Prctica N 03: Medios de Cultivo I

(Metabolismo microbiano)

I. Introduccin:

MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el

desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar
un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en
las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.
Los microorganismos son los seres ms abundantes de la tierra, pueden vivir
en condiciones extremas de pH, temperatura y tensin de oxgeno, colonizando
una amplia diversidad de nichos ecolgicos. Entre los requerimientos ms
importantes para su desarrollo estn el carbono, el oxgeno, nitrgeno, dixido
de carbono e hidrgeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte
extra de factores de crecimiento especficos en forma de suero, sangre y
extracto de levadura entre otros.

Clasificacin de los medios de cultivo

Segn su origen:
a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de
origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya
composicin qumica no se conoce exactamente.
b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica
definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados
reproducibles.
c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por
ejemplo extracto de levadura.

Segn su consistencia:
a) LQUIDOS: se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin
acuosa.
b) SLIDOS: se preparan aadiendo un agar a un medio lquido (caldo) a
razn de 15g/litro. El agar es una sustancia inerte polisacrida (hidrato
de carbono) que se extrae de las algas. Este conjunto convenientemente
esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de ensayo y
presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que
antes no eran posibles en medio lquido".
c) SEMISLIDOS: contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para
determinar la motilidad de las especies en estudio.
Segn su composicin: A causa de los requerimientos qumicos del mundo
microbiano, a veces es necesario agregar o eliminar componentes qumicos del
medio.
a) COMUNES O UNIVERSALES: su finalidad es el crecimiento de la
mayor parte de los microorganismos poco existentes. Es el medio ms
frecuentemente utilizado para mantener colonias microbianas. Por
ejemlo: agar comn o caldo comn.
b) ENRIQUECIDOS: estn compuestos de un medio base como apoyo del
crecimiento al cual se le puede agregar un gran exceso de nutrientes
como suplementos nutritivos, por ejemplo: sangre, suero, etc. Se utiliza
para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales.
c) SELECTIVOS: son slidos en los que la selectividad se consigue
alterando las condiciones fsicas del medio o aadiendo o suprimiendo
componentes qumicos especficos. Este tipo de medio slo permite el
crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo el de otros. Se
utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones
mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol o Chapman (permite el
crecimiento de ciertos estafilococos).
d) DIFERENCIALES: son medios de cultivos que nos permiten distinguir
entre varios gneros y especies de microorganismos. Por ejemplo si al
medio se le ha aadido un carbohidrato y un indicador y la bacteria que
se cultiva es capaz de fermentar dicho carbohidrato, se produce una
acidificacin del medio con el consiguiente viraje de color del indicador
por el cambio de pH. El citrato de Simmons es un medio cuya nica
fuente de carbono es el citrato sdico, entonces en l solo crecern las
bacterias capaces de desarrollarse utilizando como nica fuente de
carbono ese componente.
Suelen ser a la vez selectivos, por lo tanto solo crecern determinadas
bacterias (pueden ser dos o ms tipos) que al actuar sobre alguno de
los componentes especficos del medio, demuestran algunas de sus
propiedades o caractersticas y nos permite diferenciar entre ambos
tipos.

e) DE ENRIQUECIMIENTO: son medios lquidos que contienen un agente

que inhibe las especies no deseadas pero que favorece el crecimiento
irrestricto del agente infeccioso. El medio de Muller - Kauffman, permite
el crecimiento de Salmonella inhibiendo a su vez el de numerosos
coliformes. Esto es de gran importancia ya que en ciertas muestras, por
ejemplo fecales, el agente infeccioso (Salmonella) es frgil y puede ser
superado en nmero por agente bacterianos indgenas como E. coli; por
lo tanto antes de realizar las pruebas de laboratorio es necesario
aumentar su nmero con respecto a sta en un caldo de
enriquecimiento. Ejemplo de este tipo son los caldos de tetrationato y
selenito. El agua de peptona alcalina se utiliza para Vibrio cholerae.
 f) DE TRANSPORTE: son utilizados para asegurar la viabilidad de la
bacteria sin multiplicacin significativa de los microorganismos desde el
momento de su extraccin hasta su posterior estudio. Se utilizan
generalmente cuando las muestras deben ser enviadas de un laboratorio
a otro. Se recomienda un lmite de dos horas desde la recoleccin de las
muestras y su estudio en el laboratorio. Los medios de transporte ms
frecuentemente utilizados son los de Stuart, Amies y Carey - Blair.

Un gran nmero de medios de cultivo usados en el laboratorio de microbiologa

son mixtos, es decir que tienen como finalidad la de varios grupos de los
mencionados, por ejemplo, el agar S- S es selectivo (pues tiene un inhibidor: el
verde brillante) y es a la vez un medio diferencial (lleva lactosa y un indicador)
que permite diferenciar las bacterias fermentadoras o no de dicho polisacrido.
El medio de Thayer y Martin para Neisseria es un medio enriquecido (contiene
plasma) y es selectivo (tiene 3 antibiticos inhibidores de la flora bacteriana y
fngica: colistina, vancomicina y nistatina).

II. Capacidad:
- Reconoce y comprende las caractersticas bioqumicas de los
diferentes grupos microbianos.
- Analiza la importancia las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo.

III. Meta:
- Conocer los principios generales de la preparacin de los medios de
cultivo de uso comn en Microbiologa
- Desarrollar las tcnicas de siembra comunes de aislamiento de
bacterias.
- Conocer algunos medios de cultivo comunes para bacterias y
adquieran el criterio para seleccionarlos segn sus necesidades.

IV. Materiales y equipos:

 - Esptula de acero
- Gradilla p/ tubos de ensayo 13 x 100 mm
- Matraz erlenmeyer 250 ml
- Mechero
- Placa de petri, 15 x 100 mm (Esteril)
- Probeta graduada, 100 ml
- Varilla de agitacin
- Piceta con agua destilada
- Piceta con alcohol al 70%
- Papel kraft
- Algodn y gasa
- Balanza

Medios y Reactivos

- Agar Sangre Base

- Sangre ovina desfibrinada estril
- Medio de transporte de Stuart

V. Procedimientos:

PREPARACIN DE MEDIOS

Preparacin de un medio slido en placa:

a. Leer cuidadosamente las instrucciones de

preparacin del medio de cultivo asignado.
b. Pesar 2,4 gr de Agar Sangre Base y depositarlo en
un Matraz Erlenmeyer 250 ml
c. Medir 60 ml de agua destilada con la probeta y
agregar al matraz.
d. Dejar reposar 5 minutos y mezclar perfectamente
hasta obtener una suspensin homognea (emplear
la varillas de agitacin)
e. Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto
para disolucin total.
f. Esterilizar en el autoclave (121 C durante 15
minutos)

Preparacin de Agar Sangre:

 g. Agregar 5-10% de agar sangre ovina desfribinada estril al medio
esterilizado, fundido y enfriado (45 50 C)
h. Homogenizar y distribuir en placas Petri estril (dentro de una campana
de flujo laminar o en las proximidades del mechero, flameando bien la
boca de la botella para evitar las contaminaciones)
i. Dejar que el medio solidifique.

Preparacin de medio slido en tubo (slant):

a. Pesar el medio que contenga agar y rehidratar con agua destilada en un

matraz.
b. Fundir el medio en un placa caliente. El medio debe disolverse
completamente (transparente)
c. Distribuir rpidamente el medio en los tubos antes de que comience a
solidificar. Para ello se emplear una pipeta y los tubos no se llenarn
ms de un tercio de su volumen (5ml)
d. Autoclavar.
e. Sacar del autoclave e inclinar los tubos sobre la poyata para obtener
tubos con medio en slant.

Todos los medios se guardan en nevera a 4C.

Referencias bibliogrficas:

Koneman. Diagnostico Microbiolgico. Ed. Mdica Panamericana, 2008

Medios de cultivo - Microbiologa General. Universidad Nacional del

Nordeste

Medios de cultivo en Microbiologa. Manuel Mendo Rubio. Editorial

EBISA. 6ta Ed. 2014