Preinforme de Microbiologia Yorman

Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente
Microbiologa Ambiental-358010A_224
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS AGRCOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO
AMBIENTE
MICROBIOLOGIA AMBIENTAL
100411_304
PREINFORME
PRESENTADO POR: YORMAN LEAL FERNANDEZ
CODIGO: 83235914
TUTORA DE LABORATORIO: LEIDY JOHANA DIAZ SANCHES
TUTOR VIRTUAL: JORGE ALEJANDRO RODRIGUEZ
GRUPO: 358010_46
NEIVA, SEPTIEMBRE, 2015

INTRODUCIN
Con el desarrollo de esta prctica vamos a reconocer cada una de las instalaciones de un
laboratorio, las normas de seguridad que debemos tener en cuenta una vez estemos dentro de l,
los elementos de proteccin personal y los cdigos de seguridad que debemos seguir una vez
hayamos ingresado a sus instalaciones. Adems uno de los objetivos de la UNAD al implementar
estos procesos de aprendizaje es lograr que nosotros como estudiantes tengamos unas bases
slidas referentes a todo lo que tiene que ver con procedimientos fisicoqumicos, de ah la
necesidad de reconocer las diferentes clases de microorganismos y los beneficios que estos
pueden brindar al medio ambiente y a los seres humanos. Por otra parte vamos a adquirir un
conocimiento general sobre el cultivo de estos seres microscpicos, los ambientes en los que
pueden sobrevivir cada una de las diferentes especies y la facilidad que tiene muchos de ellos para
adaptarse a cambios bruscos en el ambiente.
OBJETIVO GENERAL
Reconocer la importancia que tiene la fisicoqumica en el estudio del medio ambiente, sus
diferentes aplicaciones, beneficios y lograr un reconocimiento adecuado de los diferentes tipos de
microorganismos.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
Identificar las normas de seguridad dentro de un laboratorio.
Reconocer cada uno de los elementos de proteccin personal que debemos utilizar una vez
estemos dentro del laboratorio.
Reconocer cada uno de los materiales de un laboratorio y los usos que le podemos dar.
Identificar los distintos mtodos de siembra de los microorganismos.
Reconocer las tcnicas de tincin y los procedimientos para realizarlas.
Manejo y reconocimiento de los microscopios y el uso que le podemos dar

PRCTICA No. 1: RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES

DE
MICROBIOLOGIA
INTRODUCCION
En esta prctica nos dan a conocer las normas de seguridad a tener dentro del laboratorio, al igual
que los elementos de proteccin personal que debemos utilizar. Tambin debemos diferenciar y
reconocer cada uno de los elementos a utilizar, las ventajas o desventajas de estos segn su
composicin ya sean de plstico o vidrio, tambin vamos a conocer los diferentes clases de
microscopios y cada una de sus partes.
PRCTICA No. 1: RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DE

MICROBIOLOGIA
Medidas para manejo Caractersticas debe

correcto y cuidados del LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA reunir el vidrio para
microscopio compuesto. la fabricacin de
material
Ventajas y desventajas del

uso de materiales de vidrio y
de plstico, respectivamente
Pasos enfocar imgenes en un
microscopio compuesto
Microscopio ptico de Uso materiales, que se

campo y sus partes les da en el laboratorio
1. Qu caractersticas debe reunir el vidrio utilizado para la fabricacin del material de

cristalera para los laboratorios y por qu?
Rta: El vidrio se fabrica mediante la fusin de arena slice con sales de sosa o potasa a una
temperatura de 1.0000c. El producto en ese estado lquido, se vierten diversos moldes de acuerdo
a los objetos que se requieran producir, debido a la propiedad de no cristalizarse cuando se enfra,
quedando como un cuerpo slido, generalmente transparente. Como se sabe, este tipo de cristal es
muy vulnerable a los impactos mecnicos, exposiciones a elevadas temperaturas. Etc, lo que no
resulta apropiado para la fabricacin de la cristalera de laboratorio la cual requiere del empleo de
otros componentes como el borosilicato de sodio y el aluminio, cuya aleacin le confiere una alta
resistencia mecnica, trmica y qumica. La cristalera fabricada con estos componentes, se
identifica por estar rotulada con el nombre de Pyrex (pairex)
1. Explique brevemente las ventajas y desventajas del uso de materiales de vidrio y de

plstico, respectivamente, en los laboratorios de microbiologa.
Rta:
VIDRIO: VENTAJAS DEL USO DEL VIDRIO
Se caracteriza porque tiene resistencia qumica ( Frente a cidos, frente a bases)

Estabilidad
Se caracteriza por su transparencia
La mayora de los utilizados son vidrios borosilicados, los cuales ofrecen gran
resistencia trmica ( vidrio pirex, quimax)
DESVENTAJAS DEL USO DEL VIDRIO
No lo podemos someter a cambios bruscos de temperatura (se provocan tensiones que

pueden romper el cristal)
Hay que colocar la estufa de secado o esterilizacin en frio, ir calentndolo despus, y
cuando acabe el tiempo de secado dejar enfriar el material.
No se debe aplicar fuerza sobre llaves, tapones de vidrio
No se debe someter a variaciones bruscas de presin
PLASTICO
Los materiales de plstico pueden ser de uso mltiple, los utensilios de plstico de laboratorio son
monmeros orgnicos polmero la rizada. Hay gran variedades de plsticos, van a tener distintas
propiedades fsicas y qumicas.
VENTAJAS
Resistencia a la rotura
Tiene un peso bajo
Sus propiedades fsicas y qumicas, varan notablemente segn su composicin
Ms estabilidad frente a los cidos excepto el cido sulfrico, cido ntrico y perclorato
DESVENTAJAS
No se puede calentar por encima de los 70C

Porosidad frente anhdrido carbnico del aire porque las disoluciones que permanecen
almacenadas por largo tiempo en estos recipientes se carbonatan
2. Describa, ilustre y clasifique los siguientes materiales, indicando el uso que se les da en el
laboratorio de microbiologa (Sea breve, se le sugiere elaborar un cuadro).
NOMBRE DEL IMAGEN ESPECIFICACIONES DE USO

MATERIAL
Se utilizan esencialmente para colocar sobre su

Portaobjetos superficie pequeas fracciones o volmenes de
muestras, que sern sometidas o no a un proceso
de coloracin, con la finalidad de ser observadas
a travs del microscopio
Son empleadas para cubrir las muestras o

Cubreobjetos preparaciones que han sido colocadas
previamente sobre las lminas portaobjetos para
ser observadas al microscopio
Se utiliza en los laboratorios de Microbiologa

Cajas de Petri principalmente para el cultivo de bacterias o
microorganismo para aislarlos e identificarlos y
as poder estudiarlos con mayor facilidad.
Miden con presin volmenes variables de

Pipetas graduadas lquidos, Traspaso de lquidos en volmenes

(terminales y no exactos.
terminales) Pipetas graduadas terminales: la ltima
graduacin termina en graduacin inferior.
Se Clasifica En Volumtrico.
Se utilizan para toma de pequeos inculos de

Pipetas Pasteur cultivos, Traspaso de lquidos en volmenes
pequeos
Se Clasifica En Volumtrico
El tubo de ensayo es un instrumento de

laboratorio que se utiliza principalmente como
Tubos de ensayo contenedor de lquidos y slidos.
Los tubos de ensayo con tapn o falcn se
utilizan para almacenar temporalmente
sustancias o muestras (slidos o lquidos),
especialmente para pruebas y ensayos
cualitativos.
- Matraces Fiolas: se utiliza para calentar

lquidos, con poca perdida de evaporacin, hacer
Matraces (tipos) titulaciones y recristalizar un slido.
-Matraz De Succin o kitazato: se utiliza para

filtraciones al vaco con bomba de succin.
-Matraces Aforados: Sirve para medir el

volumen especifico, se utiliza para preparar
soluciones.
Se Clasifica En Volumtrico
1.
Se empela para medir determinados volmenes
de lquidos o soluciones en los casos en que no
se necesite mucha exactitud.
Probetas
2. - Probeta clase A : las de clase A son
producidas con ms cuidado, se usan en
laboratorios de control de calidad y en
laboratorios de pruebas, se usan mucho en
validacin de mtodos analticos
3. Probeta clase B: Son para uso escolar y
acadmico, pare mediciones en las que no se
requiere tanta precisin. Mayormente son de
plstico, su precio es bajo respecto a las probetas
clase A.
Se clasifica en Volumtrico
Se utiliza para evidenciar la produccin de gas

Tubos de Durham de una bacteria al fermentar determinados
azucares
-Asa en argolla o anillos, no calibrada: sirve para la

Asas de siembra por estras o inoculaciones en general.
inoculacin (tipos) -Asa recta o en hilo: sirve para trasladar una sola
colonia a medios de identificacin, o subcultivos
-Asa de planillo en anillo: calibrada para tomar
0.001ml, para uro- cultivo
-Asa Espatulada: para manipular colonias duras y
tomar muestras
-Asa de alambre grueso en L: para purificar
colonias de hongos y procedimientos especiales
Se emplea a diario para esterilizar los

instrumentos de siembra de micrn o platino,
Mecheros (tipos) mediante su exposicin directa a la llama, que
los calentarn al rojo vivo en pocos segundos.
Para flamear la boca de los tubos de ensayo y
otras cristaleras estriles.
-Mechero Bunsen.
-Mechero Teclu
-Mechero Mecker
se utilizan a una temperatura de 37C, para

Estufas realizar cultivos de bacterias, hongos, a una
Bacteriolgicas temperatura igual a la del cuerpo humano
Sirve para la esterilizacin por el calor seco

Horno Pasteur
Funciona por las presiones que se dar a una

Autoclave mayor temperatura logrando su esterilizacin
como por ejemplo las conservas
Recipientes que se usan para conseguir una

Jarra de atmsfera libre de oxgeno para el cultivo de
Anaerobiosis microorganismos anaerobios
Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza

. centrfuga lo que permite la separacin de los
Centrfuga distintos componentes de la muestra mediante la
precipitacin en el fondo del tubo de las
partculas en suspensin
Nefelmetro de Medir partculas suspendidas en un lquido. Esto

Mac Farland lo hace empleando una fotocelda colocada en un
ngulo de 90 con respecto a una fuente
luminosa.
Membranas Se usa para que las bacterias no pueden pasar a

Millipore travs de los agujeros pequeos
Cuenta colonias Es un instrumento utilizado para contar colonias

de bacterias o de otros microorganismos que
crecen en una placa de agar
4. Ilustre un microscopio ptico

de campo claro con los
nombres de todas las partes
5. Enliste detalladamente todas las medidas que se requiere tomar en cuenta para el manejo
correcto y cuidados del microscopio compuesto.
Rta: MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina

completamente. Si el microscopio se recogi correctamente en el uso anterior, ya debera
estar en esas condiciones.
Colocar la preparacin sobre la platina sujetndola con las pinzas metlicas.
Comenzar la observacin con el objetivo de 4x (ya est en posicin) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparacin es de bacterias.
NORMAS BASICAS PARA EL CUIDADO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
Para trasporta el microscopio se debe utilizar siempre las dos manos, sujetndolo por el
brazo con una mano y por el pie con la palma de la otra
Una vez colocado el microscopio en n su sitio, no debe moverse hasta que finalice la
prctica, cuando se vaya a cambiar de observador se debe mover l y no el microscopio.
Mover siempre suave y lentamente cualquier elemento del microscopio.
Nunca poner los dedos en lentes del ocular ni del objeto. Si se enuncian dichas lentes se
limpiarn con un pao suave de algodn, sin utilizar ningn disolvente.
No sacar de su sitio el ocular ni los objetivos, a no ser que vayan a ser sustituidos, en cuyo
caso la operacin debe realizarse lo ms rpidamente posible, para evitar la entrada de
polvo.
Asegurarse de que el portaobjeto est bien seco cuando va a ser colocado sobre la platina
Al enfocar sobre todo con los objetivos de mayor aumento, hay que evitar que el extremo
del objeto choque con la preparacin. Para ello acercaremos el objetivo a la preparacin
mirando lateralmente y luego, mirando ya a travs del ocular, enfocamos alejando el
objetivo.
6. Enliste detalladamente todos los pasos que se requiere seguir para enfocar imgenes en
un microscopio compuesto.
Rta: ENFOQUE DE IMGENES EN UN MICROSCOPIO COMPUESTO
Colocar el portaobjetos sobre la platina del microscopio

Utilizar el objeto de menor aumento
Deslizar el tubo del microscopio por medio del tornillo macromtrico, observando
lateralmente hasta que el objetivo quede cerca del portaobjetos
Observar a travs de los oculares subiendo lentamente el tubo del microscopio hasta
observar la preparacin enfocada, no debe bajarse el tubo del microscopio mientras se
est observando, porque puede llegar a chocar el objetivo con el portaobjetos y ocasionar
desperfectos
Afinar la imagen moviendo lentamente el tornillo micromtrico
Si se desea mayor aumento, girar el revolver al objeto adecuado
Si se utiliza el objeto de inmersin (100x) colocar sobre la preparacin una gota de aceite
de inmersin y baja el tubo del microscopio hasta que la lente del objetivo toque a la gota,
observa y ajusta cuidadosamente despus de su uso, limpiar el objetivo con un tejido
suave( papel seda.
7. Defina los siguientes trminos en microscopa:
Lmite De Resolucin: El lmite de resolucin de un microscopio se define como la

distancia mnima a partir de la cual ya no es posible distinguir la separacin entre dos
puntos.
Formula: LR = C/NA
Dnde: : Longitud de onda de la luz en ()
C: Constante de proporcionalidad
NA: Abertura numrica
Poder De Resolucin: La resolucin se define como el espacio de mxima aproximacin

entre dos puntos en el que an se pueden observar claramente como dos entidades
independientes, es decir, es la distancia entre dos entidades estructurales de un objeto en
la cual todava se pueden observar como estructuras separadas en la imagen amplificada.
0,61
=

0,61: Constantes
: Longitud de onda de la luz usada
: ndice de refraccin del medio
: seno del ngulo
Poder De Amplificacin: Es la capacidad de un microscopio para aumentar la imagen.
La amplificacin de un microscopio es el producto de nmero de aumento del objetivo por los

del ocular. Aumento til: X1000 a x2000
Altura de la iamgen
Aumento Lateral:
Altura del objeto
8. diferencias y ventajas que usted considera ms importantes entre estos y el microscopio

ptico cuando se trabaja en un laboratorio de microbiologa.
TIPOS DE MICROSCOPIO ELECTRONICOS:
Microscopio Electrnico De Transmisin (MET cortes muy finos. Una parte de los electrones
son absorbidos o rebotan por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del
objeto en cuestin. Las muestras no deben ser mayores de un par de miles de angstroms (1
angstrom es igual a 0.0000000001 metros) se ha de colocar una placa fotogrfica detrs del
objeto para registrar la imagen aumentada. Cabe de destacar que este tipo de microscopios
pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces.
Microscopio electrnico de barrido (MEB): En este no es necesario que el espcimen se

encuentre en capas de observarlo. El MEB explora la superficie de la imagen punto por punto, y
recorre la muestra con un haz muy concentrado de electrones. Estos pueden provocar la aparicin
de electrones secundarios, que posteriormente sern recogidos por un dispositivo situado a los
lados del objeto en cuestin. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pixel, de forma de
cuantos ms electrones haya, mayor ser el brillo del pixel en el monitor. A medida que haz de
electrones barre la muestra, se presentan la imagen de esta en el monitor. Los MEB pueden llegar
a ampliar una imagen una 200.000 veces.
DIFERENCIAS Y VENTAGAS:
Para el estudio de las estructuras internas de las clulas es esencial un microscopio MET.
En el MET se utilizan electrones en lugar de rayos de luz, y la funcin de las lentes la
realizan electromagnetos, operndose en todo momento a alto vaco.
Cuando slo se pretende estudiar las estructuras externas de una muestra, no son
necesarios cortes ultra finos, pudindose realizar la observacin directa en MET, despus
de aplicar una tincin negativa. Tambin se puede usar el MEB.
Todos los microscopios electrnicos tienen cmaras incorporadas que permiten
fotografiar las muestras denominndose microfotografas electrnicas.
MICROSCOPIO OPTICO: Se usa para aumentar el tamao de la imagen aparente de los

objetos, lo cual permite observar los detalles estructurales de los microorganismos.
El microscopio ptico normal que se usa para observar bacterias y otros organismos celulares es
un microscopio compuesto, el cual est provisto de una fuente luminosa, una lente condensadora
de luz que la dirige hacia el objeto a observar y dos juegos de lentes que ayudan a la
amplificacin de la imagen.
9. Cul es la utilidad del asa recta y redonda?

ASA RECTA: Sirve para trasladar una sola colonia a medios de identificacin, o sub-
cultivo.
ASA REDONDA: Sirve para la siembra por estras e inoculaciones.
10. Qu se entiende por resiembra o pase bacteriano?
Rta: Resiembra se le llama al proceso donde se pasa una colonia de alguna bacteria que haya
crecido en algn medio a otra caja de Petri que contenga ya sea lo mismo que el medio en el que
creci anteriormente, esto se hace para continuar su reproduccin con nuevos elementos que le
sirven para su crecimiento, ya que como todo organismo para crecer y multiplicarse requiere de
nutrientes y si estn por mucho tiempo se acaba estos elementos por lo que es necesario hacer
este proceso, sobre todo si requiere su conservacin.
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES EQUIPOS
Vidriera Membranas Millipore
Portaobjetos Cuenta colonias
Cubreobjetos Nefelmetro de Mac Farland

Pipetas graduadas Estufas bacteriolgicas
Pipetas Pasteur Bao bacteriolgico
Tubos de ensayo Horno Pasteur
Matraces Autoclave
Probetas Jarra de anaerobiosis
Tubos de Durham Centrfuga
Asas de inoculacin Nefelmetro de Mac Farland
Mecheros
Jarra de anaerobiosis
RESULTADOS ESPERADOS
Reconocer el material a trabajar en el laboratorio de microbiolog

Definir cada trmino y las caractersticas que debemos conocer como las de los equipos a
utilizar.
PRACTICA N2: MTODOS DE SIEMBRA
INTRODUCCIN
El desarrollo de esta prctica de divide en 2 partes A y B, en la primera parte se estudia la

inoculacin para la recuperacin, mantenimiento o aislamiento de los microorganismos y
en la segunda parte, adems de los materiales y procedimientos para llevar a cabo estos
procesos. En la segunda parte estudiamos los distintos tipos de medios de cultivos, tanto
solidos como lquidos para llevar a cabo la siembra de microorganismos.
MENTEFACTO
Medios de
MTODOS DE SIEMBRA
cultivo
Aislamiento de
microorganismos
Recuperacin
Mantenimiento
Tenerse cuidado con las tcnicas
de siembra microbiana para evitar
en lo posible la contaminacin
MATERIALES Y MTODOS
MATERIALES EQUIPOS
Muestra contaminada con

microorganismos
Agar nutritivo en caja de Petri Incubadora
Asa redonda
Gradilla
Mechero
Incubadora mechero
Vinipel
Marcador de vidrio
REACTIVOA A UTILIZAR
REACTIVO FRMULA CONCENTRACIN

Agua peptonada H2O 0,1% estril
caldo nutritivo
Agar nutritivo semislido
PROCEDIMIENTO
Desinfectar el rea de trabajo, prender el mechero y preparar el material de trabajo.

Coger parte de la muestra y colocarla en el tubo de ensayo que contiene el agua
peptonada.
HOMOGENIZAR
Dejar 20 30 minutos en incubacin los tubos.

Realizar un diagrama de aislamiento de colonias, en un crculo de papel (8 cm) para
ponerlo debajo de la caja de Petri.
Finalizado el tiempo de incubacin tomar el asa redonda y esterilizarla por calor
hasta que est est roja, dejar enfriar cerca al mechero.
Abrir el tubo con la muestra y tomar una asada.
Cerrar el tubo y colocarlo en la gradilla. Teniendo cuidado de que el asa no toque
nada y de no pasarla por encima del mechero, pero siempre estar cerca de este
Abrir la caja de Petri y seguir el esquema para el aislamiento.
Terminado la siembra, marcar las cajas en el borde de la base de la caja y envolverla
en papel Vinipel
Los hongos son microorganismos eucariticos con condiciones de crecimiento especiales e

inters ambiental, pueden ser utilizados a nivel de industria
MATERIALES
Cajas de Petri con agar PDA
Agujas de diseccin, jeringas de insulina o asa recta.
Hongos de cualquier gnero con crecimiento no mayor a 15 das antes de la
prctica ( en caja de Petri)
PROCEDIMIENTO
Tome con la aguja de diseccin o asa un cuadro de la colonia fngica de no ms de

5 mm de dimetro, intente tomar de los extremos de la colonia, cuidadosamente
coloque el cuadro en la caja de Petri con agar PDA en el centro de la misma,
incubar a 25.
TABLA DE DATOS
MEDIOS DE CULTIVO
Caldo Nutritivo
Agar Nutritivo Semislido
RESULTADOS ESPERADOS
Tener una buena precaucin al ahora de manejar la tcnica para que la muestra no
se nos contamine.
El da 4 para ver los resultados esperamos que haya crecido hongo y no se halla
contaminado.
PRACTICA N3 TECNICAS DE TINCIN
INTRODUCCIN
En esta prctica se van a estudiar las las tcnicas de tincin, como se realiza la coloracin
de los microorganismos, adems se va a profundizar en la tcnica de la tincin de Gram,
vamos a reconocer los reactivos utilizados para dich proceso y todos los materiales de
laboratorio a utilizar.
MENTEFACTO
TECNICAS DE TINCION
Seque fijacin de
Coloracin simple Agua destilada
color
Cubrir la
Enfriar lamina
suspensin
Observar en el
microscopio
,
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES EQUIPOS
Lminas Alcohol cetona
Laminillas Fucsina bsica o safranina
Agua destilada estril Tinta china
Asas bacteriolgicas redonda y asa recta Microscopio ptico Microscopio
Mechero Colonias aisladas de bacterias

para observacin de bacterias
Azul de metileno Guantes de ltex
Cristal violeta
Lugol
REACTIVOA A UTILIZAR
Azul metileno Fucsina bsica o Sanabria
Cristal violeta Tinta china
Lugol
Alcohol cetona
PROCEDIMIENTO
Coloracin simple
En una lmina portaobjetos limpia, colocar una gota del agua destilada estril (trabajo con
muestra slida) o una gota del cultivo bacteriano (trabajo con muestra liquida) sobre la
misma y con ayuda del asa redonda estril extender la gota de suspensin a un rea no
superior a dos centmetros cuadrados.
Dejar que la preparacin se seque al aire. Fijar con calor, pasando tres veces seguidas a
travs de la llama del mechero
Dejar enfriar la lmina. Lo anterior se conoce como la realizacin de un frotis y se hace
para coloraciones donde la muestra debe ser fijada y luego si iniciar las coloraciones
respectivas.
Colocar la preparacin sobre una rejilla encima del vertedero.
Cubrir la suspensin con algn colorante dado por el profesor, as:
-Cristal violeta: 1 minuto
-Azul de metileno: 5 minutos
-Fucsina: 1 minuto
Terminado el tiempo de coloracin segn el colorante empleado, eliminar el colorante
lavando con agua suavemente.
Dejar secar y colocar la preparacin en la platina del microscopio y observar con el
objetivo de menor aumento inicialmente hasta llegar al objetivo de 100X,
Coloracin compuesta
Realizar un frotis de la muestra seleccionada
Colocar en la rejilla para coloracin y cubrir el frotis con cristal violeta esperando que
transcurra 1 minuto. Lavar con agua el colorante.
El segundo colorante es el Lugol, el cual se deja por 1 minuto sobre el frotis
Realizar la decoloracin con la mezcla alcohol-acetona, por 25 segundos. Lavar
Inmediatamente con agua.
Finalmente adicionar el colorante de contraste, fucsina o safranina, por 30 segundos.
Lavar con agua.
Escurrir el exceso de agua, dejar secar y montar al microscopio para hacer las
observaciones respectivas.
Resultados esperados
Conocer las reacciones observadas con la aplicacin de las tinciones de GRAM

Observar los diferentes microorganismos por medio de las muchas tinciones.
PRACTICA N4: OBSERVACIN MICROSCPICA DE HONGOS
INTRODUCCIN
El propsito de esta actividad es identificar los diferentes grupos de hongos, los beneficios
que le proporcionan al medio ambiente, la forma de reproduccin, que mtodos de cultivo
podemos utilizar, igualmente los ambientes que le facilitan las condiciones para formar
colonias Tambin vamos a reconocer los distintos reactivos que se utilizan para estos
procesos.
MENTEFACTO
Colocar en el centro de la
lmina portaobjeto una gota
de azul de lactofenol.
OBSERVACION
MICROSCOPICA
Finalizado este tiempo montar al

microscpico y observar en 10X
Luego tomar con el asa
y 40X.
micolgica previamente estril
parte del hongo y re suspenderlo
en la gota del colorante. Colocar luego una laminilla
encima de esta preparacin y
esperar 3 minutos.
MATERIALES Y METODOS
MATERIALES
Cultivo de hongos Azul de lactofenol
Lminas portaobjetos Microscopio
Laminillas
PROCEDIMIENTO
Colocar en el centro de la lmina portaobjeto una gota de azul de lactofenol, luego tomar
con el asa micolgica previamente estril parte del hongo y resuspenderlo en la gota del
colorante.
Colocar luego una laminilla encima de esta preparacin y esperar 3 minutos. Finalizado
este tiempo montar al microscopio y observar en 10X y 40X.
DIBUJAR LAS SIGUIENTES CARACTERSTICAS EN EL CUADRO QUE

CORRESPOND
Hifa septada
Hifa Cenoctica
Conidios
Artrocionidios
PRACTICA N5: CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO
INTRODUCCIN
La realizacin de esta prctica nos permite identificar los medios por los cuales se puede
controlar el crecimiento de las bacterias, las condiciones ambientales que le ayudan a las
bacterias a regular su crecimiento y los medios qumicos con los que se acelerar o reducir el
crecimiento de estas, como identificar la influencia de la temperatura, el pH, la accin de la
presin osmtica, y la accin de la luz ultravioleta en dichos procesos.
MENTEFACTO
CRECIMIENTO BACTERIANO
.ACCION DE LA ACCION DE LA ACCION DE LA

ACCION DEL PH
TEMPERATURA PRESION LUZ
OSMOTICA ULTRAVIOLETA
Suspender una colonia del Dividir la base de las Dividir la base de las
microorganismo en el caldo cajas en dos cuadrantes cajas en dos cuadrantes
nutritivo y dejarlo por media con el marcador de vidrio Dividir la base de las con el marcador de
hora. y con el asa redonda cajas en dos vidrio y con el asa
cuadrantes con el redonda
marcador de vidrio y
con el asa redonda Sembrar por estras en un
Luego tomar 0.1 mL del Sembrar por estras en un cuadrante el
medio y sembrarlo sobre el cuadrante el microorganismo microorganismo Gram-
medio slido del agar Gram-negativo y en el otro el negativo y en el otro el
nutritivo. Gram positiv. Gram positiv.
Sembrar por estras en
un cuadrante el
Llevar las dos cajas de Petri e microorganismo
Seguidamente tapar la
incubarlas a 37oC Realizar este procedimiento Gram-negativo y en el
mitad de la caja con papel
con todos los medios de otro el Gram positiv. de aluminio y coloca sobre
diferentes pH. la otra parte de la caja la
luz ultravioleta por 5 o 10
minutos
MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES EQUIPOS
Pipetas estriles de 1 y 2 mL Estufa
Vaso de precipitado de 500 mL Incubadora
CULTIVOS
Cultivo de un microorganismo Gram - Cultivo de un microorganismo Gram -
positivo negativo.
Caldo nutritivo Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri
Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri
con diferentes concentraciones de NaCl. con diferentes pHs.
PROCEDIMIENTO
ACCIN DE LA TEMPERATURA: Suspender una colonia del microorganismo seleccionado

en el caldo nutritivo y dejarlo por media hora para un desarrollo de los microorganismos en el
medio de cultivo. Luego tomar 0.1 mL del medio y sembrarlo sobre el medio slido del agar
nutritivo. Llevar el caldo nutritivo donde se inoculo el microorganismo a la estufa y ponerlo a
ebullicin por el tiempo dado por el profesor y sembrar como al inicio. Llevar las dos cajas de
Petri e incubarlas a 37oC.
ACCION DEL PH: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el marcador de vidrio y
con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante el microorganismo Gram-negativo y en el
otro el Gram positiv.
Realizar este procedimiento con todos los medios de diferentes pH.
ACCIN DE LA PRESIN OSMTICA: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el
marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante el microorganismo
Gram-negativo y en el otro el Gram positiv.
ACCIN DE LA LUZ ULTRAVIOLETA: Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con
el marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante el
microorganismo Gram-negativo y en el otro el Gram positiv.
Seguidamente tapar la mitad de la caja con papel de aluminio y colocar sobre la otra parte de la
caja la luz ultravioleta por 5 y/o 10 minutos, tapar la caja y llevar a incubar.
PRACTICA N 6: RECUENTO DE UNIDADES FORMADORAS DE

COLONIAS-UFC.
INTRODUCCIN
El recuento de unidades formadoras de colonias es un parmetro que sirve para estimar la flora
total pero sin identificar el tipo de organismo, y nos permite reconocer las condiciones
microbiolgicas del suelo, un alimento y el agua entre otros. Tambin vamos a identificar los
diferentes reactivos que se utilizan para identificar estos procesos.
Hacer diluciones
de la muestra
lquida de
RECUENTRO DE
Sembrar en
profundidad por Siempre se Se deben Sacar de la
duplicado 1 mL informan dos contar las incubadora y
de cada una de nmeros cajas cuyo realizar el
enteros y el nmero de
colonias est
Una vez
solidificado
Adicionar de 15
el agar, se
20 mL del
vierten las
agar nutritivo a Mezclar
Dejar
inmediatamente el
solidificar,
inculo con el
adicionar una
medio, con
capa sellante de
movimientos
5 mL sobre la
circulares de la placa
MATERIALES EQUIPOS
2 cajas de Petri estriles Incubadora a 35C
4 tubos de ensayo con agua peptonada al 0.1% Contador de colonias

estriles
4 Pipetas de 1 mL o una pipeta automtica (100 Balanza
1000 L)
1 frasco de dilucin con 90 mL de agua peptonada al
0.1%
50 mL de agar nutritivo previamente preparado y
atemperado a 45 - 48C
Marcador de vidrio
PROCEDIMIENTO
Hacer diluciones de la muestra lquida de acuerdo al tipo de producto.

Si es una muestra contaminada deben realizarse diluciones altas
En muestras procesadas se hacen diluciones bajas
Sembrar en profundidad por duplicado 1 mL de cada una de las diluciones seleccionadas

Adicionar de 15 20 mL del agar nutritivo a la temperatura adecuada
Mezclar inmediatamente el inculo con el medio, con movimientos circulares de la placa
a favor y en contra de las manecillas del reloj, como en ngulo recto. Debe evitarse que el
medio impregne la tapa.
Dejar solidificar, adicionar una capa sellante de 5 mL sobre la caja y dejar solidificar
nuevamente.
Una vez solidificado el agar, se vierten las placas e introducen en la incubadora (35C
durante 72 horas)
Sacar de la incubadora y realizar el recuento
Lectura: se deben contar las cajas cuyo nmero de colonias est comprendido entre 30 y
300 UFC. Es conveniente ir marcando las colonias para evitar volver a contarlas. Hallar la
media.
El nmero contado se multiplica por el factor de dilucin y los resultados se expresarn en

unidades formadoras de colonia (UFC) por mL o g, dependiendo del tipo de alimento de
partida.
Siempre se informan dos nmeros enteros y el resto en exponente
PRACTICA N 7: APLICACIONES DE MICROBIOLOGA AMBIENTAL
INTRODUCCIN
La microbiologa ambiental tiene un sin nmero de aplicaciones en nuestro planeta, pues se

utiliza para tratar aguas potables, residuales, suelos, etc. Todo esto debido a la facilidad que
tienen los microorganismos para transformar la materia, y aunque no es posible identificarlos a
simple vista ellos son parte fundamental en la naturaleza y ayudan a conservar el planeta.jjj
Diagnostica e
implementa nuevas
alternativas para el
desarrollo agrcola
APLICACIONES DE MICROBIOLOGIA
mbito de la control de calidad en

ingeniera ambiental y abonos orgnicos y
la industria. suelos por nmero ms
probable (NMP)
MATERIALES EQUIPOS
frascos con solucin salina 0.85% o agua peptonada al 0.1% (90

ml)
tubos tapa rosca con 9 ml de solucin salina o agua peptonada al
0.1%
15 tubos tapa rosca con 9 ml de caldo de cultivo lbt (lauryl
tryptose Lmpara U.V
broth)
15 campanas durham para observar produccin de gas (dentro de
los
tubos de lbt)
15 tubos trapa rosca con 9 ml de caldo de cultivo lmx (fluorocult)
para cultivo de e. coli
reactivo de kovacs Incubadora
pipetas de vidrio de 1 ml
muestra de abono orgnico (los estudiantes debern llevar la
muestra,
puede ser abono orgnico comercial, lombricompost, humus etc)
REACTIVOS A UTILIZAR
REACTIVO FRMULA CONCENTRACIN

solucin salina SSN 90 ml
PROCEDIMIENTO
Pesar 10 gramos de la muestra, mezclarla con los 90 ml de solucin salina o agua

peptonada.
Realizar diluciones seriadas hasta 10-3.
Marcar los tubos de LBT y LMX en 3 series de 5, es decir 5 tubos marcados como 10-1, 5
tubos marcados como 10-2, 5 tubos marcados como 10-3.
A partir de las diluciones sembrar 1 ml de cada dilucin en los tubos con los dos medios.
Recuerden que por cada dilucin deben inocular 5 tubos de medio.
Incubar a 37 por 24 horas
Realizar la lectura, la cual se realiza contando el nmero de tubos positivos, para el caso
de coliformes fecales (LBT) se presenta turbidez y presencia de gas en las campanas
durham, sino se presentan los dos fenmenos se tomarn como negativos)
Por ejemplo en la dilucin 10-1 se presentaron 3 tubos positivos, en la dilucin 10-2 1
tubo positivo, en la dilucin 10-3 0 tubos positivos, obtenindose una combinacin de
310, con ese nmero se dirigen a la tabla de Numero ms probable segn la EPA-1680
2006.
DETECCIN DE PSEUDOMONAS EN SUELOS:
MATERIALES
Frascos con 90 ml de solucin salina al 0.85% o agua peptonada al 0.1%
Tubos tapa rosca para diluciones con 9 ml de solucin salina al 0.85% o agua peptonada al 0.1%
Cajas de Petri con agar King b o cetrimide
Rastrillos de vidrio
Pipetas de vidrio de 1 ml
Suelo procedente del algn sitio de derrame de petrleo o que estp impactado por derivados del
petrleo (suelos de cultivos donde se ha fumigado) o cualquier suelo.
Lmpara de luz UV
PROCEDIMIENTO
Pesar 10 g de la muestra y mezclarlos con los 90 ml de solucin diluyente, agitar bien y

realizar diluciones seriadas hasta 10-6.
Sembrar 0.1 ml de las diluciones 102, 10-4, 106 en superficie por duplicado, proceder a
hacer siembra masiva con los rastrillos cuidando que no se rompa el agar, incubar a 30
grados por 4 das.
Posterior a la incubacin con ayuda de la lmpara observar las colonias con fluorescencia
o pigmentacin azul verdosa, realizar el recuento de la dilucin que contenga entre 30 y
300 colonias.
Realizar los clculos de la siguiente manera, por ejemplo, en la dilucin 10-6 se contaron
48 colonias, ese valor se multiplica por el factor de dilucin, por el factor de correccin
as:
48(nmero de colonias contadas x106(factor de dilucin) x10(factor de correccin, es un
nmero constante)=48x108UFC/g (UFC hace referencia a unidades formadoras de
colonia)
INDICADORES DE CONTAMINACION DE AGUAS POTABLES
MATERIALES
Equipo de filtracin por membrana (equipo millipore de plstico)
Membrana de nitrocelulosa de 0.45 micrometros para filtacion.
Jeringa (para hacer vaco)
Cajas de Petri con agar Cromocult para coliformes

PROCEDIMIENTO
Tomar 100 ml de agua de la llave, la cual se inocular con una asada de cultivo de E. coli,
agitar muy bien.
Colocar la muestra en la parte superior de la campana de filtracin y con la ayuda de la
jeringa realizar el vaco para permitir el paso del agua de un lado al otro.
Con unas pinzas estriles retirar la membrana y colocarla sobre el agar cromocult, la parte
de la cuadrcula debe ir mirando hacia arriba.
Incubar por 24 horas a 37 c y observar el nmero de colonias con las caractersticas
tpicas de E. coli y coliformes totales (consultar la coloracin en este medio, se encuentra
por internet)
BIBLIOGRAFIA
Gua prctica de laboratorio de microbiloga ambiental, 358010 unad
http://www.bing.com/images/search?q=hifa+septada&FORM=HDRSC2
http://www.bing.com/images/search?q=hifa+Cenocitica&FORM=HDRSC2
http://www.bing.com/images/search?q=conidios&go=Enviar+consulta&qs=ds&form=QBIR
https://www.google.com/search?q=artroconidios&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=0CAcQ_AUoAWo
VChMIu6vUy-SpyAIVwaoeCh1WMwob&biw=1366&bih=634

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Escuela de Ciencias Agrcolas, Pecuarias y del Medio Ambiente

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

PRESENTADO POR: YORMAN LEAL FERNANDEZ

TUTORA DE LABORATORIO: LEIDY JOHANA DIAZ SANCHES

TUTOR VIRTUAL: JORGE ALEJANDRO RODRIGUEZ

NEIVA, SEPTIEMBRE, 2015

Identificar las normas de seguridad dentro de un laboratorio.

Identificar los distintos mtodos de siembra de los microorganismos.

Reconocer las tcnicas de tincin y los procedimientos para realizarlas.

Manejo y reconocimiento de los microscopios y el uso que le podemos dar

PRCTICA No. 1: RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES

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No lo podemos someter a cambios bruscos de temperatura (se provocan tensiones que

No se puede calentar por encima de los 70C

NOMBRE DEL IMAGEN ESPECIFICACIONES DE USO

Se utilizan esencialmente para colocar sobre su

Son empleadas para cubrir las muestras o

Se utiliza en los laboratorios de Microbiologa

Miden con presin volmenes variables de

Pipetas graduadas lquidos, Traspaso de lquidos en volmenes

Se utilizan para toma de pequeos inculos de

El tubo de ensayo es un instrumento de

- Matraces Fiolas: se utiliza para calentar

-Matraz De Succin o kitazato: se utiliza para

-Matraces Aforados: Sirve para medir el

Se utiliza para evidenciar la produccin de gas

-Asa en argolla o anillos, no calibrada: sirve para la

Se emplea a diario para esterilizar los

se utilizan a una temperatura de 37C, para

Sirve para la esterilizacin por el calor seco

Funciona por las presiones que se dar a una

Recipientes que se usan para conseguir una

Aparato que aplica sobre los tubos una fuerza

Nefelmetro de Medir partculas suspendidas en un lquido. Esto

Membranas Se usa para que las bacterias no pueden pasar a

Cuenta colonias Es un instrumento utilizado para contar colonias

4. Ilustre un microscopio ptico

Rta: MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

Colocar el objetivo de menor aumento en posicin de empleo y bajar la platina

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