PRODUCCIN DE POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA) POR Bacillus sp.
UTILIZANDO GLICEROL COMO FUENTE DE CARBONO.
Los Polihidroxialcanoatos (PHA) son polmeros biodegradables, producidos
por algunos microorganismos como material de reserva de carbono y energa, que son almacenados en forma de grnulos en el citoplasma clula Los PHA son fuertes candidatos para sustituir a los plsticos derivados del petrleo, dado que poseen propiedades mecnicas similares a varios termoplsticos sintticos. En el presente trabajo de estudi la utilizaron del glicerol como sustrato para la produccin de polihidroxialcanoatos (PHA), por un Bacillus sp. a escala de matraces. Este fue capaz de crecer a partir de glicerol, obtenindose hasta una concentracin de biomasa de 2,2 g/L, para una concentracin inicial de glicerol de 5 g/L en un medio mnimo definido, con una acumulacin de PHA menor al lmite de cuantificacin. MATERIALES Y MTODOS Microorganismo: El Bacillus sp. fue aislado de un efluente lcteo por el Departamento de Bioingeniera de la Facultad de Ingeniera y seleccionado como productor de PHA en diversas fuentes de carbono. La cepa se mantiene en TSB con 20% de glicerol a -70C. Medio de cultivo: El medio de cultivo est constituido por: Na2HPO4 4,45 g/L, KH2PO4 1,5 g/L, MgSO47H20 0,2 g/L, (NH4)2SO4 1g/L, Citrato de Amonio y Hierro III 0.06 g/L, CaCl2H2O 0,01 g/L y 1 mL/L de metales traza. El glicerol utilizado para componer los medios fue glicerol puro para anlisis (Merck). El medio de cultivo se esteriliz en autoclave a 121C durante 15 minutos. Optimizacin de fuente de carbono: Las concentraciones de glicerol ensayadas fueron: 1, 5, 10, 20 y 30 g/L. Se realizaron los cultivos por duplicado, en matraces de 2 L (300 mL) en un agitador orbital a 250 rpm y 35C, pH inicial 7. Se tomaron muestras a diferentes tiempos y se determinaron las concentraciones de glicerol remanente y de biomasa. Optimizacin de relacin carbono/nitrgeno (CN): Para la concentracin de glicerol ptima, se ensayaron las relaciones CN: 2, 5, 11 y 17, manteniendo la composicin del medio salvo la concentracin de (NH4)2SO4, que se modific para cumplir con las relaciones mencionadas. Los cultivos fueron realizados en matraces de 2 L, (300 mL) en un shaker orbital a 250 rpm y 35C. Se tomaron muestras a diferentes tiempos y se determinaron las concentraciones de glicerol y sulfato de amonio remanentes, biomasa y PHA. PROCEDIMIENTOS ANALTICOS Cuantificacin de Biomasa: La densidad celular se determin mediante medidas de turbidometra a 600nm en espectofotmetro (Unico). Cuantificacin de glicerol: Las muestras se centrifugaron y los sobrenadantes se utilizaron para la determinacin de la concentracin de glicerol residual mediante HPLC (Cromatografa lquida de alto rendimiento) con un equipo Shimadzu con una columna Shodex sugar KS-801 (8 mm x 300 mm) a 55C, utilizando agua MilliQ como eluente, a un caudal de 0.7 mL/min. Cuantificacin de PHA: Los pellets obtenidos se secaron y se sometieron a un proceso de hidrlisis y propanlisis basado en el mtodo prouesto por Riis et al. (8) para la posterior cuantificacin de los propil-esteres mediante cromatografa gaseosa, con un GC Shimadzu, equipado con una columna Agilent DB-WAX (30m x 0,25mm x0,5 m) y detector FID. El gas carrier utilizado fue H2 y el volumen de inyeccin 1L. Se utilizaron PHB y PHBV (Sigma) como estndares. Cuantificacin de amonio: La concentracin de amonio residual fue realizada mediante un mtodo potenciomtrico con un electrodo de ion selectivo de amonio (Orion) y se expresa como g/L de (NH4)2SO4. CONCLUSIN El Bacillus sp. Fue capaz de crecer a partir de glicerol. Se obtuvo una concentracin de biomasa de 2,2 g/L para la concentracin de glicerol de 5 g/L, en un medio mnimo definido. Se determin que para la relacin CN 5 se obtiene mayor acumulacin de PHA, que corresponde a un 5%. Se evidenci que el Bacillus sp. Podra llegar a acumular dos monmeros distintos de PHA. BIBLIOGRAFA PRODUCCIN DE POLIHIDROXIALCANOATOS (PHA) POR Bacillus sp. UTILIZANDO GLICEROL COMO FUENTE DE CARBONO. Anala Banacore1 , Guadalupe Martnez, Vernica Saravia, Disponible en: http://aiquruguay.org/congreso/download/P89.pdf