1.

Finalidade

Realizar a determinao e quantificao de aflatoxinas em amostras de

amendoim ou paoca (derivada de amendoim) pela tcnica de cromatografia
em camada delgada.

2. Fundamentos dos Mtodos

O conhecimento dos nveis de aflatoxinas em produtos naturalmente

contaminados por essas micotoxinas s pode ser observado por meio de
mtodos de anlise adequados. Tais mtodos so necessrios para
fiscalizao, o controle da qualidade, a monitorizao e a pesquisa nos seus
vrios aspectos, seja anlise de sementes, gros, alimentos e raes, estudos
epidemiolgicos, estudo da produo de micotoxinas e do metabolismo dos
fungos toxignicos, verificao da estabilidade durante o processamento de
alimentos, condies de armazenamento ou descontaminao.
As aflatoxinas so extradas com metanol/cloreto de potssio da matriz
usada para anlise. Posteriormente realizada a etapa de limpeza, com a
precipitao de protenas com agentes clarificantes, sulfato de cobre ou sulfato
de amnia. As aflatoxinas so re-extradas com clorofrmio por partio
lquido-lquido e separadas dos componentes do extrato por cromatografia em
camada delgada (CCD).
A CCD uma tcnica de separao de misturas e identificao de seus
componentes. Esta separao depende da diferena entre o comportamento
dos analitos entre a fase mvel e a fase estacionria. A interao dos
componentes da mistura com estas duas fases influenciada por diferentes
foras intermoleculares, incluindo inica, bipolar, apolar, e especficos efeitos
de afinidade e solubilidade.
A deteco e a quantificao das aflatoxinas podem ser realizadas por
anlise visual sob luz ultravioleta (ex=366nm) ou por outras tcnicas mais
avanadas e precisas, porm tambm de maior custo.

3. Fluxograma dos Mtodos

 Adicionar 270 mL de
Pesagem de 50g de Adio ao bquer
metanol e 30 mL de
paoca Mindy da paoca
soluo KCl 4%
macerada
(Bquer)

Agitao por 2 min.

Descrito na figura: Misture 150 mL do extrato

Transferir 150 ml do filtrado filtrado com 150 mL de
anterior para um funil de Com auxlio de um
clarificante (Soluo de
separao com 150 ml de papel de filtro,
CuSO4 10%) e mais 5g de
gua (homogeneizar) filtrar a mistura
Celite. Depois filtrar

Adio de 10 mL de clorofrmio Extrao da fase orgnica Fazer novamente a lavagem da

(homogeneizar por 5 min.) (coletada em um soluo com clorofrmio para
erlenmeyer) a segunda extrao

O total coletado foi adicionado Extrao da fase orgnica

Aps a evaporao do
em um erlenmeyer e foi (Coletada no mesmo
solvente, observou-se um
colocado em uma chapa de erlenmeyer da outra
resduo slido
aquecimento extrao)

Ento foram adicionados 500 L de Aplicao de 10 L da amostra

Feita a cromatografia
clorofrmio para redissoluo em uma placa de slica em gel
atravs de um capilar (1 cm) em camada delgada
(tolueno: acetato de
etila: cido frmico
60:30:10)

Realizada a leitura em cuba

4. Resultados e Discusso com lmpada UV (=366nm)
 Depois de realizada a tcnica, a placa que continha a amostra foi lida na
cuba com luz UV e notou-se a ausncia de fluorescncia que corresponde com
a fluorescncia de uma placa com os padres de aflatoxinas B1, B2, G1, G2.
Entretanto a quantidade de aflatoxinas foi calculada para uma amostra
contamina que continha as aflatoxinas e com florescncia compara com os
padres de certa quantidade, como mostra a Tabela 1:

Tabela 1 - Dados da amostra contamina que j se encontrava no laboratrio.

Aflatoxinas Volume do padro correspondente

B1 3,5 L
B2 5,0 L
G1 3,5 L
G2 5,0 L

Atravs da equao abaixo, calculamos a quantidade em g/Kg de aflatoxinas.

Onde:

S = L da aflatoxina padro, de fluorescncia e Rf igual amostra;

Y = concentrao de aflatoxina padro, em g/mL usada na cromatografia;

V = L de solvente requerido para diluir o extrato final;

W = gramas de amostra contida no extrato final.

A partir dos clculos obtemos a quantidade de aflatoxinas na amostra

contaminada, como mostra a Tabela 2.

Tabela 2 - Quantidade de aflatoxinas na amostra contaminada.

Aflatoxinas Quantidade (g/Kg)

B1 33,6
B2 48,0
G1 33,6
G2 48,0
TOTAL 163,2

5. Laudo frente ao resultado

Para a amostra da paoca Mindy encontradas no mercado, por est

tcnicas no foi observado nenhum dos tipos de aflatoxinas presente. Na
amostra contamina encontrou-se um total de 163,2 g/Kg de aflatoxinas, e
como o limite mximo tolervel de 20 g/Kg de aflatoxinas totais, est
amostra inadequada para consumo.

6. Referncias Bibliogrficas

CALDAS, E.D; SILVA, S.C; OLIVEIRA, J.N. Aflatoxinas e ocratoxina A em

alimentos e riscos para a sade humana. Rev Sade Pblica, v. 36(3), p. 319-
23, 2002.

SEGAWA, K.A do A; MACHINSKI, M.J. Mtodos analticos para determinao

de aflatoxinas em milhos seus derivados: Uma reviso. Revista Analytica, v.
24, 2006.

MORAN, E.F; SIQUEIRA, C.A.C. Toxicologia Analtica. Aflatoxinas: Anlise em

amendoim por cromatografia em camada delgada (Cap. 21). Texto de
MACHINSKI, M.J.