Introduccin.

Un material nutritivo preparado para el crecimiento de microorganismos se

denomina medio de cultivo. Algunas bacterias pueden crecer bien en casi
cualquier medio de cultivo; otras requieren medio especiales y otras no pueden
crecer en ninguno de los medios inerte existentes hasta ahora. Los
microorganismos que se introducen en un medio de cultivo para que
comiencen a crecer se denominan inculo. Los microbios que crecen y se
multiplican en un medio de cultivo se denominan cultivo.

S desea cultivar un microorganismo determinado, debe contener los nutrientes

adecuados para el microorganismo especfico que se desea desarrollar:
Tambin debe contener humedad suficiente, un pH ajustado de manera
apropiada y una concentracin conveniente de oxgeno, tal vez ausente por
completo. El medio que se va a sembrar debe ser estril, es decir, en un
principio no debe contener microorganismos viables, de modo que el cultivo
contenga slo los microbios que se agreguen al medio. Por ltimo, el medio de
cultivo sembrado debe incubarse a la temperatura correcta.

Un medio qumicamente definido es aquel del cual se conoce la composicin

qumica exacta.

Un medio qumicamente indefinido es aquel del cual se desconoce su

composicin qumica y es difcil determinarla.

Medios selectivos y diferenciales.

Los medios selectivos estn diseados para suprimir el crecimiento de

bacterias no deseadas y favorecer el crecimiento de las deseadas.

Los medio diferenciales permiten distinguir con mayor facilidad las colonias del
microorganismo deseado de otras colonias que crecen en la misma placa.

Cultivo de enriquecimiento.

En ocasiones en necesario utilizar un cultivo de enriquecimiento porque las

bacterias presentes en pequea cantidad pueden no detectarse, en especial si
hay otras bacterias presentes en cantidades mucho mayores.

El medio para un cultivo de enriquecimiento suele ser lquido y proporcionar

nutrientes y condiciones ambientales que favorecen el desarrollo de un
microbio particular pero no de otros.

Cuestionario

1. Por qu es necesario prepara los medios de cultivo con agua destilada o

desmineralizada?
En la preparacin de medios de cultivo, reactivos y solucin amortiguadora de
fosfato se debe utilizar slo agua destilada o desmineralizada, libre de trazas
de metales disueltos, compuestos bactericidas o sustancias inhibidoras.
Muchos factores que pueden influir en la calidad del agua destilada que
abastece un laboratorio como: a) el diseo del destilador; b) el origen del agua
natural; c) si se usa columna de intercambio inico, la condicin en que est; d)
si se usa un filtro de carbn, la condicin en que esta; e) el diseo del tanque
de almacenamiento; f) la temperatura del agua almacenada y g) la duracin
del almacenamiento antes del uso.

El agua destilada estril se usa para rehidratar las clulas del cultivo.

2. Mencionar dos ejemplos de medios de cultivo que requieran su

esterilizacin por filtracin.

Algunos medio de cultivo que requieren esterilizacin por filtracin son: Agar
sangre y Agar corazn, ya que algunos de sus componentes son muy
termolbiles, es decir que se altera fcilmente por la accin del calor.

3. Por qu se recomienda enfriar a 45 C el agar antes de efectuar el

vaciado en las cajas Petri?

El agar se debe dejar enfriar porque si est a una temperatura superior al

vaciar a las cagas Petri y colocarles la tapa el agar empezara a evaporar
adhirindose a la tapa, y al ir bajando la temperatura esta se condensar sobre
nuestro cultivo de agar evitando que se forme una superficie lisa donde se
pueda realizar de manera adecuada nuestro inocular nuestro cultivo.

4. Qu caractersticas tiene el agar en cuanto a composicin qumica,

valor alimenticio y propiedades fsicas?

El agar es un producto que se obtiene de numerosas algas, principalmente

algas de los gneros Gracilaria, Gelidium y Euchem. Todas se caracterizan por
pertenecer al grupo de las algas rojas (Rodofceas).

Composicin qumica: 70% de hidratos de carbono, sustancias proteicas, fibras,

sales de calcio, agarosa, agropectina y otras sustancias.

Es un laxante fuerte tiene actividad vasculotropa y vasomotora;es rubefaciente

y descongestionante, alivia la neuralgia posherptica en infecciones por Herpes
zoster y tiene propiedades antibacterianas.

5. Consultar la composicin de los siguientes medios: S.S., S-110, EMB,

XLD, LIA, SDA, MIO, caldo nutritivo y caldo Czapek-Dox
Agar Salmonella Shigella (S.S): Base de peptona con lactosa, citrato frrico y
citrato de sodio. Contiene rojo neutro como indicador, inhibicin de coliformes
por el verde brillante y las sales biliares.

Lab- Lemcopoderv 5.0 g

Peptone . 5.0 g
Lactose . 10.0 g
Bile salts . 8.5 g
Sodium citrate 10.0 g
Sodium thiosulphate .. 8.5 g
Ferric citrate . 1.0 g
Brillant Green 0.00033 g
Neutral red .. 0.025g
Agar 15.0 g

Estafilococo Medio 110 (S-110): Es un microorganismo que puede causar

intoxicacin alimentaria, y para su aislamiento, pueden usarse distintos medios
slidos selectivos.

Gelatina bacteriolgica 30.0 g

Lactosa . 2.0 g
Extracto de levadura .... 2.5 g
D-Manitol . 10.0 g
Peptona de Casena 10.0 g
Cloruro de sodio .. 75.0 g
Fosfato dipotsico .. 5.0 g
Agar bacteriolgico 15.0 g

Agar eosina azul de metileno (EMB): Es un medio de siembra diferencial que se

puede utilizar en lugar del agar de MaeConkey para el aislamiento o la
deteccin de Enterobacteriaceae o bacilos coliformes relacionados a partir de
muestras con bacterias mixtas.
EMB de Levine, que slo tiene lactosa.

Peptona ... 10.0 g

Lactosa .... 10.0 g
Fosfato dipotsico ..... 2.0 g
Eosina .. 0.40 g
Azul de metileno .... 0.065 g
Agar . 15.0 g
Agar xilosa lisina desoxicolato (XLD): Agar extracto de levadura con lisina,
xilosa, lactosa, sacarosa y citrato de amonio frrico. El desoxicolato de sodio
inhibe los microorganismos grampositivos; contiene rojo fenol como indicador.

Xilosa . 3.75 g
L-lisina .... 5.0 g
Lactosa . 7.5 g
Sacarosa .... 7.5 g
Cloruro de sodio .. 5.0 g
Extracto de levadura .. 3.0 g
Rojo fenol ... 0.08 g
Desoxicolato de sodio 2.5 g
Tiosulfato de sodio .. 6.8g
Citrato frrico de amonio .... 0.08g
Agar 15.0 g
Agua destilada c.s.p .. 1000 ml

Agar hierro-lisina (LIA): Utilizado en muchos laboratorios como auxiliar para la

identificacin de especies de Salmonella, la mayora de las cuales son tanto
sulfuro de hidrogeno positivas como lisina descarboxilasa positiva.

Peptona .. 15.0 g
Extracto de levadura .... 3.0 g
Extracto de carne .. 3.0 g
Sacarosa ... 10.0 g
Sulfato de hierro .. 0.20 g
Cloruro sdico .. 5.0 g
Tiosulfato de sodio .. 0.30 g
Rojo fenol ..... 0.024 g

Agar Sabouraud Dextrosa (SDA): Este medio de cultivo es utilizado para cultivo
de mohos y levaduras patgenas y no patgenas. Est compuesto por digerido
enzimtico de casena, dextrosa, agar y agua destilada.

MIO: Medio usado para la identificacin de Enterobacteriaceae en base a su

movilidad, actividad de ornitina decarboxilasa y produccin de indol.

Dextrosa .... 1.0 g

Extracto de levadura ... 3.0 g
Peptona ..... 10.0 g
Triptena .. 10.0 g
Clorhidrato de L-ornitna .. 5.0 g
Agar ....... 2.0 g
Purpura de bromocresol ........ 0.02 g
Caldo nutritivo: Es un medio slido que se prepara aadiendo 12 g de agar-
agar a un caldo usual. Existen diversas clases de agar nutritivo
comercializadas: agar nutritivo, agar de infusin de cerebro-corazn (BHI agar),
agar triptona de soja (TSA), agar brcela, agar Columbia, agar GC, etctera.

Peptona ..... 0.5 %

Extracto de carne/extracto de levadura 0.3 %
Agar ....... 1.5 %
Cloruro de sodio .. 0.5 %
Agua destilada

Caldo Czapek-Dox: Est compuesto por nitrato de sodio (NaNO 3) fosfato

dipotasico (K2HPO4), sulfato de magnesio MgSO4, agua, cloruro de potasio (KCl)
sulfato de hierro FeSO4, sacarosa, agar y agua destilada.

Nitrato sdico .... 2.0 g

Cloruro potsico ... 0.5 g
Sulfato magnsico ... 0.5 g
Sulfato ferroso .. 0.01 g
Fosfato dipotsico .... 1.0 g
Sacarosa ..... 30.0 g
Agar agar .......... 12.0 g

Referencias

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Tortora, G. Funk, B., Case, C. (2007). Introduccin a la Microbiologa (9 ed.)

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