Anda di halaman 1dari 4

Mikroorganisme atau mikroba adalah organisme yang berukuran sangat kecil sehingga untuk

mengamatinya diperlukan alat bantuan.[1] Mikroorganisme disebut juga organisme mikroskopik.


[1]
Mikroorganisme seringkali bersel tunggal (uniseluler) maupun bersel banyak (multiseluler) [1].
Namun, beberapa protista bersel tunggal masih terlihat oleh mata telanjang dan ada beberapa
spesies multisel tidak terlihat mata telanjang.[rujukan?] Virus juga termasuk ke dalam
mikroorganisme meskipun tidak bersifat seluler.[1]

Ilmu yang mempelajari mikroorganisme disebut mikrobiologi.[1] Orang yang bekerja di bidang
ini disebut mikrobiolog.[rujukan?]

Mikroorganisme biasanya dianggap mencakup semua prokariota, protista, dan alga renik.[rujukan?]
Fungi, terutama yang berukuran kecil dan tidak membentuk hifa, dapat pula dianggap sebagai
bagiannya, meskipun banyak yang tidak menyepakatinya.[rujukan?] Kebanyakan orang beranggapan
bahwa yang dapat dianggap mikroorganisme adalah semua organisme sangat kecil yang dapat
dibiakkan dalam cawan petri atau inkubator di dalam laboratorium dan mampu memperbanyak
diri secara mitosis.[rujukan?]

Mikroorganisme berbeda dengan sel makrooganisme.[rujukan?] Sel makroorganisme tidak bisa


hidup bebas di alam melainkan menjadi bagian dari struktur multiselular yang membentuk
jaringan, organ, dan sistem organ.[rujukan?] Sementara, sebagian besar mikrooganisme dapat
menjalankan proses kehidupan dengan mandiri, dapat menghasilkan energi sendiri, dan
bereproduksi secara independen tanpa bantuan sel lain.[1]

Isolasi merupakan cara untuk memisahkan atau memindahkan


m i k r o b a tertentu dari lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni atau biakan
murni.Kultur murni ialah kultur yang sel-sel mikrobanya berasal dari pembelahan dari satusel
tunggal (Pelczar, 1986).P e k e r j a a n m e m i n d a h k a n b a k t e r i d a r i m e d i u m y a n g l a m a
k e m e d i u m y a n g baru harus dilakukan secara teliti. Terlebih dahulu harus diusahakan agar
semua alat-alat yang ada sangkut pautnya dengan medium dan pekerjaan inokulasi itu
benar- b e n a r s t e r i l . H a l i n i u n t u k m e n g h i n d a r i
k o n t a m i n a s i , y a i t u m a s u k n y a mikkroorganisme yang tidak diinginkan
(Budiarti, 2009).
1 . 2 T u j u a n
Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mempelajari teknik-teknik isolasi mikroba dan
pemurniannya.

BAB IITINJAUAN PUSTAKA


Bakteri tersebar sangat luas baik ditanah, air dan udara, bila
h e n d a k mengisolasi bakteri dari tanah/ benda padat yang mudah tersuspensi atau
terlarut,atau zat cair lain, maka dilakukan serangkaian pengenceran (dilution series)
terhadapzat tersebut. Sumber isolat dari bakteri benda yang liat atau padat, misatnya
dagingmaka zat tersebut dihancurkan terlebih dahulu. Terhadap bakteri yang hanya
terdapatd i p e r m u k a a n m a k a p e n g e n c e r a n d i l a k u k a n t e r h a d a p a i r
t e m p a t z a t t e r s e b u t dicelupkan/ direndam. Dan jika bakteri hendak diisolasi
dari udara, cukup denganmembuka cawan Petri yang berisi media agar steril beberapa
saat.I s o l a s i m e r u p a k a n c a r a u n t u k m e m i s a h k a n a t a u m e m i n d a h k a n
m i k r o b a tertentu dari lingkungannya, sehingga diperoleh kultur murni atau biakan
murni.Kultur murni ialah kultur yang sel-sel mikrobanya berasal dari pembelahan dari satusel
tunggal (Pelczar, 1986).Kultur murni atau biakan murni sangat berguna didalam
mikrobiologi, yaituuntuk menelaah dan mengidentifikasi mikroorganisme, termasuk
penelaahan ciri-ciricultural, morfologis, fisiologis, maupun serologis, memerlukan
suatu popolasi yangterdiri dari satu macam mikroorganisme saja (Hadioetomo,
1993). Sifat organismedalam suatu biakan murni dapat dipelajari dengan metode
yang amat keras denganhasil yang sangat akurat karena pengaruh sel hidup yang lain dapat
ditiadakan (Volk,1993).Terdapat beberapa cara untuk mencegah masuknya
mikroorganisme yangtidak diinginkan dan untuk menanam suatu species yaitu :
1 . P e n a n a m a n d e n g a n p e n g g o r e s a n

Merupakan cara rutin yang dipakai untuk mengasingkan mikroba agar didapatkan biakan
murni.2 . P e n a n a m a n l a p a n g a n Dilakukan dengan
m e m b a s a h i s e l u r u h p e r m u k a a n l e m p e n g a g a r dengan suspensi
mikroba.C a r a y a n g d a p a t d i l a k u k a n u n t u k m e n d a p a t k a n b i a k a n m u r n i
t e r d a p a t beberapa, yaitu :
1 . P e n g e n c e r a n 2 . P e n u a n g a n 3 . P e n g g e s e k a n 4.Single
c e l l i s o l a t i o m 5 . I n o k u l a s i h e w a n ( B u d i a r t i , 2 0 0 9 ) Beberapa faktor yang perlu
diperhatikan dalam melakukan isolasi mikroba yaitu:1 . S i f a t s e t i a p j e n i s
mikroba yang akan diisolasi2.Tempat hidup atau asal
mikroba tersebut3 . M e d i u m p e r t u m b u h a n y a n g
s e s u a i 4 . C a r a m e n g i n o k u l a s i m i k r o b a 5 . C a r a
m e n g i n k u b a s i m i k r o b a 6.Cara menguji bahwa
m i k r o b i a y a n g d i i s o l a s i t e l a h b e r u p a k u l t u r m u r n i d a n sesuai
dengan yang dimaksud7 . C a r a m e m e l i h a r a a g a r m i k r o b i a y a n g t e l a h
d i i s o l a s i t e t a p m e r u p a k a n k u l t u r murniP e n g g u n a a n m e d i a b u k a n
hanya untuk pertumbuhan dan perkembangbiakanmikroba, tetapi juga
untuk tujuan-tujuan lain, misalnya untuk isolasi, seleksi,

evaluasi, dan deferensiasi biakan yang didapatkan. Artinya penggunaan


beberapa j e n i s z a t t e r t e n t u y a n g m e m p u n y a i p e n g a r u h t e r h a d a p
p e r t u m b u h a n d a n perkembangbiakan mikroba, banyak dilakukan dan dipergunakan.
Sehingga tiap-tiapmedia mempunyai sifat (spesifikasi) tersendiri sesuai dengan
maksudnya (Baker,1986).Bakteri adalah salah satu contoh mikroorganisme yang penting dan
memiliki b e n t u k y a n g b e r a g a m . P a d a u m u m n y a b a k t e r i b e r h u b u n g a n
d e n g a n m a k a n a n . Adanya bakteri dalam bahan pangan dapat mengakibatkan
pembusukan yang tidak diinginkan atau menimbulkan penyakit yang ditularkan
melalui makanan atau dapatmelangsungkan fermentasi yang menguntungkan (Buckle,
1987).Dilakukan serangkaian pengenceran terhadap zat tersebut untuk
mengisolasi bakteri dari tanah/benda padat yang mudah tersuspensi atau terlarut
atau zat cair.Misalnya suatu sampel dari suatu suspensi yang berupa campuran diencerkan
dalams u a t u t a b u n g t e r s e n d i r i s e c a r a b e r k e l a n j u t a n d a r i s u a t u t a b u n g
k e t a b u n g l a i n (Dwidjoseputro, 1994). Pertumbuhan bakteri pada medium
a g a r p a d a u m u m n y a berbentuk koloni berupa lendir dan mengkilap. Pemurnian
dengan suhu inkubasi30C selama 2 x 24 jam (Cappuccino & Sherman, 1983).Selain
bakteri, di alam masih terdapat mikroorganisme lain seperti khamir d a n f u n g i .
Khamir termasuk fungi, tetapi dapat dibedakan dari kapang
k a r e n a bentuknya yang uniseluler, dan memiliki ukuran 5 dan 20 mikron (Fardiaz,
1992).B i a s a n y a b e r u k u r a n 5 s a m p a i 1 0 k a l i l e b i h b e s a r d a r i b a k t e r i .
S u m b e r k h a m i r terutama terdapat pada daun-daun, bunga-bunga, eksudat dari
tanaman, buah lewatmasak, tanah kebun buah, serta khamir yang banyak di jual dipasaran.

Khamir/yeast dapat tumbuh dalam media cair dan pada dengan cara
y a n g sama dengan bakteri. Penampakan pada medium akan tampak seperti koloni bakteri,hanya
saja koloninya tidak mengkilap (Buckle, 1987).Fungi/kapang sangat berlawan dengan
bakteri dan khamir/yeast, seringkalid a p a t d i l i h a t o l e h m a t a . B e n t u k k h a s y a n g
dimiliki oleh kapang adalah adan ya f i l a m e n ( m i s e l i u m ) ( F a r d i a z ,
1 9 9 2 ) . I n i l a h y a n g m e m b e d a k a n n y a d e n g a n mikroorganisme
lainnya.Fungi mempunyai bentuk seperti kapas dan biasanya terlihat pada kertas-
kertas koran basah, kulit yang sudah usang, dinding basah, buah-buahan
y a n g membusuk dan bahan pangan lain seperti keju dan selai. Sumber fungi hampir
samadengan bakteri, hanya saja perbedaannya populasi fungi di air lebih sedikit dan fungilebih
menyukai pH lingkungan yang rendah (Buckle, 1987). Pemurniannya dengan suhu
inkubasi 28C selama 2 x 24 jam.P e n g u k u r a n k u a n t i t a t i f p o p u l a s i s u a t u m i k r o b a
d a p a t d i l a k u k a n d e n g a n penentuan jumlah sel dan penentuan massa sel (Fardiaz, 1992).
Ada berbagai macamc a r a u n t u k m e n g u k u r j u m l a h s e l a n t a r a l a i n d e n g a n
h i t u n g a n c a w a n , h i t u n g a n mikroskopis langsung, atau dengan alat colony counter
(Hadioetomo, 1993).

BAB IIIMETODE PRAKTIKUM3 . 1 W a k t u d a n T e m p a t


Praktikum ini dilaksanakan pada hari Senin tanggal 5 Oktober
2 0 0 9 bertempat di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas MIPA Unlam Banjarbaru.
3 . 2 A l a t d a n B a h a n
Alat alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah tabung reaksi steril,cawan petri steril,
vortex mixer, ependorp pipet, pipet volumetric, kertas label, h o l l y s t i c k , j a r u m
i n o k u l a s i , l a b u e r l e n m e n y e r , k a r e t g e l a n g , w a t e r b a t h , inkubator, lampu
spritus, aluminium foil, kapas.Bahan - bahan yang digunakan adalah medium nutrient agar (NA),
alkohol7 0 % , s p r i t u s , a q u a d e s t / l a r u t a n f i s i o l o g i s s t e r i l , s u m b e r b a k t e r i ,
m e d i a P D A , bayklin.
3 . 3 P r o s e d u r K e r j a Isolasi dan Pemurnian Bakteri
1 . D i b u a t m e d i u m N u t r i e n t A g a r 2.Dimasukkan sebagian ke dalam
tabung reaksi @ 5 ml3.Dimasukkan sebagian ke dalam labu
erlenmeyer 4 . D i s t e r i l k a n p a d a 1 2 1
o
C selama 15 menit.5 . D i b u a t s e r a n g k a i a n p e n g e n c e r a n s a m p e l 1 0
1
-10
5
6.Disuspensikan ke dalam cawan petri steril seban yak 1 ml dari
p e n g e n c e r a n tertinggi7 . D i r a t a k a n p a d a d a s a r c a w a n d e n g a n
menggo yangn ya8.Dituang 10-15 ml sampel agar bersuhu 45
o
c
7.Diratakan pada dasar cawan dengan menggo yangn ya8.Dituang 10-15 ml
sampel agar bersuhu 45
o
9 . D i g o y a n g m e m b e n t u k a n g k a 8 10.Dibiarkan hingga memadat11.Diinkubasi
terbalik pada 30
o
c selama 24 jam12.Dimurnikan secara goresan koloni yang terpisah13.Dipindah ke
media agar miring