Anda di halaman 1dari 2

BAB III

METODOLOGI

A. Alat
Gunting, pinset, scapel sterile
Bejana Tripsinasi ( bejana Erlenmeyer 500/250 ml ) dengan pemutar magnet
Pemutar magnet
Penangas air 37C
Pompa suntik 10 ml
Pemutar yang berpendingin
Tabung pemutar steril dari plastic atau kaca 50ml
Kotak penghitung sel darah
Cawan atau botol plastic 25cm2
Inverted mikroskop
Botol 250ml/100ml steril
Pipet 1ml, 5ml, 10ml, dan 25ml steril
Gelas piala dengan 4-5 lapis kain kassa
Tabung reaksi bertutup sekrup
Gelas piala 500ml, 1000ml
B. Bahan
Embrio ayam umur 9-10 hari ( telur berembrio ) diatas nampan telur
Desinfektan, alcohol 70% ditambah Biocid atau Betadine ( berisi Povidon Iodine )
sampai warna coklat tua dalam botol penyemprot.
PBS tanpa Ca2+ dan Hg2+
Larutan tripin 0,25% dalam PBS tanpa Ca2+ dan Hg2+
Serum sapi
Serum fetus sapi
Larutan tryplan blue 0,4% dalam NaCl fisiologis
MEM dengan buffer NaHCO3 dan yang berbuffer HEPES
Larutan Penisilin dan Streptomisin
Larutan fungizone
C. Cara Kerja
Cucilah kulit telur dengan desinfektan

Bukalah kulit telur pada ujung yang tumpul dengan menggunakan pinset, kemudian selaput
telur dan selaput korio allantois dirobek

Angkatlah embrio dengan pinset dan masukan kedalam cawan patri

Potonglah kepala embrio, keluarkan vicera dan cucilah dengan PBS


Masukan semua embrio kedalam pompa suntik 10ml, masukan penghisap pompa dan
tekanlah embrio keluar dari pompa suntik

Tampunglah hancuran embrio yang keluar dengan bejana tripsinasi yang berisi batang
magnet

Cucilah hancuran embrio dengan PBS sebanyak 3x

Tuangkan larutan tripsin 0,25% temperature 37C kedalam bejana tripsinasi ( 10ml tripsin
untuk satu embrio )

Lakukan tripsinasi selama 30-45menit. Tripsinasi dihentikan bilamana hancuran embrio


berubah menjadi massa seperti selai. Sebelum selai terjadi belum banyak sel yang diperoleh,
sesudah massa selai bila tripsinasi dilanjutkan akan banyak sel yang tercemar oleh tripsin

Tuangkan suspense sel hasil tripsinasi kedalam gelas piala yang ditutup dengan 5 kain kassa
halus

Pindahkan suspense sel kedalam tabung yang berisi serum ( suspense sel: serum 40:1 )

Cucilah sel dengan medium penumbuh 3x, medium penumbuh mengandung serum 10%

Selesai dicuci, suspensikan sel dalam medium penumbuh

Ambil 0,5ml suspense sel, masukan kedalam tabung dan tambahkan 0,1ml 0,4% trypan blue,
campur dan diamkan selama 3menit

Hitung suspense sel dengan counting chumber ( sel mati yang berwarna biro tidak dihitung )
N
Jumlah sel per-ml 4 x 10.000 x factor pengencer

N=jumlah sel dalam kotak (4) yang dipakai untuk menghitung leukosit. Minimum N=40

Buatlah suspense sel dalam medium penumbuh ( 2x106/ml )

Tanamlah 5ml suspense sel dalam cawan patri ( garis tengah cawan patri 60mm )

Masukan dalam incubator

Amatilah pertumbuhan sel esok harinya. Bila telah terjadi selapis sel yang penuh ( memenuhi
dasar cawan patri ) gantilah medium dengan medium pemeliharaan ( 5% serum ). Bila belum
terjadi selapis sel yang penuh gantilah medium dengan medium penumbuh