Generalidades Pseudomonas

Caractersticas de las colonias de los bacilos Gram Negativos que se aslan en diferentes medios de utilidad clnica.

Medios de Agar
Organismo EMB MC SS BC
Pseudomonas Translucidas, Transparentes, La mayora Sin crecimiento
incoloras al oro incoloras inhibidas
BS, Agar bismuto sulfito; EMB, Agar eosina-azul de metileno; MC, Agar MacConckey; SS, Agar Salmonella-Shigella
Adaptado por P.R. Murray E.J. Baron, M.A. Pialler F.C.1997, Manuel of clinical Microbiology, 7 edicin, Washintong DC.

Pruebas importantes para el diagnstico clnico de bacterias.

Prueba Principio Mtodo Utilizacin ms

frecuente
Licuefaccin de la Muchas hidrolasas Incubar un caldo con 12% Ayuda a la identificacin
gelatina hidrolizan la gelatina y de gelatina. Enfriar para de Serratia,
destruyen el gel comprobar la formacin del Pseudomonas,
gel. Si se hidroliza la Flavobacterium,
gelatina, el tubo permanece Clostridium
liquido cuando se refrigera

Mecanismo de resistencia bacteriana a los antibiticos

Mecanismo de Ejemplo de antibitico Base genrica de Mecanismo presente en

resistencia la resistencia
Permeabilidad Penicilinas Cromosmica Pseudomonas aeruginosa
reducida Bacterias entricas

Aparicin de resistencia a drogas antimicrobianas en algunos

patgenos humanos. El smbolo * indica algunas cepas
multiresistentes de esos organismos que ahora pueden tratarse con
otras drogas antimicrobianas conocidas.
 Ruta bioqumica de todas las Pseudomonas, catabolismo de la glucosa.

Caractersticas de las Pseudomonas

Bacilos rectos o curvados pero no vibroides, tamao de 0.5 a 1 micrmetros por 1.5 4.0 micrmetros, sin esporas: Gram negativas;
flagelos polares, normalmente aislados: no envainadas apendiculadas o con yemas, metabolismo respiratorio, nunca fermentativo,
aunque pueden producir ligeras cantidades de cido a partir de la glucosa en aerebiosis, utilizan compuestos orgnicos de bajo peso
molecular pero no polmeros; algunos son quimiolitrotrofos, utilizando H22 o CO como nico donador de electrones en anaereobiosis,
algunos pueden utilizar arginina anaerbicamente.
Caractersticas mnimas para la identificacin
Gram negativas, bacilos rectos o ligeramente curvados, sin esporas siempre mviles por flagelos polares; metabolismo oxidativo; en
medio para oxidacin-fermentacin con glucosa, el tubo sin vaselina produce acido (amarillo) y el tubo con vaselina no produce cido
(color neutro); no se produce gas de la glucosa (se distingue fcilmente de las bacterias entricas y de Aereomona)
La oxidasa es casi siempre positiva (las entricas son negativas)
La catalasa es siempre positiva, no presenta pigmentos fotosintticos (lo distingue de las bacterias rojas no del azufre)
El indol y el rojo de metileno son siempre negativos.

Caractersticas de los subgrupos y especies de los gneros Pseudomonas

Grupo Grupo Caractersticas DNA

 filogentico (GC
mol %)
Subgrupo Fluorescente Gamma La mayora produce pigmentos fluorescentes verde-amarillento
solubles en agua no forman poli-beta-hifroxibutirato, nico grupo
de homologa de DNA
Pseudomonas aeroginosa Producen piocinina, crecen hasta 43 C; flagelo polar nico, 67
desnitrificantes
Pseudomonas flourescens No producen piocinina y no crecen a 43C; penacho de flagelos 59-61
polares.
Pseudomonas putida Semejante a P. flourescens pero no licua la gelatina y crece en 60-63
benzilamina
Pseudomonas syringae Carece de arginina dihidrolasa, oxidasa negativa, patgena para las 58-60
plantas.
Pseudomonas stutzeri Saprofito del suelo, fuerte desnitrificador y no flourescente 62
Subgrupo Diminuta- Alfa Flagelo nico, requieren vitaminas ( pantotenato, biotina, B12)
vesiculares
Pseudomonas diminuta No pigmentada, no utiliza azcares como fuente de carbono 66-67
Pseudomonas vescularis Con pigmentos carotenoides, utilizan azcares 66
Subgrupo Ralstonia Beta
Pseudomonas maltophilia Requiere metionina , no utiliza NO-3 como fuente de nitrgeno oxidasa 67
negativa

Especies patgenas de Pseudomona

Especie Relacin con la enfermedad

Pseudomonas aeroginosa
Pseudomonas flourescens
Pseudomonas maltophilia
Pseudomonas stutzeri
Pseudomonas syringae
Patgenos de animales
Patgeno oportunista, especialmente en medios hospitalarios; en pacientes con problemas
tumorales, metablicos, hematolgicos, infecciones nosocomiales derivadas de cateterismos,
traqueotomas, punciones lumbares y transfusiones; pacientes con tratamientos prolongados con
inmunosupresores, corticosteroides antibiticos, radiaciones; puede contaminar heridas quirrgicas
como abscesos, quemaduras, infecciones de odo, pulmones de pacientes tratados con antibiticos:
fibrosis qustica principalmente un organismo del suelo
Raramente patgena ya que no crece bien a 37C, puede crecer en sangre contaminada y
productos hematolgicos refrigerados
Organismo ubicuo de vida libre siendo un patgeno nosocomial habitual
A menudo aislado de humanos y muestras ambientales pudiendo vivir saprofiticamente en el cuerpo
humano
Patgenos de plantas
Ataca a las hojas produciendo clorosis y lesiones necrticas; raramente en el suelo

Pruebas de identificacin fenotpicas

Determinacin de la sensibilidad a antimicrobianos
Los ensayos de sensibilidad por difusin en agar y la determinacin de la concentracin inhibitoria mnima (CIM) por dilucin en medio
slido se realizaron segn las recomendaciones del CLSI
Deteccin fenotpica de metalo-b-lactamasas
Se realizaron ensayos de sinergia de doble disco empleando EDTA (1 mol) como inhibidor de las MBL (sobre la base del ensayo de
sinergia descrito inicialmente por Arakawa et al. Para ello se inocularon las placas segn las recomendaciones del CLSI para la
prueba de difusin, y se colocaron discos conteniendo EDTA (1 mol) y discos comerciales conteniendo CAZ y con IMP a 15 mm de
distancia, centro a centro del primero. Un agrandamiento en el halo de inhibicin del disco con antibitico en la zona adyacente al
disco con EDTA fue interpretado como posible presencia de MBL.
Pruebas de identificacin genotpica
Deteccin del perfil de sustratos de las b-lactamasas
Con obtencin de extractos enzimticos crudos por ruptura ultrasnica de los cultivos bacterianos. Se evalu el perfil de hidrlisis de
sustratos por el mtodo iodomtrico en agar, utilizando como sustratos ampicilina (AMP) (500 g/ml), CAZ (1000 g/ml) e IMI (1000
g/ml).
Determinacin del perfil de protenas de membrana externa (OMP)
La extraccin de porinas se realiz segn el mtodo de Hancock y Poxton y los perfiles fueron resueltos mediante electroforesis en
geles de poliacrilamida al 12% en condiciones desnaturalizantes (SDS-PAGE), empleando un marcador de peso molecular de
protenas (Bio-Rad).
Deteccin de la presencia de genes codificantes de MBL
Se realiz un ensayo de Multiplex-PCR empleando como molde ADN total.
Determinacin de la localizacin de los genes codificantes de MBL
Se amplifica por PCR la regin variable de integrones de clase 1 a partir de DNA total.
Tipificacin molecular de los aislamientos productores de MBL
Se amplificaron por PCR las secuencias repetitivas del DNA: REP-PCR, ERIC-PCR a partir de DNA total.