Recambio Proteico.

Importancia biolgica.

Dra. Mara Mercedes Sobern Lozano

 Caso Clnico
Varn de 53 aos con carcinoma de supraglotis
Presenta astenia y anorexia desde hace varios meses.
Prdida de peso de 20 kg en el ltimo ao.

Pruebas realizadas:
Peso actual = 50 kg (hace un ao: 72.2 kg), Talla = 164 cm,
IMC = 18.59 kg/m2.

Pruebas bioqumicas
Hemoglobina = 12,7 g/dL, velocidad de sedimentacin globular
(VSG) = 22 mm, protena C reactiva = 5 mg/dL,
Na+: 112 mmol/L, K+: 5,5 mmol/L, Na urinario: 81 mmol/L.
 Por qu se
produce la prdida
excesiva de peso en
pacientes con
cncer avanzado?
 Destino de los aminocidos (AAs)

Protenas de la
dieta Degradacin
de Protenas
corporales

Conjunto de Sntesis de
aminocidos nuevas
(Pool de AA) protenas
corporales
 Una persona adulta, sana y
alimentada adecuadamente
Velocidad Velocidad degradacin
Sntesis de protena = de protenas

Pool
amincidos en
estado
estacionario
Para muchas protenas la regulacin de su sntesis determina su
concentracin en la clula. Su degradacin desempea papel
minoritario.

Otras protenas, velocidad de sntesis es constitutiva. Sus niveles

celulares estn controlados por una degradacin selectiva.
 A nivel CELULAR, pool
aminocidos es utilizado en el
RECAMBIO PROTEICO

RECAMBIO
Proceso de sntesis y degradacin
simultnea de molculas proteicas

Velocidad de recambio vara para

cada protena.
Importante en tejidos de rpido
crecimiento o remodelacin
 Para que utilizan las clulas el
Recambio Proteico?

1. Control de calidad.- permite eliminar

protenas anmalas o innecesarias

Eliminacin selectiva de protenas es uno

de los mecanismos ms empleados en el
control de procesos celulares complejos,
pues permite limitar la actividad de estas
molculas a momentos especficos de la
vida celular
 Para que utilizan las clulas el
Recambio Proteico?

2. Regulacin de etapas metablicas:

La concentracin y en consecuencia la actividad
de una enzima puede ser modificada.

Enzimas que juegan un papel clave en la

regulacin de vas metablicas tienen vidas
medias particularmente cortas.
 Para que utilizan las clulas el
Recambio Proteico?
3. En los tejidos, las elevadas tasas de recambio proteico
les permiten adaptarse a cambios ambientales.

Esfago , estmago, e intestino delgado tienen un recambio

proteico elevado debido a su actividad secretora, el rpido
desplazamiento y muerte de las clulas de la mucosa del
tracto gastrointestinal
Hgado tiene una tasa de recambio relativamente elevado
que facilita su adaptacin a cambios: alteraciones en la
ingesta de nutrientes

Tejido muscular cardaco y esqueltico es de recambio

relativamente bajo
 Para que utilizan las clulas el
Recambio Proteico?

4. Recambio proteico ms elevado ocurre en la vida

fetal y desciende progresivamente desde el recin
nacido hasta el adulto.

- Mayor sntesis proteica: En un nio prematuro la sntesis

proteica es dos veces mayor que en un nio en edad pre-escolar
y 3 a 4 veces mayor que en un adulto.

- Remodelacin tisular continua

 Para que utilizan las clulas el
Recambio Proteico?

5. Control del ciclo celular eucariota.

La progresin a travs de
las fases del ciclo celular
est regulada por la sntesis
y degradacin oportunas de
protenas ciclinas.
 La degradacin de protenas daadas o
innecesarias es mediada por sistemas
especializados presentes en todas las clulas

1. Sistema vesicular no dependiente de ATP:

- enzimas hidrolasas cidas de lisosomas.

2. Proteasas dependientes de Ca2+

3. Sistemas citoslicos dependientes de ATP: Ubiquitina-Proteasoma:

Protenas alteradas qumicamente por oxidacin.
Ricas en secuencia prolina-glutamato-serina-treonina (PEST)
Residuos N-terminales
 Mediante ubiquitina:
- Protenas anormales
- Protenas de vida media corta
(enzimas, reguladoras y limitantes
- Protenas de vida media larga
(estructurales)
- Protenas de membrana

Mediante lisosomas:
- Protenas de membrana
- Protenas de endocitosis:
Protenas plasmticas,
hormonas, lipoprotenas

Protenas mitocondriales tienen otros mecanismos de degradacin

 Proteasas citoslicas dependientes de Ca2+ : Calpainas
Superfamilia de proteasas no lisosomales
dependientes de Ca2+, con una cistena
en su sitio cataltico (tiolproteasas).

Poseen un dominio de unin a Ca2+

denominado calmodulin-like por ser
altamente homlogo a la calmodulina,
presentando las estructuras
tpicas manos EF de unin a Ca2+

El centro activo de las calpanas est

compuesto de una trada
cataltica formada
por cistena (C), histidina (H)
y Asparagina (N).
 Clasificaciones

Las calpanas se agrupan sobre la base de dos clasificaciones

diferentes:

1. Presencia o ausencia de dominios EF de unin a calcio.

Calpanas que los poseen: "convencionales" o "tpicas".
Calpanas que carecen de las manos EF: "atpicas".
- Calpanas tpicas: Calpanas 1, 2, 3, 8, 9, 11, 12 y 13.
- Calpanas atpicas: Calpanas 5, 6, 7, 10, 14 y 15.

2. En la localizacin de las enzimas,

Calpanas ubicuas, expresadas en todas las clulas del organismo.
Calpanas tejido-especficas, que solamente se expresan en
determinados tejidos, como el tero, el testculo o el tracto digestivo.
Calpanas ubicuas: Calpanas 1, 2, 5, 7, 10, 12, 14 y 15.
Calpanas tejido-especficas : Calpanas 3, 6, 8, 9, 11 y 13.
Proteasas citoslicas dependientes de Ca2+ : Calpainas

Estudios cinticos han

demostrado que la
calpastatina es un
inhibidor competitivo de
dos proteasas
dependientes de Ca2, la
-calpana y la m-
calpana
 Proteasas citoslicas dependientes de Ca2+ : Calpainas

En presencia de Ca2+ una molcula de

calpastatina puede inhibir hasta 4
molculas de calpana.

Este in es esencial para que esta

interaccin se produzca, ya que en
presencia del mismo se forman -
hlices en los subdominios A y C de la
calpastatina y se evidencian
estructuras abiertas en la superficie
de los dominios IV y VI de las
IV y VI: dominios de la -calpaina en contacto con
calpanas, promoviendo la interaccin subdominios A y C de la calpastatina. Subdominio B
entre ambas protenas de la calpastatina interacta con los dominios I y II
de la -calpana.
 Sistema citoslico
Ubiquitina-Proteasoma
 Premio Nbel Qumica 2004
Por el descubrimiento de la degradacin de protenas
mediada por ubiquitina

Aaron Ciechanover Avram Hershko Irwin A. Rose

Ubiquitina
 Ubiquitina

Protena pequea, de 76
aminocidos, altamente
conservada en eucariotes.

Extremo C-terminal presenta

dos Gly consecutivas; la ltima
se une a cadenas laterales de
Lys de otra Ub, o de una
protena, mediante un enlace
isopeptdico.
 Ubiquitina
Presenta varios residuos internos
de Lys (K), el ms importante:
K48.

A grupo NH2 de esta lisina se

puede unir una segunda molcula
de ubiquitina y al de esta, una
tercera y as sucesivamente
hasta formar una cadena de
poliubiquitina.

Por lo menos 4 ubiquitinas

constituyen la seal para la
destruccin por protelisis.
1) Unin de Ub al sitio activo de E1 por enlace tioster

- Activacin dependiente de ATP, de la Ub por parte de enzima

conjugadora de Ub (E1)

- Cada molcula E1 carga 2 molc.Ub activadas: una ligada con enlace

adenilato (enlace no-covalente) y la otra con enlace tiol-ster (enlace
covalente).

- Ub enlazada a E1 como tiol-ster es transferida a la enzima

conjugadora E2.
 3) Ubiquitina ligasa (E3) liga el E2-Ub y el
sustrato (protena blanco). Luego transfiere la
Ub directamente desde la E2 hacia el sustrato.
Son numerosas en el ser humano.
Son de 3 tipos segn dominio de ubiquitinacin
presente en ellas: RING, HECT, U-box.
2) Transferencia de Ub
desde E1 hacia enzima
conjugante de Ub (E2),
tambin mediante enlace
tioster.
 Protena MDM2 es un ejemplo de ubiquitina ligasa E3
tipo RING.

Ubiquitinacin y degradacin
por el proteosoma, de p53
La poliubiquitinacin no necesariamente funciona como seal de degradacin,
sino que la sealizacin es ms compleja, pudiendo funcionar como:
- seal de regulacin de la localizacin celular,
- la funcin o la interaccin de la protena blanco con sustratos
4. Reaccin de deubiquitinacin

Una regulacin adicional del sistema es llevada a cabo por las

enzimas desubiquitinadoras, E4 deubiquitinas (DUBs), las cuales
regulan la longitud de cadenas de poliUb y liberan las molculas de
Ub unidas a las protenas sustrato haciendo de la ubiquitinacin un
proceso dinmico y reversible.

E
1

E
1
 Proteasoma
- Complejo multiprotenico gigantesco con actividad endoproteasa.
- Localizado en ncleo o en el citoplasma celular.
- Forma de un cilindro hueco y en l se distinguen dos componentes:

1. Partcula reguladora de 19S.

Ocupa los extremos del cilindro.
19 S
Se distinguen 2 estructuras:
a.base (subunidades con actividad
de ATPasa (Rpt1-Rpt6) y 20 S regin
subunidades sin actividad de cataltica
ATPasa (Rpn1, Rpn2 y Rpn10).
b.pestaa (subunidades sin 19 S
actividad de ATPasa (Rpn3-
9,11-12)).
 Proteasoma

2. Partcula central
formada por dos anillos
heptagonales de 19 S
subunidades (ocluyen el
canal central) y dos 20 S regin
anillos de subunidades cataltica
(actividad treonn
proteasa) 19 S
Protena sustrato debe tener
al menos 4 Ub unidas para
reconocimiento.

Complejo regulador superior.-

Rpn10 se asocia con poliUb, y
Rpn1-Rpn2 se unen a la protena.

Enzimas desubiquitantes separan las

Ub y las subunidades con actividad
ATPasa, utilizando la energa de
ATP, producen desplegamiento de la
protena y la van pasando hacia la
cmara interior de la partcula
central mediante cambios de
conformacin de las subunidades
que obstruyen la entrada.
Partcula central.- A medida que la
protena va atravesando la cmara,
se produce la hidrlisis de los
enlaces peptdicos y los pptidos as
formados son liberados a travs de
la partcula reguladora inferior.

Pptidos formados tienen vida media

muy corta, pues son atacados
rpidamente por proteasas y
aminopeptidasas.

Cada proteasoma procesa solamente

un sustrato a la vez.
 Significado fisiolgico del sistema
ubiquitina-proteasoma

Ayuno, estados de desnutricin grave, caquexia

cancerosa
Intensa degradacin de protena
muscular.

Destruccin de protenas mal plegadas

Destruccin de protenas extraas en

pptidos ms pequeos para ser anclados a
las membranas para su reconocimiento por
el sistema inmunitario.
 Significado fisiolgico del
sistema ubiquitina-proteasoma

El producto del gen supresor tumoral,

protena p53, inhibe la actividad del
factor inducido por hipoxia (HIF-1),
convirtindolo en un objetivo para la
degradacin proteosmica
Significado fisiolgico del sistema
ubiquitina-proteasoma
En condiciones de oxigenacin normal
(normoxia), el HIF es continuamente
sintetizado y degradado

Para ser degradado:

- Hidroxilacin de 2 prolinas en el
dominio oxgeno dependiente (ODD) del
HIF.

- Reconocimiento por pVHL y la posterior

activacin de la va de degradacin de la
ubiquitina
protena Von Hippel Lindau (pVHL)
 Qu determina que una protena sufra un
proceso de ubiquitinizacin?

La vida media de protena est determinada por residuo amino terminal

Aminocido N-terminal Semivida
Ser, Met, Gly, Ala, Thr, Val > 20 h
Ile, Gln 30 minutos
Tyr, Glu 10 minutos
Pro 7 minutos
Asp, Leu, Phe, Lys 3 minutos
Arg 2 minutos

Se han conservados por billones de aos de evolucin y son los mismos

para degradacin de protenas tanto en bacterias como en humanos
 Secuencias PEST

Protenas con vida media menor de 2 horas son ricas en

regiones que contienen aa prolina, glutamato, serina y
treonina (P, E, S y T, respect.).

Son regiones, de 12 a 60 residuos de longitud, conocidas

como secuencias PEST.

Forman parte de un esquema de reconocimiento para

sistemas enzimticos que degradan protenas de vida media
corta, que posiblemente incluya el sistema de marcado de
ubiquitina.

Son pocas las protenas de vida media larga que contienen

estas regiones.
Fin de la
clase!