Reglarea activitatii enzimelor

Majoritatea enzimelor rspund rapid la modificarea concentraiei substratului printr-o

cretere a vitezei de reacie. Aceasta are ca urmare scderea concentraiei substratului, fapt care
face necesara o noua reajustare a vitezei de reacie. Astfel reglarea vitezei de reacie a enzimelor
este esenial pentru coordonarea proceselor metabolice.
Principalele mecanisme prin care este reglat activitatea enzimelor dintr-o cale
metabolic, sunt reprezentate de:
1. Reglarea alosteric;
2. Reglarea covalent (prin fosforilare-defosforilare)
3. Transformarea pre-enzimelor inactive n enzime active;
4. Sinteza de noi molecule de enzime

1. Reglarea alosteric este mecanismul cel mai complex al coordonrii metabolice.

Enzimele implicate n acest tip de reglare sunt enzime alosterice, limitante de vitez n cadrul
unui proces. Reglarea activitatii lor este posibila datorita structurii lor speciale.

1.1. Structura enzimelor alosterice.

Enzimele alosterice sunt enzime care prezint pe lng centrul activ un situs (uneori mai
multe) suplimentar numit situs alosteric (fig. 20). Alo provine din grecescul alo care nseam
altul. Compuii care se leag la acest situs poart numele de efectori sau liganzi sau modulatori.
Legarea unui efector alosteric produce modificri conformaionale ale enzimei, care determina
modificarea afinitii acesteia pentru substrat.
Enzimele alosterice :
1) sunt proteine cu structur cuaternar alctuite din mai multe lanuri polipeptidice, numite
monomeri sau subuniti, care de regul sunt n numr par.
2) fiecare unitate prezint un centru activ i unul sau mai multe centre alosterice.
3) fiecare subunitate se prezint sub dou forme: o forma T (tight sau tense) cu afinitate
sczut pentru substrat (stabilizat de efectorii negativi) i o form R (relaxed) cu afinitate
crescut pentru substrat (stabilizat de efectorii pozitivi).

Page 1 of 9
 Fig.20 Structura enzimelor
alosterice, alcatuite din monomeri ce isi
pot modifica afinitatea pentru substrat
functie de forma pe care o adopta la un
moment dat: forma T cu afinitate
crescuta, forma R cu afinitate scazuta
pentru substrat. Modificarea de forma
este dictata de prezenta/absenta
modulatorilor.

1.2. Funcionarea enzimelor

alosterice.
Au fost elaborate dou modele care ncearc s explice funcionarea acestor enzime,
modelul simetric i modelul secvenial.
Modelul simetric
Acest model trebuie s respecte condiia de simetrie n sensul c oligomerii pot exista fie
n forma T, fie n forma R, strile hibride TR nefiind admise (fig. 20). Legarea modulatorului (de
exemplu modulator pozitiv) la starea T determin tranziia la forma R fr apariia de specii
intermediare. n virtutea simetriei toi monomerii vor suferi tranziia TR ceea ce va accelera
semnificativ legarea substratului efect cooperativ. Aceeai comportare se va manifesta i la
fixarea unui modulator negativ, numai c efectul va fi contrar, de scdere rapid a fixrii
substratului.

Modelul secvenial
Acest model abandoneaz principiul simetriei n sensul c legarea efectorului la forma T
induce tranziia T-R, dar efectul se limiteaz doar la monomerul vecin. Numai monomerul vecin
va fixa cu mai mult uurin substratul i modificndu-i conformaia, prin legarea substratului,

Page 2 of 9
 va induce tranziia T-R monomerului urmtor, fenomenul propagndu-se din aproape n aproape
la toi monomerii.

Fig.22 Model secvential, in care monomerii pot adopta configuratii in intregime T sau
R sau configuratii hibride TR. Modulatorii pozitivi induc tranzitia TR doar monomerului vecin
ducand la aparitia formei mixte TR. Aceasta leaga la unitarea R, ce are afinitate crescuta,
substratul, ceea ce induce tranzitia T R urmatorului monomer. Modificarea se transmite
progresiv tuturor monomerilor.

Modelul secvential poate fi ilustrat prin comportarea hemoglobinei.

Hemoglobina este un tetramer alctuit din patru lanuri polipeptidice, numite subunitati
sau monomeri, in care fiecare subunitate transporta o molecula de oxigen. Hemoglobina se
prezinta sub doua forme:
1) o forma tensionata cu afinitate mic pentru oxigen, determinat de o structur dens,
cauzat de legturi de hidrogen, ce mpiedic micarea liber a monomerilor;

Page 3 of 9
2) o form relaxata cu afinitate mare pentru oxigen, determinat de o structur afnat,
cauzat de ruperea unor legturilor de hidrogen fapt ce permite micarea liber a monomerilor;
La nivel pulmonar, presiunea crescut a oxigenului forteaza legarea unei prime
molecule de oxigen. In urma legarii, Fe2+ din hem se poziioneaza n centrul nucleului tetrapirolic
ceea ce antreneaz deplasarea histidinei proximale si a intregii portiuni de lant careia ii apartine
(fig. 23).

(a)

(b)

Page 4 of 9
 Fig.23 Atomul de Fe este situat in afara planului porfirinic in molecula de hem (a).
Fixarea unei molecule de oxigen trage Fe in planul porfirinic, miscare ce antreneaza deplasarea
histidinei F8 proximale si a intregului fragment F din care aceasta face parte (b). Acest fapt are ca
urmare ruperea unor legaturi de hidrogen intre monomeri si modificarea conformatiei spatiale a
proteinei.

Apar asadar modificri conformaionale ale acestei subuniti care duc la ruperea unor
legturi ionice slabe, prezente n forma T. In urma acestor modificari forma T trece n forma R
care are afinitatea crescut pentru oxigen. Aceste modificri sunt transmise subunitilor
urmtoare astfel c monomerii 2, 3 i 4 vor trece consecutiv n forma R. Altfel spus prima
molecul de oxigen se va lega greu, urmtoarele din ce n ce mai uor. Subunitile se
influeneaz asadar reciproc, cooperand n fixarea substratului (fig. 24). De aici noiunea de
cooperativitate n activitatea acestor enzime.
La nivel tisular, datorit gradientului de presiune, oxigenul este descrcat. Pierderea
primei molecule de oxigen va favoriza conversia formei R n forma T, conversie ce se va
transmite progresiv tuturor subunitilor. Astfel detaarea primei molecule de oxigen va
determina desprinderea din ce n ce mai rapid a urmtoarelor.

Fig.24- Tranzitia de la forma T la forma R. Legaturile slabe dintre monomeri prezente in forma
T ( puntile albastre) se rup progresiv pe masura ce oxigenul este legat. Fixarea fiecarei molecule

Page 5 of 9
de oxigen antreneaza tranzitia T R a monomerului invecinat. Progresiv tranzitia T R este
indusa apoi pas cu pas tuturor monomerilor.

1.3. Factorii care regleaza activitatea enzimelor alosterice.

Factorii care regleaza activitatea enzimelor alosterice sunt asa numitii modulatori sau
efectori sau liganzi.
Funcie de natura lor, modulatorii sunt homotropi sau heterotropi.
Modulatori homotropi
n aceasta situaie modulatorul se identific cu substratul. Cel mai adesea substratul
activeaz enzima care l transforma. Se spune ca substratul este modulator pozitiv i genereaz
un efect homotrop. Legarea unei molecule de substrat la unul din centrele active ale enzimei
mrete capacitatea de legare a celorlalte centre active. Cu alte cuvinte monomerii se
influeneaz unii pe alii, instalndu-se aa-numitul efect cooperativ intre centrele active ale
enzimei. Urmarea cooperarii monomerilor este cresterea brusca a vitezei de reactie observata in
cinetica sinusoidala (fig 19.) Un exemplu de efect homotrop este fixarea oxigenului la
hemoglobina, acesta favorizndu-i propria legare.
Modulatori heterotropi
Sunt compui diferii de substrat. n general sunt produi de reacie sau metabolii i pot
genera dou tipuri de efecte, reversibile i anume: (a) feed-forword, de regula activator i (b)
feed-back, de regul inhibitor.

a) Reglarea feed - forword

Acest tip de reglare a activitatii enzimatice are scopul de a imprima un anumit ritm unei ci
metabolice. Transformarea substratului A n produsul final H are loc printr-o succesiune de
reacii catalizate de diferite enzime, n care reacia catalizat de enzima E2 (de exemplu) este

Page 6 of 9
limitant de vitez. Aceasta nsemn c transformarea compusului B n C se realizeaz cel mai
ncet, ceea ce duce la acumularea lui. Creterea concentratiei compusului B, n mediu de reacie
face posibil fixarea lui la enzima E5, care catalizeaz transformarea F G. Compusul B este un
activator al enzimei, prin urmare fixarea lui la situsul alosteric al enzimei va determina o
crestere a activitatii enzimei E5, ceea ce va asigura o fluidizare a procesului prin prelucrarea mai
rapid a produsului F (prezent n cantitate din ce n ce mai mare ca urmare a iniierii cii
metabolice).
Altfel spus un intermediar situat in amonte intr-o cale metabolica atentioneaza o enzima situata
in aval, sa se pregateasca pentru a face fata unui aflux sporit de substrat.
b) Reglarea feed - back
Acest tip de reglare a activitatii enzimatice se numete inhibiie prin produs final, feed-back sau
retroinhibiie. Produsul final acioneaz ca un efector alosteric negativ asupra enzimei reglatoare.
Acumularea de produs H, ca urmare a neutilizrii lui n acelai ritm cu sinteza, duce la inhibiia
enzimei ce iniiaz procesul, E2, i care de regul catalizeaz etap limitant de vitez a acestuia.
Se evit astfel att epuizarea substratelor ct i producerea n exces a compuilor.

2. Reglarea covalent (prin fosforilare-defosforilare)

Un grup important de enzime i regleaz activitatea prin ataarea respectiv ndeprtarea
unei grupri fosfat la un rest de serina, treonina sau tirozina care nu apartin centrului activ al
enzimei. Ataarea restului fosfat poarta denumirea de fosforilare i este catalizat de o familie de
enzime numite kinaze prin intermediul ATP-ului. ndeprtarea gruprii fosfat poart denumirea
de defosforilare i este catalizat de o familie de enzime numite fosfataze, cu ajutorul apei.

Page 7 of 9
 Rspunsul la fosforilare/defosforilare este diferit funcie de enzim: astfel n urma
fosforilrii unele enzime se activeaz, altele se dezactiveaz. Un exemplu de reglare a unui
proces metabolic n care este utilizata reglarea covalenta l constituie degradarea/sinteza
glicogenului.
3. Transformarea pre-enzimelor n enzime active
Unele enzime sunt secretate n organism n form inactiv de pre-enzim sau zimogen.
De regul zimogenii sunt sintetizai ntr-un anumit compartiment n form inactiv i sunt
activai la locul aciunii sub influena unor factori locali sau autocatalitic. Aceste transformri au
caracter ireversibil i implic hidroliza unor legturi peptidice (covalente) de la captul N
terminal (n cele mai multe cazuri) urmat de ndeprtarea unor oligopeptide i expunerea
centrului activ al enzimei.
Un exemplu de zimogeni l constituie enzimele pancreatice (tripsina, chimotripsina
secretate de pancreas i activate n intestin) .

Fig.21 Tripsinogenul este secretat in forma inactiva in pancreas. In intestin are loc
activarea la tripsina sub actiunea enterokinazei. Activarea se realizeaza prin indepartarea unui

Page 8 of 9
fragment oligopeptidic care mascheaza centrul activ. Fragmentul oligopeptidic este situat, de
regula, la capatul N terminal si indepartare lui duce la expunerea centrului activ al enzimei .

4. Reglarea sintezei de enzime

Mecanismele prezentate mai sus modific activitatea enzimelor existente deja n
organism. Celule i pot ns regla i cantitatea de enzim prezent la un moment dat, prin
reglarea sintezei acesteia. n acest caz reglarea este exercitata la nivelul genelor i este realizat
prin procese de inducie sau represie.
Inducia se refer la stimularea sintezei de noi molecule de enzim ca rspuns la un
semnal transmis de o molecul de inductor care, de multe ori, este chiar substratul enzimei
(substratul i activeaz enzima).
Represia reprezint blocarea sintezei de noi molecule de enzim ca rspuns la prezena
unui represor. De multe ori produii reaciei catalizate de o anumit enzim acioneaz n calitate
de represori limitnd sinteza respectivei enzime.
Acest tip de reglare opereaz intermitent funcie de condiiile fiziologice la un moment
dat. Un exemplu de enzima inductibil este glucokinaza, prezent doar n ficat, a carei sinteza
este indusa de nivelele crescute de glucoz. n acest mod organismul face fa aportului crescut
de glucoz, dupa absorbtie.
Modificarea cantitii de enzim ca rspuns la prezena unui stimul (sau absena unui
represor) i care se traduce prin sintez de proteine, este un fenomen lent (ore/zile). n contrast
modificrile n activitatea enzimei, cauzate de mecanismele alosterice, se instaleaz rapid
(secunde/minute).
Pe lng enzimele inductibile n organism exist i enzime care se gsesc n cantitate
relativ constant, n sensul c rata lor de formare egaleaz rata dispariiei lor cauzat de procesele
normale de degradare. Aceste enzime sunt cunoscute sub denumirea de enzime constitutive. Ele
nu sunt supuse reglarii prin mecanism de inducie/represie; sunt aa-numitele enzime de servici
housekeeping-enzymes cu afinitate mare pentru substrat i care saturndu-se rapid ating
eficiena maxim. Un exemplu de enzim constitutiv l constituie hexokinaza (vezi met glucidic
p...).

Page 9 of 9