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DETERMINACIN DE PESTICIDAS ORGANOCLORADOS EN SUELOS -

EXTRACCIN POR MICROONDAS

Mara Silvina Villemur*


Instituto Nacional del Agua - Centro de Tecnologa del Uso del Agua (I.N.A. - C.T.U.A.). msvillemur@ina.gov.ar
Lic. en Qumica. Desde 1991, es Investigadora y Responsable del rea de Cromatografa Gaseosa del C.T.U.A.
Directora de Beca de Tcnicos Qumicos en formacin en Qca. Analtica del Agua, desde abril de 1995. Representante
del I.N.A., ante el I.R.A.M., en el Comit de Calidad Ambiental. Becada por el Gobierno de Japn, a travs de JICA,
para realizar el curso de entrenamiento Water Quality Management (Tokyo, 08 - 10/00). Pasante del I.N.A. para
capacitarse en Anlisis de residuos de productos derivados del petrleo en matrices ambientales (N.T.L. Alaska,1999).

Marta Gabriela Rimini*


Instituto Nacional del Agua - Centro de Tecnologa del Uso del Agua (I.N.A. - C.T.U.A.). mrimini@ina.gov.ar
Lic. en Qumica, egresada de la Universidad Nacional del Sur de Baha Blanca. Se desempea en el Laboratorio del
Programa de Qumica Analtica del Instituto Nacional del Agua como Profesional Analista/Investigadora. Directora de
beca de Tcnicos Qumicos en el marco del Programa de Entrenamiento Profesional y Tcnico del Instituto Nacional del
Agua. Becaria del Curso Monitoreo Ambiental - Calidad de Aguas, organizado por el Gobierno de Japn a travs de la
Agencia de Cooperacin Internacional del Japn (JICA), en Tokorozawa Saitama - Japn desde 25/09/95 al 9/11/95.

Autopista Ezeiza - Cauelas Km: 1.62 - Ezeiza - Provincia de Buenos Aires - CP: 1802 - Repblica Argentina - Tel:
054-11-4480-4500 Int: 2436 - Fax: 054-11-4480-4500 Int: 2388.

RESUMEN

En el presente trabajo se estudi la optimizacin del mtodo de extraccin por Microondas, para lograr una mejor
recuperacin en la determinacin de Pesticidas Organoclorados en suelos, desarrollando la misma en trminos de
evaluacin del porcentaje de recuperacin en funcin del tiempo y la temperatura de extraccin. Para ello, se llevaron a
cabo ensayos por triplicado a tres tiempos y a tres temperaturas de extraccin. Establecidas las condiciones ptimas de
operacin, se compar este mtodo de extraccin con el mtodo Soxhlet. La metodologa estudiada result ser un
mtodo de preparacin rpido, eficiente, econmico y aplicable a muestras provenientes de sitios contaminados.

Palabras Clave: Pesticidas organoclorados, extraccin por microondas, optimizacin del mtodo, disminucin de
costos, sitio contaminado.

1
INTRODUCCION

Estudiar la optimizacin del mtodo de extraccin por microondas, para lograr una mejor recuperacin en la
determinacin de once pesticidas organoclorados en suelos. Comparar este mtodo de preparacin de muestras con el
mtodo Soxhlet. Evaluar su aplicabilidad en muestras provenientes de un sitio contaminado.

Fundamento de la Extraccin por Microondas

El mtodo de extraccin por microondas, es un procedimiento para extraer compuestos orgnicos insolubles o
ligeramente solubles en agua, de matrices slidas (suelos, arcillas, sedimentos, lodos y residuos slidos). El proceso
utiliza energa de microondas proveniente de dos magnetrones independientes con difusor rotatorio logrando una
distribucin homognea de las microondas para producir condiciones de presin y temperatura elevadas en recipientes
cerrados que contienen la muestra y la mezcla de solventes adecuada. Esto facilita la rpida disolucin de los analitos de
inters en la mezcla de solventes mencionada, con una alta eficiencia de recuperacin.
Una vez extrados los analitos en el solvente adecuado, se est en condiciones de proceder a su anlisis, siendo la
Cromatografa Gaseosa, el mtodo instrumental utilizado en esta aplicacin.

METODOLOGA EMPLEADA

Desarrollo
En la extraccin por microondas, se hace necesario establecer las condiciones de temperatura de trabajo y tambin el
tiempo de extraccin, razn por la cual se plante la optimizacin del mtodo por microondas en los siguientes
trminos:
-Evaluacin del porcentaje de recuperacin en funcin del tiempo de extraccin
-Evaluacin del porcentaje de recuperacin en funcin de la temperatura de extraccin

Evaluacin del porcentaje de recuperacin en funcin del tiempo de extraccin. Se procedi a esta evaluacin, a
tres tiempos de extraccin (5, 10 y 20 minutos) y en cada caso con ensayos por triplicado, manteniendo la temperatura
de extraccin fija a 120 C (temperatura tentativa).
Para ello, se prepararon blancos fortificados slidos (BFS), consistentes cada uno en: 5 g. de arena adicionada con los
analitos de inters mezclada con 5 g. de sulfato de sodio anhidro, con 30 ml. de mezcla de solventes de extraccin
calidad grado pesticida (acetona : hexano 1:1), lo que es colocado en los vasos de extraccin. La arena fue muflada a
450 C durante 4 horas y el sulfato de sodio a 650 C durante toda la noche. A cada vaso de extraccin, se le agrega una
barra de agitacin magntica, dado que un adecuado mezclado de la muestra con la mezcla de solventes, ayuda a una
mejor y ms rpida extraccin.
Terminado el proceso de extraccin, se deja enfriar por lo menos tres horas y se procede a la filtracin con sulfato de
sodio para retener algn vestigio acuoso, enjuagando el residuo del vaso de extraccin con dos porciones de 5 ml. de la
misma mezcla de extraccin y filtrando estos enjuagues a travs del sulfato de sodio. Este extracto se recoge en tubo
graduado y en un evaporador Kuderna - Danish y se concentra bajo corriente de nitrgeno a volumen deseado.
La mezcla de solventes consta de hexano, que es un solvente insoluble en agua, y de acetona que es un solvente miscible
en agua. El propsito de usar un solvente miscible en agua es el de facilitar la extraccin de slidos hmedos
permitiendo que la mezcla de solventes penetre la capa de agua de la superficie de las partculas slidas. El solvente
inmiscible en agua extrae compuestos orgnicos con polaridad similar. La polaridad de la acetona puede tambin ayudar
a extraer analitos polares en los sistemas de mezclas de solventes. (Tabla 1 y Figura 1).

2
TABLA 1: Evaluacin del porcentaje de recuperacin en funcin del tiempo de extraccin

ANALITO % Recuperacin a % Recuperacin a % Recuperacin a 20


5 min. de t de 10 min. de t de min. de t de
extraccin extraccin extraccin
Lindano 76 81 84
Heptacloro 69 76 78
Aldrin 75 79 82
Hept. Epxido 74 78 80
Endosulfn I 86 89 88
p,p-DDE 67 75 76
Dieldrin 72 78 80
Endrin 61 67 71
p,p-DDD 67 73 74
p,p-DDT 46 53 56
Metoxicloro 45 50 52

100
Porcentaje de recuperacin

80

60

40

20

Analitos
5 minutos 10 minutos 20 minutos

Figura 1: Evaluacin del tiempo de extraccin

Al aumentar el tiempo de extraccin, se produjo un incremento de las recuperaciones. Si bien el orden del incremento en
las recuperaciones es mayor al pasar de 5 a 10 de extraccin que al pasar de 10 a 20, a este ltimo tiempo se alcanzan
las mejores recuperaciones para 10 de los 11 analitos en estudio.

Evaluacin del porcentaje de recuperacin en funcin de la temperatura de extraccin. Se procedi a esta


evaluacin, a tres temperaturas de extraccin (80, 120 y 140 C) y en cada caso con ensayos por triplicado. Se trabaj de
igual forma que para la evaluacin anterior, manteniendo fijo el tiempo de extraccin a 20 minutos (tiempo en el que se
obtiene mejor recuperacin). (Tabla 2 y Figura 2).

3
TABLA 2: Evaluacin del porcentaje de recuperacin en funcin de la temperatura de extraccin

ANALITO % Recuperacin a % Recuperacin a % Recuperacin a


80 C de T de 120 C de T de 140 C de T de
extraccin extraccin extraccin
Lindano 80 84 66
Heptacloro 74 78 65
Aldrin 77 82 65
Hep. Epxido 77 80 65
Endosulfn I 87 88 79
p,p-DDE 73 76 65
Dieldrin 76 80 66
Endrin 64 71 60
p,p-DDD 71 74 61
p,p-DDT 51 56 51
Metoxicloro 45 52 43

100
90
Porcentaje de recuperacin

80
70
60
50
40
30
20
10
0

A nalitos
80C 120C 140C

Figura2: Evaluacin de la temperatura de extraccin

Para los analitos hubo un incremento de las recuperaciones al aumentar la temperatura de extraccin de 80 a 120 C,
con incrementos que van desde un 3% (4,4-DDD; 4,4-DDE; Hept. Epx.) a un 7 % (Metoxicloro, Endrin). Por el
contrario, se produjo una disminucin en la recuperacin, al aumentar la temperatura de 120 a 140 C, con prdidas que
van desde un 9 % (Metoxicloro, Endosulfn I) hasta un 17 - 18 % (Aldrin, Lindano).

Condiciones ptimas operativas: 20 minutos y 120 C


El equipo utilizado fue un microondas modelo Ethos 1600, marca Milestone. Este equipo cuenta con un sensor de
temperatura que permite un monitoreo directo del contenido de los vasos de extraccin, hasta temperaturas de 260 C
por perodos cortos. Posee un rotor con capacidad para diez vasos de extraccin y una terminal de control, permitiendo

4
almacenar hasta 20 programas con posibilidad de asignar valores diferentes a los parmetros operativos en cada paso
del proceso de extraccin. (Foto 1).

FOTO 1: Microondas marca Milestone

COMPARACIN DE DOS METODOLOGAS DE PREPARACIN DE MUESTRAS: MICROONDAS


SOXHLET

Posteriormente, se procedi a la evaluacin de algunos aspectos, a fin de comparar dos metodologas de preparacin de
muestras: Microondas y Soxhlet. Este ltimo mtodo de preparacin de muestras, tiene el mismo alcance que el mtodo
de microondas, y es ampliamente usado en laboratorios.
Se observaron las siguientes ventajas del mtodo microondas frente al mtodo Soxhlet:
Se determinaron los Lmites de Deteccin Metodolgicos (L.D.M.), para ambos mtodos de preparacin de muestras.
Los L.D.M. fueron calculados sobre siete rplicas (siete blancos fortificados slidos con igual nivel de adicin de los
analitos de inters), siguiendo las recomendaciones de la E.P.A. (Appendix A: Definition and Procedure for the
Determination of the Method Detection Limit, July 1982). (Ecuacin 1 y Tabla 3).

Clculo:

L.D.M. = t(n-1, 1- = .99) .S ecuacin (1)

Siendo:
L.D.M.: Lmite de Deteccin Metodolgico.
t(n-1, 1- = .99): el valor Student apropiado para un nivel de confianza del 99% y una desviacin estandar estimada con n-1
grados de libertad.
S: desviacin estandar de los anlisis rplicas.

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TABLA 3: Comparacin de los lmites de deteccin

ANALITO L.D.M. g./Kg. (Microondas) L.D.M. g./Kg. (Soxhlet)


Lindano 3.46 3.61
Heptacloro 4.78 4.29
Aldrin 2.86 2.19
Hep. Epxido 2.46 3.09
Endosulfn I 3.51 9.50
p,p-DDE 2.28 2.76
Dieldrin 2.67 2.45
Endrin 5.21 4.88
p,p-DDD 2.39 5.38
p,p-DDT 2.35 1.67
Metoxicloro 5.93 5.80

Para el mtodo Soxhlet, la extraccin se llev a cabo con el agregado de 300 ml. de la misma mezcla de solventes de
extraccin, siendo el tiempo de extraccin de 18 horas.
Los valores de sensibilidad alcanzados por ambos mtodos fueron similares para la mayora de los analitos, pero el
nmero de las interferencias provenientes de los reactivos resultaron mayores para el mtodo Soxhlet.
Menor costo de operacin, debido fundamentalmente al menor volumen de solvente de extraccin a usar (10 veces
menos).
Menor tiempo de proceso de extraccin, siendo del orden de por lo menos un cuarto del tiempo total del necesario
para la extraccin Soxhlet.
Mayor cantidad de muestras a procesar por proceso de extraccin.
Automatizacin, lo que implica una independencia en el control de operacin por parte de los analistas.
Menor exposicin de los analistas a los solventes de extraccin (menor cantidad y tiempo de exposicin).
Mayor seguridad al medio ambiente por el menor consumo de mezcla de solventes.

APLICACIN

Esta metodologa de preparacin fue probada en la


determinacin de once pesticidas organoclorados en
muestras de suelos provenientes de un sitio 3000
contaminado. Para la totalidad de muestras
Concentracin g./Kg.

analizadas (la mitad en superficie y la otra mitad en 2500


profundidad) los pesticidas detectados en mayor 2000
concentracin corresponden a: 4,4-DDT; 4,4-DDD;
4,4-DDE; Dieldrin; Metoxicloro. Se detect 1500
presencia de: Heptacloro, Hept. Epxido y 1000
Metoxicloro en dos muestras; Lindano en cuatro
muestras; Aldrin, Dieldrin y Endosulfn I en seis 500
muestras; 4,4-DDD en siete muestras; 4,4-DDE en 0
doce muestras y 4,4-DDT en quince muestras. En 1 2 3
algunas muestras se evidenci presencia de otro
ismero de BHC distinto del Lindano. La Ubicacin de muestras
distribucin que mostraron los pesticidas hallados,
segn se trate de muestras superficiales o en
profundidad, y en orden desde el punto ms alejado p,p-DDE p,p-DDD p,p-DDT Dieldrin
al ms cercano al rea comprometida, se visualiza en
los siguientes grficos (Figuras 3 y 4). Figura 3: Concentraciones a nivel superficial

6
120

Concentracin g./Kg.
100
80

60
40
20
0
I II
Ubicacin de muestras

p,p-DDE p,p-DDD p,p-DDT Dieldrin

Figura 4: Concentraciones a profundidad

Equipamiento utilizado en la determinacin analtica: Todas las determinaciones se llevaron a cabo en un


Cromatgrafo Gaseoso marca Hewlett Packard modelo 6890 A, que cuenta con software adecuado para el control del
equipo, almacenamiento y procesamiento de datos y con detector de micro captura de electrones (ECD). La columna
utilizada es una HP 1701 de 30 m. de largo, 250 m. de dimetro interno y 0.25 m. de espesor de film, a flujo
constante de 2.2 ml./min., con nitrgeno de alta pureza como gas carrier. Se trabaj con inyeccin automtica (Inyector
serie 7683 de Hewlett Packard), en modo Splitless pulsado, con temperatura del inyector de 250 C, temperatura del
detector de 300 C y el siguiente programa de temperaturas del horno: temperatura inicial de 80 C durante 1 min., una
primer rampa de calentamiento hasta 190 C a una velocidad de 30 C/min. y una segunda rampa de calentamiento hasta
260 C a una velocidad de 6 C/min., manteniendo esta temperatura final durante 2 min.
Durante la aplicacin, tambin se trabaj con el mismo equipo con un segundo detector para confirmaciones: detector de
masas (MS) modelo 5973 de Hewlett Packard, en modo SIM (Selected Ion Monitoring). En este caso, se us la columna
HP 5MS de 30 m. de largo, 250 m. de dimetro interno y 0.25 m. de espesor de film, a flujo constante de 1.2
ml./min., con helio de alta pureza como gas carrier. La temperatura del inyector y el programa de temperaturas del horno
fueron iguales que para las determinaciones con detector de ECD, mientras que la lnea de transferencia del Masas se
mantuvo a 280 C, la temperatura del cuadrupolo a 150 C y la temperatura de la fuente de iones a 230 C. (Foto 2 y
Figuras 5, 6, 7 y 8)

Foto 2: Cromatgrafo Gaseoso con detectores de ECD y Masas

7
Response_

589.D\ECD1A
4.5e+07

15.35
4e+07

3.5e+07

3e+07
10.70
7.80
2.5e+07 15.24

8.64
8.14
2e+07 10.11 11.17
11.56

1.5e+07 12.06
13.12
13.54
1e+07

7.40
6.11
5000000 7.217.94 9.13 13.27
13.93
14.82 16.20
16.65 18.03
14.18
14.36

6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00
Time

Figura 5: Cromatograma de blanco fortificado con once pesticidas organoclorados. GC/ECD

Abundance

TIC: 928.D
10.87
11.09 15.25
14.55
18000
11.16

16000
10.38

14000 7.14 11.32


11.26
10.57
10.79
10.44
10.62
10.67 11.67
12.10
11.54
12000 11.60
5.27
100005.22 8.98 11.90
8.33 9.79
5.35
8000
8.52 9.97 13.03
6.05
6000 6.59
6.17
5.87 10.20
10.13
9.69
10.26
10.06
9.58
9.34
6.47 9.88
5.82 6.68 8.66
8.78 9.54
9.47
9.16
9.23
6.44 7.99
4000 5.92
5.57
5.98
6.266.97 7.73
5.526.12
5.706.32 7.23
6.747.43
6.91
7.28
6.82 7.78
7.83
7.528.18
7.93
8.08
5.77 6.40 7.64
7.37
12.01 13.43
2000 12.34
12.25
12.47
12.66
12.93
12.84 13.76
13.18
13.70
13.26
13.36 15.46
13.83
13.92
13.99
14.0214.76
14.12
14.34
14.23
14.2715.06
15.02
14.93 15.94
15.99
15.7716.55
16.74
16.18
15.6216.36
15.85
16.07 17.37
17.13
16.68
16.28
16.62
16.11 17.42
16.79
17.08
16.83
16.43 17.55
17.75
17.62
17.20
17.30
17.67
17.86
18.07
17.51
18.01
18.20
17.81
18.23
6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 11.00 12.00 13.00 14.00 15.00 16.00 17.00

Figura 6: Cromatograma de blanco fortificado con once pesticidas organoclorados. CG/MS-SIM. TIC
(Cromatograma de Iones Totales)

8
Abundance

Ion 235.00 (234.70 to 235.70): 928.D


3000 13.03
2500
2000
1500
1000
500 13.13 13.27
0
12.95 13.00 13.05 13.10 13.15 13.20 13.25 13.30
Time-->
Abundance

Ion 237.00 (236.70 to 237.70): 928.D


3000
2500
13.03
2000
1500
1000
500 13.18 13.23
0
12.95 13.00 13.05 13.10 13.15 13.20 13.25 13.30
Time-->
Abundance

Ion 165.00 (164.70 to 165.70): 928.D


3000
2500
13.03
2000
1500
1000 13.13 13.18 13.26 13.29
500
0
12.95 13.00 13.05 13.10 13.15 13.20 13.25 13.30
Time-->

Figura 7: Cromatograma de blanco fortificado con once pesticidas organoclorados. GC/MS-SIM. EIC
(Cromatograma de Iones extrados: 235, 237, 165 - p,p-DDT)

Abundance

Scan 765 (13.033 min): 928.D


3000 235

2800

2600

2400

2200

2000

165
1800

1600

1400

1200

1000

800

600

152
400

200
227
0
145150155160165170175180185190195200205210215220225230235240

Figura 8: Cromatograma de blanco fortificado con once pesticidas organoclorados. GC/MS-SIM. Espectro de
masas correspondiente al p,p-DDT

9
CONCLUSIONES

Esta metodologa de extraccin sobre la que se llev a cabo la optimizacin, demostr ser un proceso de preparacin de
muestras rpido, eficiente, econmico, ofreciendo adems mayor seguridad para los operadores y para el ambiente,
debido al menor consumo de solvente. Asimismo result ser una herramienta til de diagnstico en la evaluacin de
contaminacin de muestras slidas.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:
Manual de Operador Ethos 1600 - Milestone Srl.
Method 3540 C: Soxhlet Extraction (Rev. 3, Dec. 1996). Test Methods for evaluating solid waste, physical/chemical
methods (E.P.A. SW - 846).
Method 3546: Microwave Extraction (Rev. 0, Nov. 2000). Test Methods for evaluating solid waste, physical/chemical
methods (E.P.A. SW - 846).
Method 8081 B: Organochlorine Pesticides By Gas Chromatography (Rev. 2, Nov. 2000). Test Methods for evaluating solid
waste, physical/chemical methods (E.P.A. SW - 846).

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