ARTIKEL ILMIAH

PRAKTIKUM BIOKIMIA
IDENTIFIKASI ASAM AMINO PADA ALBUMIN TELUR DAN SAMPEL
UNKNOWN MELALUI UJI MILLON, NINHIDRIN, PbS, DAN UJI
NITROPRUSIDA

OLEH:
NAMA : FAJRIA MAYRISA RAHMA
NIM : 1413031035
KELAS : VIB

PROGRAM STUDI PENDIDIKAN KIMIA

JURUSAN KIMIA
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS PENDIDIKAN GANESHA
2017
 IDENTIFIKASI ASAM AMINO PADA ALBUMIN TELUR DAN SAMPEL
UNKNOWN MELALUI UJI MILLON, NINHIDRIN, PbS, DAN UJI
NITROPRUSIDA

Fajria Mayrisa Rahma

Program Studi Pendidikan KimiaJurusan Kimia, Fakultas MIPA, UNDIKSHA
Jalan Udayana, Singaraja-Bali
Email: fajriamayrisa@gmail.com

ABSTRAK

Tujuan percobaan ini adalah untuk mengidentifikasi asam-asam amino yang terdapat dalam
larutan protein (albumin telur) serta dapat mengidentifikasi jenis asam amino yang terdapat dalam
sampel unknown. Metode yang digunakan adalah metode uji kualitatif dengan cara uji reaksi Millon,
Ninhidrin, PbS, dan Nitroprusida. Dari hasil percobaan diperoleh bahwa pada albumin telur
mengandung asam amino tirosin, asam -amino bebas, dan asam amino yang dalam struktur asam
aminonya mengandung belerang. Asamamino yang menunjukkan hasil positif terhadap uji millon
hanya asam amino tirosin. Asam amino tirosin, triptofan, glisin dan phenilalanin menunjukkan hasil
positif terhadap uji ninhidrin. Asam mino sistein memberikan hasil positif terhadap uji nitroprusida.
Sampel unknown yang digunakan hanya memberi hasil positif pada uji ninhidrin.

Kata kunci : asam amino, larutan albumin telur, sampel unknown

ABSTRACT

The purpose of this experiment is to identified the amino acids contained in the protein
solution (egg albumin) and to identified the types of amino acids contained in the unknown sample.
The method used is a qualitative test method by of Millon reaction, Ninhydrin, PbS, and Nnitroprusside
test. From the experiment results obtained that the egg albumin-containing amino acid tyrosine, -
amino acids is free amino acids in the structure of the amino acid containing sulfur. Amino acid that
gave positive result on millon test only tyrosin. Amino acid wich gave a positif result on ninhidrin test
are tyrosine, tryptophan, glisine, and phenilalanin. Cystein gave a positive result on nitropruside test.
Unknown sample only gave positive result on the ninhydrin test.

Keywords: amino acids, egg albumin solution, samples of unknown

PENDAHULUAN
Protein tergolong dalam kelompok
senyawa terpenting dalam organisme,
hewan, termasuk juga manusia. Secara
kimia, protein adalah polimer yang terdiri
atas monomer-monomer asam -amino yang
dihubungkan dengan ikatan peptida. Sebuah
molekul protein mengandung ratusan atau
bahkan ribuan unit asam amino. Unit-unit
itu akan membentuk berbagai macam
kombinasi yang jumlahnya hampir tidak
terbatas, sehingga jumlah jenis protein yang
ada juga tidak terbatas (Frieda, 2002).
Protein adalah salah satu kelompok bahan
makronutrien. Tidak seperti bahan
makronutrien lainnya yaitu karbohidrat dan
lemak, protein ini memiliki peran yang lebih
penting dalam pembentukan biomolekul
daripada sumber energi. Namun apabila
organisme sedang kekurangan energi, maka
protein juga dapat di pakai sebagai sumber
energi.
Semua protein disusun dari
rangkain dasar yang sama yaitu dari 20
asam amino yang dihubungkan satu sama
lain dengan ikatan peptida. Asam amino
adalah monomer dari protein. Asam-asam
amino yang secara alami menyusun protein
mempunyai gugus fungsi karboksil (-
COOH) dan amina (-NH2) yang terikat pada
atom karbon yang sama, yaitu atom karbon
alfa. Gugus karboksil dalam asam amino
memberikan sifat asam dan gugus amina
memberikan sifat basa. Gugus lain yang
terikat pada C adalah atom hydrogen dan
rantai samping yang bervariasi (gugus R).
Berikut adalah struktur umum dari asam
amino.
 H O
H
N C
H OH
R
Gambar 1. Struktur Umum Asam Amino
Tidak semua asam amino
merupakan asam -amino melainkan dari
ke-20 itu hanya 19 yang merupakan asam -
amino, sedangkan satu asam amino yang
menyimpang dari struktur umum adalah
asam amino prolin karena asam amino ini
mempunyai gugus amino sekunder. Asam
amino bersifat amfoterik dalam bentuk
larutannya, dimanadalam larutan basa ia
cenderung menjadi asam dan pada larutan
asam cenderung menjadi basa. Hal ini
terjadi karena asam amino mampu
membentuk zwitter-ion (Redhana, 2004).
Perbedaan antara asam amino satu
dengan asam amino lainnya terletak pada
gugus R atau rantai sampingnya.
Berdasarkan gugus R-nya akan dapat
diramalkan sifat-sifat suatu asam amino.
Asam-asam amino ini dapat dibagi menjadi
tiga kelompok. Kelompok asam amino
dengan gugus R polar bermuatan positif
atau negatif terdiri dari Lisin, Arginin, dan
Histidin yang bermuatan positif, sedangkan
asam amino yang bermuatan negatif adalah
Asam Aspartat dan Asam Glutamat.
Kelompok asam amino dengan gugus R
polar tak bermuatan teridiri dari Serin,
Treonin, Asparagin, Glutamin, Tirosin, dan
Sistein. Kelompok asam amino dengan
gugus R non polar terdiri dari Glisin,
Alanine, Valin, Leusin, Isoleusin, Prolin,
Metionin, Fenilalanin, dan Triptofan.
Tabel 1. Beberapa reaksi untuk mendeteksi asam amino berdasarkan gugus R.
sumber: Tika, 2010 : 24 Buku Penuntun Praktikum Biokimia
Reaksi Uji Reaksi/Reagen
Uji Millon HgNO3 dalam asam nitrat
dengan sedikit asam nitrit
Uji Hopkins-Cole Asam Glioksilat dalam H2SO4
pekat
Ninhidrin Triketohidrin Hidrat
PbS PbS (Timbal Sulfat)
Nitroprusida Natrium nitroprusida dalam
NH3 encer
C
Asam amino dapat diklasifikasikan
menjadi delapan kelompok berdasarkan
strukturnya. Klasifikasi ini berdasarkan atas
sifat kimia dari gugus R-nya. Kelompok
alifatik terdiri dari Glisin, Alanin, Valin,
Leusin, dan Isoleusin. Kelompok Aromatik
terdiri dari Fenilalanin, Tirosin, Triptofan.
Kelompok hidrosiklik terdiri dari Serin dan
Treonin. Kelompok karbosiklik terdiri dari
Asam Aspartat, dan Asam Glutamat.
Kelompok yang mengandung sulfur terdiri
dari Sistein dan Metionin. Kelompok imino
terdiri dari Prolin dan Histidin. Kelompok
amino terdiri dari Lisin dan Arginin.
Kelompok amida terdiri dari Aspargin dan
Glutamin.
Asam amino memiliki banyak
manfaat bagi kehidupan terutama dalam
metabolisme, sebagai bangunan blok protein
yang linear dari rantai asam amino. Asam
amino juga penting dalam banyak molekul
biologi lainnya, seperti pembentukan bagian
koenzim atau sebagai prekursor untuk
biosintesis dari molekul seperti hemoglobin.
Analisis asam amino dapat dilakukan
dengan dua metode yaitu metode kualitatif
untuk mengetahui keberadaan asam amino
dalam protein, metode kuantitatif untuk
mengetahui jumlah asam amino dalam
protein. Analisis asam amino dengan
metode kualitatif dapat dilakukan dengan
cara melakukan uji-uji seperti berikut:
Asam amino yang Warna
dideteksi
Tirosin Merah
Triptofan Cincin
ungu
Asam -amino dan Biru
peptide yang
memiliki gugus -
amino yang bebas.
Asam amino yang Hitam
dapat melepaskan
unsr S.
Sistein Merah
Uji Millon
Uji Millon dilakukan untuk
mengidentifikasi adanya asam amino tirosin
pada suatu zat. Pereaksi Millon berupa
larutan merkuro dan merkuri nitrat dalam
asam nitrat. Jika kedalam larutan yang
mengandung asam amino dengan rantai
samping gugus fenolik (tirosin)
ditambahkan reagen Millon, maka akan
segera terbentuk endapan putih yang jika
dipanaskan akan berubah menjadi warna
merah. Endapan yang terbentuk merupakan
garam kompleks dari tirosin yang ternitrasi
(Frieda, 2002).
Uji Hopkins-Cole
Larutan protein yang mengandung
triptofan dapat direaksikan dengan pereaksi
Hopins-Cole yang mengandung asam
glioksilat (HOOC-CHO). Pereaksi ini dibuat
dari asam oksalat dengan serbuk magnesium
dalam air. Setelah dicampur dengan pereaksi
Hopkins-Cole, asam sulfat dituangkan
perlahan-lahan sehingga membentuk lapisan
di bawah larutan protein kemudian akan
terbentuk cincin ungu pada batas antara
kedua lapisan tersebut. Cincin ungu yang
tampak pada bidang batas antara kedua
cairan adalah hasil kondensasi triptofan
dengan gugus aldehida dari asam glioksilat
dalam suasana asam sulfat.
Uji Ninhidrin
Apabila ninhidrin (triketohidrin
hidrat) dipanaskan bersama asam amino,
maka akan terbentuk kompleks berwarna.
Reagen yang digunakan pada uji ninhidrin
yaitu triktohidrin hidrat. Asam amino yang
dideteksi dengan uji ninhidrin yaitu asam -
amino dan peptida yang memiliki gugus -
amino bebas. Untuk mengetahui bahwa uji
ini positif akan dihasilkan warna biru.
Keseluruhan reaksi asam amino dengan
ninhidrin adalah sebagai berikut. (a)
dekarboksilasi oksidatif dari asam amino
dan produksi ninhidrin tereduksi, amoniak
dan karbondioksida (b) reaksi ninhidrin
tereduksi dengan molekul ninhidrin yang
lain dan dengan molekul amoniak yang
dibebaskan (c) pembentukan kompleks
berwarna biru. Untuk prolin dan hidroksi
prolin yang gugus aminonya tersubstitusi
memberikan hasil berwarna kuning.
(Frieda, 2002).
Uji PbS
Uji PbS dilakukan untuk
mengidentifikasi adanya asam amino sistein
pada suatu zat. Pada uji ini, belerang yang
terdapat dalam asam amino sistein akan
dibebaskan sebagai ion sulfida dengan
kehadiran NaOH. Ion sulfida selanjutnya
akan bereaksi dengan ion Pb2+ membentuk
endapan berwarna hitam. Reaksi yang
terjadi adalah sebagai berikut.
S2-(aq) + Pb2+(aq) PbS(s)
Uji Nitroprusida
Protein yang mengandung gugus
SH bebas seperti sistein memberikan warna
kemerah-merahan jika direaksikan dengan
natrium nitroprusida, Na2Fe(CN)5NO.2H2O
dalam larutan amoniak. Hal ini disebabkan
selain mengandung gugus COOH dan
gugus NH2, pada gugus R pada asam
amino mengandung gugus tiol (gugus
sulfidril) atau peptida (glutat ion). Reaksi
antara gugus sulfidril dari asam amino
(sistein), peptida (glutation) dapat
direaksikan dengan natrium nitroprusida
dalam amonia berlebih menghasilkan
kompleks berwarna merah, dengan reaksi
sebagai berikut.
[Fe3+(CN)5NO]2-(aq) + NH3(aq) + R-SH(aq)
(NH4)2+[Fe2+(CN)5NOSR]2-(aq)
METODE
Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam
praktikum ini terdiri dari 1 rak tabung
reaksi, 3 buah pipet tetes, 1 buah corong, 1
buah gelas kimia ukuran 25 mL, 3 buah
gelas kimia ukuran 100 mL, 1 buah pipet
volume, 1 buah gelas ukur 10 mL, 1 buah
labu Erlenmeyer 100 mL, 2 buah spatula, 1
buah batang pengaduk, 1 buah pembakar
spritus, 1 buah korek api, 1 buah gelas kimia
250 mL, 1 buah Erlenmeyer ukuran 250 mL,
2 buah kaca arloji, dan 1 buah heater.
 Bahan-bahan yang digunakan adalah
albumin telur, larutan Pb-asetat, reagen
Millon, reagen Ninhidrin, larutan natrium
nitroprusida, larutan amonia, asam sulfat
pekat, NaOH 0,1 N, aquades, larutan
Phenilalanin, larutan Triptofan, larutan
glisin, larutan Tirosin, Larutan Sistein,
sampel unknown A, F, dan G.
Prosedur Kerja
Uji Millon
Sebanyak 3 mL larutan protein
(albumin telur), larutan sampel unknown,
dan larutan asam amino (larutan tirosin,
glisin, triptofan, dan fenilalanin)
ditambahkan 5 tetes reagen Millon
kemudian dipanaskan. Perubahan yang
terjadi kemudian diamati.
Uji Ninhidrin
Sebanyak 0,5 mL larutan ninhidrin
0,1% ditambahkan ke dalam 3 mL larutan
protein, larutan sampel unknown, dan
larutan asam amino (larutan tirosin,
fenilalanin, triptofan dan glisin), kemudian
dipanaskan hingga mendidih.
Uji PbS
Sebanyak 2 mL larutan NaOH dan 2
tetes Pb-asetat ditambahkan ke dalam 5 mL
larutan protein dan larutan sampel unknown,
kemudian dipanaskan dalam penangas air.
Perubahan warna yang terjadi diamati.
Uji Nitroprusida
Sebanyak 0,5 mL larutan natrium
nitroprusida 1% dan 0,5 mL larutan
amonium hidroksida ditambahkan ke dalam
5 mL larutan sampel unknown dan larutan
sistein.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan percobaan identifikasi
asam amino pada larutan protein (albumin
telur) dan sampel unknown yang telah
dilakukan diperoleh hasil seperti tabel
berikut :

Tabel 2. Hasil uji identifikasi asam amino pada larutan protein (albumin telur) dan
sampel unknown.
Sampel Uji Uji Ninhidrin Uji PbS Uji natrium
Millon nitroprusida
Albumin + + + Tidak dilakukan
Tirosin + + Tidak dilakukan Tidak dilakukan
Triptofan - + Tidak dilakukan Tidak dilakukan
Glisin - + Tidak dilakukan Tidak dilakukan
Fenilalanin - + Tidak dilakukan Tidak dilakukan
Sistein Tidak Tidak dilakukan Tidak dilakukan +
dilakukan
Unknown - + - -
Uji Millon mengoksidasi ion Hg+ menjadi Hg2+.
Endapan yang terbentuk merupakan garam
Pada uji Millon, larutan protein kompleks dari tirosin yang ternitrasi yang
(albumin telur) menunjukkan hasil uji berwarna merah (gambar 3). Terbentuknya
positif adanya asam amino. Asam amino larutan yang berwarna merah menunjukkan
yang memberikan hasil positif pada uji bahwa dalam albumin telur mengandung
Millon adalah tirosin. Larutan albumin telur asam amino tirosin.
ketika ditambahkan reagen Millon terbentuk Uji selanjutnya yang dilakukan
endapan putih. Endapan putih yang adalah uji terhadap sampel unknown
terbentuk merupakan reaksi antara Hg +
menunjukkan hasil negatif. Hal ini
dengan asam amino tirosin. Endapan putih
tersebut mengalami reaksi lebih lanjut
menandakan bahwa sampel unknown ini
dengan pemanasan.Selanjutnya, pada proses tidak mengandung asam amino tirosin
pemanasan, HNO3 yang mula-mula (gambar 4). Pengujian juga dilakukan
bertindak sebagai pelarut yang terhadap asam amino glisin, triptofan,
 tirosin, dan fenilalanin (gambar 5). kompleks dari tirosin yang ternitrasi
Penambahan reagen Millon pada zat sesuai persamaan reaksi berikut:
yang mengandung asam amino tirosin
akan menyebabkan terbentuknya
endapan merah yang merupakan garam

H H H H
O O
HO C C C Hg+(aq) C C C OH Hg+
OH (aq) -O
H N N H
H H H H (s)

Tirosin Tirosin Ternitrasi

H H
O
HO C C C + Hg+ (aq) HNO3(aq)
OH
H N
H H (aq)

H H
O
O2 N C C C Hg2+
O-
H N
H H (s)

Tirosin Kompleks tirosin ternitrasi

(warna merah)

Gambar 2. Reaksi pembentukan kompleks tirosin ternitrasi

Gambar 3. Terbentuknya endapan merah pada albumin telur.

 Gambar 4. Tidak terbentuk endapan merah pada sampel unknown

(a) (b) (c) (d)

Gambar 5. Terbentuk endapan merah pada reaksi reagen Millon dengan tirosin (a), tidak
terbentuk endapan merah pada Triptofan (b), Fenilalanin (c), dan Glisin (d)

Uji Ninhidrin

Uji ninhidrin merupakan uji yang sehingga terbentuk kompleks berwarna

dilakukan untuk menentukan ada atau
tidaknya asam- amino bebas pada suatu
sampel yang akan diidentifikasi. Pengujian
larutan albumin telur menggunakan reagen
Ninhidrin menunjukkan hasil positif, yang
mana pada pengujian ini, ketika albumin
ditambahkan larutan Ninhidrin terbentuk
larutan berwarna biru setelah dipanaskan
(gambar 7). Pembentukan larutan
kompleks berwarna biru ini terjadi
karena dekarboksilasi oksidatif dari
asam amino dan produksi ninhidrin
tereduksi, NH3 dan CO2. Kemudian
terjadi reaksi antara ninhidrin tereduksi
dengan molekul ninhidrin yang lain dan
dengan molekul NH3 yang dibebaskan
biru.
Pengujian sampel unknown juga
menunjukkan hasil yang positif yang
ditandai dengan terbentuknya larutan
berwarna biru tua (gambar 8). Hal ini
menunjukkan sampel unknown mengandung
asam amino bebas. Pengujian juga
dilakukan terhadap asam amino tirosin,
triptofan, glisin dan fenilalanin. Dari
pengujian keempat asam amino
menunjukkan hasil positif yang ditandai
dengan terbentuknya larutan berwarna biru
keunguan (gambar 9 ). Hal ini menunjukkan
bahwa asam amino tirsin, triptofan, glisin
dan fenilalanin merupakan asam amino.
Berikut adalah reaksinya.
 O O
H O
OH O OH

H2N C C NH3(aq) CO2 R C

(g)
OH H H(aq)
(aq) OH (aq) (aq)
R
O O

Ninhidrin asam amino Ninhidrin tereduksi aldehid

O O
O O
OH H H H

N N 3H2O(l)
OH (aq) H2 O (aq) (aq)
H (aq)
O O
O O
Ninhidrin Ninhidrin tereduksi Kompleks berwarna biru

Gambar 6. Reaksi pembentukan kompleks berwarna biru pada uji Ninhidrin

Gambar 7. Terbentuk larutan berwarna biru pada reaksi Ninhidrin dengan

albumin telur

Gambar 8. Terbentuk larutan berwarna biru pada reaksi Ninhidrin dengan

sampel unknown
 (a) (b) (c) (d)
Gambar 9. Terbentuk larutan berwarna biru pada reaksi Ninhidrin dengan asam
amino Tirosin (a), Triptofan (b), fenilalanin (c) , dan glisin (d)

Uji PbS hitam tersebut merupakan PbS. Adanya

endapan hitam ini menandakan bahwa
Pengujian PbS dilakukan untuk albumin telur mengandung asam amino
menguji ada atau tidaknya unsur S dalam sistein. Uji terhadap sampel unknown
suatu zat. Ketika albumin telur memberikan hasil negatif yang ditandai
ditambahkan larutan NaOH dan Pb-asetat dengan tidak terbentuknya endapan hitam
awalnya tidak berwarna Namun, setelah (gambar 11). Reaksi yang terjadi pada uji
dipanaskan dalam penangas air, larutan PbS adalah sebagai berikut:
berubah warna menjadi hitam. Endapan
S2-(aq) + 2NaOH(aq) Na2S(aq) + 2 OH-(aq)
Na2S(aq) + Pb(CH3COO)2(aq) PbS(s) + 2CH3COONa(aq)
Endapan hitam
Gambar 10. Reaksi Uji PbS

Gambar 11. Tidak terbentuk endapan hitam setelah sampel unknown direaksikan
dengan NaOH, pb-asetat dan dipanaskan

Uji Natrium Nitroprusida
Reaksi antara gugus sulfidril dari
asam amino (sistein)dengan natrium
nitroprusida dalam amonia berlebih
menghasilkan kompleks berwarna merah.
Kompleks berwarna merah tersebut
merupakan Na2Fe(CN)5NO.2H2O.
Berdasarkan percobaan yang dilakukan,
larutan asam amino yaitu sistein yang telah
diuji nitroprusida, menghasilkan larutan
yang berwarna merah (gambar 13). Hal ini
menunjukkan bahwa dalam sistein memang
terdapat gugus SH bebas, karena reaksi ini
spesifik untuk gugus SH bebas. Uji
sampel unknown memberikan hasil negatif
dengan natrium nitroprusida karena tidak
terbentuk kompleks berwarna merah
(gambar 14). Dengan demikian dapat
disimpulkan bahwa sampel unknown bukan
asam amino sistein. Adapun reaksi yang
terjadi adalah sebagai berikut.
 [Fe3+(CN)5NO]2- (aq)+ 2NH4OH(aq) + R-SH(aq) (NH4)2+[Fe2+(CN)5NOSR]2-(aq)
Gambar 12. Reaksi natrium nitroprusida dengan asam amino

Gambar 13. Terbentuk larutan merah pada reaksi antara natrium

nitroprusida dengan larutan sistein

Gambar 14. Tidak terbentuk larutan merah pada reaksi antara natrium nitroprusida dengan
larutan sampel unknown

SIMPULAN Wirahadi Kusuma S.Pd selaku asisten

Berdasarkan hasil percobaan yang
diperoleh dapat disimpulkan bahwa pada
albumin telur mengandung asam -amino
dan peptida yang memiliki gugus -amino
bebas, asam amino tirosin, dan asam amino
yang mengandung unsur belerang yaitu
sistein. Sampel unknown merupakan asam
asam -amino bebas karena menunjukkan
hasil positif pada uji Ninhidrin.
UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih penulis
sampaikan kepada Dr. I Nyoman Tika,
M.Si., sebagai dosen pengampu mata kuliah
Praktikum Biokimia atas bimbingan dan
masukan selama praktikum ini, I Made
dosen, dan I Dewa Subamia selaku laboran
di Jurusan Pendidikan Kimia atas bantuan
dalam memberikan segala keperluan yang
berkaitan dengan praktikum sehingga
percobaan ini dapat dilaksanakan dengan
baik.
DAFTAR PUSTAKA
Fessenden, F dan Fessenden. 1994. Kima
Organik Jilid 2. Jakarta : Erlangga
Frieda Nurlita, dkk. 2002. Kimia Organik II.
Singaraja : IKIP Negeri Singaraja
Redhana, I Wayan. 2004. Biokimia Jilid 1.
Singaraja: IKIP Negeri Singaraja
Tika, I Nyoman. 2010. Penuntun Praktikum
Biokimia. Singaraja: UNDIKSHA.