESULTADOS Y DISCUSIN.
Figura 14. Precipitacin de la pectina de tuna amarilla (A) y nopal cardn (B)
36
valoraron varias temperaturas, siendo la antes mencionada la mejor para la
extraccin.
Los rendimientos de pectina se muestran en la grfica 1, donde se compara el
rendimiento obtenido en cada una de las variedades de nopal y tuna. Para la
muestra de tuna completa variedad amarilla, no se realiz el anlisis debido a
que se utilizaron todas las muestras de esta variedad, por lo cual no fue posible
conseguir ms, ya que la temporada haba terminado.
Para la pectina obtenida de la cascara de tuna amarilla, se obtuvo el mayor
rendimiento con un 26.62%, por el contrario el menor valor se observ en la
pectina de tuna cristalina completa con un 8.17%. En comparacin con las penca
de nopal cardn y nopal peln de las cuales, se obtuvieron los rendimientos ms
bajos con un 6.25% y 2.78% respectivamente.
Lazona (2007), extrajo pectina de la cascara de tuna alfayuca, a una temperatura
de 60, bajo una condicin de extraccin, acuosa con agente quelante (EDTA),
obteniendo un rendimiento de 0.25%-1.5% en base seca. De igual manera
Espinoza et al., (2011) realizaron extraccin de pectina en nopal (Opuntia Ficus
Indica), por el mtodo de hidrolisis acida utilizando cido clorhdrico, bajo
diferentes condiciones de extraccin, llegando a la conclusin, que ha estados de
madurez de 12 meses, temperatura de extraccin de 80 C y tiempo de 30min
obtuvo un rendimiento de 0,677 %. Siendo el mejor tratamiento.
Sin embargo, las variedades de tuna y nopal usadas por cada autor y las
condiciones de extraccin difieren a las usadas en esta investigacin. Por lo
tanto se puede confirmar que factores como temperatura, tiempo de extraccin y
pH, as como el mtodo de extraccin son determinantes en el rendimiento.
37
Cascara= Ca
Completa= Co
2.78
16.35
26.35
6.25
26.62
21.36
8.17
0 5 10 15 20 25 30
38
cristalina y Cardona respectivamente, mientras que el mayor contenido se obtuvo
en la tuna amarilla (Ca) con 25 Brix. En el caso de la pectina de nopal, se
registraron valores de 23 Brix para nopal cardn y 22 Brix para nopal peln.
0 5 10 15 20 25 30
39
Pectina de nopal peln 23.15
0 5 10 15 20 25
0 20 40 60 80 100 120
40
Para el caso de las pectinas obtenidas a partir de tuna, se puede notar que estas
tuvieron valores menores de humedad, aunque la fluctuacin no fue significativa.
Se observa que los valores obtenidos fueron semejantes entre pectinas de la
misma variedad, como es el caso de la Pectina de tuna Cardona (Co) 82.86 y
Pectina de tuna Cardona (Ca) 83.49%; Pectina de tuna cristalina (Co) 81.83% y
Pectina de tuna cristalina (Ca) 80.87%, donde la variacin no fue tan grande. Las
pectinas obtenidas de nopal cardn (85.42%) y nopal peln (99.89%) fueron los
de mayor porcentaje de humedad.
La pectina es una sustancia con una gran habilidad para retener agua, por lo que
el contenido de humedad es un parmetro importante para la comercializacin y
determinar la calidad.
0 1 2 3 4 5 6 7
41
Grfica 5. Contenido de ceniza, en pectinas de nopal y tuna
0.16 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.18 0.18 0.18 0.18
42
Se observa una fluctuacin de 0.025%- 0.067 %, siendo la pectina de tuna
amarrilla la de menor porcentaje, por el contrario la pectina nopal cardn
presento el mayor porcentaje de nitrgeno.
0
Pectina de tuna cardona (Co)
% protena
43
Tuna amarilla 6.74
1.239 1.970
(Ca*)
Nopal cardn 9.10 0.154 1.968
Tuna Cardona 7.17
0.922 1.955
(Co*)
Tuna Cardona 6.36
17.43 1.963
(Ca*)
Nopal peln 2.71 18.00 1.957
44
20 17.43 18
18
16
14
12
10
8
6
4 1.96
1.54 1.96 1.97
1.24 1.97 1.96 1.96 1.96
2 0.46 0.15 0.92
0
% Metoxilos % AAG
45
7.5 Espectro infrarrojo de las pectinas
En la figura 14, se observan los espectros de IR de las pectinas obtenidas de
nopal (4 y 7) y de las diferentes tunas. Los picos expresado a una longitud de
onda de 1040 cm-1 y 1090 cm-1 indican la banda de vibracin de tensin del grupo
simtrico COC que confirma tambin el alto grado de esterificacin y la
presencia de pectina de metoxilo en las pectinas estudiadas del nopal y tuna. A
1325 y 1390 cm-1, existe una banda de vibracin de tensin del CO. Los picos a
1226 son la banda de vibracin de tensin asimtrica del COC, e indican la
abundancia de los grupos metoxilos (OCH 3). Las bandas de particular
importancia para la determinacin del grado de esterificacin son aquellas que
aparecen alrededor de 1640 cm -1 y 1720 cm-1 y son indicadoras de grupos
carboxilos libres y esterificados, los cuales son tiles para determinar el grado de
esterificacin y para la identificacin de pectinas de alto y bajo metoxilo
(Manrique, 2002). En ambos espectros se observa un pico ancho de 3400 cm -1
debido a las vibraciones de tensin del O-H, lo cual indica que existen muchos
grupos OH en la estructura de la pectina. La banda de 2970 cm -1 corresponde a
la tensin del CH de los grupos CH2.
46
Figura 15. Espectros de IR de las pectinas de nopal y tuna.
Chasquibol y Morales (2010) reporta que los espectros infrarrojos de los patrones
de las pectinas de la manzana y el limn tienen caractersticas similares, ya que
presentaron un alargamiento pronunciado entre 1626 y 1646 cm -1, que
corresponde a la banda de vibracin de tensin simtrica del grupo COO,
coincidiendo con los encontrados en las pectinas del nopal y tuna, tambin
menciona que las bandas que aparecen entre 1746 cm -1 y 1749 cm-1
corresponden a los grupos carbonilos de los grupos COOH y de los grupos
acetilos (COOCH3) de la pectina.
47
VIII. CONCLUSIONES
Para FT-IR en general se observa que todos los espectros tienen la misma forma
y expresin de picos.
Por la diferencia en los valores de calidad en cada una de las pectinas obtenidas,
se puede notar que las condiciones del proceso de extraccin; influyeron sobre la
calidad de las pectinas.
48
IX. LITERATURA CITADA
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