Anda di halaman 1dari 2

METODOLOGI PENELITIAN

Sampling katak dilakukan di Batang Ai National Park di Lubok Antu dan Taman
Nasional Gunung Gading di Lundu, Sarawak. Lokasi dipilih karena Batang Taman Nasional Ai
dan Taman Nasional Gunung Gading terdiri dari habitat stream cocok untuk spesies dan ini juga
didasarkan pada laporan dari koleksi sebelumnya. Semua eksperimen dengan hewan hidup
disetujui oleh Komite etika penelitian hewan dari Universiti Malaysia Sarawak dan dilaksanakan
dengan resmi penyidik.
Kulit dorsal katak yang mengelupas dan longitudinal berpisah dengan dorsal tubuh katak.
Membedah kulit katak dimulai dari anus dan dipotong menjadi banyak sub lebih lanjut dan terus
setelah panen. Tikus adalah anaesthetized oleh Intra-Peritoreal (IP) Teknik inokulasi
menggunakan KTX (Zoletine, Ketamine, Pengenceran Xylazine). Dua eksisi luka sekitar 5mm
(diameter) sampai tingkat subkutan, Jaringan adiposa dibuat dorsal tikus dengan menggunakan
alat biopsi pukulan 5mm. Setelah proses melukai, tikus disimpan dalam kandang steril dan diberi
makanan dan air. Satu luka dicangkokkan dengan kulit O. hosii (5 mm diameter) dijahit ke
permukaan luka dan luka lainnya yang tersisa tidak diobati. Kulit terluka diambil setelah 14 hari
pasca melukai untuk mengamati proses penyembuhan melalui analisis histologis. Kulit
ditempatkan dalam formalin 10% (fiksatif solution) untuk 24 jam.
Kulit di dehidrasi enam kali dengan serangkaian etanol, di tanam dalam parafin dan
memotong bagiannya. Bagian tersebut kemudian diwarnai dengan haematoxylin-eosin untuk
mengidentifikasi jaringan granulasi, sel-sel inflamasi dan struktur jaringan di daerah terluka.
Akhirnya sampel kulit diamati di bawah mikroskop Olympus. Daerah yang terluka diteliti
dengan menganalisis memperbaiki struktur jaringan di bawah kulit sebagai panduan untuk
memeriksa durasi proses penyembuhan. Penilaian histologis dilaksanakan pada bagian terluas
dan terdalam bagian luka yang paling benar-benar terganggu dipertimbangkan dalam penilaian.
Ada empat parameter yang diubah dari Braiman-Wiksman et al. dan Gal et al. yang terdiri dari
penutupan (1) epidermis, (2) dermal penutupan, (3) infiltrasi granulasi jaringan dan (4) tingkat
peradangan. Penutupan dermal diukur dengan mengambil persentase kontraksi dan formasi
dermis baru dalam lapisan kulit. Infiltrasi granulasi jaringan luka diukur oleh pengambilan
persentase jumlah fibroblas per daerah luka. Tingkat peradangan ditentukan oleh kelimpahan
neutrofil, dan makrofag di daerah luka. Metode kuantitatif semi digunakan untuk memperkirakan
tingkat peradangan dimodifikasi dari Gal P et al. Klasifikasi dari peradangan sangat subjektif.
Jika sel-sel inflamasi absen, skala inflamasi adalah 0, namun, jika tersebar sel-sel inflamasi
biasanya ringan, skala 1; kumpulan sel-sel yang padat diklasifikasikan sebagai parah, skala
seperti 3 dan apa pun antara diklasifikasikan sebagai sedang, skala 2.